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刺榆嫩茎叶的生药学研究



全 文 :刺榆嫩茎叶的生药学研究
李  岩1 , 石利春1 , 王 玲2 , 包海鹰1
(1.吉林农业大学中药材学院 , 长春 130118;2.吉林大学测试科学试验中心 , 长春 130023)
摘 要:对刺榆嫩茎叶进行了显微鉴定 , 并采用 HPLC法测定了刺榆嫩茎叶中主要成分芦丁的含量。结果表
明:刺榆嫩茎叶组织中有大型的分泌细胞 , 有众多的草酸钙簇晶和非腺毛 , 其中叶片主脉维管束为外韧型。主
要成分为黄酮类物质 ,其中含芦丁 0.09%,在 0.05 ~ 0.45μg 范围内 , 与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 8),
平均回收率为 99.34%(RSD=0.6%, n=5)。
关键词:刺榆;嫩茎叶;芦丁;高效液相色谱法
中图分类号:R284.1   文献标识码:A   文章编号:1000-5684(2009)01-0051-04
Pharmacognostical Study on Tender Stem and Leaf
of Hemiptelea davidii
LI Yan1 , SHI Li-chun1 , WANG Ling2 , BAO Hai-ying1
(1.College of Chinese Medicinal Materials , Jilin Agricultural University , Changchun 130118 , China ;
2.Center of Test Science , Jilin University , Changchun 130023 , China)
Abstract:Microscopical identification of the tender stem and leaf of Hemiptelea davidii is studied , and
the content of rutin in it is determined by HPLC.Result showed:there are large-scale secretory cells ,
numerous calcium oxalate cluster crystal and nonglandular hair in the tissue of the tender stem and leaf.
The phloem of vascular bundle of primary vein on the leaf blade is located outside xylem.Main con-
stituent of Hemiptelea davidii is rutin of flavonoid.The content of rutin is 0.09%.The linear range of
rutin is 0.05 ~ 0.45 μg(r=0.999 8), and the mean recovery of rutin is 99.34%(RSD =0.6%, n=
5).
Key words:Hemiptelea davidii;tender stem and leaf;rutin;HPLC
  刺榆嫩茎叶为榆科 、刺榆属植物刺榆
(Hemiptelea davidii Planch.)的干燥茎 、叶 。刺榆
性味淡 、涩 、平 ,主要功效为解毒消肿 。刺榆为旱
中生植物 ,耐干旱脊薄 ,生于固定沙丘 ,见于辽河
平原州 ,产于通辽市 ,分布于我国东北 、华北 、西
北 、华中 ,朝鲜也有分布[ 1] 。内蒙古东部的蒙古族
在几百年前就有食用刺榆嫩茎叶的习惯。据调
查 ,刺榆嫩茎叶具有降脂 、滑肠和延年益寿的作
用 ,但一直未见相关的文献报道。为了更深入研
究和开发这一资源 ,我们对刺榆嫩茎叶的生药学
进行了研究 ,现将研究结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 试验材料
刺榆嫩茎叶采于内蒙古通辽 , 5月份在其刚
刚长出时轻轻摘下 ,晾干或低温烘干。
芦丁对照品由中国药品生物制品检验所提
供 ,纯度 95%以上 ,甲醇为色谱纯 ,醋酸为分析
纯。
1.2 试验方法
1.2.1 显微鉴别 采用石蜡切片 、徒手切片 、粉
末装片等常规的生药学方法对刺榆茎 、叶的横切

通讯作者
基金项目:吉林省科技发展计划项目(212-00026)
作者简介:李 岩 ,女 ,硕士研究生 ,研究方向:中药学。
收稿日期:2007-07-04  修回日期:2008-01-20
吉林农业大学学报 2009 ,31(1):51 ~ 54 http:// xuebao.jlau.edu.cn
Journal of Jilin Agricultural University E-mail:jlndxb@vip.sina.com
DOI :10.13327/j .j jlau.2009.01.024
片及粉末进行研究[ 2-4] 。用微量升华法对升华物
进行显微观察。
1.2.2 理化鉴别 (1)颜色反应。 ①取刺榆嫩茎
叶粉末 1 g ,加 95%乙醇 10 mL , 50℃水浴回流提
取4 h ,过滤 ,取滤液与等体积石油醚萃取 3次后 ,
将下层乙醇溶液蒸干得浸膏。将浸膏加甲醇溶
解 ,得到待测液 。②取1 ~ 2 mL待测液 ,加入 2滴
浓盐酸 ,再加少量镁粉 ,不断振荡 ,溶液变为淡红
色。③取 1 ~ 2 mL待测液 ,加入少量 10%的AlCl3
乙醇溶液显色 ,在紫外灯下呈黄绿色荧光 。④取
1 ~ 2 mL待测液 ,加等体积的 10%α-萘酚乙醇溶
液 ,摇匀 ,沿管壁滴加浓硫酸 ,两界面产生颜色变
化 ,首先变成淡黄色再缓慢变为黄绿色 。⑤取1 ~
2 mL待测液 ,加入醋酸铅溶液 ,溶液迅速变成黄
色[ 5-7] 。
(2)微量升华物鉴别。 ①开始收集到的多为
黄色油滴状物质 ,随时间的延长有小的羽毛状 、针
状结晶 , 之后有明显的黄色雪花样结晶。 ②加
5%磷钼酸乙醇试剂约 5 min后结晶变为蓝绿色 ,
并伴有羽毛状 、针状 、细小雪片状结晶。 ③取少量
结晶放于滤纸上 ,滴 1 滴 5%磷钼酸乙醇试剂 ,
115℃下烘 2 min ,斑点由棕黄色变为褐色。 ④取
该结晶2份分别溶于乙醇和乙醚中。结晶在 2种
溶剂中均易溶[ 5-7] 。
1.2.3 HPLC 法测定芦丁含量 (1)色谱条件。
日本岛津高效液相色谱仪 。色谱柱:ZORBAX80A
Extend C18柱(250 mm×4.6 mm ,5μm);流动相:[ V
(甲醇)∶V(3%冰醋酸)=35∶65] ;流速 1 mL/min;
柱温 25℃;检测波长 257 nm。
(2)对照品溶液的制备 。精密称取芦丁对照
品10 mg ,置100 mL容量瓶中 ,用流动相溶解并稀
释至刻度 ,摇匀 ,备用。即得浓度为 100 μg/mL对
照品母液。再从中精确吸取 2 mL 母液 , 置于
10 mL 容量瓶中 ,得 20μg/mL 的对照品溶液。
(3)供试品溶液制备方法 。取刺榆嫩茎叶粗
粉1 g ,精密称定 ,加甲醇50 mL ,精密称定质量 ,加
热回流2 h ,回流结束后 ,再称质量 ,补足缺失的质
量 ,过滤 ,取滤液 2 mL蒸干 。用少量甲醇溶解 ,移
至10 mL 容量瓶中 ,加甲醇定容 ,再取母液 2 mL
放入 10 mL容量瓶中 ,加甲醇定容至刻度 ,得供试
液。
(4)线性关系考察。分别精密称取上述对照
品母液0.5 ,1.5 ,2.5 ,3.5 ,4.5 mL ,置于 10mL 容量
瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 。分别吸取上述溶液各
10 μL ,注入液相色谱仪中 ,在上述色谱条件下测
定芦丁峰面积 。以芦丁峰面积为横坐标 ,对照品
进样量为纵坐标 ,经线性回归 ,回归方程为 Y =
4.982 584e-0.05X , r=0.999 8。结果表明 ,芦丁
在 0.05 ~ 0.45μg范围内 ,与峰面积呈良好线性关
系[ 4 ,8-9] 。
(5)HPLC定量方法学考察 。取刺榆粗粉制成
供试液 ,在上述色谱条件下 ,连续进样 5次 ,每次
10μL ,测定芦丁峰面积的 RSD 值 ,进行精密度试
验。精密吸取同批刺榆制成的供试品溶液10μL ,
每隔一定时间(0 , 2 , 4 ,6 , 24 h)注入液相色谱仪 ,
以芦丁峰面积指标计算 RSD 值 ,考察样品在 24 h
内稳定性 。取同批刺榆粗粉 5份 ,每份 1 g ,精密
称定 ,依上述方法制成供试品溶液并进行进样操
作测定 ,以芦丁峰面积指标计算 RSD 值 ,考察方
法学的重复性。取上述已测定含量的刺榆粗粉
0.5 g ,精密称定 ,精密加入芦丁对照品溶液(浓度
为0.46 mg/mL)1 mL ,按供试液制备方法制成供
试液 ,测定 ,根据峰面积的变化计算加样回收率。
2 结果与分析
2.1 显微鉴别
2.1.1 粉末 呈绿色 ,有香气 ,簇晶较多 ,棱角
稍钝 ,直径 0.4 ~ 0.6μm ,针状簇晶较少 ,非腺毛指
状;表皮细胞呈多角形 ,气孔多为不定式 ,付卫细
胞4 ~ 6个;导管多为网纹或螺纹 ,直径 0.30 ~
0.45μm(图 1)。
1.非腺毛 Nonglandular hai r;2.腺毛 Glandular hair;3.导管
Vessel;4.表皮细胞及栅栏组织 Epidermic cell and palisade tis-
sue;5.绒毛 Floss;6.草酸钙簇晶Calcium oxalate cluster crys-
tal;7.气孔及表皮细胞 Stoma and epidermic cell
图 1 粉末图
Fig.1.Powder of H.davidii
2.1.2 叶横切面 上表皮细胞呈偏方形或长方
形 ,被角质层 ,下表皮细胞较小 ,有气孔及腺毛。
52  吉林农业大学学报 2009年 2月
Journal of Jilin Agricultural University 2009 , February
栅栏组织为1 ~ 2列细胞 ,草酸钙簇晶整齐排列在
栅栏组织中。海绵组织排列疏松 ,其中也含有草
酸钙簇晶。主脉维管束外韧式 ,中柱鞘纤维束淡
黄色 ,断续排列成环状 。叶肉组织中有大型分泌
细胞(直径 0.6 ~ 1.3μm)散在(图 2)。
2.1.3 茎横切面  茎组织中有大型分泌细胞
(直径 0.9 ~ 1.5μm)散在 ,并有大量草酸钙簇晶存
在 ,维管束为外韧型 ,外壁生有绒毛(图 3)。
A.刺榆叶组织简图 Diagram of leaf cross section from H.davidii;B.刺榆叶叶肉组织显微结构Microstructure of mesophyll tissue from H.
davidii;C.刺榆叶主脉维管束显微结构Microstructure of main vein vascular bundle f rom H.davidii 1.腺毛 Glandular hair;2.上表皮 Epi-
dermic;3.栅栏组织 Palisade tissue;4.草酸钙簇晶 Calcium oxalate cluster crystal;5.叶脉导管 Vein vessel;6.分泌细胞 Secretory cell;
7.海绵组织 Spongy tissue;8.下表皮 Lower epidermis;9.气孔 Stoma;10.中柱鞘纤维 Pericyclic fiber;11.韧皮部 Phloem;12.木质部
导管 Xylem wood vessel;13.木纤维 Wood f iber;14.木射线 Xylem ray;15.木薄壁细胞 Xylem parenchyma;16.厚角组织 Collenchyma
图 2 叶横切面图
Fig.2.Leaf cross section of H.davidii
1.绒毛 Floss;2.草酸钙簇晶 Calcium oxalate cluster crystal;
3.表皮 Epidermic;4.厚角组织 Collenchyma;5.分泌细胞
Secretory cell;6.薄壁组织 Parenchyma;7.初生韧皮纤维 Pri-
mary phloem fiber;8.初生韧皮部 Primary phloem;9.形成层
Cambium;10.初生木质部 Primary xylem;11.髓射 线
Medullary ray;12.髓 Pith;13.皮层 Cortex
图 3 茎横切面图
Fig.3.Stem cross section of H.davidii
2.2 理化鉴别结果
刺榆嫩茎叶提取物经上述颜色反应证明此类
化合物主要为黄酮类物质 。用微量升华法观察升
华物 ,起初肉眼观察为黄色油状物 ,慢慢地可看到
少量的结晶 ,在显微镜下观察呈雪花状结晶 。对
微量升华物经过理化鉴别证明 ,此结晶应属挥发
油类物质 。
2.3 HPLC测定结果
2.3.1 方法学考察结果 按照本文 “1.2.3 中
(5)”试验方法进行试验 ,结果精密度的 RSD 值为
0.133 7%,重复性的 RSD 值为 0.60%,稳定性的
RSD 值为 0.118 7%,加样回收率见表 1。以上结
果表明:该方法精密度 、重复性均较好 ,样品在
24 h内稳定 ,加样回收率也说明该方法适用于芦
丁的定量分析 。
53李 岩等:刺榆嫩茎叶的生药学研究
吉林农业大学学报 Journal of Jilin Agricultural University
表 1 刺榆嫩茎中加样回收率测定结果
Table 1.Tender stem of H.davidii spotting recovery determination consequence
取样量/ g
Sample
样品中芦丁含量/mg
Content of
rutin in sample
加入芦丁量/mg
Content of
added rutin
测得芦丁量/mg
Content of
rutin in total
回收率/ %
Recovery
平均回收率/ %
Average recovery
RSD/ %
0.5 0.45 0.46 0.910 100
0.5 0.45 0.46 0.910 100
0.5 0.45 0.46 0.897 98.6 99.34 0.60
0.5 0.45 0.46 0.899 98.8
0.5 0.45 0.46 0.904 99.3
2.3.2 样品中芦丁含量测定结果 取供试液和
对照品溶液各 10μL注入液相色谱仪 ,按干燥品计
算含量 ,样品中芦丁含量为 0.09%。
3 讨 论
本试验通过对刺榆嫩茎叶的生药学研究 ,首
次绘制出刺榆茎 、叶的详细显微结构图 。刺榆叶
气香 ,组织中有大型的分泌细胞 、众多的草酸钙簇
晶和非腺毛 ,叶片主脉维管束为外韧型。另外 ,刺
榆嫩茎叶的水提物黏性大可能与其组织中的大量
分泌细胞有一定关系 。
由于刺榆嫩茎叶中主要的化学成分为黄酮类
物质 ,首次用HPLC法对其有效成分芦丁进行了含
量测定 ,建立了刺榆嫩茎叶提取物中有效成分的
定量分析方法 ,该方法简捷 、快速 、准确 。本研究
为刺榆嫩茎叶的定性 、定量分析提供了方法和依
据 ,为制定其质量标准及开发利用提供了科学的
依据 。此外 ,银杏叶总黄酮具有降血脂 、抗凝血 、
清除自由基 、抗白血病 、抗炎 、镇痛 、抗肿瘤 、抗辐
射等作用[ 10] ,刺榆的主要成分也为黄酮类物质 ,
民间亦流传其具有降脂 、滑肠 、延年益寿等作用 ,
二者药效的相似性说明在其成分上必定存在一定
的相关性 。今后应对刺榆嫩茎叶的化学成分和降
血脂活性做进一步地研究。
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