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匙羹藤叶总皂苷提取工艺研究



全 文 :·药剂与工艺·
匙羹藤叶总皂苷提取工艺研究
秦民坚 ,吴靳蓉 ,黄 芸 ,吉文亮
(中国药科大学中药学院 ,江苏 南京 210038)
  摘要:目的 优选出匙羹藤 Gymnema sylvestre ( Retz. ) Schult叶中匙羹藤总皂苷的最佳提取工艺。 方法
 匙羹藤叶所含有的总皂苷经 5%香草醛-冰醋酸和高氯酸 ( 1∶ 4)混合液处理后显色 ,于 550 nm处有最大吸
收。利用这一特性 ,用比色法测总皂苷含量。 在比色法的基础上 ,采用正交试验法 ,以总皂苷的产量为考察指
标 ,考察了乙醇浓度、提取时间和药材粉碎度三因素对有效成分提取的影响。 结果和结论 匙羹藤叶的最佳
提取工艺为 50%乙醇提取 2次 ,每次 6 h。
  关键词:匙羹藤 ;匙羹藤总皂苷 ;比色法 ;正交试验法
  中图分类号: R284. 2    文献标识码: A    文章编号: 1004-2199( 2003) -0039-03
  匙羹藤叶为萝摩科植物匙羹藤 Gymnema
sylvestre ( Retz. ) Shcult的干燥叶 ,广泛分布于印
度、越南及我国广东、广西、福建、台湾和云南等省
区。匙羹藤叶性平 ,味苦 ,具有祛风止痛、生肌消肿之
功效 [1 ]。 大鼠口服或肌肉注射匙羹藤叶的乙醇提取
液 ,可抑制垂体生长激素或促肾上腺皮质激素引起
的高血糖 [2 ] ,其活性成分是匙羹藤酸 ( Gymnemic
acids,简称 GA) ,为一系列三萜类皂苷化合物 [3 ]。进
一步研究证明 ,匙羹藤酸能抑制大鼠在小肠内吸收
葡萄糖 ,从而抑制血糖值上升 ,因而可用来防治糖尿
病和肥胖症 [4 ]。此外 ,匙羹藤酸对龋齿致病菌的葡聚
糖合成有抑制作用 ,故对防治龋齿有效 [4 ]。为了充分
开发我国丰富的匙羹藤植物资源 ,我们对匙羹藤叶
总皂苷提取工艺进行了研究。
1 材料、仪器和试药
1. 1 药材
匙羹藤药材购于广西。 经鉴定为萝摩科植物匙
羹藤 Gymnema sylvestre ( Retz. ) Shcult的干燥叶。
1. 2 仪器
岛津 UV-2501型紫外分光光度计
1. 3 试药
1. 3. 1 药品 匙羹藤皂苷 1( GA1 )由本校天然药
物化学教研室叶文才教授提供。香草醛、甲醇、丙酮、
冰醋酸、高氯酸 以上试剂均为分析纯。 乙醇为工业
用乙醇。
1. 3. 2 显色剂的配制 取香草醛 0. 1 g ,加冰醋酸
2 ml ,再加入 8 m l高氯酸 ,溶解摇匀 ,配成 5%香草
醛-冰醋酸和高氯酸混合溶液 ( 1∶ 4)。
2 方法与结果
2. 1 样品溶液的制备
取匙羹藤干叶 50 g ,加稀乙醇 600 ml ,回流提
取 ,纱布过滤。重复提取一次 ,两次滤液合并浓缩。浸
膏称重。将浸膏溶于水 ,用石油醚萃取除去叶绿素等
色素。离心去除不溶物。加入 10%盐酸 ,调节水层至
pH= 2,出现沉淀。沉淀水洗后 ,溶于 95%乙醇中回
流 2 h,加入丙酮 ,抽滤 ,滤液减压浓缩 ,得匙羹藤叶
总皂苷。 精密称取 50 mg匙羹藤叶总皂苷 ,置于 25
ml容量瓶中。加甲醇至刻度 ,作为样品溶液。
2. 2 对照品溶液的制备
精密称取匙羹藤酸 ( GA1 )对照品 5. 0 mg ,用甲
醇溶解并定容至 5 ml容量瓶中。
2. 3 最大吸收波长测定
精密吸取对照品液及样品液各 100μl,分别置
10 m l具塞试管中 ,置水浴中挥尽溶剂 ,立即取出 ,
放冷 ,精密加入新配置的含 5%香草醛 -冰醋酸和高
氯酸 ( 1∶ 4)混合液 1 ml摇匀 ,密塞 ,置 60℃水浴中
加热 15 min,取出 ,立即放入冷水中冷却 2 min,精
密加入冰醋酸 5 ml,摇匀 ,以相应试剂作空白 ,在
400~ 700 nm波长区段测定其吸收光谱 ,样品和
GA1对照品的吸收光谱基本一致 ,均在 550 nm波
长处有最大吸收 ,故选定 550 nm为测定波长。
2. 4 标准曲线的绘制
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DOI : 10. 13728 /j . 1673 -6427. 2003. 03. 016
精密吸取 GA1对照品溶液 40、 80、 120、 160、 200
μl,按前述最大吸收波长测定方法操作 ,以相应的试
剂作空白 ,在 550 nm波长测定其吸收值。浓度与吸
收值的回归方程为: A= 0. 003 6C - 0. 030 5, r=
0. 999 5。 匙羹藤总皂苷在浓度 40~ 200μg范围内
与吸收值有良好的线性关系。
2. 5 样品吸收值的测定
精密吸取样品 100μl。置于 10 m l具塞试管中 ,
水浴挥尽溶剂 ,立即取出 ,放冷。 精密加入新配置的
显色剂 1 ml ,摇匀 ,密塞 ,置 60℃水浴中加热 15
min。精密加入冰醋酸 5 ml,摇匀。以相应的试剂作
空白 ,于 550 nm处测定吸收值。
2. 6 加样回收率
取已知含量的样品 5份 ,分别添加一定量的
GA1对照品溶液 ( 1. 0 mg /ml ) ,加甲醇定容至 5 ml
量瓶中 ,按样品吸收值的测定方法测定 ,其平均回收
率为 98. 5% , RSD= 0. 65% 。
2. 7 正交试验方法优化提取工艺
提取工艺的一般流程同样品溶液的制备 ,制备
样品溶液时 ,称取 50 mg总皂苷 ,不足 50 mg时 ,按
全部总皂苷浸膏重量计算。根据工艺选出乙醇浓度、
提取时间、药材粉碎度作为考察的三个因素 ,各取三
个水平。 以测总皂苷提取量为考察指标。选用 L9
( 34 )正交表进行试验。每次试验的匙羹藤叶用量为
50 g ,收集两次滤液均各为 200 ml。
表 1 因素水平表
乙醇浓度 ( A) 提取时间和次数 ( B) 药材粉碎度 ( C)
1 50% 6 h× 4 完整
2 65% 8 h× 2 20目
3 95% 4 h× 3 40目
表 2 正交试验设计 L9 (34)表
A
1
B
2
C
3 4
叶精密质量
( g )
浸膏重量
( g)
总皂苷重量
( mg)
1 1 1 1 1 50. 1 0. 2957 117. 039
2 1 2 2 2 50. 3 0. 2132 154. 649
3 1 3 3 3 50. 3 0. 3559 115. 249
4 2 1 2 3 50. 8 0. 2112 64. 108
5 2 2 3 1 50. 7 0. 2422 107. 227
6 2 3 1 2 50. 7 0. 1761 102. 405
7 3 1 3 2 29. 1 0. 0291 17. 108
8 3 2 1 3 18. 0 0. 0180 8. 865
9 3 3 2 1 50. 9 0. 0579 34. 811
K1 386. 937 198. 255 228. 309 259. 077
K2 273. 74 270. 741 253. 568 274. 162
K3 60. 784 252. 865 239. 584 188. 222
K1 128. 979 66. 085 74. 436 86. 359 G= 721. 461
C T= G2 /nm= 57833. 99717
K2 91. 247 90. 247 84. 523 91. 387 Q= K1
2+ K2
2+ K3
2
S= Q /3- CT
K3 20. 261 84. 288 79. 861 62. 740
Rj 108. 718 24. 162 10. 087 28. 647
SS J 18282. 178 1014. 817 106. 744 1403. 741
表 3 匙羹藤皂苷提取量方差分析表
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F值 P值
A 18282. 1776 2 9141. 08879 13. 024 < 0. 10
B 1014. 81694 2 507. 40847 0. 723
C 106. 74388 2 53. 37194 0. 076
误差 ( D) 1403. 74132 2 701. 870658
   F1- 0. 05( 2, 2)= 19. 0 , F1- 0. 10( 2, 2)= 9. 00
3 结果与讨论
3. 1 正交试验分析 由表 2得知 ,当乙醇浓度为 A1
= 50% ,提取时间为 B2= 8 h× 2,粉碎度为 20目时 ,
总皂苷提取量最高 ,故最优条件似是 A1 B2 C2。然而由
方差 R的大小可知:因素 A的极差 ( 108. 718)最大 ,
为主要因素 ;因素 B的极差 ( 24. 162)较低 ,因素 C的
极差 ( 10. 087)最小 ,所以这两个因素为次要因素。由
于 B中提取时间增加 ,产量提高并不大 ; C中粉碎度
对药材提取也没有太大影响。权衡利弊得失 ,应考虑
最优条件为 A1B1 C1。
3. 2 方差分析 表 3是方差分析的结果。由 F值可
知各因素对实验结果影响的程度是 A> B> C,即影
响最大的是乙醇浓度 ,次之为提取时间和粉碎度。只
有乙醇浓度这一因素有显著性差异 ( P < 0. 10)。 所
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以 ,从节省时间、压缩工艺流程等方面考虑 ,应选择
A1B1 C1为最佳条件。 以上两种分析得出相同结果 ,
即用 50%乙醇 ,提取时间为 6 h,提取 2次 ,叶片不用
粉碎 ,为最佳提取条件。采用这个条件 ,可以在很大
程度上提高产量并且节省时间。
参考文献
[ 1] 江苏新医学院编 .中药大辞典 (上册 ) [M ] .上海:上海人民出版
社 , 1977. 1246.
[2 ]  Gupta S S, Seth C B, Variyar M C. Ex perim ental s tudies on pi-
tui tary-diabetes Part I Inhibitory ef fect of a few Ayu rvedic an-
tidiabetic remedies on an t terior pi tui tary ext ract induced hyper-
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[3 ]  Liu H M , Kiuch i F, Tsuda Y. Isolation and st ructure elucida-
tion of Gym nemic acids, anti sw eet principles of Gymnema
sylvest re. Ch em Pharm Bu ll, 1992, 40( 6): 1366.
[ 4 ] 韦宝伟 ,施 褰 .匙羹藤的研究概况 [ J ]. 国外医药 -植物药分
册 , 1996, 11( 3): 107.
(收稿日期: 2003-05-10)
Study on Extraction Process of General Saponins in the Leaves ofGymnema sylvestre
QI Min-jian, WU Jin-rong, HUANG Yun, JI Wen-liang
( Colleg e of Tradi tional Chinese M edicines, China Pharmaceutical Universi ty , Nanjing 210038, China)
   Abstract: Objective  To optimize the ex t raction process of g eneral saponins in the leaves of Gymnema
sylvestre. Methods  After general saponins in the leaves of Gymnema Sylvestre were dealt wi th mixed liq-
uid of 5% vani lin-acetic acid and perchlo ra te( 1∶ 4) , i t w ould show colo r wi th maximum abso rption at 550
nm. General saponins can be determined by spectrophotometry. The o rthogona l test w ere used, in which
the output of g eneral saponins was rega rded a s an examine ta rg et and the influences of three facto r in the
ex t raction of ef fectiv e substance w ere studied. The three factor are the densi ty of ethanol, the time of ex-
traction and the crush deg ree of crude drug. Results and Conclusion: The optium ex traction process was as
follow s: The leaves of Gymnema sylvestre were ex t racted wi th 50% ethanol , 2 times, ev ery time fo r
6h.       
  Key words: Gymnema sylvestre; g eneral saponins; Spect ropho tometry; Orthogonal test
黄连上清片体外溶出度考察
辛 勋 1 ,陆红云2
( 1.江西宜春市药品检验所 ,江西 宜春 336000; 2.江西宜春市医学科学研究所 ,江西 宜春 336000)
  摘要 :目的 考察不同厂家生产的黄连上清片体外溶出速率。 方法 用转蓝法 ,以盐酸溶液 ( 9→ 1000)
1 000 ml为溶剂 ,转速 100 r /min,紫外分光光度法测定。 结果 不同批号样品间的溶出度有显著性差异。 结
论 认为有必要增加黄连上清片的体外溶出度测定以控制其质量。
  关键词:黄连上清片 ;溶出度 ;崩解时限 ;紫外分光光度法
  中图分类号: R288    文献标识码: A    文章编号: 1004-2199( 2003) -0041-03
  黄连上清片是由黄连、大黄、连翘等 17味中药
材组成的复方中药片剂 ,有清热通便、散风止痛的功
效 ,用于头晕目眩、暴发火眼、牙齿疼痛、口舌生疮等
症。据临床反映服用不同厂家生产的黄连上清片 ,功
效不一。 本文根据黄连上清片的盐酸溶液 ( 9→
1000)在 277 nm波长处有最大吸收的特点 ,用转蓝
法测定了国内五家药厂生产的 6批黄连上清片的体
外溶出度 ,为改进其生产工艺、提高产品质量、提供
参数及方法。
1 仪器和试样
TU-1221紫外分光光度计 (北京通用仪器有限
公司 ) , RC-3B药物溶出度仪 (天津大学无线电厂 ) ,
ZB-IB智能崩解仪 (天津大学精密仪器厂 )。样品: A1
( 020910 ) ; A2 ( 020225 ) ; B ( 20020414 ) ; C
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