全 文 ：娃儿藤抗肿瘤活性部位的成分
王红刚1 ,马远刚1 ,余伯阳1＊ ,袁胜涛2
1中国药科大学中药复方研究室 ,南京 210038;
2中国药科大学新药筛选中心 ,南京 210038
【摘　要】　目的:研究娃儿藤属植物七层楼根中的抗肿瘤活性成分。方法:在抗肿瘤活性部位筛选的基础
上 ,利用多种柱色谱方法对其中的化学成分进行了分离 ,通过理化常数和波谱分析鉴定了所得化合物的结构。
结果:从该植物中共分得 8 个化合物 , 其结构分别鉴定为:异去羟基娃儿藤宁(antofine , Ⅰ)、新白前酮(hancolu-
penone , Ⅱ)、新白前醇(hancolupenol , Ⅲ)、香荚兰酸(vanillic acid , Ⅳ)、丁香酸(syringic acid , Ⅴ)、阿魏酸(ferulic acid ,
Ⅵ)、β-谷甾醇(β-sitosterol , Ⅶ )、胡萝卜苷(daucosterol , Ⅷ)。结论:此 8个化合物均为首次从该植物中分到 , 其中
Ⅱ 、Ⅲ 、Ⅳ、Ⅴ 、Ⅵ 均为首次从该属植物中分到 , Ⅰ有明显抑制肿瘤细胞生长的作用。
【关键词】　娃儿藤属;七层楼;抗肿瘤;化学成分
【中图分类号】　R284.1 , R965.1　　【文献标识码】　A　　【文章编号】　1672-3651(2006)05-0352-03
【收稿日期】　2005-11-28
【＊通讯作者】　余伯阳:教授 ,博导 , Tel/Fax:025-85391042 , E-mail:
boyangyu@yahoo.com.cn
　　娃儿藤为萝 科娃儿藤属植物七层楼 Ty-
lophora floribunda Miq.的根 ,又称土细辛 、一见香 、
小尾伸根(《江西草药》)、老君须(《湖南药物志》),
分布于江苏 、浙江 、福建 、江西 、湖南 、广东 、广西和
贵州 ,朝鲜 、日本也有分布 。娃儿藤性辛 ,温 ,有小
毒 ,具有祛风化痰 、解毒散瘀之功效 ,民间主要用于
治疗小儿惊风 ,中暑腹痛 ,哮喘痰咳 ,咽喉肿痛 ,胃
痛 、牙痛 ,风湿疼痛 ,跌打损伤[ 1]等。目前对娃儿藤
属植物的研究主要集中于其中所含的生物碱类成
分 ,对其他类成分报道较少。研究表明 ,从娃儿藤
属植物中分离得到的娃儿藤碱(Tylophorine)、异娃儿
藤碱(Tylocrebrine)、娃儿藤宁碱(Tylophorinine)的抗
癌活性相当显著[ 2] ;Ganguly 等人[ 3]研究发现娃儿藤
生物碱具有抗炎 、抗过敏 、平喘等作用。
为了寻找抗癌活性物质 ,我们对娃儿藤根中
脂溶性部分和水溶性部分分别进行了抗肿瘤活性
筛选 ,发现其脂溶性成分抗肿瘤活性为强效 ,而水
溶性部分则为中效 ,因此对其根中的酯溶性部位
进行研究 。共分得 8个化合物 ,其结构分别鉴定
为异去羟基娃儿藤宁(Ⅰ)、新白前酮(Ⅱ)、新白前
醇(Ⅲ)、香荚兰酸(Ⅳ)、没食子酸(Ⅴ)、阿魏酸
(Ⅵ)、β-谷甾醇(Ⅶ )、胡萝卜苷(Ⅷ),其中 Ⅱ、Ⅲ 、
Ⅳ、Ⅴ 、Ⅵ均为首次从该属植物中分到 , Ⅰ具有显
著的抗肿瘤活性。
1　仪器与材料
X-4型显微熔点测定仪(温度未校正),Brucker
AV-300 , AV-500 型核磁共振仪(TMS 内标), HP-
1100LC/API/MSD system 质谱仪 ,柱色谱和薄层色
谱用硅胶为青岛海洋化工厂产品 ,所用试剂规格
为分析纯和色谱纯 ,所用药材娃儿藤采自江西省
南康市 ,由作者余伯阳鉴定。
2　提取与分离
娃儿藤药材 4 kg 粉碎 ,用 5倍量 95%的乙醇
热回流提取 3次 ,每次2 h ,合并提取液 ,减压浓缩
干燥 ,得浸膏 250 g ,用 2%HCl酸化稀释 ,滤去酸不
溶物 ,等体积乙醚萃取 4次 ,酸水层氨水碱化至 pH
9 ～ 10 ,碱水液用等体积氯仿萃取3次 ,氯仿层减压
干燥 ,得总生物碱 3 g ,将此总碱经硅胶柱色谱 ,氯
仿-甲醇(50∶1)洗脱 ,馏分 10 ～ 15合并 ,甲醇重结
晶得化合物Ⅰ(25 mg),将酸不溶物及乙醚层合并
共52 g ,经硅胶柱色谱 ,石油醚-乙酸乙酯梯度洗
脱 ,再经反复柱层析及重结晶得化合物 Ⅱ(5 mg),
Ⅲ(10 mg), Ⅳ(15 mg), Ⅴ(5 mg), Ⅵ (4 mg),
Ⅶ (200 mg), Ⅷ(50 mg)。
352　　Chin J Nat Med　Sep.2006　Vol.4　No.5 　2006年 9月　第 4卷　第 5期
3　结构鉴定
化合物 Ⅰ 　黄色粉末 , mp 207 ～ 209 ℃,溶于
氯仿 ,不溶于甲醇 、丙酮 。ESI-MS m/z 364 [ M+
H] + , 295 [ M +H -69] +。 1H-NMR (CDCl3 , 500
MHz)δ:7.92(1H , s ,H-4),7.90(1H ,d , J=2.5 Hz ,
H-5), 7.80 (1H , d , J =9 Hz , H-8), 7.30 (1H , s ,
H-1),7.20 (1H , dd ,2.5 Hz , 9 Hz , H-7), 4.01(3H ,
s , 2-OCH3), 4.06 (3H , s , 3-OCH3), 4.10 (3H , s ,
6-OCH3)。 13C-NMR (CDCl3 , 125 MHz)δ:104.0
(C-1), 149.5 (C-2), 148.5 (C-3), 104.1 (C-4),
123.7 (C-4a), 130.2 (C-4b), 104.8 (C-5), 157.6
(C-6), 115.0 (C-7), 124.1 (C-8), 124.2 (C-8a),
124.2 (C-8b), 53.5 (C-9), 55.0 (C-11), 21.6
(C-12), 31.2 (C-13), 60.2 (C-14), 33.2 (C-15),
124.2(C-15a),124.2(C-15b),56.1(2-OCH3),55.9
(3-OCH3), 55.6 (6-OCH3)。以上数据与文献[ 4 , 5]
报道的异去羟基娃儿藤宁(antofine)波谱数据基本
一致 ,故推定为异去羟基娃儿藤宁 。
化合物 Ⅱ　白色粉末 , mp 240 ～ 242 ℃,溶于
氯仿 、乙酸乙酯 , 不溶于甲醇 。 1H-NMR (CDCl3 ,
500 MHz)δ:0.75 (3H , s , H-26), 0.74 (3H , s ,
H-27),0.88(3H , d , J=5 Hz ,H-29),0.90 (3H , d , J
=5 Hz , H-30), 0.93 (3H , s , H-28), 1.06 (3H , s ,
H-24),1.07(3H , s ,H-23),1.20(3H , s ,H-25),5.32
(1H ,m ,H-11)。13C-NMR(CDCl3 , 125 MHz)δ:36.6
(C-1), 34.9 (C-2), 217.1(C-3), 47.7(C-4), 53.5
(C-5), 22.9 (C-6), 26.3(C-7), 42.4 (C-8), 146.9
(C-9), 39.2 (C-10), 115.1 (C-11), 36.6 (C-12),
37.1 (C-13), 37.4 (C-14), 28.0 (C-15), 32.3
(C-16), 41.2 (C-17), 54.3 (C-18), 49.6 (C-19),
36.0 (C-20), 29.0 (C-21), 38.6 (C-22), 25.6
(C-23), 22.0 (C-24), 21.3 (C-25), 16.0 (C-26),
15.7 (C-27), 32.6 (C-28), 22.3 (C-29), 23.4
(C-30)。以上数据与文献[ 6]报道的新白前酮(han-
colupenone)波谱数据基本一致 ,故推定为新白前
酮。
化合物 Ⅲ　白色粉末 , mp 214 ～ 216 ℃,溶于
氯仿 , 乙酸乙酯 , 不溶于甲醇 。 1H-NMR (CDCl3 ,
500 MHz)δ:0.72 (3H , s , H-26), 0.75 (3H , s ,
H-27),0.81(3H , s ,H-24),0.88 (3H ,d , J=5.8 Hz ,
H-29),0.90(3H , d , J=5.8 Hz ,H-30),0.92(3H , s ,
H-28),0.98(3H ,S ,H-23),1.02(3H , s ,H-25), 3.23
(1H , m , 3-OH), 5.32 (1H , m , H-11)。 13C-NMR
(CDCl3 , 125 MHz)δ:35.9 (C-1), 27.9 (C-2), 79.0
(C-3), 39.1 (C-4), 52.6 (C-5), 21.7 (C-6), 27.2
(C-7),42.2(C-8),148.3(C-9),39.5(C-10),113.8
(C-11), 37.0 (C-12), 37.1 (C-13), 37.4 (C-14),
28.0 (C-15), 32.6 (C-16), 41.2 (C-17), 54.3
(C-18), 49.6 (C-19), 36.0 (C-20), 28.9 (C-21),
38.6 (C-22), 28.2 (C-23), 15.6 (C-24), 21.8
(C-25), 15.7 (C-26), 16.0 (C-27), 32.3 (C-28),
22.3(C-29), 23.4 (C-30)。以上数据与文献[ 7] 报
道的新白前醇(hancolupenol)波谱数据基本一致 ,
故推定为新白前醇 。
化合物Ⅳ　无色针晶 ,溶于甲醇 、乙酸乙酯 ,
不溶于氯仿。ESI-MS m/z 169[M+H] +。1H-NMR
(CDCl3 , 500 MHz)δ:3.88(3H , s , 3-OCH3), 6.83
(1H ,d , J=8.7 Hz ,H-5), 7.54 (2H , m ,H-6 , H-2)。
13C-NMR(CDCl3 , 125 MHz)δ:123.6 (C-1), 116.4
(C-2), 149.2 (C-3), 153.2 (C-4), 114.4 (C-5),
125.8(C-6), 170.5 (-COOH), 56.9 (3-OCH3)。以
上数据与文献[ 8]报道的香荚兰酸 (vanillic acid)波
谱数据基本一致 ,故推定为香荚兰酸。
化合物Ⅴ　无色针晶 ,溶于甲醇 ,乙酸乙酯 ,
不溶于氯仿。ESI-MS m/z 197[ M-H] +。 13C-NMR
(CDCl3 , 125 MHz)δ:122.1 (C-1), 108.5 (C-2),
148.9 (C-3), 133.0 (C-4), 148.9 (C-5), 108.5
(C-6), 170.1 (-COOH), 56.8 (3-OCH3), 56.8
(5-OCH3)。与文献[ 9] 报道的丁香酸(syringic acid)
波谱数据基本一致 ,故推定为丁香酸。
化合 Ⅵ 　无色针晶 ,溶于甲醇 ,乙酸乙酯 ,不
溶于氯仿。ESI-MS m/z 195[M +H] +。 13C-NMR
(CDCl3 , 125 MHz)δ:127.9 (C-1), 111.8 (C-2),
150.5 (C-3), 149.4 (C-4), 116.1 (C-5), 123.9
(C-6), 171.0 (-COOH), 56.5 (3-OCH3), 116.5
(C-α), 146.8(C-β)。与文献[ 10]报道的阿魏酸(fer-
ulic acid)波谱数据基本一致 ,故推定为阿魏酸 。
　2006年 9月　第 4卷　第 5期 Chin J Nat Med　Sep.2006　Vol.4　No.5　353　
4　体外抗肿瘤活性试验
以阿霉素为阳性对照品 ,用 MTT 法对化合物
Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ进行抗肿瘤活性筛选(见表1)。
Table 1　Antitumor activity in vitro against selected hu-
man tumor cells of compound Ⅰ
Sample
c
mol·L -1
BGC-823 HL-60 A549 SMMC-7221
Inhibitory rate(%)〗
1×10-7 66.67 96.22 45.30 29.48
Antof ine 1×10-6 77.62 98.07 55.89 51.09
1×10-5 97.41 98.46 98.28 95.48
1×10-7 17.86 61.59 16.42 10.28
Doxorubicin 1×10-6 45.80 89.73 16.42 53.40
1×10-5 97.67 99.09 90.44 97.47
　　试验结果显示 ,化合物 Ⅰ抑制肿瘤细胞 BGC-
823 、HL-60 生长作用很强(实验最低浓度为 1×
10-7 mol · L-1 时 , 抑 制 率 分 别 为 66.27%、
96.22%),对A549 、SMMC-7721也有较好的抑制生
长的作用(实验最低浓度为1×10-7 mol·L-1时 ,抑
制率分别为 45.30%、29.48%)。化合物 Ⅱ 、Ⅲ对
以上四种细胞无抑制其生长的作用 ,由此可以看
出 ,异去羟基娃儿藤宁(antofine)是娃儿藤中抗肿
瘤活性成分 ,且其具有显著的抗肿瘤活性[ 11] ,具体
的作用机理有待进一步研究。
参 考 文 献
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Antitumor Constituents from the Roots of Tylophora floribun-
da
WANG Hong-Gang1 , MA Yuan-Gang1 , YU Bo-Yang1＊ ,YUAN Sheng-Tao2
1Department of Chinese Medicinal Presription , China Pharmaceutical University , Nanjing 210038 ;
2NewDrug Screening Center , China Pharmaceutical University , Nanjing 210038 , China
【ABSTRACT】　AIM:To study the antitumor constituents from roots of Tylophora floribunda Miq.METHOD:Bioactive fractions were
obtained from the crude extract of Tylophora floribunda Miq.by screening of antitumor activity.The constituents were isolated and purified
by various chromatographicmethods.All compounds were identified on the basis of spectral analysis and physico-chemical characters.RE-
SULT:Eight compounds were isolated and identified as antofine(Ⅰ), hancolupenone(Ⅱ), hancolupenol(Ⅲ), vanillic acid(Ⅳ), sy-
ringic acid(Ⅴ), ferulic acid(Ⅵ), sitosterol(Ⅶ )and daucosterol(Ⅷ), respectively.CONCLUSION:Compounds Ⅰ ～ Ⅷ were isolat-
ed from this plant for the first time.Compound Ⅰ could significantly inhibit the growth of cancer cell.
【KEY WORDS】　Tylophora;Tylophora floribunda ;Antitumor activity;Chemical constituent
354　　Chin J Nat Med　Sep.2006　Vol.4　No.5 　2006年 9月　第 4卷　第 5期