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独角莲醇提液对H22肝癌荷瘤小鼠血清IL-2和TNF-α水平的影响



全 文 :肿瘤药学 2013 年 12 月第 3 卷第 6 期 Anti-tumor Pharmacy, December 2013, Vol. 3, No. 6- 432 -
作者简介:黄展,女,主管药师,研究方向:肿瘤药物学,E-mail:19127239@qq.com。
*通讯作者:辛华,女,教授、主任技师,研究方向:临床检验诊断学,E-mail:xh70128@163.com;孙国志,男,副教授,研究方向:
实验动物学,E-mail:sunguozhijms@163.com。
●基础研究●
独角莲醇提液对 H22 肝癌荷瘤小鼠血清 IL-2 和
TNF-α 水平的影响
黄 展1,辛 华2*,江旭东3,欧 芹3,孙国志4*
(佳木斯大学附属第一医院 1药剂科,2检验科,黑龙江 佳木斯,154003;佳木斯大学 3基础医学院生化教研室,
4实验动物中心,黑龙江 佳木斯,154007)
摘要:目的 探讨独角莲醇提液对H22肝癌荷瘤小鼠血清 IL-2和TNF-α水平的影响。方法 建立体内H22肝
癌荷瘤小鼠的模型,采用灌胃法给予其100 mg·kg
-1
·d
-1独角莲醇提液,以生理盐水灌胃和5-FU腹腔注射作为对照,
连续 10 d,停药后第 2天摘取小鼠眼球取血后断髓处死,取出胸腺、脾脏称重,计算小鼠的胸腺重量指数、脾脏重量
指数,采用ELISA法检测小鼠血清中细胞因子白介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。结果 与生理
盐水灌胃的H22肝癌荷瘤小鼠比较,5-FU腹腔注射和独角莲醇提液灌胃处理的H22荷瘤鼠血清中细胞因子 IL-2、
TNF-α水平明显升高;但胸腺重量指数、脾脏重量指数显著下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 独角莲
醇提液可提高H22荷瘤鼠的血清 IL-2和TNF-α水平。
关键词:独角莲提取液;H22肝癌荷瘤小鼠;白介素-2;肿瘤坏死因子-α
中图分类号:R735.7 文献标识码:A 文章编号:2095-1264(2013)06-0432-04
doi:10.3969/j.issn.2095-1264.2013.106
Effects of Alcohol Extracts of Typhonium Gigantewm Engl. on the Serum IL-2 and
TNF-alpha Levels of H22 Liver Cancer-bearing Mice
Huang Zhan1, Xin Hua2*, Jiang Xudong3, Ou Qin3, Sun Guozhi4*
(1Pharmacy; 2Clinical Laboratory, First Affiliated Hospital of Jiamusi University, Jiamusi, Heilongjiang, 154003,
China; 3Biochemistry Teaching and Research Section of Basic Medical College; 4Laboratory Animal Center, Jiamusi
University, Jiamusi, Heilongjiang, 154007, China)
Abstract: Objective To explore the effects of alcohol extracts of Typhonium giganteum Engl. on the serum IL-2 and
TNF-alpha levels of H22 liver cancer-bearing mice. Methods The models of in vivo H22 cancer bearing mice were established,
and 10 mice were lavaged with 100 mg·kg-1·d-1 of alcohol extracts of Typhonium giganteum Engl., and another 10 had intra-
peritoneal injection of 5-FU, and the remaining 10 had lavage of saline and were taken as control, for 10 days. On the 2nd day
after drug discontinuation, the mice were pulpotomy executed after being taken blood from eyes, and then the thymus, spleen
were removed, weighed and calculated. The serum interleukin-2 (IL-2) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) levels were
detected by ELISA. Results Compared with the mice lavaged by saline, the serum IL-2 and TNF-α levels of mice with intra-
peritoneal injection of 5-FU and those with Typhonium giganteum Engl. alcohol extracts significantly increased, but their thymus
weight index, spleen weight index both decreased (P<0.05). Differences all had statistical significance. Conclusion The alcohol
extracts of Typhonium giganteum Engl. could enhance serum IL-2 and TNF-α levels of H22 liver cancer-bearing mice.
Key words: Alcohol extracts of Typhonium giganteum Engl.; Liver cancer-burdened H22 mice; IL-2; TNF-α
前言
  原发性肝癌(primary hepatic carcinoma, PHC),
简称肝癌,是我国常见的消化系统恶性肿瘤之一,
发病率占世界肝癌发病率的 50 %[1]。虽然近年来
肝癌的治疗取得了显著的进展,但总体疗效仍然不
佳。我国是中医药大国,中药在抗肝癌方面取得
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了显著的疗效[2-6]。独角莲(Typhonium giganteum
Engl.)为天南星科(Araceae)犁头尖属(Typhonium
Schott)植物,是中国特有植物。一方面,独角莲丰
富的化学成分和在抗肿瘤、免疫调节、抑制酪氨酸
酶活性、镇静、抗惊厥、抗破伤风毒素、抗炎、抗菌、
祛痰等方面广泛的药理作用,特别是含有多种倍受
人们关注的脑苷类化合物和天然的酪氨酸酶抑制
剂,必将使其成为一个很有前途的中药品种;另一
方面,对独角莲化学成分的提取、分离、鉴定及药理
作用虽已有较多研究 , 但对于其化学成分与药理活
性关系还有待进一步深入研究[7]。本研究以体内
H22 肝癌荷瘤小鼠为动物模型,旨在探讨独角莲醇
提物对荷瘤小鼠的影响。
1 材料与方法
1.1 独角莲醇提液的制备 原料采自黑龙江省绥滨
县,为野生独角莲根茎,大小不一,最大根茎为 47 g,
最小 13 g,经过专家鉴定确认后,采用无水乙醇提取,
制成浓度为每 1 mL 中含 2 mg 生药的独角莲醇提液。
1.2 动物模型的建立 H22 腹水瘤模型小鼠购自
哈尔滨兽医研究所,腹腔种植肿瘤细胞三天后,选
取腹水量大,状态佳的小白鼠,断髓处死,75 %酒
精全身消毒,无菌操作吸取腹水,加适量生理盐水
配成细胞悬液,倒置显微镜下进行细胞计数并测定
细胞活力,调整细胞密度为 2×107 ·mL-1 备用。昆
明种清洁级小鼠,用 75 %乙醇对小鼠左腋下进行
消毒,每只小鼠左腋下皮下注入 0.2 mL(含癌细胞 4
×106 个)上述细胞悬液,制成 H22 荷瘤鼠模型[8,9]。
  将 30 只造模后的小鼠称重,随机分为对照
组、5-FU 组(25 mg·kg-1·d-1)、独角莲醇提物组(100
mg·kg-1·d-1),每组各 10 只。24 h 后按体重给药,隔
日称量体重。对照组:给予生理盐水(50 ml·kg-1·d-1)
一次灌胃;5-FU 组:给予 5-FU(25mg·kg-1·d-1)一
次腹腔注射;独角莲醇提物组:给予独角莲醇提液
(50 mL·kg-1·d-1)一次灌胃,连续 10 d,停药后第 2 天
摘眼球取血后断髓处死,取出胸腺、脾脏称重。
1.3 检测指标 胸(脾)腺重量指数(mg/10g)= 胸腺
(脾)重量 / 去瘤鼠重量 ×10;血清 IL-2、TNF-α 含
量采用 ELISA 方法测定,试剂盒购自南京建成正洁
科技有限公司。
1.4 统计学处理 所得实验数据以均数 ± 标准差
(x±s)表示,应用 SAS 9.13 软件进行统计分析,各组
数据采用方差分析和组间 q 检验,以 P<0.05 为差
异有统计学意义。
2 结果
2.1 独角莲醇提液对 H22 荷瘤鼠胸(脾)腺重量指
数的影响 与对照组比较,5-FU 组、独角莲醇提液
组 H22 荷瘤鼠胸腺(湿)重量明显降低、脾腺(湿)重
量明显增加,胸腺、脾腺指数下降亦明显,差异具有
统计学意义(P<0.05),但 5-FU 组、独角莲醇提液组
之间的差异无统计学意义(P>0.05)(见表 1)。
表1 独角莲醇提液对H22荷瘤鼠胸腺、脾腺重量指数的影响
Tab. 1 Effect of alcohol extraction of Typhonium giganteum Engl. on the index of thymus and spleen weight of H22 tumor-bearing mice
重量指数(Weight Index)
对照组
(Control group)
5-FU组
(5-FU group)
独角莲醇提液组
(Alcohol extraction of Typhonium
giganteum Engl.)
F P
n 9 8 8
胸腺湿重(Wet weight of thymus/mg) 171.62±13.62 22.84±1.80* 37.06±1.40* 842.37 <0.0001
胸腺指数[Thymus index (mg/10g)] 23.17±0.42 7.54±0.23* 11.37±0.85* 1836.07 <0.0001
脾腺湿重(Wet weight of spleen/mg) 45.54±1.35 81.77±4.11* 106.51±16.21* 89.54 <0.0001
脾腺指数[Spleen index (mg/10g)] 100.04±5.23 34.17±4.42* 44.16±10.28* 218.33 <0.0001
注:与对照组比较,*P< 0.05。
Note: Compared with control group, *P< 0.05.
2.2 独角莲醇提液对 H22 荷瘤鼠血清 IL-2 和
TNF-α水平的影响 与对照组比较,5-FU 组、独
角莲醇提液组血清中 TNF-α 和 IL-2 水平明显增
高,差异具有统计学意义(P<0.05),但 5-FU 组、独
角莲醇提液组之间的差异无统计学意义(P>0.05),
见表 2。
3 讨论
  独角莲(Typhonium giganteum Engl.)是佛焰苞
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目(Spathiflorae)天南星科(Araceae)多年生草本植
物,其根茎呈倒卵形、卵球形或卵状椭圆形,具有抗
肿瘤、免疫调节、抗炎、祛痰、镇静、抗惊厥、抗破伤
风毒素等作用[10-18]。增强机体的免疫功能是目前
抗肿瘤治疗的主要方法之一,IL-2 参与细胞免疫,
能够通过促进 T 细胞增殖和分化等作用提高机体
的免疫机能。LAK 细胞是一种由淋巴因子活化的
杀瘤谱最广、效应最强的杀伤细胞,只杀伤肿瘤且
不损伤正常细胞,而 IL-2 能够明显增加 LAK 细胞
活性,加强其杀瘤细胞作用[19]。本研究结果表明,
独角莲醇提液可提高荷瘤鼠血清中的 IL-2 水平,
效果与 5-FU 相当,表明其可能增强 H22 荷瘤小鼠
的细胞免疫。TNF-α 是一种由激活的单核吞噬细
胞分泌产生的糖蛋白,正常情况下,机体内 TNF-α
的浓度较低,具有抑制肿瘤细胞增殖、促进其溶解、
增强机体抗肿瘤免疫反应等作用,是迄今为止发
现的抗肿瘤作用最强的细胞因子[20]。本研究结果
表明,独角莲醇提液能明显提高 H22 荷瘤鼠血清
TNF-α 水平,由此可能促进肿瘤细胞凋亡、阻止肿
瘤生长。本研究还发现,与生理盐水处理的 H22 荷
瘤小鼠相比,5-FU 和独角莲醇提液处理的小鼠胸
腺、脾脏重量指数均明显下降。综上所述,本研究
结果表明独角莲醇提液可通过提高 H22 荷瘤鼠的
血清 IL-2 和 TNF-α 水平,增强机体免疫力,达到
抑制肿瘤生长的作用,但其具体机理尚有待于进一
步研究。
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表2 独角莲醇提液对H22荷瘤鼠血清中IL-2和TNF-α水平的影响
Tab. 2 Effect of alcohol extraction of Typhonium giganteum Engl. on the serum level of IL-2 and TNF-alpha of H22 tumor-bearing mice
项目
(Items)
对照组
(Control group)
5-Fu组
(5-FU group)
独角莲醇提液组
(Alcohol extraction of Typhonium giganteum Engl.)
F P
n 9 8 8
TNF-α(ng·mL-1) 1.03±0.17 2.45±0.10* 1.78±0.18* 177.56 <0.0001
IL-2(n g·mL-1) 5.75±0.10 7.93±1.11* 9.61±0.75* 55.75 <0.0001
注:与对照组比较,*P< 0.05。
Note: Compared with control group, *P< 0.05.
肿瘤药学 2013 年 12 月第 3 卷第 6 期 Anti-tumor Pharmacy, December 2013, Vol. 3, No. 6 - 435 -
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    收稿日期:2013-09-30 校稿:王娟 李征
Cite this article as: Huang Z, Xin H, Jiang XD, et al. Effect of Alcohol Extracts of Typhonium
Gigantewm Engl. on the Serum IL-2 and TNF-alpha Levels of H22 Liver Cancer-bearing Mice.
Anti-tumor Pharm, 2013, 3(6): 432-435. [黄展, 辛华, 江旭东, 等. 独角莲醇提液对H22肝癌荷
瘤小鼠血清IL-2和TNF-α水平的影响. 肿瘤药学, 2013, 3(6): 432-435.] doi: 10.3969/j.issn.20
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