全 文 ：29(1)110-116 中国生物防治学报 Chinese Journal of Biological Control 2013年 2月

收稿日期：2012-02-28
基金项目：国家自然科学基金项目（31101454）；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目（2012RG003-2）；浙江省自然科学基金项
目（Y3100237）；“十二五”农村领域国家科技计划项目（2012BAD19B02）；“863”计划项目（2011AA10A206）
作者简介：韩川（1987），男，硕士研究生，Email: hanchuansin@126.com；*通讯作者，研究员，E-mail: liuqyu53@yahoo.com.cn。


六蕊假稻Leersia hexandra病原真菌稻平脐蠕孢
Bipolaris oryzae的分子鉴定及致病性研究
韩 川 1，段桂芳 2，张建萍 1，陆永良 1，余柳青 1*
（1. 中国水稻研究所/水稻生物学国家重点实验室，杭州 310006; 2. 中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所/合成生物学重点实验室，
上海 200032）
摘要：为了筛选获得具除草潜力的病原真菌菌株，经形态学观察和 18s rDNA ITS序列分析，6株分离自感
病六蕊假稻的菌株被鉴定为稻平脐蠕孢 Bipolaris oryzae。采用培养皿生测法和盆栽生测法分别评价其发酵
液毒素和菌丝体悬浮液的除草活性，同时用盆栽生测法测定了菌丝体悬浮液对主要作物的安全性。试验结
果表明：6株稻平脐蠕孢培养 14 d的发酵液对稗草根长、芽长均有很高的抑制作用，根长和芽长最高抑制
率分别为 100%和 80.38%。培养 7 d的菌丝体悬浮液对稗草的感病率、感病指数、株高抑制率、鲜重抑制
率最高可达 100%、72.00、50.29%和 63.31%。6株稻平脐蠕孢菌丝体悬浮液对稗草、千金子、六蕊假稻、
鸭舌草、矮慈姑、野荸荠具有不同程度的致病性，对双穗雀稗、异性莎草、看麦娘不致病。6 株稻平脐蠕
孢对主要农作物安全或致病性很弱，具有进一步开发为生物除草剂的潜力。
关 键 词：六蕊假稻；稻平脐蠕孢；分子鉴定；致病性
中图分类号：S451；S476.1 文献标识码：A 文章编号：1005-9261(2013)01-0110-07
Molecular Identification and Pathogenicity Research of Bipolaris oryzae on Leersia hexandra
HAN Chuan1, DUAN Guifang2, ZHANG Jianping1, LU Yongliang1, YU Liuqing1*
(1. China National Rice Research Institute/State Key Laboratory of Rice Biology, Hangzhou 310006, China; 2. Key Laboratory and
Synthetic Biology, Institute of Plant Physiology and Ecology, Shanghai Institute for Biological Sciences, Chinese Academy of
Sciences, Shanghai 200032)
Abstract: In order to obtain potential pathogenic fungi for biological control of weeds, we isolated from
natural-infected Leersia hexandra six strains which was then identified as Bipolaris oryzae via morphology and
rDNA ITS sequence analysis. Herbicidal activity of toxins in culture filtrates and mycelial suspension were
evaluated by petri dish and pot bioassay, and the safety to main crops of mycelia suspension was also tested using
pot bioassay. Results showed that the 14 day culture filtrates of the six strains were highly inhibitory against growth
of barnyardgrass, Echinochloa crusgalli (L.) Beauv. , with inhibitory rate of 100% on roots and 80.38% on shoots
respectively. Disease incidence, disease infection index, inhibition rates of plant height and fresh weight of
barnyardgrass treated with 7 day mycelia suspension reached 100% , 72 , 50.29% and 63.31%, respectively. The 7
day mycelia suspension was pathogenic with various degrees to E. crusgalli, Leptochloa chinensis, L. hexandra,
Monochoria vaginalis, Sagittaria pygmaea and Eleocharis plantaginerformis, but not pathogenic to Paspalum
distichum, Cyperus difformis and Alopecurus aequalis. The six strains were safe or weak pathogenic to main crops,
and showed potential as biological herbicides.
Key words: Leersia hexandra; Bipolaris oryzae; molecular identification; pathogenicity
第 1期 韩川等：六蕊假稻 Leersia hexandra病原真菌稻平脐蠕孢 Bipolaris oryzae的分子鉴定及致病性研究 111

六蕊假稻 Leersia hexandra Swartz，禾本科 Gramineae假稻属 Leersia，又名李氏禾、稻李氏禾 [1]，
常生于河边、湖边，属水生或湿生多年生根茎类禾本科 C3 植物，具有传播途径广、繁殖能力强、危害
严重、防除困难等特点[2,3]。六蕊假稻通常以根茎和种子繁殖[4]，自从 1983年在黑龙江桦南县稻田首次发
现以来，近几年由于栽培制度和耕作制度的改进，特别是节水灌溉的大力推广，在黑龙江、云南、山东、
河北、天津等地相继有六蕊假稻侵入水田造成危害的报道[5]。据黑龙江省农科院在萝北县和密山县的调查，
直播稻田六蕊假稻再生苗达 10株·m2使水稻减产 20%～30%，20株·m2使水稻减产 50%～70%，200株·m2
造成水稻绝产，颗粒无收[6]。
稗草 Echinochloa crus-galli (L.) Beauv.，禾本科稗属 Echinochloa，常生于沼泽、沟渠旁、低洼田地及
稻田中，属一年生草本植物。原产于欧洲及印度，现广泛分布在全球热带及温带地区，在我国南北各省均
有分布。稗草根系发达，适应力强，生长茂盛，通过资源竞争对水稻、玉米、棉花、大豆、小麦等农作物
造成危害，对水稻影响特别严重，每年受稗草危害的稻田有 670多万公顷[1]，造成水稻减产高达 30%～50%，
有的田块甚至颗粒无收[7]，是稻田重要的恶性杂草。
微生物除草剂是指能在人为控制的条件下，利用植物病原微生物或其代谢产物，使目标杂草感病致死
的一种微生物制剂。与化学除草剂相比，微生物除草剂具有资源丰富，不易产生抗性杂草，对非靶标生物
安全，经济效益好，环境相容性好等特点[8]。真菌、细菌、病毒和放线菌是可用于微生物除草剂的潜力微
生物资源。近年来，微生物除草剂的研究和开发获得了突破性的进展。据目前研究报道已分离鉴定出约 80
余种微生物，防除约 70种恶性杂草。其中有 36种微生物有望或已发展作为微生物除草剂的候选菌株，有
19种微生物已经被开发应用为商品化产品[9]。但是由于它们致病力和商品化的差异性，现在市场上见到的
绝大多数微生物除草剂产品属于病原真菌，这主要与真菌具有很强的的繁殖力和侵染力有关[11]。因此，近
20多年来真菌除草剂的研究和开发是微生物除草剂领域中一个非常活跃的分支。
为了获得防除稻田杂草的病原真菌菌种资源，从浙江省海盐、龙游、开化县的稻田采集和分离到 6株
病原真菌，经形态学观察和 rDNA ITS序列分析鉴定了此 6株菌株，并对其进行了发酵液毒素除草活性、
杀草谱和作物安全性评价研究。
1 材料与方法
1.1 菌株的分离与纯化
自然感病六蕊假稻 Leersia hexandra样品采自浙江省海盐、龙游、开化县的稻田，共分离到 6株病原真菌，
分别为菌株 L1、L3、L4、L5、L6、L8。采用方中达[10]的组织分离法分离：灭菌剪刀剪取病茎、病叶，剪成长
度 3 mm小段，放入盛有 70%酒精的灭菌小烧杯中表面消毒 10 s，再放入盛有 3%次氯酸钠小烧杯中消毒 5 min，
无菌水冲洗 3次，接种于 PDA培养基中，每皿放置 3段，每样品重复 3次。在恒温培养箱中 25 ℃倒置恒温
培养，待菌落长出后，挑取菌落边缘特征性菌块纯化菌种，纯化菌种用甘油保存于-80 ℃超低温冰箱中备用。
1.2 菌株鉴定
1.2.1 形态学观察 将甘油保存的纯化菌株转接于 PDA平板，于 28 ℃恒温培养箱培养 6 d后，测量各菌
株的菌落直径，观察记录菌落形态、颜色、质地等，同时用无菌水洗脱菌落，于显微镜下观察产孢情况及
孢子、菌丝体的形态学特征。
1.2.2 分子鉴定 总 DNA 提取方法采用 CTAB法，参照赵杏利[11]的方法略作改动；ITS区片段的扩增测
序及系统树构建[12~15]：对分离获得的代表性菌株的 18s rDNA 的 ITS1-5.8S-ITS2 进行 PCR 扩增，引物为
ITS1： （5-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3）和 ITS4：（5-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3）。PCR反
应所需试剂购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司，PCR反应体系 50 μL：10×Buffer缓冲液 5 μL，引
物 ITS1（10 μmol·L1）和 ITS4（10 μmol·L1）各 1 μL，10 mmol·L1 dNTP 1 μL，2 U·μL1 Taq DNA聚合
酶 1 μL，模板 DNA 1 μL，双蒸灭菌水 40 μL。
PCR反应程序：95 ℃ 2 min；95 ℃ 1 min，53 ℃ 1 min，72 ℃ 2 min，34个循环；72 ℃ 10 min。
4 ℃保存。PCR产物在 1.4%琼脂糖凝胶中电泳分离后，通过 ALPHA凝胶成像系统显示，拍照记录电泳结
果。PCR 扩增产物经检测纯化后送到上海桑尼生物科技有限公司进行双向测序。将测得的序列采用 Blast
112 中 国 生 物 防 治 学 报 第 29卷
程序与 GenBank上的序列进行同源性比较，在MEGA5.04中用 Clustal W进行多重序列比对，按邻近相接
法（neighbour-joining）构建系统发育树，系统树的重复抽样分析采用 1000次自展法（bootstrap）获得。
1.3 菌株发酵液对稗草根长及芽长的抑制率测定
将已分离的 6株病原菌活化培养 7 d后，取直径 5.5 mm的菌块 3块接种于 100 mL PDB培养基中。
25 ℃，120 r·min1，黑暗条件下发酵 14 d后用无菌纱布过滤收集发酵液，采用种子根芽生长抑制率法比较
发酵液杀草活性。挑选颗粒饱满无损伤的稗草种子，表面消毒，无菌水漂洗，然后先对它们进行催芽。分
别取发酵液原液 8 mL置于含灭菌滤纸的培养皿中，3次重复。再将预先催芽至露白的稗草和水稻种子置于
滤纸上，每片滤纸上放 10粒，放置于 28 ℃，光周期 12 L:12 D的培养箱中培养，3次重复。以灭菌水作为
对照，72 h后统计种子的根芽长度并计算抑制率。
1.4 温室条件下菌丝体悬浮液对稗草的活力测定
将 6株病原菌活化培养 7 d后，取直径 5.5 mm的菌块 3块接种于 100 mL PDB培养基中。25 ℃，120 r·min1，
黑暗条件下发酵 7 d后用无菌纱布过滤收集菌丝体，菌丝体研磨后再加入 0.05%的吐温-20配成 200 g·L1
菌丝体悬浮液，对 3叶期稗草进行叶面喷施，喷施量为 60 mL·m2，以 0.05%的吐温-20作为对照，各处理
重复 3次，喷施后 28 ℃保湿 24 h。处理 7 d后测定稗草的感病率及感病指数，14 d后进行稗草株高、鲜
重调查。禾本科杂草的病情分级标准见参考文献[11]。
1.5 温室条件下菌丝体悬浮液的杀草谱
将稗草 E. crusgalli、六蕊假稻 L. hexandra、千金子 L. chinensis、双穗雀稗 P. distichum、异型莎草
C. difformis、鸭舌草 M. vaginalis、矮慈姑 S. pygmaea、看麦娘 A. aequalis、野荸荠 E. plantaginerformis
播种于温室塑料盆（25 cm×25 cm×15 cm）中。用 6株病原菌菌丝体悬浮液（制备同 1.4），对 3叶期杂
草进行叶面喷施，喷施量为 60 mL·m2，以 0.05%的吐温-20作为对照，各处理重复 3次，喷施后 28 ℃保
湿 24 h，处理 7 d后测定菌丝体悬浮液对杂草的感病指数。
1.6 温室条件下菌丝体发酵液对主要作物的安全性测定
将水稻（籼稻 9311、粳稻华粳 6号、杂交稻扬两优 2号）、小麦、大麦、玉米、大豆、油菜播种于温
室塑料盆（25 cm×25 cm×15 cm）中。温室生长 14 d后，用菌丝体悬浮液（制备同 1.4）对其进行叶面喷
施，喷施量为 60 mL·m2，以 0.05%的吐温-20作为对照，各处理重复 3次。喷施处理后 28 ℃保湿 24 h。7 d
后检测作物幼苗是否受害，并记录受害情况[16]。
1.7 数据统计与分析
所有数据用唐启义[17]的 DPS软件进行方差分析，差异显著性检验采用随机区组设计的 Duncan’s新复
极差法。
2 结果与分析
2.1 菌株鉴定
通过形态学观察，仅有菌株 L6 在常规 PDA 培养基培养能较易产孢，菌株 L1、L3、L4、L5、L8 在
PDA培养基上不产孢，在 PDA培养基 28 ℃黑暗培养 6 d后，菌落直径从大到小依次为菌株 L5、L1、L6、
L8、L3、L4，其中最大为菌株 L5（ 8.6～8.8 cm），最小为菌株 L4（3.6～4.0 cm），菌落颜色由浅绿色
至深绿色，质地绒毛状，表面有灰白色气生菌丝，菌株 L5培养基背面有红色色素产生。 在醋酸钠培养基
（醋酸钠 4 g，琼脂 17 g）上，6菌株在 28 ℃，黑暗下培养 15 d能少量产孢，分生孢子深黄褐色，舟形，
倒棍棒形或圆柱形，表面光滑，端部较尖，脐部较平滑略突出，孢子略弯，具 5～10个（多 6个）假隔膜，
大小（42.7～106.7）μm×（10.2～21.3）μm；分生孢子梗茎中褐色，顶端色浅，内有隔膜，单生，有分支，
直径 4.9～9.8 μm（图 1）。
PCR结果显示，用 ITS1和 ITS4扩增的 6菌株 rDNA的 ITS序列均为单一清晰条带，分子量大小为 600
bp左右，并对此序列测序并构建系统发育树（图 2）。6菌株与稻平脐蠕孢 B. oryzae和稻平脐蠕孢菌有性
态 Cochliobolus miyabeanus的亲缘关系最近，相互聚为一簇，构成一个分支，bootstrap value为 98%。结合
菌落及孢子形态学特征，可以确定 6株潜力菌株为稻平脐蠕孢菌。
第 1期 韩川等：六蕊假稻 Leersia hexandra病原真菌稻平脐蠕孢 Bipolaris oryzae的分子鉴定及致病性研究 113


图 1 6株稻平脐蠕孢菌 Bipolaris oryzae菌落形态及孢子形态
Fig. 1 Colony and spore morphology of Bipolaris oryzae.
100
42
38
94
78
55
64
44
47
71
98
L6
L5
L4
L3
L1
Bipolaris sp.BR479(FJ971841)
Cochliobolus miyabeanus (HM131852)
Cochliobolus miyabeanus (HM131851)
Bipolaris oryzae (DQ3000207)
Bipolaris oryzae (DQ3000206)
Bipolaris oryzae (DQ3000205)
Bipolaris oryzae (JN093305)
L8
Bipolaris heveae (AY004775)
Cochliobolus sativus (EF452447)
Bipolaris stenospil (AB179837)
Bipolaris eleusines (DQ337382)
Cochliobolus heterostrophus (HM195267)
Bipolaris sorokiniana (GU934504)
Bipolaris setariae (GU290228)
Bipolaris sacchari (AB179836)
Cochliobolus heterostrophus (HM195267)
Alternaria alternata (AF455539)
Alternaria longipes (AY154684)
Asperrgillus niger (EF094826)
0.05
图 2 基于 ITS基因序列构建的分离的 6株病原菌与相关属种的系统发育树
Fig. 2 Neibour-joining tree among six strains and other ITS-based related species.
2.2 菌株发酵液对稗草根长和芽长的抑制率测定
6种稻平脐蠕孢发酵液对稗草种子处理 3 d后，稗草根长、芽长均显著低于对照（P＜0.05）。其中菌
株 L3和菌株 L6对稗草根长的抑制率大于 90%，菌株 L4对稗草根长和芽长的抑制率均大于 80%（表 1）。
2.3 温室条件下菌丝体悬浮液对稗草的活力测定
6种稻平脐蠕孢菌丝体悬浮液对稗草处理 7 d后，稗草叶片均有不同程度的感病情况，病斑形态如下：
稗草基部叶鞘、叶片产生梭形黄褐色病斑，大小形似芝麻，外围有黄色晕圈，严重的从叶尖开始，整个叶
片变黄逐渐枯死。处理 7 d后，稗草叶片感病率均达到 60%以上，感病指数从高到低依次为菌株 L5、L4、
L3、L1、L8、L6，其中菌株 L5对稗草的致病力最强，感病指数达到 72。菌丝体悬浮液处理 14 d后，稗
114 中 国 生 物 防 治 学 报 第 29卷
草的株高和鲜重均显著低于对照。其中菌株 L5处理对稗草的株高和鲜重抑制率最高，分别达到 50.29%和
63.31%，这与菌株 L5对稗草叶片的感病指数最高一致（表 2）。
表 1 6种稻平脐蠕孢发酵液对稗草根长和芽长的抑制率（平均值±标准差）
Table 1 Root and shoot growth inhibition rate of E. crusgalli by culture filtrates of B. oryzae (Mean±SD)
病原菌发酵液
Culture filtrates of strains
稗草 E. cursgalli
根长抑制率 Root length inhibition rate (%) 芽长抑制率 Shoot length inhibition rate (%)
L1 57.02±4.07 bc 36.16±7.68 de
L3 100.00±0.00 a 59.44±0.91 b
L4 98.31±1.55 a 80.38±3.74 a
L5 47.88±0.78 d 43.34±1.16 cd
L6 98.71±1.14 a 55.64±5.18 bc
L8 49.41±6.27 cd 26.21±3.90 e
注：表中同列数据后不同小写字母表示 0.05水平下差异显著，下同。
Note: Data in a column followed by different lowercase letters are significantly different at 0.05 level, the same below.
表 2 6种稻平脐蠕孢菌丝体悬浮液对稗草的杀草活性（平均值±标准差）
Table 2 Herbicidal activity of the mycelia suspension against E. crusgalli (Mean±SD)
菌种菌丝体悬浮液
Mycelia suspension of strains
感病率
Disease incidence (%)
感病指数
Disease index
株高抑制率
Plant height inhibition rate (%)
鲜重抑制率
Fresh weight inhibition rate (%)
CK 0.00±0.00 d 0.00±0.00 d 0.00±4.92 f 0.00±3.04 e
L1 90.00±0.00 ab 46.67±10.07 b 24.16±1.19 d 36.29±3.04 d
L3 96.67±5.77 ab 46.67±2.31 b 37.06±1.92 b 45.56±2.10 c
L4 100.00±0.00 a 53.33±2.31 b 40.45±1.57 b 58.06±1.85 ab
L5 100.00±0.00 a 72.00±6.93 a 50.29±2.03 a 63.31±3.04 a
L6 60.00±10.00 c 25.33±12.86 c 19.10±1.66 e 37.50±6.21 d
L8 76.67±15.28 b 40.00±10.58 b 32.25±2.01 c 50.81±5.45 bc
2.4 温室条件下菌丝体悬浮液的杀草谱
6种稻平脐蠕孢菌丝体悬浮液对目标杂草处理 7 d 后，稗草、千金子、六蕊假稻、鸭舌草、矮慈姑均
有不同程度的致病性，对双穗雀稗、异性莎草、看麦娘不致病。其中对稗草和千金子、鸭舌草、矮慈姑的
致病力较强，对六蕊假稻、野荸荠有较弱的致病力。尤其是菌株 L5对稗草, 以及菌株 L4、L5和 L8 对鸭
舌草的感病指数大于 60，具有较高的杀草活性（表 3）。
表 3 6种稻平脐蠕孢菌丝体悬浮液对杂草的感病指数（平均值±标准差）
Table 3 Disease indexes of the weeds under the treatment with mycelia suspension (Mean±SD)
菌株
Strain
稗草
E.crusgalli
千金子
L.chinensis
六蕊假稻
L.hexandra
鸭舌草
M.vaginalis
矮慈姑
S. pygmaea
野荸荠
E. plantagineiformis
CK 0.00 d 0.00 c 0.00 b 0.00 c 0.00 c 0.00 b
L1 46.67 b 34.67 ab 8.00 ab 24.45 bc 44.45 a 0.00 b
L3 46.67 b 28.00 ab 5.33 ab 51.11 ab 6.67 bc 3.33 b
L4 53.33 b 22.67 b 2.67 ab 64.45 a 40.00 ab 27.33 a
L5 72.00 a 44.00 a 13.33 ab 60.00 a 37.78 ab 8.67 ab
L6 25.33 c 18.67 b 20.67 a 20.00 bc 37.78 ab 0.00 b
L8 40.00 b 30.67 ab 5.331 ab 84.45 a 31.11 abc 1.33 b
2.5 温室条件下菌丝体悬浮液对主要作物的安全性测定
试验结果表明，菌丝体悬浮液施药后 7 d，菌株 L3、L4、L5、L6、L8的菌丝体悬浮液对籼稻、粳稻、
杂交稻、小麦、大豆、油菜主要农作物安全，菌株 L3对玉米、大麦有轻度致病作用，菌株 L6对玉米有轻
第 1期 韩川等：六蕊假稻 Leersia hexandra病原真菌稻平脐蠕孢 Bipolaris oryzae的分子鉴定及致病性研究 115

度致病作用，菌株 L8 对大麦有轻度致病作用，菌株 L4 和 L5 对所测农作物均不致病。菌株 L1 对主要农
作物的致病力较强，对华粳 6号、扬两优 2号和大麦都有轻度致病作用。通过以上结果，菌株 L4、L5对
主要农作物均不致病，具有进一步开发为生防潜力菌株的潜力（表 4）。
表 4 6种稻平脐蠕孢对主要作物的安全性
Table 4 The safety test of B. oryzae to major crop
菌株
Strain
水稻 9311
Rice 9311
水稻华粳 06
Rice Huajing 06
水稻扬两优 02
Rice Yangliangyou 02
小麦
Wheat
大麦
Barley
玉米
Corn
大豆
Soybean
油菜
Rape
CK NS NS NS NS NS NS NS NS
L1 NS LS LS NS LS NS NS NS
L3 NS NS NS NS LS LS NS NS
L4 NS NS NS NS NS NS NS NS
L5 NS NS NS NS NS NS NS NS
L6 NS NS NS NS NS LS NS NS
L8 NS NS NS NS LS NS NS NS
NS：不感病；LS：轻度感病，少量叶片上有零星病斑；MS：中度感病； HS：高度感病，叶片上病斑较多且扩展；PD：植株死亡。
NS: Not susceptible; LS: Mild susceptible, a small amount of leaves with sporadic lesions; MS: Moderate susceptible; HS: Highly susceptible to leaf spot
and more expansion; PD: The plants died.
3 讨论
经菌落形态和孢子形态学观察，结合菌株 18s rDNA ITS序列分析鉴定，将从浙江省海盐、龙游、开化
县稻田自然感病的六蕊假稻上分离的 6株病原真菌鉴定为稻平脐蠕孢 Bipolaris oryzae。张猛等[18]从河南马
唐上分离到稻平脐蠕孢，并经致病性分析认为是一种有希望用于田间杂草生物防治的潜在真菌资源。耿锐
梅等[5]从云南六蕊假稻上分离到 2 株稻平脐蠕孢 Bipolaris oryzae 和稻平脐蠕孢有性型 Bipolaris oryzae
(teleomorph: Cochliobolus miyabeanus )，并通过生测评价其除草活性及对作物的安全性，证明其用于微生物
除草剂开发的合理性。但对多株稻平脐蠕孢的杀草活性及杂草寄主范围开展比较研究还鲜见报道。
利用稗草病原真菌开发微生物除草剂的研究取得进展，世界各国已采集到并显示出较好的应用前景的
稗草病原菌有稗叶枯菌 Helminthosporium sativum[19,20]、刺盘孢 Colletotrichum graminicola[21]、弯孢
Curvularia lunata[22]、链格孢 Alternaria alternata[23]、平脐蠕孢 Bipolaris maydis，Bipolaris australiensis[24]
和尖角突脐孢 Exserohilum monocerus[25]等 。中国水稻研究所从自然感病杂草标样上分离获得大量稗草病
原真菌，其中禾长蠕孢稗草专化型（Elminthosporium gramineum Rabenh. f.sp．echinochloae，HGE）对稗
草有较强的致病力，且对水稻、小麦、玉米、油菜等作物安全[26]。但关于稻平脐蠕孢 B. oryzae对稗草的防
治潜力评价未见报道.
本文从六蕊假稻上分离的 6 株稻平脐蠕孢除菌株 L6 可在 PDA 培养基较低产孢外，其余菌株在常规
PDA 培养基上不产孢，但是在 PDB 中可产生大量菌丝体，因此采用菌丝体悬浮液作为接种体评价其对杂
草致病性和作物安全性。发酵液抑制稗草根芽试验表明，在 6 株稻平脐蠕孢中，菌株 L4 对稗草根长和芽
长的抑制率最高，说明该菌株的发酵液含有较高的毒素代谢产物。菌丝体悬浮液杀草活性及对作物的安全
性试验表明， 菌株 L5的菌丝体悬浮液对杂草的致病能力强，对杂草的株高和鲜重有较强的抑制作用，同
时对杂草的寄主范围更广，而且对水稻、玉米、小麦等主要农作物安全，因此具有更广泛的开发应用潜力。
对六蕊假稻生物防治的研究，国内仅有耿锐梅[5]用离体叶片生测法评价稻平脐蠕孢对离体六蕊假稻叶
片的致病性研究，国外对六蕊假稻生物防治研究还未曾有人报道。本文筛选的 6株稻平脐蠕孢的菌丝体悬
浮液对六蕊假稻的感病指数均较低，不具备开发应用潜力。究其原因可能与本试验研究材料均取六蕊假稻
的移栽苗，较难控制其生长期有关，因此 6株稻平脐蠕孢对六蕊假稻的除草活性还有待进一步研究。
对具有稗草防治潜力的菌株 L4和 L5的生物学特性、产孢培养基的优化、杀草活性物质的结构鉴定等
尚有待进一步研究。
116 中 国 生 物 防 治 学 报 第 29卷
参 考 文 献
[1] 李扬汉. 中国杂草志[M]. 北京: 中国农业出版社, 1998.
[2] 韩崇文, 赵丽红, 刘占国. 稻李氏禾综合防治技术[J]. 北方水稻, 2007, 38(4): 58-59.
[3] 黄元炬, 朴德万, 黄春艳, 等. 农美利防除水稻直播田李氏禾效果及安全性[J]. 杂草科学, 2005, (1): 32-34.
[4] 邓秀成, 姜贵生, 潘永亮, 等. 稻李氏禾的发生及防治[J]. 现代化农业, 2005, (7): 7-8.
[5] 耿锐梅, 张建萍, 余柳青. 稻平脐蠕孢的分离、鉴定及对作物的安全性[J]. 浙江农业科学, 2008, 20(6): 446-450.
[6] 张子丰, 黄元巨, 韩逢春, 等. 黑龙江省水田稻李氏禾的危害及防除[J]. 杂草科学, 2000, (1): 36-37.
[7] 耿锐梅. 稻田微生物除草剂孢子生产和制剂加工技术的研究[D]. 北京: 中国农业科学院, 2009.
[8] Babu R M, Sajeena A, Seetharaman K, et al. Advances in bioherbicides development-an overview[J]. Crop Protection, 2004, 23(7): 253-655.
[9] 顾成波, 赵长山. 微生物及其天然产物防治杂草的发展及展望[J]. 农药科学与管理, 2003, 24(2): 19-21.
[10] 方中达. 植病研究方法[M]. 北京: 中国农业出版社, 1998.
[11] 赵杏利. 我国北方部分地区主要禾本科杂草病原真菌资源研究[D]. 北京: 中国农业科学院, 2009.
[12] 陈志谊, 王晓艳, 罗楚平. 空心莲子草病原真菌的分离筛选及其菌株 SF-193种的鉴定[J]. 中国生物防治, 2007, 23(4): 353-357.
[13] Bruns T D, White T J, Taylor J W. Fungal molecular systemaries[J]. Annual review of ecology and systematics, 1991, 22: 525-564.
[14] Iwen P C, Hinrichs S H, Rupp M E. Utilization of the internal transcribed spacer regions as molecular targets to detect and identify human fungal
pathogens[J]. Medical Mycology, 2002, 40: 87-109.
[15] Edwards K, Johnstone C, Thompson C. A simple and rapid method for the preparation of plant genomic DNA for PCR analysis[J]. Nucleic Acid Research,
1991, 19: 1349.
[16] 耿锐梅, 傅扬, 张文明, 等. 麦根腐平脐蠕孢和薏苡平脐蠕孢防治稻田稗草的生物活性和安全性[J]. 中国水稻科学, 2008, 22(3): 307-312.
[17] 唐启义, 冯光明. 实用统计分析及其 DPS数据处理系统[M]. 北京: 科学出版社, 2010.
[18] 张猛, 孙炳剑, 刘建华. 河南省禾本科农田杂草蠕形菌病原鉴定. 莱阳农学院学报, 2006, 23(4): 300-302.
[19] 王明旭, 罗宽. 稗叶枯菌及其毒素的研究 I. 病原菌鉴定及产孢产毒条件[J]. 湖南农学院学报, 1991, 17(1): 34-41.
[20] 王明旭, 罗宽. 稗草叶枯菌及其毒素的研究 II. 病原寄主范围和对稗的致病性[J]. 湖南农学院学报, 1993, 19(3): 248-251.
[21] Yang Y K, Kim S O, Chung H. S, et al. Use of Colletotrichum graminicola KA001 to control barnyard grass[J]. Plant Disease, 2000, 84: 55-59.
[22] Safari Motlagh M R. Isolation and characterization of some important fungi from Echinochloa spp. the potential agents to control rice weeds[J].
Australian Journal of Crop Science, 2010, 4(6): 457-460.
[23] Safari Motlagh M R. Identification of new fungi isolated from Echinochloa spp. , as potential biological control agents in paddy fields in Iran[J].
Scientific Research and Essays, 2011, 6(3): 567-574.
[24] Zhang W M, Waston A K. Characterization of growth and conidia production of Exesrohilum monoceras on different substrates[J]. Biocontrol Science
and Technology, 1997, (7): 75-86.
[25] 陈勇, 倪汉文. 中国稗草病原真菌对稗草及水稻的致病性研究[J]. 中国生物防治, 1999, 25(2): 73-76.
[26] 余柳青, 陆永良, 周勇军, 等. 微生物除草剂剂潜力菌禾长蠕孢稗草专化型[J]. 中国生物防治, 2005, 21(增刊): 22-27.