全 文 ：＊乌鲁木齐市科学技术计划项目（Ｙ１４１３１００４６）
△乌鲁木齐市友谊医院
欧芹根对非酒精性脂肪肝大鼠的有效成分及机制研究＊
新疆医科大学第二附属医院药剂科（乌鲁木齐８３００６３）　陈　妍　缪　娟　高　宏△
　　摘　要　目的：探讨欧芹根治疗脂肪肝的有效成分及其作用机制。方法：高脂乳剂，高脂饲料
诱导大鼠非酒精性脂肪性肝病（ＮＡＦＬＤ）模型，选出其有效成分，并用ＥＬＩＳＡ法测肿瘤坏死因子
（ＴＮＦ－α）和脂联素水平。结果：经成分预试，５种有效成分为黄酮类物质，且动物实验提示该药总黄
酮能促进脂联素水平的表达。结论：欧芹根总黄酮是该药治疗脂肪肝的有效成分，其作用机制可能
与该药能提高脂联素表达水平相关。
主题词　脂肪肝／药物疗法　总黄酮类／代谢　模型，动物　大鼠　＠欧芹根　＠脂联素
　　【中图分类号】　Ｒ５７５．５　【文献标识码】　Ａ　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－７３７７．２０１６．０９．００３
　　非酒精性脂肪性肝病（Ｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃ　ｆａｔｔｙ　ｌｉｖｅｒ
ｄｉｓｅａｓｅ，ＮＡＦＬＤ）指病变主要在肝小叶，以肝细胞脂肪
变性和脂肪沉积为病理特征，但无过量饮酒史的临床
病症［１］。近几年来，随着人民生活水平的提高，其患病
率逐年上升。其对机体的危害，除了增加肝病相关的
发病率和死亡率，更重要的是引起代谢异常等相关疾
病［２］。新疆维药欧芹根在维医临床应用已久，该药对
治疗肝炎、脂肪肝、关节炎等疾病具有良好疗效。我们
结合临床用药特性对该药进行了护肝和降脂作用的药
理学实验，发现该药有较好的疗效［３～５］。肿瘤坏死因
子（ＴＮＦ－α）作为一个炎症标志物，是与 ＮＡＦＬＤ发病
的密切相关的致病因子，而脂联素是体内保护性细胞
因子。本研究从ＴＮＦ－α和脂联素水平调节程度去与
探讨其有效成分及可能作用机制。
材料与方法
１　 动物与材料　ＳＤ大鼠３３０只，由新疆医科大
学动物中心提供，体重为１８０±２０ｇ，自由饮食，饲养条
件为２２±２℃。欧芹根购自新疆参茸中维药饮片公
司，粉碎后备用。水飞蓟宾胶囊（批号：５５０７０４０６８）由
天津天士力圣特制药有限公司生产；大鼠脂联素
ＥＬＩＳＡ放射免疫检剂盒：美国ＡＤＬ公司。大鼠ＴＮＦ－
α放射免疫检剂盒：美国 ＡＤＬ 公司。ＣＨＯ、ＴＧ、
ＡＬＴ、ＡＳＴ均在新医大二附院检验科检测。
２　有效部位筛选　采用我们前期提取方法［５］，用
相应的试剂萃取后得石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇
４个干膏备用。
３　脂肪肝动物模型的建立与分组
３．１　分组：将１０５只大鼠随机分为７组，分别为
空白对照组、阳性对照组、模型组、石油醚组、氯仿组、
乙酸乙酯组、正丁醇组。所有大鼠喂养１周开始实验。
３．２　模型建立：除空白对照给与生理盐水外，其
余各组采用高脂乳剂（５０ｇ花生油加热，加入１５ｇ胆固
醇融化，搅匀后加入３．５ｍｌ的吐温８０，制成油相，使用
５０ｍｌ水、１０ｇ全脂奶粉、１ｇ食盐、２０ｇ蔗糖和３．５ｍｌ丙
二醇加热后介入１ｇ脱氧胆酸钠，制成水箱，随后将油
相和水相进行充分混合成高脂乳剂），根据大鼠体重每
周两次喂食，平时以高脂饲料维持，连续喂食１２周。
１２周后每组随机处死３只，测定血脂ＣＨＯ、ＴＧ值，制
作病理切片，观察模型是否成功。
３．３　给药：模型成功后，除了空白对照组与模型
组外，其余各组加灌胃各组相应的药物（阳性组按４．
５ｍｇ／ｋｇ灌胃水飞蓟宾胶囊，石油醚组、氯仿组、乙酸
乙酯组、正丁醇组均按３ｇ／ｋｇ灌胃），空白组与模型组
依旧按１ｍｌ／１００ｇ灌胃生理盐水。再连续灌胃８周。
３．４　指标检测及结果：处死大鼠，取肝右叶同一
部位肝组织，制作病理切片。腹主动脉取血，分离血
清，测定胆固醇（ＣＨＯ）、甘油三酯（ＴＧ），筛选出有效
部位为乙酸乙酯和正丁醇。
４　有效成分的筛选
４．１　药品的分离：采用我们前期提取分离方
法［６］，将乙酸乙酯和正丁醇两个部位进行梯度洗脱，
合并相同流分，共得到８个流分。
４．２　动物模型的建立与给药：大鼠１６５只分为１１
组，分别为空白对照组、阳性对照组、模型组、流分１～
８组。除空白对照给与生理盐水外，其余各组采用高
脂乳剂，灌胃方法及检测指标同３．２。模型成功后，除
了空白对照组与模型组灌胃生理盐水外，其余各组加
灌胃各组相应的药物（阳性组按４．５ｍｇ／ｋｇ灌胃水飞
蓟宾胶囊，１～８组均按５０ｍｇ／ｋｇ灌胃），再连续灌胃８
周。
４．３　指标检测及结果：处死大鼠，取肝右叶同一
２１１１ 陕西医学杂志２０１６年９月第４５卷第９期
部位肝组织，制作病理切片。腹主动脉取血，分离血
清，测定胆固醇（ＣＨＯ）、甘油三酯（ＴＧ），筛选出有效
成分为５个流分，确定为欧芹根总黄酮。
５　有效成分机制研究
５．１　欧芹根总黄酮的提取分离：用７０％乙醇回流
提取欧芹根粗粉，浓缩干燥后得干浸膏，７０％醇溶解
后，用Ｄ－１０１型大孔树脂纯化，干燥后得欧芹根总黄酮
粉末备用。
５．２　总黄酮机制研究：对６０只大鼠进行分组实
验，随机分为正常组、模型组、水飞蓟素组和欧芹根总
黄酮高、低剂量组，除了正常组，其他组均按３．２项下
造模。模型成功后，除了正常组与模型组灌胃生理盐
水外，其余各组加灌胃各组相应的药物（水飞蓟素组按
４．５ｍｇ／ｋｇ灌胃水飞蓟宾胶囊，欧芹根总黄酮组高、低
剂量按８０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ灌胃），再连续灌胃８周后
处死大鼠，腹主动脉取血，分离血清，全自动生化仪测
量ＡＬＴ、ＡＳＴ，ＣＨＯ、ＴＧ，ＥＬＩＳＡ法测肿瘤坏死因子
（ＴＮＦ－α）和脂联素水平。
６　统计学方法　所有数据均用ＳＰＡＳＳ１３．０统计
软件包处理。计量资料均以珚ｘ±ｓ表示。
结　果
１　有效部位筛选结果　见表１。四个部位中正
丁醇和乙酸乙酯部位效果比较明显，且差异有统计学
意义（Ｐ＜０．０５）。病理切片也显示正丁醇和乙酸乙酯
部位及阳性组在组织形态学上均有一定程度的改善，
肝细胞肿胀程度减轻，细胞未见明显的组织坏死。
２　有效成分筛选结果　８个流分中有５个流分
效果比较明显（Ｐ＜０．０５）。病理切片也显示这５个流
分在组织形态学上均有一定程度的改善，提示其有效
成分可能为此５种流分共同作用。对此５个流分进行
化学成分预测，发现１％三氯化铝试剂及氨熏检查呈
阳性，说明此５种流分为黄酮类化合物。据此，我们推
测该药材护肝作用的有效成分为欧芹根总黄酮。
表１　欧芹根治疗脂肪肝有效部位筛选（珚ｘ±ｓ）
组别 ｎ　 ＣＨＯ（ｍｍｏｌ／Ｌ） ＴＧ（ｍｍｏｌ／Ｌ）
模型组 １０　 １１．４４±２．８９＃＃ １．６８±５４．３２＃＃
正丁醇组 １０　 ４．０６±３．９９＊＊ ０．５９±７３．３６＊＊
石油醚组 １０　 ９．９８±４．４１　 ０．８４±５１．７９＊
氯仿组 １１　 １０．１１±３．８８　 １．４３±６０．３７
乙酸乙酯组 １０　 ４．４８±３．９９＊＊ ０．５３±７９．７１＊＊
阳性组 １１　 ３．９４±２．８３＊＊ ０．４６±７８．５１＊＊
空白组 １２　 ２．７３±１．４９　 ０．３２±０．７１
　　注：模型组与空白对照组比较，＃Ｐ＜０．０５，＃＃Ｐ＜０．０１；给药组
与模型组比较，＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１
　　３　欧芹根总黄酮作用机制研究　我们对欧芹根
总黄酮治疗脂肪肝机制进行研究探讨，发现该药能促
进非酒精性脂肪肝大鼠脂联素水平的表达，但是对
ＴＮＦ－α的作用并不明显，可能是和在给药过程中继续
喂养高脂饲料有关。
讨　论
ＴＮＦ－α是由巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞等
细胞合成、分泌的一种非糖基化蛋白。主要通过激活
其他细胞因子和调节细胞的分化、增殖、坏死或凋亡，
对脂肪代谢起一定作用。目前很多研究表明，ＴＮＦ－α
和非酒精性脂肪肝的发病密切相关。脂联素是由白色
分泌组织分泌的一种蛋白，具有调节胰岛素敏感性、葡
萄糖内环境平衡、抗动脉粥样硬化、促进脂肪酸氧化等
作用，是机体调节脂质代谢和血糖稳定的重要因子。
目前研究显示脂联素能减少肝中脂肪堆积及炎症介质
作用，与非酒精性脂肪肝的发病有关［６］。本研究从
ＴＮＦ－α和脂联素水平这两个角度去探索欧芹根有效
成分的作用机制，发现欧芹根总黄酮能促进脂联素水
平的提高，但是对ＴＮＦ－α的表达作用不明显。
新疆维药欧芹根主要分布在新疆的和田、阿克苏一
带，临床及民间主要用于治疗脂肪肝等肝脏疾病。但由
于缺乏实验基础，限制了该药的应用和推广。本研究对
该药进行脂肪肝药效学实验及有效成分的筛选，并对其
有效成分可能作用的机制进行了探讨，结果表明该药中
的黄酮类成分对脂肪肝有较好的治疗效果。
参考文献
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清脂联素关系研究［Ｊ］．临床医学工程．２０１２，９（１９）：１５０９－１５１０．
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相关分析［Ｊ］．中国健康文摘，２０１３，１０（６）：２１６－２１７．
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的乙醇提取工艺优选及其大孔树脂筛选［Ｊ］．中国实验方
剂学杂志，２０１４，２０（１５）：１９－２１．
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［５］　 陈 妍，赵先彬，马亮英，等．维药芹菜根不同部位对四氯
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２０１１，２４（９）：５６５８－５６５９．
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联素表达的影响［Ｊ］．陕西中医，２００９，３０（５）：６１７－６１９．
（收稿：２０１６－０３－１１）
３１１１陕西医学杂志２０１６年９月第４５卷第９期