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刺柏叶水提液对高羊茅的化感作用及其GC-MS分析



全 文 :第24卷 第2期
 Vol.24  No.2
草 地 学 报
ACTA AGRESTIA SINICA
   2016年  3月
  Mar.  2016
doi:10.11733/j.issn.1007-0435.2016.02.018
刺柏叶水提液对高羊茅的化感作用及其GC-MS分析
王晓英
(唐山师范学院,河北 唐山063000)
摘要:为证实刺柏(Juniperus formosana Hayate)叶对高羊茅(Festuca arundinacea Schreb.)的化感作用,采用室内
生物测定法研究刺柏叶水提液对高羊茅种子萌发、幼苗生长的影响,并采用气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术对刺
柏叶水提液化学成分进行分析。结果表明:刺柏叶水提液对高羊茅种子发芽率、发芽势和发芽指数的影响表现出
“低促高抑”的效应,对高羊茅种子活力指数表现出抑制效应。当水提液浓度为0.100g·mL-1时,对高羊茅种子
发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数的抑制率分别达到39.24%,80.36%,74.92%,87.41%。刺柏叶水提液对高
羊茅幼苗根长和苗高生长也表现出抑制效应,抑制率在5.33%~43.33%和10.81%~46.85%之间,对高羊茅地上
部分的化感抑制作用大于地下部分。刺柏叶水提液中鉴定出31种化合物,主要成分有7-羟基香豆素、香草醛、2,4-
二叔丁基苯酚、邻苯二酚、2,3-二氢苯并呋喃、4-羟基-3-甲基苯乙酮等。
关键词:刺柏;高羊茅;化感作用;GC-MS
中图分类号:S731.2    文献标识码:A     文章编号:1007-0435(2016)02-0363-06
Alelopathy of Aquatic Extract of Juniperus formosana Hayate Leaves
on Festuca arundinacea Schreb.and the GC-MS Analysis of the extracts
WANG Xiao-ying
(Tangshan Teachers Colege,Tangshan,Hebei Province 063000,China)
Abstract:The alelopathic effect of the aqueous extracts of Juniperus formosana Hayate leaves on germi-
nation and seedling growth of Festuca arundinacea Schreb.were tested in petri dishes in laboratory by a-
dopting indoor bioassay.And the chemical components of the extracts were analyzed using GC-MS.Re-
sults showed that the germination rate,germination potential and germination index of F.arundinacea
were promoted by aqueous extracts of J.formosana Hayate leaves at low concentration while suppressed
at high concentration,but only suppression effect was detected on the vigor index.At 0.100g·mL-1of
the aqueous extracts,the maximal IRof 4germination indexes of tal fescue were 39.24%,80.36%,
74.92%,87.41%,respectively,compared with the control.The IRof seedling height and root length of
F.arundinaceaseedlings were 5.33%~43.33%and 10.81%~46.85%.The alelopathic inhibition of a-
queous extracts con the above ground part of the seedling plant was greater than that on the underground
part of the plant.Thirty-one compounds in water aqueous extracts of J.formosana Hayate leaves were i-
dentified,including 7-hydroxy-2H-1-Benzopyran-2-one,vanilin,2,4-Di-tert-butylphenol,Pyrocatechol,2,
3-Dihydrobenzofuran,4-Hydroxy-3-methylacetophenone,etc.
Key words:Juniperus formosana Hayate;Festuca arundinacea Schreb.;Alelopathy;GC-MS
收稿日期:2015-12-28;修回日期:2016-03-10
基金项目:唐山市科技计划项目(12120203b);唐山师范学院科学研究基金项目(2016C07)资助
作者简介:王晓英(1984-),女,山西运城人,硕士,实验师,主要从事植物化感作用研究,E-mail:64979385@qq.com
  化感作用是植物通过淋溶、挥发、残体分解和根
系分泌等方式向环境释放化学物质,从而对周围植
物产生直接或间接的、有害或有利的作用[1]。近年
来化感作用对园林植物配置的影响成为研究的热
点。通过对樟树叶、圆柏叶片以及琼花和红叶李水
浸液对地被植物的化感作用研究[2-5],表明园林植物
若搭配不当,将会影响到园林景观的生态效益和可
持续发展。
刺柏(Juniperus formosana Hayate)是柏科
(Cupressaceae)刺柏属(Juniperus)常绿植物。在园
林绿化中,常孤植、带植于草坪中,可增加绿化层次,
丰富草坪景观。随着刺柏在草坪中建植时间延长,
草 地 学 报 第24卷
刺柏树冠下的草坪草生长不良,有逐年退化的现象。
关于这一现象发生是否存在化感作用尚未见报道,
本研究试图通过不同浓度刺柏叶水提液处理高羊茅
(Festuca arundinacea Schreb.)种子,研究刺柏叶
水提液对高羊茅种子萌发、幼苗生长的影响,并采用
气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术分析刺柏叶水
提液的物质成分,探讨刺柏叶水提液与高羊茅生长
的关系,为园林绿化中植物配置提供一定的理论
依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
刺柏叶于2014年12月采自唐山师范学院校园
15年龄刺柏植株二年生枝条上,经风干、粉碎,过筛
备用。高羊茅‘猎狗5号’种子购自神州克劳沃园艺
技术有限责任公司。
1.2 试验方法
1.2.1 刺柏叶水提液的制备 刺柏叶粉末以1︰10
的比例与蒸馏水混合,室温下浸提,期间不断搅拌,48
h后4000r·min-1离心10min,上清液经0.45μm微
孔滤膜抽滤4次,得到质量浓度为0.100g·mL-1的
水提液母液。经预试验,将母液分别稀释至0.075,
0.050,0.025g·mL-1,4℃保存备用。
1.2.2 试验设计 高羊茅种子用0.3% KMnO4
溶液消毒10min,蒸馏水冲洗3次后,置于40~
45℃的恒温水浴锅中水浴20min催芽,备用。取已
消毒的高羊茅种子,放入铺有滤纸的培养皿,每个培
养皿放入50粒种子,每皿加3mL不同质量浓度的
水提液,以蒸馏水作对照。期间保持滤纸湿润。从
种子露白开始,每隔24h记录萌发的种子数。连续
记录7d发芽率(GR)、计算发芽势(GE)、发芽指数
(GI)和活力指数(VI)。第7d从每个培养皿中挑选
10株健壮幼苗,测量高羊茅幼苗苗高(SH)、根长
(RL)和单株鲜重(FW)。
相对抑制率IR=(处理值-对照值)/对照值×
100%(IR>0表示促进,IR<0表示抑制),抑制率
绝对值的大小与作用强度一致。
以化感作用平均敏感指数(MSI)[6]评价高羊茅
不同生长发育阶段和各测定指标对刺柏叶化感作用
的敏感性:
MSIR=


j=1
IRj

式中,R为化感作用平均敏感指数(MSI)的级
别或层次,IR 为数据项,n为该级别或层次数据
(IR)的总个数。当MSI>0为促进,MSI<0为抑
制,绝对值的大小与作用强度(敏感性)一致。
1.3 刺柏叶水浸提液化学成分测定
取5mL刺柏叶水提液母液加入2mL乙酸乙
酯萃取,吸取1μL萃取液进样,用Shimadzu GCMS
-QP2010气相色谱-质谱联用仪进行GC-MS分
析。GC(TraceTM 2000,CE Instrument Company)
条件:色谱柱:rxi-5ms;石英毛细管柱(30m×0.25
mm × 0.25μm);升温程序:初始温度50°C,以
15°C·min-1的速率升至180°C,保持5min,再以10
℃·min-1升到 220°C,保 持 15 min;载 气:He
(99.99%),柱流速为0.8mL·min-1;进样口温度
250°C。MS(Voyager,Finnigan Thermo-Quest-
Company)条件:电离方式:EI;电子能量70eV;离
子源温度200°C;传输线温度250°C;扫描质量范围
39~450amu。采 用 Xcalibur 1.2 版 本 软 件、
NIST08.LIB和 NIST08S.LIB谱图库兼顾色谱保
留时间定性。
1.4 数据处理
数据经EXCEL 2003处理后,用SPSS 19.0进
行显著性分析。文中数据均以“均值±标准差”
表示。
2 结果与分析
2.1 刺柏叶水提液对高羊茅种子萌发及幼苗生长
的影响
表1可知,刺柏叶水提液对高羊茅种子发芽率、
发芽势和发芽指数表现出“低促高抑”的作用,对高
羊茅种子活力指数表现出抑制作用。不同质量浓度
处理液对高羊茅种子萌发的抑制作用随质量浓度的
增大 逐 渐 增 大,当 水 提 液 质 量 浓 度 为0.100
g·mL-1时,对高羊茅种子发芽率、发芽势、发芽指
数、活力指数的抑制率最大,分别达到39.24%,
80.36%,74.92%,87.41%。同质量浓度处理液对
高羊茅种子发芽势的抑制作用大于发芽率,对活力
指数的抑制作用最大。
463
第2期 王晓英等:刺柏叶水提液对高羊茅的化感作用及其GC-MS分析
表1 刺柏叶水提液对高羊茅种子萌发的影响
Table 1 Influence of aqueous extracts of J.formosana Hayate leaves on seed germination of F.arundinacea Schreb.
质量浓度
Concentration
/g·mL-1
发芽率
Germination
rate/%
抑制率
IR/%
发芽势
Germination
Energy/%
抑制率
IR/%
发芽指数
Germination
index
抑制率
IR/%
活力指数
Vigor index
抑制率
IR/%
CK  52.67±3.53b — 37.33±2.67a — 40.8033±1.8577a — 0.7345±0.0335a —
0.025  66.67±2.40a 26.58  42.00±3.06a 12.51  43.9267±2.7431a 7.65  0.5168±0.0539b -29.64
0.050  48.00±3.06b -8.87  22.67±0.67b -39.27  23.6533±1.7344b -42.03  0.2462±0.0362c -66.48
0.075  39.33±5.81bc -25.33  14.00±3.06c -62.50  14.1933±2.3341c -65.22  0.1522±0.0252cd -79.28
0.100  32.00±4.62c -39.24  7.33±2.91c -80.36  10.2333±2.2495c -74.92  0.0925±0.0277d -87.41
  注:同列不同字母表示差异显著(P<0.05),下同
Note:Different letters in the same column indicate significant differences at the 0.05level,the same as below
  由表2可知,刺柏叶水提液对高羊茅幼苗各生
长指标均有抑制作用,且具有明显的浓度效应。各
处理组高羊茅幼苗的苗高和单株鲜重与对照组差异
显著(P<0.05),高质量浓度处理组(≥0.750
g·mL-1)高羊茅幼苗的根长与对照差异显著(P<
0.05)。刺柏叶水提液对高羊茅幼苗根长和苗高的
抑制率分别在 5.33%~43.33% 和 10.81% ~
46.85%之间,即相同质量浓度处理液对高羊茅幼苗
苗高的抑制程度明显大于根长,说明刺柏叶水提液
对高羊茅地上部分的化感作用大于地下部分。
表2 刺柏叶水提液对高羊茅幼苗生长的影响
Table 2 Influence of aqueous extracts of J.formosana Hayate leaves on seedling growth of F.arundinacea Schreb.
质量浓度
Concentration
/g·mL-1
苗高
Seedling
height/cm
抑制率
Inhibition rate/%
根长
Root length
/cm
抑制率
Inhibition rate/%
单株鲜重
Fresh
weight/g
抑制率
Inhibition rate/%
CK  7.40±0.42a — 5.00±0.5442a — 0.0180±0.0003a —
0.025  6.60±0.26b -10.81  4.73±0.2601a -5.33  0.0117±0.0005b -35.00
0.050  5.96±0.12b -19.37  4.43±0.3843a -11.33  0.0103±0.0009b -42.78
0.075  5.23±0.08c -29.28  3.56±0.1203b -28.67  0.0109±0.0015b -39.44
0.100  3.93±0.36d -46.85  2.83±0.0601c -43.33  0.0087±0.0008b -51.67
2.2 高羊茅不同受体指标对刺柏叶水提液化感作
用的敏感性
由表3得出,刺柏叶水提液对高羊茅各级指标
均存在抑制作用,敏感性存在差异。一级敏感指数
(M1)对刺柏叶化感作用的敏感性强弱依次为:活力
指数>发芽指数>发芽势>单株重>苗高>根长>
发芽率;二级敏感指数(M2)对刺柏叶化感作用的敏
感性来看,种子萌发阶段的平均敏感指数大于幼苗
生长阶段的平均敏感指数,表明高羊茅种子萌发阶
段对化感物质更敏感。综合受体植物(M3)来看,刺
柏叶 水 提 液 对 高 羊 茅 整 体 化 感 抑 制 作 用 为
-36.35%,说明刺柏叶含有较强的化感潜力。化感
物质能经雨雾淋溶释放,抑制周围高羊茅草坪草的
正常生长发育。
表3 不同受体指标对刺柏叶水提液化感作用的敏感性比较
Table 3 Comparison of sensitivity of different tested indexes to alelopathy of aqueous extracts of J.formosana Hayate leaves
敏感指数
MSI
一级(M1) 二级(M2) 三级(M3)
受体指标
index
发芽率
GR
发芽势
GE
发芽指数
GI
活力指数
VI
苗高
SH
根长
RL
单株鲜重
FW
种子萌发阶段
Seed germination
幼苗生长阶段
Seedling growth
受体
Receptor
抑制率IR/% -11.72 -42.41 -43.63 -65.70 -26.58 -22.17 -42.22 -40.86 -30.32 -36.35
2.3 刺柏叶水提液中化感物质成分分析
刺柏叶水提液样品经乙酸乙酯萃取后进行GC-
MS分析(图1),经GC-MS联用仪标准质谱数据库
NIST08.LIB和NIST08S.LIB的检索,鉴定出其主要含
有31种化合物,并采用面积归一化法确定了他们的相
对含量(表4)。刺柏叶水提液中主要有酚(30.79%)、
醇(4.65%)、酮及其衍生物(14.64%)、杂环化合物
(8.44%)、酯(10.80%)、芳香烃衍生物(1.16%)、有机
酸(0.45%)、烷烃(0.21%)、萜(1.25%)、醚(5.06%)、吡
咯(2.38%);主要成分是7-羟基香豆素、2,4-二叔丁
基苯酚、香草醛、邻苯二酚、2,3-二氢苯并呋喃、4-羟
基-3-甲基苯乙酮等。
563
草 地 学 报 第24卷
图1 刺柏叶水提液总离子流色谱图
Fig.1 TIC chromatogram of aqueous extracts of J.formosana Hayata leaves
表4 刺柏叶水提液化学组分
Table 4 Chemical components of aqueous extracts of J.formosana Hayate leaves
编号
No.
保留时间
R.Time/min
化合物名称
Compounds
分子式
Molecular formula
相似度
SI
峰面积
Aera/%
1  4.971 蘑菇醇1-Octen-3-ol  C8H16O  96  2.04
2  5.057 苯酚Phenol  C6H6O  97  4.67
3  5.627  4,5-二甲基-1,3-二氧杂环戊烯-2-酮4,5-Dimethyl-1,3-dioxol-2-one  C5H6O3 84  3.14
4  6.050  4,6,7-三羟基-2-辛烯酸2-Octenoic acid,4,5,7-trhydroxy  C8H14O5 82  0.45
5  6.268 愈创木酚Guaiacol  C7H8O2 99  2.28
6  6.479  1-脱氧阿卓糖醇1-Deoxy-d-altritol  C6H14O5 83  0.74
7  6.533 苯乙醇Phenylethyl Alcohol  C8H10O  97  0.38
8  7.190  2-癸烯-1-醇2-Decen-1-ol  C10H20O  85  0.29
9  7.275 (-)-4-萜品醇(-)-Terpinen-4-ol  C10H18O  96  0.47
10  7.480 邻苯二酚Pyrocatechol  C6H6O2 97  9.90
11  7.651  2,3-二氢苯并呋喃2,3-Dihydrobenzofuran  C8H8O  93  8.44
12  8.685  4-羟基-3-甲基苯乙酮4-Hydroxy-3-methylacetophenone  C9H10O2 89  5.83
13  9.127
2,6-二甲基-2,7-辛二烯-1,6-二醇2,7-Octadiene-1,6-diol,2,6-dim-
ethyl-
C10H18O2 82  0.47
14  9.428  2,6,11-三甲基十二烷2,6,11-Trimethyldodecane  C15H32 85  0.21
15  9.617  2-甲氧基对苯二酚2-Methoxyhydroquinone  C7H8O3 83  0.52
16  9.667 香兰素,香草醛Vanilin  C8H8O3 91  0.35
17  9.869  3,4-二甲氧基苯酚3,4-Dimethoxyphenol  C8H10O3 95  0.62
18  9.946 对羟基苯乙醇4-Hydroxyphenethyl alcohol  C8H10O2 92  0.30
19  10.253  3-羟基-4-甲氧基苯甲醇3-Hydroxy-4-methoxybenzyl alcohol  C8H10O3 81  0.78
20  10.413  3-甲基-1,6-庚二烯-3-醇3-Methyl-1,6-heptadien-3-ol  C8H14O  81  0.84
21  10.912  2,4-二叔丁基苯酚2,4-Di-tert-butylphenol  C14H22O  91  0.57
22  11.390 甲氧基二甲基苄甲醇1-(O-Methoxyphenyl)ethanol  C9H12O2 80  0.74
23  11.619 覆盆子酮,对羟基苯丁酮4-(4-Hydroxyphenyl)-2-butanone  C10H12O2 94  4.68
24  11.794 杜鹃醇rhododendrol  C10H14O2 89  6.10
25  13.407
甲基-(2-羟基-3-乙氧基)苄醚 Methyl-(2-hydoxy-3-ethoxy-benzyl)e-
ther
C10H14O3 80  5.06
26  13.709 α-毕橙茄醇alpha.-Cadinol  C15H26O  87  0.31
27  14.670
4-(3-羟基丁基)-3,5,5-三甲基-2-环己烯-1-酮4-(3-hydroxybutyl)-
3,5,5-trimethyl-2-Cyclohexen-1-one,
C13H22O2 91  0.99
28  15.278 松酒4-((1E)-3-Hydroxy-1-propenyl)-2-methoxyphenol  C10H12O3 88  5.48
29  16.292  2,3-Bis(1-methylalyl)pyrrolidine2,3-二(1-甲基烯丙基)吡咯烷 C12H21N  80  2.38
30  16.630
Kauran-18-al,17-(acetyloxy)-,(4.beta.)-17-乙酰氧基-4β-18-贝壳

C22H34O3 85  0.80
31  17.438  7-羟基香豆素2H-1-Benzopyran-2-one,7-hydroxy - C9H6O3 96  10.00
663
第2期 王晓英等:刺柏叶水提液对高羊茅的化感作用及其GC-MS分析
3 讨论
3.1 刺柏叶水提液对高羊茅种子萌发和幼苗生长
的化感作用
种子萌发在植物生活史中起着基础性作用,同
时植物种子萌发和幼苗生长初期更易受到外界环境
变化的影响,因此,常作为物种间化感作用的评价指
标[7]。植物体内化感物质通过雨雾淋溶、挥发、残体
腐解、根系分泌等途径释放到环境中,被周围植物吸
收,影响其种子的发芽率和发芽势,从而影响周围植
物的正常生长。本试验中用刺柏叶水提液模拟自然
界中化感物质雨雾淋溶途径,研究其对高羊茅的化
感作用。结果表明刺柏叶不同浓度水提液对高羊茅
种子萌发及幼苗生长均有不同程度的影响,证实其
对高羊茅有化感作用。
不同浓度刺柏叶水提液对高羊茅种子发芽率、
发芽势和发芽指数的影响表现出“低促高抑”的效
应,这种“低促高抑”的效应在其他植物化感效应的
研究中也有较多报道[8-9]。刺柏叶水浸提液中化感
物质浓度越高,对高羊茅种子3个萌发指标的抑制
效应越明显,当化感物质浓度未达到一定程度时,甚
至会具有一定促进作用;这与李俊等[10]研究油松枯
落叶水浸提液对紫穗槐种子萌发的影响结果基本一
致;而不同浓度刺柏叶水提液对高羊茅种子活力指
数表现出抑制效应,说明高羊茅种子活力指数对刺
柏叶水提液中化感物质更敏感。
研究结果还表明,刺柏叶水提液不仅抑制高羊
茅生物量的积累,而且影响生物量在地上地下部之
间的分配,对地上部生物量的抑制作用大于地下部。
这与紫花地丁水浸提液对高羊茅地下部分的化感作
用大于地上部分的研究结果不一致[11],与薄荷挥发
油在水中的溶解度低导致其水溶液状态下对萝卜幼
苗的抑制作用强于根的结果一致[12]。原因一方面
与植物化感效应具有专一性和选择性的表现有
关[13],即供体不同释放出的化感物质种类及浓度不
同,对高羊茅不同部位的物质运输及代谢的影响程
度也不同;另一方面可能与刺柏叶水提液中含有挥
发物以及挥发物的种类、数量等有关,尚需进一步
研究。
3.2 刺柏叶水提液物质成分分析
化感物质是植物实现化感作用的重要媒介。这
些化感物质大部分为次生代谢产物,具有很强的生
理活性,可以干扰受体植物的某些生理过程[14]。由
GC-MS法鉴定乙酸乙酯提取的刺柏叶水提液,鉴
定出酚、醇、酮及其衍生物、烷烃、酯、酸、萜、芳香烃
衍生物、醚、吡咯、杂环等11类化合物成分。酚类物
质是目前已知最重要的水溶性化感物质。刺柏叶水
提液中酚类物质有10种,含量占30.79%。其中
2,4-二叔丁基苯酚[15]、香草醛[16]、邻苯二酚[17]是
已经证实的具有化感作用的物质,其含量分别为
0.57%,0.35%,9.90%。萜类是第二大化感物质,
单萜和倍半萜多具有抑制临近植物的作用。刺柏叶
水提液中单萜和倍半萜有3种,4-萜品醇、2,6-二甲
基-2,7-辛二烯-1,6-二醇、α-毕橙茄醇含量分别占
0.47%,0.47%,0.31%,累计占1.25%。有研究表
明,化感效应与高等植物所含的香豆素类有密切的
关系[18]。香豆素是邻阔马酸的内酯,能够抑制植物
种子的萌发和幼苗根和芽的生长[19-20],几乎所有香
豆素在7位碳上都有羟基。邬彩霞等[21]研究结果
表明香豆素对多花黑麦草、紫花苜蓿、稗草、萹蓄、红
三叶、黄花草木樨等都有很强的化感抑制作用。刺
柏叶水提液中含有7- 羟基香豆素,其含量占
10.00%;其对高羊茅的化感抑制作用很可能与香豆
素物质的含量有关。植物化感作用是各种化感物质
综合作用的结果,根据以上分析推测刺柏叶水提液
中主要起化感作用的物质可能是酚类、萜类和香豆
素衍生物,多种化感物质间具体的协同效应方式,还
需进一步验证。
4 结论
由GC-MS法鉴定刺柏叶水提液的主要物质有
7-羟基香豆素、2,4-二叔丁基苯酚、香草醛、邻苯二
酚、2,3-二氢苯并呋喃、4-羟基-3-甲基苯乙酮等。刺
柏叶水提液中的化感物质能够影响高羊茅种子萌发
和幼苗生长。不同浓度刺柏叶水提液对高羊茅种子
发芽率、发芽势和发芽指数的影响表现出“低促高
抑”的效应,对高羊茅种子活力指数表现出抑制效
应。刺柏叶水提液对高羊茅地上、地下部生物量的
积累表现出抑制效应,说明刺柏叶水提液具有较强
的化感潜力,可经雨雾淋溶等途径将化感物质带入
树冠周围的土壤,从而影响林下草坪草的更新、
演替。
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(责任编辑 赵 欢)
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