全 文 ：水红花子配方颗粒中花旗松素的含量测定
谢健鸣，陈浩桉，隆颖(广东省药品检验所，广东 广州 510180)
摘要:目的 采用高效液相色谱法(HPLC)测定水红花子配方颗粒中花旗松素的含量。方法 采用高效液相色谱法。色谱柱
为 ThermoODS－2 HYPEＲSIL C18(250 mm×4．6 mm，5 μm);采用乙腈－水(26 ∶74)作为流动相，流速为 1．0 mL·min
－1，柱温
30 ℃，检测波长为 290 nm。结果 花旗松素在 0．092 8～ 0．556 9 μg 范围内，线性关系良好(r = 1)，平均回收率为 100．1%，
ＲSD为 0．68%。结论 该方法操作易行、结果可靠、重复性好，可应用于水红花子配方颗粒中花旗松素的含量测定。
关键词:水红花子配方颗粒;花旗松素;高效液相色谱法
中图分类号:Ｒ284．1 文献标志码:A 文章编号:1674-229X(2016)09-0636-03
基金项目:广东省省级科技计划项目(2013B040200029);广东省中医药局科研课题(20142028)
作者简介:谢健鸣，主管药师，Tel:020-81816868，E-mail:554874742@ qq．com 通讯作者:隆颖，主任中药师，Tel:020-81886161，
E-mail:longer2623@ 163．com
Determination of Taxifolin in Polygoni Orientalis Fructus Fomula Granule by HPLC
XIE Jianming，CHEN Haoan，LONG Ying(GuangdongInstitute for Drug control，Guangzhou，Guangdong 510180，China)
ABSTＲACT:OBJECTIVE To establish a method for determine of taxifolin in PolygoniOrientalisFructusFomula granule by HPLC．
METHODS HPLC was performed on a Thermo ODS-2 HYPEＲSIL C18 column (250 mm×4．6 mm，5 μm)。The mobile phase was
acetonitrile-water (26 ∶ 74)，and flow rate was 1． 0 mL·min－1，column temperature was 30 ℃，The determination wavelength was
290nm． ＲESULTS The taxifolin had a good linearity in the ranges of 0． 092 8 － 0． 556 9 μg (r = 1)． The average recovery was
100．1%，with ＲSD = 0． 68%． CONCLUSION The method is for the determination of easy operation，reliable results，and
reproducible．It can be used for the quality control of taxifolin in PolygoniOrientalisFructusFomula granule．
KEY WOＲDS:PolygoniOrientalisFructusFomula granule;taxifolin;HPLC
水红花子为蓼科植物红蓼 Polygonumorientale L．
的干燥成熟果实，秋季果实成熟时割取果穗，晒干，
打下果实，除去杂质，该品种的质量标准收载于
《中国药典》2015 年版一部［1］。水红花子配方颗粒
是由水红花子饮片制成的单味药材制剂，具有散血
消癥、消积止痛、利水消肿的功效。本实验参考《中
国药典》2015 年版一部中水红花子药材含量测定，
选用花旗松素含量测定指标，采用 HPLC 法，测定
水红花子中花旗松素(C15H12O7)的含量，以期为其
建立灵敏度高、专属性强、重现性好的质量控制方
法提供理论参考和实验依据。
1 实验材料
1．1 仪器及设备
Agilent1100高效液相色谱仪(安捷伦科技有限
公司);KQ－300DE型数控超声波清洗器(昆山市超
声波仪器有限公司);Sartorius 224S、225D 电子天平
(赛多利斯科学仪器北京有限公司)。
1．2 试药及试剂
花旗松素对照品，中国食品药品检定研究院，
含量为 98．9%，批号:111816－201102;水红花子配
方颗粒，规格:每袋装 0．5 g，华润三九医药股份有
限 公 司，批 号 分 别 为: 1511001Y、1511002Y、
1511003Y;乙腈为色谱纯试剂(Honeywell);水为超
纯水;其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2．1 色谱条件与系统适应性试验
以 Thermo ODS-2 HYPEＲSIL (250 mm×4．6 mm，
5 μm)为色谱柱;以乙腈 ∶水(26 ∶74)为流动相，流
速为 1．0 mL·min－1进行洗脱;检测波长为 290 nm，
进样量为 5 μL。理论塔板数按花旗松素峰计算应
大于 3 000，花旗松素峰与相邻杂质峰的分离度均
应大于 1．5。
2．2 溶液制备
2．2．1 对照品溶液的制备 取花旗松素对照品
·636· Pharmacy Today，2016 Sep，Vol．26 No．9 今日药学 2016年 9月第 26卷第 9期
0．011 73 g，置于 25 mL量瓶中加入 60%乙醇溶解后
定容至刻度，摇匀，再精密吸取 1 mL至 10 mL量瓶
定容至刻度，摇匀，作为对照品溶液(每 1 mL 含花
旗松素 46．40 μg)。
2．2．2 供试品溶液的制备 取本品 10袋内容物，研
细，取 0．1 g，精密称定，置三角瓶内，精密加入60%乙
醇 20 mL，称定质量，超声处理(功率 40kHz，
300W)15 min。放冷至室温，用 60%乙醇补足减失
的质量，过滤，取续滤液，过微孔滤膜，即得。
2．2．3 阴性样品溶液 取辅料麦芽糊精，按“2．2．2”
项下的操作步骤各自制备水红花子的阴性样品
溶液。
2．3 专属性试验
取上述对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液
各 5 μL，采用“2．1”项下的色谱条件进行检测操作，
结果在与花旗松素对照品相同保留时间处，阴性对照
样品无色谱峰存在，说明阴性无干扰。见图 1。
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A． 花旗松素对照溶液;B．供试品溶液;C．缺水红花阴性样品
溶液
图 1 水红花子配方颗粒中花旗松素的 HPLC色谱图
2．4 线性关系考察
精密吸取对照品溶液 2，3，5，8，10，12 μL，
按上述色谱条件进行测定，测得峰面积，以进样量
(μg)为横坐标(X)，以峰面积(mAu× sec)为纵坐标
(Y)，绘制标准曲线并进行线性回归计算，得花旗
松素的标准曲线回归方程:Y = 2 846X － 0． 695，
Ｒ= 1．000。结果表明花旗松素在 0．092 8 ～ 0．556 9 μg
的范围内，线性关系良好。
2．5 重复性试验
取同一批号(1511001Y)的水红花子配方颗粒，
平行制备 6 份溶液。进样量为 5 μL，采用“2．1”项
下的色谱条件进行测定，测定峰面积并计算其 ＲSD
值。花旗松素 ＲSD 为 1．5%，提示本方法的重复性
良好。
2．6 加样回收试验
取已知含量的同一批水红花子配方颗粒(样品
批号:1511001Y)，每份约 0．05 g，精密称定，共 6
份，分别加入对照品适量(约为有效成分的 1．0 倍
量)，制备溶液，进行检测，计算回收，结果为花旗松
素平均回收率为 100．1%，ＲSD 平均值为 0．68%。见
表 1。
表 1 花旗松素加样回收试验结果(n= 6)
序号 取样量 /g
测得总
量 /mg
样品中
含量 /mg
测得总
量 /mg
回收率 /
%
1 0．050 04 0．565 3 0．681 4 1．242 7 99．40
2 0．050 02 0．565 1 0．681 4 1．240 1 99．05
3 0．049 63 0．560 7 0．681 4 1．246 4 100．62
4 0．049 85 0．563 2 0．681 4 1．249 6 100．73
5 0．050 00 0．564 9 0．681 4 1．247 0 100．10
6 0．049 55 0．559 8 0．681 4 1．243 8 100．38
平均回收率= 100．1%，ＲSD= 0．68%
2．7 样品测定
取样品 3批，按“2．2．2”项下分别制备供试品溶
液，依法测定含量，见表 2。
表 2 每袋样品中花旗松素的含量测定结果(珋x±s)
样品批号 花旗松素 /mg ＲSD /%
1511001Y 5．618±0．05 0．89
1511002Y 5．416±0．06 1．0
1511003Y 5．516±0．01 0．21
2．8 稳定性试验
取同一份水红花子配方颗粒的供试品溶液(样
品批号:1511001Y)，分别于 0，2，4，8，10，12，
16，24和 48 h进样测定，记录化合物的峰面积并计
算其 ＲSD 值(n = 9)。结果花旗松素峰面积的 ＲSD
为 0．6%，表明供试品溶液在放置 48h内基本稳定。
2．9 检测限试验
取花旗松素对照品适量，加 60%乙醇多次稀释
·736·今日药学 2016年 9月第 26卷第 9期 Pharmacy Today，2016 Sep，Vol．26 No．9
后进行检测，结果信噪比(S /N)为 3 时，花旗松素
最低检测浓度为 0．9 μg·mL－1。
3 讨论
3．1 吸收波长的选择
取花旗松素对照品适量，加 60%乙醇稀释，在
紫外分光光度计扫描吸收波长，结果显示花旗松素
在 290 nm处有最大吸收波长。
3．2 取样量的选择
分别精密称取供试品 0．05，0．1，0．3，0．5 g，置
三角瓶内，精密加入 60%乙醇 20 mL，称定质量，超
声处理 15 min。结果显示取样 0．05 g、0．1 g 的含量
高于取样 0．3 g、0．5 g的含量，说明溶剂用量 20 mL
时，取样 0．05 g、0．1 g，提取完全，因此，确定取样
量为 0．1 g、溶剂用量 20 mL作为提取条件。
3．3 提取溶媒、方法及时间的选择
试验过程中采用甲醇、60%甲醇、10%甲醇、
60%乙醇及 10%乙醇作为溶媒，发现甲醇、60%甲
醇及 60%乙醇对花旗松素的提取效果最优，色谱峰
对称性好，基线平稳，从环保考虑，尽量减少有机
溶剂用量，因此选择 60%乙醇作为提取溶媒。在提
取方面，分别考察了 15 min、30 min及 60 min，结果
显示 3种提取时间测得的峰面积接近，因此，选用
15 min作为提取时间;用超声、回流方法提取，两者
操作效率相近，超声较回流方法简便，所以选择超
声提取。
3．4 流动相的选择
实验过程中选择流动相为①甲醇－水(26 ∶74)，
②乙腈－0．1%磷酸溶液(26 ∶ 74)，③乙腈－水(26 ∶
74);结果发现使用流动相①时花旗松素的峰形不
好，流动相②及流动相③时花旗松素的峰形好，分
离度也符合要求，从对色谱柱的适用性考虑，故选
择③乙腈－水(26 ∶74)作为流动相。
3．5 拟定花旗松素含量限度范围
根据水红花子配方颗粒 3批样品花旗松素含量
的测定结果，3 批样品测定平均值为 5．517mg /袋，
并根据水红花子配方颗粒的制法，水红花子为水提
工艺，拟定花旗松素含量限度为平均值下浮 20%，
即规定本品每袋含水红花子以花旗松素(C15H12O7)
计，不得少于 4．4 mg。
参考文献
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谱研究［J］． 中国中药杂志，2010，35(6):711-713．
(收稿日期:2016-06-24)
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·简讯·
广东省药学会开办美国药物治疗管理(MTM)药师证书培训项目简介
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称 APhA)联合开办了“美国 MTM 药师证书培训项目”，由美国药师协会利用其自身的培训教材和师资，为广东地区培训 MTM
药师。参训学员在规定期限内完成自学课程、及时参加面授课程并考试合格者，将获得美国药师协会颁发的 MTM 药师证书。
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在美国，取得了该项证书，就取得了相关服务资质，可以面向公众开展相关服务。
(编辑部)
·836· Pharmacy Today，2016 Sep，Vol．26 No．9 今日药学 2016年 9月第 26卷第 9期