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120-127．
HPLC法同时测定尿毒灵灌肠液中的地榆皂苷-Ⅰ、地榆皂苷-Ⅱ、花旗
松素、落新妇苷和白藜芦醇
吴建华1， 李玉山2*
(1． 湖北民族学院附属民大医院，湖北 恩施 445000;2． 湖北民族学院，湖北 恩施 445000)
收稿日期:2014-04-12
作者简介:吴建华 (1975—) ，男，硕士，主治医师，主要从事泌尿系统的临床基础研究。E-mail:wujianhualunwen @ 163． com
* 通信作者:李玉山 (1969—) ，男，副教授，主要从事基础医学研究工作，Tel: (0718)8437479，E-mail:liyushanlunwen@ 163． com
摘要:目的 建立同时测定尿毒灵灌肠液中地榆皂苷-Ⅰ、地榆皂苷-Ⅱ、花旗松素、落新妇苷和白藜芦醇方法。方法
HPLC法采用依利特 Hypersil C18色谱柱 (4. 6 mm × 200 mm，5 μm) ;流动相 A 为甲醇-乙腈 (1 ∶ 1) ，流动相 B 为
0. 5%磷酸溶液;体积流量 1. 2 mL /min;地榆皂苷-Ⅰ和地榆皂苷-Ⅱ的检测波长为 203 nm，花旗松素和落新妇苷的检
测波长为 289 nm，白藜芦醇的检测波长为 306 nm。结果 地榆皂苷-Ⅰ、地榆皂苷-Ⅱ、花旗松素、落新妇苷和白藜芦
醇分别在 0. 072 8 ～ 1. 456 0 μg (r = 0. 999 7)、0. 037 4 ～ 0. 748 0 μg (r = 0. 999 8)、0. 012 6 ～ 0. 252 0 μg (r =
0. 999 3)、0. 086 2 ～ 1. 724 0 μg (r = 0. 999 9)、0. 035 6 ～ 0. 712 0 μg (r = 0. 999 5)范围内呈良好的线性关系;地榆
皂苷-Ⅰ、地榆皂苷-Ⅱ、花旗松素、落新妇苷和白藜芦醇的平均加样回收率分别为 98. 6%、97. 6%、96. 9%、99. 1%、
98. 4%，ＲSD (n = 6)分别为 0. 8%、0. 7%、0. 7%、0. 6%、0. 5%。结论 本法所测 5 个组分均能达到基线分离，各
组分峰型良好，分离度均大于 2。
关键词:尿毒灵灌肠液;地榆皂苷-Ⅰ;地榆皂苷-Ⅱ;花旗松素;落新妇苷;白藜芦醇
中图分类号:Ｒ927. 2 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2015)01-0112-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2015. 01. 022
Determination of ziyu-glycoside Ⅰ，ziyu-glycoside Ⅱ， taxifolin，astilbin and
resveratrol in Niaoduling Enema by HPLC
WU Jian-hua1， LI Yu-shan2 *
(1． University Hospital of Hubei University for Nationalities，Enshi 445000，China;2． Hubei University For Nationalities，Enshi 445000，China)
ABSTＲACT:AIM To develop a method for determination of the contents of ziyu-glycoside Ⅰ，ziyu-glycoside
Ⅱ，taxifolin，astilbin and resveratrol in Niaoduling Enema． METHODS The HPLC method was applied and the
chromatographic column was an Hypersil C18 column (4. 6 mm × 200 mm，5 μm)． The flow rate was 1. 2
mL /min． The mobile phase A consisted of methanol-acetonitrile (1 ∶ 1) ，the mobile phase B consisted of 0. 5%
phosphoric acid solution;λ1 = 203 nm (ziyu-glycoside Ⅰand ziyu-glycoside Ⅱ)，λ2 = 289 nm (taxifolin and
astilbin)，λ3 = 306 nm (resveratrol)． ＲESULTS There was a good linear relationship between the concentra-
tion of ziyu-glycoside Ⅰ，ziyu-glycoside Ⅱ，taxifolin，astilbin，resveratrol and peak area value when the concen-
trations of ziyu-glycoside Ⅰ，ziyu-glycoside Ⅱ， taxifolin，astilbin and resveratrol were within the ranges of
0. 072 8 － 1. 456 0 μg (r = 0. 999 7)，0. 037 4 － 0. 748 0 μg (r = 0. 999 8) ，0. 012 6 － 0. 252 0 μg (r =
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Vol． 37 No． 1
0. 999 3) ，0. 086 2 － 1. 724 0 μg (r = 0. 999 9) ，0. 035 6 － 0. 712 0 μg (r = 0. 999 5) ，respectively． The av-
erage recoveries were 98. 6% (ＲSD = 0. 8%) ，97. 6% (ＲSD = 0. 7%) ，96. 9% (ＲSD = 0. 7%) ，99. 1%
(ＲSD =0. 6%)and 98. 4% (ＲSD =0. 5%) ，respectively． CONCLUSION The method can make five meas-
ured constituents the baseline resolution with good peak shape，and their resolutions are more than two．
KEY WOＲDS:Niaoduling Enema;ziyu-glycoside Ⅰ;ziyu-glycoside Ⅱ;taxifolin;astilbin;resveratrol
尿毒灵灌肠液处方源自国家药品标准中药成方
制剂第二十册，由甲组和乙组两部分组成。甲组为
灰绿色的粉末，味淡。由地榆、土茯苓、大黄、连
翘、龙骨 (煅)、蒺藜、牡蛎 (煅)、丹参、桂枝、
槐米、钩藤、青黛、栀子、黄柏、金银花等 15 味
药物组成，是方中的主组分。乙组为棕褐色的液
体，味淡。由生晒参、麦冬、枸杞、白茅根、红花
5 味药物组成，是方中的辅助成分。尿毒灵灌肠液
具有通腑泄浊、利尿消肿的功效，可用于全身浮
肿，恶心呕吐，大便不通，无尿少尿，头痛烦躁，
舌黄，苔腻，脉实有力，以及各种原因引起的肾功
能衰竭、氮质血症及肾性高血压等症的治疗。原部
颁标准中仅对方中部分药材进行了定性鉴别，未对
方中的任何药物进行成分定量测定［1-2］，不能有效
地控制产品的质量和疗效，同时地榆皂苷-Ⅰ和地
榆皂苷-Ⅱ为地榆的主要成分，花旗松素、落新妇
苷、白藜芦醇为土茯苓的主要成分和有效成分［3］，
本实验采用高效液相梯度洗脱法对尿毒灵灌肠液中
地榆中的地榆皂苷-Ⅰ、地榆皂苷-Ⅱ和土茯苓中的
花旗松素、落新妇苷、白藜芦醇进行定量测定方法
研究，为完善该制剂质量标准提供依据。
1 试药与仪器
1. 1 仪器 Agilent 1200 高效液相色谱仪，
G1311A 四元泵、G1330B 自动进样器恒温器、
G1322A脱气机、Chemstation色谱工作站、G1315B
可变波长检测器，XP205 型梅特勒电子天平 (精
度:0. 01 mg)。
1. 2 试药 地榆皂苷-Ⅰ对照品 (批号 111952-
201301，纯度 95. 1%)、花旗松素对照品 (批号
111816-201102，纯度 98. 9%)、落新妇苷 (批号
111798-201303，纯度 92. 4%)、白藜芦醇 (批号
111535-200502，纯度 100. 0%)均购于中国食品药
品检定研究院;地榆皂苷-Ⅱ对照品 (批号 35286-
59-0，纯度 98. 0%)购于上海田源生物技术有限
公司;尿毒灵灌肠液 (市售;甲组每瓶装 20 g，
乙组每瓶装 200 mL;批号分别为 20140101、
20140102、20140103);甲醇、乙腈 (色谱纯，天
津市康科德科技有限公司) ;磷酸 (分析纯，广州
化学试剂二厂)。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 依利特 Hypersil C18 色谱柱
(4. 6 mm × 200 mm， 5 μm) ;体 积 流 量 1. 2
mL /min;流动相 A 为甲醇-乙腈 (1 ∶ 1) ，流动相
B 为 0. 5%磷酸溶液［4-7］，梯度洗脱 (0 ～ 10 min，
45. 0%A;10 ～ 27 min，45. 0% →60. 0% A;27 ～
40 min，60. 0% A;40 ～ 45 min，60. 0% →45. 0%
A) ;检测波长 (0 ～ 27 min，λ1 = 203 nm
［8-9］;
27 ～ 35 min，λ2 = 289 nm
［10］;35 ～ 45 min，λ3 =
306 nm［11］) ;进样量 10 μL。此系统条件下所测组
分与其他组分分离效果良好，理论塔板数按花旗松
素计不得低于 3 000，分离度均大于 2。
2. 2 样品制备
2. 2. 1 混合对照品溶液配制 精密称取 5 种对照
品地榆皂苷-Ⅰ、地榆皂苷-Ⅱ、花旗松素、落新妇
苷和白藜芦醇各适量，分别置于 5 个 20 mL 量瓶
中，加 60%甲醇溶解并稀释至刻度，再分别精密
吸取上述溶液 10、5、2、10、5 mL 置于 50 mL 量
瓶中，加 60%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得混合
对照品溶液 (地榆皂苷-Ⅰ为 0. 072 8 mg /mL，地
榆皂苷-Ⅱ为 0. 037 4 mg /mL，花旗松素为 0. 012 6
mg /mL，落新妇苷为 0. 086 2 mg /mL，白藜芦醇为
0. 035 6 mg /mL)。
2. 2. 2 供试品溶液的制备 取本品甲组成分适量，
研细，混匀，称取约 1. 0 g，精密称定，精密加入
60%甲醇 50 mL，密塞，称定质量，超声波 (功率
160 W，频率 50 kHz)超声处理 30 min，放冷，再
称定质量，用 60%甲醇补足减失的质量，摇匀，
过滤，取续滤液作为供试品溶液。
2. 2. 3 阴性对照试验 按尿毒灵灌肠液处方比例称
取除地榆的其余药味和除土茯苓的其余药味各一份，
按尿毒灵灌肠液的制备工艺分别制成地榆空白样品和
土茯苓空白样品，按照上述供试品溶液的配制方法制
成地榆空白溶液和土茯苓空白溶液。分别精密吸取 10
μL的供试品溶液、混合对照品溶液、地榆空白溶液
及土茯苓空白溶液，按上述方法测定，结果显示各待
测组分分离效果良好，阴性样品无干扰。见图 1。
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A． 对照品 B． 样品 C． 地榆空白溶液 D． 土茯苓空白溶液
1． 地榆皂苷-Ⅰ 2． 地榆皂苷-Ⅱ 3． 花旗松素 4． 落新妇苷 5． 白藜芦醇
A． reference substance B． sample C． sample without Sanguisorbae Ｒadix D． sample without Smilacis glabrae Ｒhizoma
1． ziyu-glycoside Ⅰ 2． ziyu-glycoside Ⅱ 3． taxifolin 4． astilbin 5． resveratrol
图 1 地榆皂苷-Ⅰ、地榆皂苷-Ⅱ、花旗松素、落新妇苷和白藜芦醇的 HPLC图谱
Fig. 1 HPLC of ziyu-glycoside Ⅰ，ziyu-glycoside Ⅱ，taxifolin，astilbin and resveratrol
2. 3 方法学考察
2. 3. 1 线性关系考察 分别精密吸取混合对照品溶
液 1. 0、5. 0、10. 0、15. 0、20. 0 μL，依次注入高效
液相色谱仪中，按上述色谱条件进行分析测定，以
峰面积 Y 与进样量 X 进行线性回归，得地榆皂苷-Ⅰ
回归方程为:Y = 3. 151 6 × 106X － 415. 7，r = 0. 999
7，线性范围为 0. 072 8 ～ 1. 456 0 μg;地榆皂苷-Ⅱ
Y =2. 304 2 ×106X +197. 5，r =0. 999 8，线性范围为
0. 037 4 ～0. 748 0 μg;花旗松素 Y =1. 298 1 ×106X －
263. 6，r = 0. 999 3，线性范围为 0. 012 6 ～ 0. 252 0
μg;落新妇苷 Y = 3. 361 9 × 106X + 513. 8， r =
0. 999 9，线性范围为 0. 086 2 ～ 1. 724 0 μg;白藜
芦醇 Y = 2. 611 9 × 106X + 394. 1，r = 0. 999 5，线
性范围为 0. 035 6 ～ 0. 712 0 μg。结果表明:各成
分在对应的线性范围内，进样量与峰面积线性关系
良好。
2. 3. 2 精密度试验 取 “2. 2. 1”项下的混合对
照品溶液按照“2. 1”项下色谱条件，精密吸取混
合对照品溶液 10 μL，连续重复进样 6 次，分别测
得 5 种成分的峰面积，计算各成分相对标准偏差，
ＲSD分别为 0. 5% (地榆皂苷-Ⅰ)、0. 9% (地榆
皂苷-Ⅱ)、0. 9% (花旗松素)、0. 4% (落新妇
苷)和 0. 8% (白藜芦醇)。结果表明，仪器精密
度良好。
2. 3. 3 重复性试验 称取同一批号供试品 (批号
131201)，按“2. 2. 2”项下供试品溶液制备方法
制备 6 份供试品溶液，按照 “2. 1”项下色谱条件
依法进样测定，计算各成分含有量和相对标准偏
差，ＲSD 分别为 0. 5% (地榆皂苷-Ⅰ)、0. 8%
(地榆皂苷-Ⅱ)、0. 9% (花旗松素)、0. 3% (落
新妇苷)和 0. 7% (白藜芦醇)。结果表明，本法
测定重复性良好。
2. 3. 4 稳定性试验 精密吸取同一批样品 (批号
131201)的同一供试品溶液，在室温下放置 0、2、
4、8、12、24 h后，每次进样 10 μL，测定其峰面
积值，求得各组分 ＲSD 分别为 0. 5% (地榆皂苷-
Ⅰ)、0. 8% (地榆皂苷-Ⅱ)、0. 9% (花旗松素)、
0. 4% (落新妇苷)和 0. 6% (白藜芦醇)。表明
供试品溶液 24 h内稳定性良好。
2. 3. 5 加样回收率试验 取已知含有量的同一批
(批号 131201)尿毒灵灌肠液甲组成分 (地榆皂苷-Ⅰ
为 3. 67 mg /g、地榆皂苷-Ⅱ为 1. 85 mg /g，花旗松素
为 0. 634 mg /g，落新妇苷为4. 32 mg /g，白藜芦醇为
1. 76 mg /g)适量，研细，混匀，取约0. 5 g，精密称
定，精密加入混合对照品溶液 25 mL和 60%甲醇 25
mL，按“2. 2. 2”项下供试品溶液的配制方法制备
加样供试品试液。按“2. 1”项下色谱条件进样测
定，计算各组分回收率，结果见表 1。
2. 4 样品测定 取 3 个批号的样品甲组成分，按
“2. 2. 2”项下供试品制备方法，按 “2. 1”项下色
谱条件测定本品中地榆皂苷-Ⅰ、地榆皂苷-Ⅱ、花
旗松素、落新妇苷和白藜芦醇，结果见表 2。
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表 1 地榆皂苷-Ⅰ、地榆皂苷-Ⅱ、花旗松素、落新妇苷和
白藜芦醇回收率试验
Tab. 1 Ｒesults of recovery tests for ziyu-glycoside Ⅰ，
ziyu-glycoside Ⅱ，taxifolin，astilbin and resvera-
trol
称样量 /
g
样品中量 /
mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
平均值/%
(ＲSD/%)
地榆皂苷-Ⅰ
地榆皂苷-Ⅱ
花旗松素
落新妇苷
白藜芦醇
0. 501 2 1. 839 1. 820 3. 614 97. 5
0. 498 3 1. 829 1. 820 3. 635 99. 2
0. 500 7 1. 838 1. 820 3. 627 98. 3
0. 501 6 1. 841 1. 820 3. 641 98. 9
0. 499 2 1. 832 1. 820 3. 619 98. 2
0. 501 9 1. 842 1. 820 3. 652 99. 5
0. 501 2 0. 927 2 0. 935 0 1. 841 97. 7
0. 498 3 0. 921 9 0. 935 0 1. 839 98. 1
0. 500 7 0. 926 3 0. 935 0 1. 834 97. 1
0. 501 6 0. 928 0 0. 935 0 1. 844 98. 0
0. 499 2 0. 923 5 0. 935 0 1. 826 96. 5
0. 501 9 0. 928 5 0. 935 0 1. 847 98. 2
0. 501 2 0. 317 8 0. 315 0 0. 620 8 96. 2
0. 498 3 0. 315 9 0. 315 0 0. 624 9 98. 1
0. 500 7 0. 317 4 0. 315 0 0. 621 7 96. 6
0. 501 6 0. 318 0 0. 315 0 0. 624 1 97. 2
0. 499 2 0. 316 5 0. 315 0 0. 619 8 96. 3
0. 501 9 0. 318 2 0. 315 0 0. 624 2 97. 1
0. 501 2 2. 165 2. 155 4. 312 99. 6
0. 498 3 2. 153 2. 155 4. 294 99. 4
0. 500 7 2. 163 2. 155 4. 286 98. 5
0. 501 6 2. 167 2. 155 4. 319 99. 9
0. 499 2 2. 157 2. 155 4. 286 98. 8
0. 501 9 2. 168 2. 155 4. 291 98. 5
0. 501 2 0. 882 1 0. 890 0 1. 765 99. 2
0. 498 3 0. 877 0 0. 890 0 1. 751 98. 2
0. 500 7 0. 881 2 0. 890 0 1. 759 98. 6
0. 501 6 0. 882 8 0. 890 0 1. 761 98. 7
0. 499 2 0. 878 6 0. 890 0 1. 749 97. 8
0. 501 9 0. 883 3 0. 890 0 1. 756 98. 1
98. 6
(0. 8)
97. 6
(0. 7)
96. 9
(0. 7)
99. 1
(0. 6)
98. 4
(0. 5)
表 2 样品测定结果 (x ± s，n =3)
Tab. 2 Ｒesults of content determination (x ± s，n =3)
批 号
地榆皂苷-Ⅰ /
(mg·g － 1)
地榆皂苷-Ⅱ /
(mg·g － 1)
花旗松素 /
(mg·g － 1)
落新妇苷 /
(mg·g － 1)
白藜芦醇 /
(mg·g － 1)
131201 3. 67 ± 0. 04 1. 85 ± 0. 02 0. 634 ± 0. 004 4. 32 ± 0. 02 1. 76 ± 0. 02
131202 3. 42 ± 0. 02 1. 78 ± 0. 02 0. 641 ± 0. 006 4. 57 ± 0. 04 1. 82 ± 0. 02
131203 3. 89 ± 0. 03 1. 96 ± 0. 01 0. 629 ± 0. 003 4. 19 ± 0. 02 1. 68 ± 0. 01
3 讨论
3. 1 供试品溶液提取方法的选择 在选择供试品
溶液提取方法时，考察比较了超声提取和回流提取
两种方法对提取效果的影响，按照本实验中的色谱
条件测定，结果加热回流 2 h与超声提取 30 min结
果相当，考虑操作简便性，选用超声提取 30 min
作为供试品溶液制备的提取方法。
3. 2 流动相的选择 在流动相的选择中，还曾考
察了不同比例的甲醇-0. 5%磷酸溶液、乙腈-0. 1%
磷酸溶液、乙腈-水为流动相梯度洗脱，结果以甲
醇-0. 5%磷酸溶液梯度洗脱时，各组分分离度差，
地榆皂苷-Ⅰ和地榆皂苷-Ⅱ出现峰型重叠;以乙腈-
0. 1%磷酸溶液、乙腈-水为流动相梯度洗脱，地榆
皂苷-Ⅰ和地榆皂苷-Ⅱ峰形对称，但花旗松素、落
新妇苷和白藜芦醇峰型不对称，拖尾现象严重。而
以甲醇-乙腈 (1 ∶ 1)与 0. 5%磷酸溶液为流动相
梯度洗脱时，所测 5 个组分均能达到基线分离，各
组分峰型良好，分离度均大于 2。
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2015 年 1 月
第 37 卷 第 1 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
January 2015
Vol． 37 No． 1