全 文 ：　［收稿日期］　２０１４－０５－０５；２０１４－０９－１４修回
　［作者简介］　彭莉萍（１９８９－），女，在读硕士，专业方向：生物化学与分子生物学。Ｅ－ｍａｉｌ：３８９８５０１０８＠ｑｑ．ｃｏｍ
　＊通讯作者：姬可平（１９５６－），男，教授，从事分子生物学技术在中草药研究中应用研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｌｈｊｘｊ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
［文章编号］１００１－３６０１（２０１４）１０－０６３７－０２１７－０４
广东孑遗植物水松ｒＤＮＡ　ＩＴＳ序列分析
彭莉萍，牛宪立，姬可平＊，魏妮娜，王 燕
（遵义医学院珠海校区，广东 珠海５１９０４１）
　　［摘　要］为鉴定广东水松的遗传多样性，应用改良ＣＴＡＢ法分别提取广东不同地区的孑遗植物水松基
因组ＤＮＡ，以真核生物ｒＤＮＡ　ＩＴＳ序列的通用引物分别对其ＩＴＳ区进行ＰＣＲ扩增及测序后进行比对、分
析，将得到的序列申请登录入ＧｅｎＢａｎｋ核苷酸数据库。结果表明：广东地区不同来源水松的ｒＤＮＡ　ＩＴＳ序
列长度均为９８８ｂｐ，相互之间仅有２～３个碱基差异，说明该序列可作为从分子水平鉴别水松种质资源的参
考标记。珠海、中山和广州地区孑遗植物水松ＧｅｎＢａｎｋ核苷酸数据库登录号分别是ＫＦ９７７８７４、ＫＦ９７７８７６
和ＫＦ９７７８７５。
［关键词］孑遗植物；水松；ＰＣＲ；ＩＴＳ；广东
［中图分类号］Ｑ８９ ［文献标识码］Ａ
Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｒＤＮＡ　ＩＴＳ　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｒｅｌｉｃ　Ｐｌａｎｔ
Ｇｌｙｐｔｏｓｔｒｏｂｕｓ　ｐｅｎｓｉｌｉｓ　ｉｎ　Ｇｕａｎｄｏｎｇ
ＰＥＮＧ　Ｌｉｐｉｎｇ，ＮＩＵ　Ｘｉａｎｌｉ，ＪＩ　Ｋｅｐｉｎｇ＊，ＷＥＩ　Ｎｉｎａ，ＷＡＮＧ　Ｙａｎ
（Ｚｈｕｈａｉ　Ｃａｍｐｕｓ，Ｚｕｎｙｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｚｈｕｈａｉ，Ｇｕａｎｄｏｎｇ５１９０４１，Ｃｈｉｎａ）
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ　ｏｆ　ｒｅｌｉｃ　ｐｌａｎｔ　Ｇ．ｐｅｎｓｉｌｉｓ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｒｅｇｉｏｎｓ　ｉｎ　Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　ｗａｓ
ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ＣＴＡＢ　ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅｎ　ｔｈｅ　ＩＴＳ　ｏｆ　ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ　ｗａｓ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ａｎｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ　ｂｙ
ｔｈｅ　ｕｎｉｖｅｒｓａｌ　ｐｒｉｍｅｒ　ｏｆ　ｅｕｃａｒｙｏｎ　ｒＤＮＡ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄ　ｆｉｎａｌｙ　ｔｈｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｂｙ
ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｗａｓ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｆｏｒ　ｅｎｔｅｒｉｎｇ　ＧｅｎＢａｎｋ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｒＤＮＡ　ＩＴＳ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　Ｇ．ｐｅｎｓｉｌｉｓ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｒｅｇｉｏｎｓ　ｉｎ　Ｇｕａｎｄｏｎｇ　ｉｓ　９８８ｂｐ　ａｎｄ　ｔｈｅｒｅ　ｉｓ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ
ｗｉｔｈ　２－３ｂａｓｅｓ　ｉｎ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｌｅｎｇｔｈ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　Ｇ．ｐｅｎｓｉｌｉｓ　ｓａｍｐｌｅｓ，ｗｈｉｃｈ　ｍｅａｎｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｔｈｅ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｍａｒｋｅｒ　ｔｏ　ｉｄｅｎｔｉｆｙ　Ｇｌｙｐｔｏｓｔｒｏｂｕｓ　ｐｅｎｓｉｌｉｓ　ｇｅｒｍｐｌａｓｍ　ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ
ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｌｅｖｅｌ．Ｔｈｅ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　Ｇ．ｐｅｎｓｉｌｉｓ　ｆｒｏｍ　Ｚｈｕｈａｉ，Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ　ａｎｄ　Ｇｕａｎｚｈｏｕ　ｉｓ
ＫＦ９７７８７４，ＫＦ９７７８７６ａｎｄ　ＫＦ９７７８７５ｉｎ　ＧｅｎＢａｎｋ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｒｅｌｉｃ　ｐｌａｎｔ；Ｇｌｙｐｔｏｓｔｒｏｂｕｓ　ｐｅｎｓｉｌｉｓ；ＰＣＲ；ＩＴＳ；ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ
　　水松（Ｇｌｙｐｔｏｓｔｒｏｂｕｓ　ｐｅｎｓｉｌｉｓ），属杉科（Ｔａｘｏｄｉ－
ａｃｅａｅ）水松属，是我国特有珍稀孑遗树种，是国家一
级保护植物。水松生长于沼泽地，材质轻软，纹理
细，耐水湿，是造桥和造船的良材；树根轻、浮力大，
可用来做木塞和救生工具；水松枝叶和果实均可入
药，功能主治化气止痛；水松根系发达，可栽于河边、
堤旁，固堤护岸和防风［１－２］。水松作为世界著名的活
化石植物，曾广泛分布于北半球，由于地理因素和人
为活动的影响，水松数量日益减少，已处于濒危状
态［３－５］。水松现仅残存于我国南方的广西、广东、江
西、福建等省，大部分地区仅剩几株孤立木，但广东
地区珠海天然水松林、中山民众镇及广州华农树木
园天然水松林相对较多。
２００３年加拿大分类学家Ｐａｕｌ　Ｈｅｂｅａ首次提出
了ＤＮＡ条形码的概念，在世界范围内该概念受到
广泛关注，很多学者认为，其很大程度补充了日渐萎
缩的传统形态分类学，能够为分类学修订、新种和隐
存种的发现、资源利用及生物多样性研究等提供新
的思路和研究工具，同时将分类学的结果应用于生
物学调查、濒临物种监测和保护、法医鉴定、药物和
食品市场监督、中草药资源鉴定等诸多领域［６－１０］。
２００９年在墨西哥城召开的第三届国际ＤＮＡ条形码
会议上，与会代表对植物ＤＮＡ条形码概念达成共
识，建议将核基因片段ＩＴＳ序列作为植物ＤＮＡ条
形码的补充码。目前，野生生物种质资源库已完成
了库内保存的９００多份种子ＤＮＡ条形码测定，并
利用ＤＮＡ条形码技术更正了一些错误鉴定［１１］。而
对于水松鉴别，学者们研究形态学、种质资源学、药
用价值等方面［４－６］，从分子水平的研究尚未见报道。
笔者利用分子生物学ＤＮＡ条形码技术对广东不同
地区的水松进行分子水平的鉴别，为水松的遗传多
样性研究提供参考。
１ 材料与方法
１．１ 材料
１．１．１ 植物材料 水松叶于２０１３年１１月分别采
自广州华农树木园、中山民众镇和珠海水松林，并已
经通过技术人员认可。采回的植物用７５％乙醇擦
　贵州农业科学　２０１４，４２（１０）：２１７～２２０
　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
拭，目的在于消除外源ＤＮＡ的污染（凭证标本存放
于遵义医学院珠海校区生物化学与细胞分子生物学
教研室）。
１．１．２ 仪器 高速冷冻离心机（长沙湘宜仪器
厂），核酸定量仪（环亚生物科技有限公司），ＰＣＲ扩
增仪（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）、电泳仪（北京六一仪器厂），凝胶成
像仪（Ｔｏｃａｎｌ９０）。
１．１．３ 试剂 ｄＮＴＰ、１０×Ｅｘ－ｔａｑ　Ｂｕｆｆｅｒ、Ｍａｒｋｅｒ
ＤＬ１５　０００、Ｅｘ－ｔａｑ酶购自于宝生生物工程有限公
司，凝胶回收试剂盒（ＱＩＮＧＥＮ）、ＲＮａｓｅ　Ａ、ＩＴＳ通
用引物购自上海生工生物工程技术服务有限公司，
Ｔ载体（日本宝生物公司）、三羟甲基氨基甲烷、
ＣＴＡＢ、β－巯基乙醇、ＰＶＰ－４０、ＮａＣｌ、硼酸、氯仿、乙
醇、异丙醇、异戊醇等均为国产分析纯试剂，液氮由
遵义医学院珠海校区中心实验室提供。
１．２ 水松基因组ＤＮＡ的提取
采用改良ＣＴＡＢ法提取珠海、中山和广州的水
松基因组 ＤＮＡ［１２］，将沉淀溶于合适体积（６０～
８０μＬ）ＴＥ缓冲液，４℃待用或－２０℃长期保存，作
为水松ＩＴＳ序列ＰＣＲ的扩增模板。
１．３ ＤＮＡ片段大小及纯度的检测
配置１．０％的琼脂糖凝胶进行电泳，检测广东
不同地区水松基因组ＤＮＡ片段的大小及完整性，
观察并拍照；取２μＬ　ＤＮＡ样品于核酸定量仪进行
分析并判断ＤＮＡ的浓度和纯度。
１．４ 引物设计及ＰＣＲ扩增
通过查阅参考文献［１３］及 ＮＣＢＩ网站检索，选
用真核生物扩增ＩＴＳ序列的通用引物、ＰＣＲ反应系
统及扩增程序，对目标样品ＤＮＡ中的ＩＴＳ序列进
行ＰＣＲ扩增，引物序列为ＩＴＳ－５Ｆ，５′－ＧＧＡＡＧＴＡ－
ＡＡＡＧＴＣＧＴＡＡＣＡＡＧＧ－３′；ＩＴＳ－４Ｒ，５′－ＴＣＣＴＣ－
ＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ－３′；ＰＣＲ反应程序为９４℃
预变性５ｍｉｎ，９４℃变性３０ｓ，５４℃退火４５ｓ，７２℃延
伸１．５ｍｉｎ，循环３５次，最后在７２℃延伸１０ｍｉｎ。
ＰＣＲ扩增产物通过１．０％的琼脂糖凝胶电泳进行初
步检测，在Ｂｉｏ－ＲＡＤ凝胶成像系统观察并拍照，将
检测成功的产物进行凝胶回收纯化。
１．５ 克隆ｒＤＮＡ　ＩＴＳ序列及序列测定
将纯化的 ＰＣＲ 产物与 ｐＭＤ１９－Ｔ　ｖｅｃｔｏｒ于
４２℃连接１ｈ，转化入感受态菌ＤＨ５α，活化培养进
行涂板，在含有 Ａｍｐ＋的ＬＢ固体培养基上挑取单
克隆菌落，并进行ＬＢ液体培养基培养，将菌液送往
华大基因（广州）测序。
１．６ 碱基序列的比对及获取登录号
对获得测序峰利用分子生物学应用软件ＤＮＡ－
ＭＡＮ进行校对拼接，除去引物区，获得目的片段完
整序列，相互进行比对分析，并将该序列提交到
ＧｅｎＢａｎｋ，申请并获取登录号。
２ 结果与分析
２．１ 基因组ＤＮＡ浓度及电泳检测
由表１可见，提取广东不同地区水松的基因组
ＤＮＡ样品经核酸定量仪检测，ＯＤ２６０／ＯＤ２８０比值
为１．６～２．０，ＤＮＡ纯度符合ＰＣＲ扩增标准；不同
地区的水松基因组ＤＮＡ的电泳条带清晰、完整，大
小均为１５　０００ｂｐ左右（图１）。
表１ 不同地区水松基因组的ＤＮＡ浓度
Ｔａｂｌｅ　１　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇ．ｐｅｎｓｉｌｉｓ　ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｒｅｇｉｏｎｓ
样品
Ｓａｍｐｌｅ
ＯＤ２６０ ＯＤ２８０ ＯＤ２６０／
ＯＤ２８０
浓度／（μｇ／ｍＬ）
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
１（珠海）Ｚｈｕｈａｉ　 ３．００３　 １．７５３　 １．７１３　 １５０
２（中山）Ｚｈｏｎｇｓｈａｎ　 ４．６２３　 ２．６１９　 １．７６５　 ２３１
３（广州）Ｇｕａｎｚｈｏｕ　 ６．４７５　 ３．４２７　 １．８８９　 ３２３
　注：Ｍ为ＤＬ１５０００Ｍａｒｋｅｒ，１为珠海，２为中山，３为广州。
　Ｎｏｔｅ：Ｍ，ＤＬ１５０００ｍａｒｋｅｒ；１，２ａｎｄ　３ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ　Ｚｈｕｈａｉ，Ｚｈｏｎｇ－
ｓｈａｎ　ａｎｄ　Ｇｕａｎｚｈｏｕ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
图１ 不同地区水松基因组ＤＮＡ的电泳图谱
Ｆｉｇ．１　Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ　ｏｆ　Ｇ．ｐｅｎｓｉｌｉｓ
ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｒｅｇｉｏｎｓ
　注：Ｍ为ＤＬ１５０００Ｍａｒｋｅｒ，１为珠海，２为中山，３为广州。
　Ｎｏｔｅ：Ｍ，ＤＬ１５０００ｍａｒｋｅｒ；１，２ａｎｄ　３ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ　Ｚｈｕｈａｉ，Ｚｈｏｎｇ－
ｓｈａｎ　ａｎｄ　Ｇｕａｎｚｈｏｕ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
图２ 不同地区水松基因组ＤＮＡ　ＩＴＳ序列ＰＣＲ扩增图谱
Ｆｉｇ．２　ＰＣＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｇ．ｐｅｎｓｉｌｉｓ　ｇｅ－
ｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｒｅｇｉｏｎｓ
·８１２·
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　贵 州 农 业 科 学
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
图３ ＩＴＳ序列ＰＣＲ扩增产物测序部分峰
Ｆｉｇ．３　Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ＰＣＲ
２．２ 水松基因组ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增
从图２看出，珠海、中山和广州的水松基因组
ＤＮＡ已成功扩增出ＩＴＳ序列，ＩＴＳ序列长度均接近
于１　０００ｂｐ，电泳条带清晰明亮，无拖尾现象，说明
扩增效果良好，符合测序要求。
２．３ 水松的ｒＤＮＡ　ＩＴＳ序列拼接
经过测序得广东不同地区水松的ｒＤＮＡ　ＩＴＳ序
列的测序峰（图３），均无重叠峰和套峰，可进行后续分
析。利用分析软件ＤＮＡＭＡＮ进行校对拼接，获得完
整序列，其不同地区水松序列长度均为９８８ｂｐ。
２．４ 水松的ｒＤＮＡ　ＩＴＳ序列差异
经ＤＮＡＭＡＮ比对发现，广东不同地区水松的
ｒＤＮＡ　ＩＴＳ序列均存在有较小差异，珠海水松与中
山水松的ＩＴＳ序列存在有２个碱基差异，分别在
２０５和９６５个碱基处；珠海与广州水松ＩＴＳ序列间
存在３个碱基差异，分别在２０５个、９８２个和９８８个
碱基处；广州与中山水松ＩＴＳ序列间存在有３个碱
基差异，分别在９６５个、９８２个和９８８个碱基处（图
４）。
２．５ ＧｅｎＢａｎｋ核苷酸数据库的登录号
将获得的广东珠海、中山和广州水松的ｒＤＮＡ
ＩＴＳ序列申请登录于ＧｅｎＢａｎｋ核苷酸数据库，获得
登录号（表２）。
图４ 广州不同地区水松的ｒＤＮＡ　ＩＴＳ序列比对
Ｆｉｇ．４　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　ｏｆ　ｒＤＮＡ　ＩＴＳ　ｏｆ　Ｇ．ｐｅｎｓｉｌｉｓ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｒｅｇｉｏｎｓ
表２ 广州不同地区水松的信息
Ｔａｂｌｅ　２　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇ．ｐｅｎｓｉｌｉｓ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｒｅｇｉｏｎｓ
编号
Ｎｏ．
来源
Ｓｏｕｒｃｅ
科
Ｆａｍｉｌｙ
属
Ｇｅｎｕｓ
凭证编号
Ｖｏｕｃｈｅｒ　ｎｕｍｂｅｒ
登录号
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　ｎｕｍｂｅｒ
１ 珠海 杉科 水松属 ＱＡ１３１１２１ ＫＦ９７７８７４
２ 中山 杉科 水松属 ＱＡ１３１１２６ ＫＦ９７７８７６
３ 广州 杉科 水松属 ＱＡ１３１１２４ ＫＦ９７７８７５
３ 结论与讨论
ＩＴＳ测序分析可知，若ｒＤＮＡ重复序列间的纯
合度较低，各重复单位间序列差异大，ＰＣＲ直接测
序将导致无法读出其序列，运用Ｔ克隆载体测序的
方法比直接测序的方法具有更高的效率和准确性。
ＰＣＲ产物直接测序时，前３０～５０ｂｐ和终止前的序
列均无法正确读取，为确保测序的稳定性和准确性，
避免测序反应开始和结束的一些序列不准确，采用
Ｔ克隆载体测序的方法，将扩增后的产物经胶回收
纯化后与Ｔ载体连接，放于先行培养并制作好感受
态的菌液中扩增复制，再将菌液送到公司进行测序。
近些年来，越来越多的学者对植物ＤＮＡ条形
码进行研究，焦点主要是对靶植物中的特定片段进
行评价和分析试验，其中研究较多的特定序列即为
ｒＤＮＡ　ＩＴＳ序列［１４］。本研究对广东地区珠海、中山
和广州的水松进行基因组ＤＮＡ提取，ＩＴＳ序列进
行ＰＣＲ扩增，并进行测序。不同地区水松ＩＴＳ序列
·９１２·
　彭莉萍 等　广东孑遗植物水松ｒＤＮＡ　ＩＴＳ序列分析
　ＰＥＮＧ　Ｌｉｐｉｎｇ　ｅｔ　ａｌ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｒＤＮＡ　ＩＴＳ　Ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｒｅｌｉｃ　Ｐｌａｎｔ　Ｇｌｙｐｔｏｓｔｒｏｂｕｓ　ｐｅｎｓｉｌｉｓ　ｉｎ　Ｇｕａｎｄｏｎｇ
测序结果进行比对表明，相互之间仅有２～３个碱基
的差异，可能因为气候、地理环境的变化导致碱基发
生突变，但并不影响ｒＤＮＡ　ＩＴＳ序列从分子水平对
物种种质资源进行鉴定［１５－１６］。本研究获得了广东珠
海、中山和广州水松的ｒＤＮＡ　ＩＴＳ序列，从分子水平
上可为其种质资源的研究提供参考依据。
［参 考 文 献］
［１］ Ｗｕ　Ｚ　Ｙ，Ｌｉｕ　Ｊ　Ｆ，Ｈｏｎｇ　Ｗ，ｅｔ　ａｌ．Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｏｆ　ｎａｔｕｒａｌ　ａｎｄ　ｐｌａｎｔｅｄ　Ｇｌｙｐｔｏｓｔｒｏｂｕｓ　ｐｅｎｓｉｌｉｓ　ｐｏｐｕｌａ－
ｔｉｏｎｓ：ａ　ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．Ｙｉｎｇ　Ｙｏｎｇ　Ｓｈｅｎｇ　Ｔａｉ
Ｘｕｅ　Ｂａｏ，２０１１，２２（４）：８７３－８７９．
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ｄｉｔｅｒｐｅｎｅ　ｆｒｏｍ　Ｇｌｙｐｔｏｓｔｒｏｂｕｓ　ｐｅｎｓｉｌｉｓ［Ｊ］．Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａ，
２０１０，８１（８）：１２０２－１２０４．
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（责任编辑：刘忠丽）
·０２２·
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　贵 州 农 业 科 学
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ