全 文 ：应 用 生 态 学 报
  年 ! 月 第 ∀ 卷 第 # 期
∃ % &∋ ( ) ( ∗+ , − ∋ . / +0 . 11 / &( 2 ( ∃+ / + 3 4 , ∗5 67
  , ∀ 8# 9 : ; <;一 ; < ∀
利福霉素生产菌产生钝化 −= > )? 物质
的分离及性质研究 ‘
吴文芳 张成刚 吕安国
8中国科学院沈阳应用生态研究所 , 沈阳
张立新 胡江春 曾 青


≅ ≅
9
【摘要
利福霉素 ) Α 8简称 −= > ) Α 9生产菌—地中海拟无枝菌酸菌在生物合成 −= > ) Α过程中 , 产生一种能钝化自身产物 8−= > ) Α 9的物质 Β 实验证实 , 该物质是由谷氨酸 、天冬氨
酸 、赖氨酸及撷氨酸等
Χ 种常见氨基酸组成的蛋白质 Β 分子量 8ΔΕ 9约 ; Β Φ
≅ ‘2 , 等电
点 8169为 Β ! 一 ∀ Β
Β 在
≅ ≅ ℃下加热 = ΓΗ =Ι , 其活性丧失 Β 作用于 − => ) Α 的最适 ϑ % 值范围
为 ! Β Χ 一 < Β ∀ , 最适温度为 ; ℃ , 初步证实该物质是一种酶 8暂称利福霉素钝化酶 9 Β
关键词 地中海拟无枝菌酸菌 利福霉素 ) Α 利福母素钝化酶 抗生素酶
&Κ Γ 6Λ Μ=Γ Ι Λ Ι Ν 1ΟΓ 1Π Ο Μ=Π Κ Γ > − =>Λ Η 7Π =Ι ) Α 一=Ι Λ Π Μ= ?Λ Μ=Γ Ι Κ 5 Θ Κ ΜΛ Ι ΡΠ 1 ΟΓ Ν 5 Π Π Ν Θ7 − => ) Α 一1Ο ΓΣΝ 5 Π Μ=? Π ΚΜΟ Λ= Ι Β Τ 5 Τ Π Ι >Λ Ι Υ , ςΩ Λ Ι Υ ∃ Ω Π Ι Υ Υ Λ Ι Υ , / 5 . Ι 四。 , ςΩ Λ Ι Υ / =Φ =Ι , % 5 ∗=Λ Ι Υ Π Ω 5 Ι ,
ς Π Ι Υ Ξ =Ι Υ 8&Ι ΚΜ=Μ 5 ΜΠ Γ> . 116=Π Ν ( Ρ 时。岁 , . Ρ Λ Ν Π Η =Λ ) =Ι =ΡΛ , )ΩΠ 哪Ι Υ

≅ ≅
9一∃Ω =Ι Β ∗ Β月沪户
Β (Ρ Γ 6 Β ,
  , ∀ 8# 9 : ; < ;一 ; < ∀ Β
Ψ Ω Π ϑ ΟΓ Ν 5 Π Μ=? Π Κ ΜΟ Λ =Ι 8. 州岁Ρ耐 Λ‘Γ 1“ Η ΠΝ =ΜΠΟΛ Ι 瓦9 ϑ ΟΓ Ν 5 Π Π Κ Λ Κ 5 ΘΚ ΜΛ Ι Π Π >Γ Ο =Ι Λ Π Μ=? Λ Μ=Ι ΥΚ Π 6>一 ϑ Ο Γ Ν 5 Π Μ 8− =>) Α 9 =Ι ΜΩ Π Π Γ 5 ΟΚ Π Γ > − => )Α 一Θ=Γ Κ 7Ι ΜΩ Π Κ =Κ Β Ψ Ω Π Π Φ ϑ Π Ο =Η Π Ι ΜΚ ΝΠ Η Γ Ι Κ ΜΟ Λ ΜΠ
ΜΩΛ Μ =Μ
Λ ϑ Ο Γ Μ Π =Ι Π Γ Ι Κ =Κ Μ=Ι Υ Γ >
Χ Ζ =Ι Ν Κ Γ > Π Γ Η Η Γ Ι Λ Η =Ι Γ Λ Π =Ν Κ =Ι Π 65 Ν =Ι Υ 3 65 , . Κ ϑ ,
/ 7 Κ , ? Λ 6 Λ Ι Ν ≅ Γ Ι Β &Μ Κ Η Γ 6Π Π 5 6Λ Ο Ε Π =Υ ΩΜ 8ΔΤ 9
Λ ϑ ϑ Ο Γ Φ =Η Λ ΜΠ 67 ; Β ) [ 6Γ ‘2 Λ Ι Ν =Μ Κ =Κ Γ Σ
Π 6Π Π ΜΟ =Π ϑ Γ =Ι Μ 8169
Β !一 ∀ Β
Β . >ΜΠ Ο Ω Π Λ ΜΠ Ν Λ Μ
≅ ≅ ℃ >Γ Ο
≅ Η =Ι , =ΜΚ ΛΠ Μ =? =Μ7
Ν =Κ Λ ϑ Σ
ϑ Π Λ Ο Π Ν Β Ψ Ω Π Γ ϑ Μ=Η 5 Η ϑ % Ο Λ Ι 沙 >Γ Ο Ο Π Λ Π Μ=Ι Υ Γ Ι − => ) Α
! Β Χ 一 < Β ∀ Λ Ι Ν ΜΩ Π Γ ϑ Μ=Η 5 Η ΜΠ Η Σ
ϑ Π Ο Λ Μ 5 Ο Π
;  ℃ Β &Μ
ϑ Ο Π 6=Η =Ι Λ Ο=6? =Ν Π Ι Μ =>=Π Ν Λ Κ Λ Π Ι ∴ 7ΗΠ 8ΜΠ Η ϑ Γ Ο Λ Ο =67 Ν Π Κ =Υ Ι Λ ΜΠ Ν Λ Κ − =Σ>Λ Η 7 Π =Ι ) Α 一=Ι Λ Π Μ=? Λ Μ=Γ Ι Π Ι ∴ 7 Η Π 9Β
] Π 7 Ε Γ ΟΝΚ . 邓67 Ρ Γ 6Λ Μ+1 Κ =) Η Π Ν =Μ⊥ Ι五 , − =>Λ Η 7Π =Ι ) Α , − =>Λ Η 界=Ι ) Α 一=Ι Λ Π Μ=? Λ Μ =Γ Ι Π Ι Σ∴ 7Η Π , . Ι Μ=Θ =Γ Μ=Π Π Ι ∴ 7 Η Π Β

引 言
有些抗生素生产菌在合成抗生素的同
时 , 能产生相应的抗生素酶 , 使自身产物活
性降低或完全丧失 〔‘〕Β 但迄今尚未见 国内
外有关 −= > ) Α 生产菌产生 −= > ) Α 钝化酶
的报道 Β 我国 −= > ) Α 发酵后期发酵液经常
突然 由棕黄色变成紫红色 , 同时伴随着 −= >
) Α 效价大 幅度 降低 Β 而 生长在含 −= > )Α
固体培养基上的菌落周 围时常出现透 明
圈 , 显然是 −= > ) Α 已被某种物质分解 Β 为
阐明这些现象 , 本文对发酵液中分离 出的
能使 −= > ) Α 活性降低的物质进行了研究 ,
并检测其性质 , 为在生产上保持 −= > Κ? 高
产采取相应措施提供科学依据 Β
; 材料与方法
; Β
供试材料
; Β
Β
菌种 地中海拟无枝菌酸菌 8. Η7 ΡΓ 6ΛΜ Γ1 Κ=
Η Π Ν =∴ΠΟΛ Ι 瓦 9和滕黄八叠球菌 8) Λ ΟΡ =Ι Λ 65 ∴ Π Λ 9 8生测指示菌 9均由东北制药总厂提供 Β
; Β
Β ; 培养基 本研究所用培养基均参照东北制
, 中国科学院重点资助项 目 Β

  年 # 月 =一 日收到 , ∀ 月 ; 日改 回 Β
# 期 吴文芳等 :利福霉素生产菌产生钝化 −= > ) Α 物质的分离及性质研究 ; < #
药总厂有关配方配制 Β
; Β
Β # 供试药品 2 ( . ( 一纤维素 2 ( : :和葡萄糖凝
胶 3 6 。、 3 , ≅ 。均为进 口 分装产 品 Β 2 ( . ( 一纤 维素
2 ( , ,和大孔树脂 2 6Γ 6分别为上海试剂二厂和天津
农药厂产品Β −= > ) Α 标准品为中国药品生物制品
检定所产品Β 牛血清白蛋白和 ϑ% Χ 一
≅ 的两性电
解质均为中国科学院上海生物化学研究所东风试
剂厂产品 Β
; Β ; 实验方法
; Β ; Β
生物效价的测定 采用扩散法中的杯碟
法 _ , ⎯ ‘
; Β ; Β ; 菌落周围透明圈中钝化 −= > ) Α 的活性物质
的测定 方法 & : 分别将 ; Β ≅  透明圈 、红圈琼脂
块放入 ∀ Η 6 ≅ Β ΓΚΗ Γ 6 · / ” ϑ% ! Β Χ 磷酸缓冲液中 ,
于室温下浸提 ; Χ Ω , # ≅ ≅ Γ Ο ϑ Η 离心 , 取
Β ςΗ 6上清
液 , 加 ≅ Β Χ Η 6含 # ≅ ≅ ≅ 科Υ · Η 6一 , 的标准 − => ) Α , 置
; ℃下反应 ;Ω , 测生物效价 , 以同样处理的空白
培养基样品为对照 Β 方法 & :在 ΚΗ 6 ≅ Β ≅ Η Γ6 · / ,
ϑ% ! Β Χ 磷酸缓冲液中加入 ; Β ΚΗ 6 # ≅ ≅ ≅科Υ · Η 6一 , − =>
Κ? 溶液 , 分别放入 ; Β ≅ 呈现透明圈 、红圈和空白
培养基的琼脂块 , 室温下浸提 ; ΧΩ , # ≅ ≅Ο ϑ Η 离心 ,
测定上清液的生物效价 Β
; Β ; Β # 发醉液中钝化 −= > ) Α 的活性物质测定
在发酵 < 一
#∀Ω 菌体尚未自溶前 , 用无菌过滤技
术除去菌体 , 滤液置 ; ℃ 以 ;; ΓΟϑ Η 振荡 ; Χ Ω 后 ,
测定滤液振荡前后的生物效价 Β
; Β ; Β Χ 发醉液效价色谱峰变化的测定 发酵液超
速离心 , 于上清液中加入 # 倍体积的甲醇 , 室温放
置
Ω , 以
≅ ≅。。Ο1 Η 离心 , 取上清液注入 日立 ∀#
型高压液相色谱仪_6≅ ⎯ Β 采用反相 ∃ 6Β色谱柱 , 流动
相为 < α甲醇 , 以波长 #
Ι Η 测色谱峰值Μ,∗ Β
;Β ; Β ‘钝化 −= > )? 的活性物质分子量估算 超速
离心的发酵液相继用截留不同分子量的超滤膜进
行分离 , 然后测定各截留分子量的样品对 −= > Κ?
的钝化作用 Β
; Β ; Β ‘发酵液中钝化 −= > )? 物质的分离 采用
2 ( . ( 一纤维素 82 ( 。:或 2 ( 66 9和葡萄糖凝胶 83 , 。 、
3 6Γ Γ 9柱层析法进行分离 _ ‘, ‘〕Β
; Β ; Β ! 钝化 −= > ) ? 物质的氨基酸组成 、蛋白质含
量及活性测定 分纯的钝化 −= > ) Α 的物质 , 用日
立 < # 一 。型氨基酸分析仪测其氨基酸组成_≅∗ Β 用
0 Γ6 =Ι 酚法川测定蛋白质含量 Β 活性测定取不同分
离步骤 中蛋 白含量高的洗脱液及经
≅ ℃处理
6ΓΗ =Ι 的相同体积的同一洗脱液 , 与一定浓度的
标准 − => ) Α 溶液 , 于 ;  ℃反应 ςΩ 后 , 测定 − =>
) Α 的剩余生物效价 Β
在上述条件下以正常样品比灭活样品的剩余
生物效价差值表示钝化 −= > ) Α 生物活性 , 以降低

产Υ · Η 6’值定为
个活性单位Β
; Β ; Β < 钝化 −= > Κ? 物质的纯度 、分子量及等 电点
测定 用聚丙烯酞胺凝胶圆盘 电泳检测钝化 −= >
) Α 物质的纯度_,⎯ Β 分离胶为 ϑ % ) Β  的 !写聚丙烯
酸胺凝胶 , 以 ϑ % ) Β # 的 Ψ Ο= Κ 一甘氨酸溶液作为电极
槽缓冲液 Β 钝化 −= > )Α 物质的等电点 , 用等 电聚
焦凝胶 电泳测定_Λ∗ Β 用 ) 2 ) 8硫酸十二烷醋钠9聚
丙烯酞胺平板电泳 _’〕 , 测定钝化 −= > )? 物质的
分子量 Β 用 已知分子量 8
Β ! 一  Β Χ Φ
≅ ‘2 9的标准
蛋白进行核对 Β
; Β ; Β  钝化 − => ) Α 物质作用于 − => ) Α 的最适 ϑ %
值与最适 温度的测定 在一定体积 的 ϑ % ΧΒ ∀ 、
∀ Β ≅ 、 ! Β Χ 、 < Β ∀ 和
≅ Β ∀ 的 ≅ Β Γ ΚΗ Γ 6 · / 一 , 各缓冲液
中 , 分别加入用少量甲醇溶解的标准 −= > )? ςΗ Υ
8含量 <
卜Υ · Η Υ ‘ , 9和一定量的钝化 − => ) Α 物质
洗脱液 ,使总体积为 6Η 6 , 于 ; ℃反应 ;Ω 后 , 测定
− => ) Α 剩余效价 Β 将 = ∀Η Υ 的 − => ) Α 用少量甲醇
榕解后 , 加入 ϑ% ! Β Χ 的 。Β ≅ Η Γ6 · / 一‘磷酸缓冲液
及一定量钝化 −= > ) Α 物质 , 使总体积为 <Η 6 , 以
=Η 6为单位 , 取出 ∀ 份 , 分别放入 ; ; 、 ;  、 # ! 、 Χ 、
和 ! ℃ 的恒温水浴中 ,保温 ςΩ 后 , 测定 −= > ) Α 的
剩余效价 , 计算不同温度下的生物活性 Β
# 结果与讨论
# · = 钝化 − => ) Α 物质的产生
地中海拟无枝菌酸菌在琼脂平板上形
成 菌落时 , 在它周 围即出现不透明的红色
色素沉积圈 , 随着菌落逐渐长大 , 色素圈扩
大 , 颜色加深 Β 再延长培养时间 8一般在 !Ν
左右 9 , 红色色素在贴近 菌落 的里圈消失 ,
变成了透明圈 8图
9 , 且透明圈的大小与其
生产菌产生 −= > )Α 的效价高低呈负相关 Β
无论是透 明圈琼脂 块的浸提液 , 还是
透明圈的琼脂块直接与 −= > ) Α 一起保温 ,

# 期 吴文芳等 :利福霉素生产菌产生钝化 −= > ) Α 物质的分离及性质研究
在分子量 ≅ Β Φ 6Γ Β 2 以下和 又
≅ ‘2 以上
的滤液几乎无活性 8图 #9 Β 分子量
一 # Φ

≅ 电2 的滤液钝化 −= > ) Α 的活性列入表 # Β
农 # 截留分子 Μ 6一 # Φ =Γ Β 2 的超浪液作用于 − =Ο Κ?
后的生物效价变化
介Θ 6Π # ∃血ΛΙ Υ Π &Ι Θ =Γ 6ΓΥ =Π公 Μ=ΜΠ Ο Γ > 5 6ΜΟ Λ >=6ΜΟ Λ Μ=Γ Ι &=β Σ5 =Ν , =Μ七 Ο ΠΜΠΙ Μ=Γ Ι Η Γ 6Π Π 5 6Λ Ο , Π=Υ 血Μ Γ > 6 一 # [
≅ 心 Ν Λ 6Σ
ΜΓ山 Β >ΜΠ Ο Ο ΠΛΡ Μ=Γ Υ Γ Ι − => ) Α
. χ δ
. δ
反应前
玫, >Γ ΟΠ
Ο Π < ∃ Μ 6Γ Ι
反应后. >ΜΠ Ο
Μ Π Λ ∃ Μ
+ Ι
反应后下降效价Ψ =Μ Π Ο
Ν Π Π Ο Π Λ Κ Π
Λ >Μ Π Ο
Ο Π < ∃ Μ
+ Ι
毓 ∃ 愁
≅
∃ # ≅ # ∃ , ≅ 一 ) ∃户 ∗’ 范匕 − Γ Μ Π川 =Γ Ι 、
、? Ο :⋯片、 ‘
≅‘ 生物效价δ =Γ 6Γ Υ =Π Λ6 # Χ ≅ ≅
≅ Χ ≅ Χ Χ Χ ≅  ≅ ; # # <

日日八卜八 !!,盆‘∀‘∀‘日,#∃
%
一奋工一户!碑、卜


图 & 不同截留分子量的超德液钝化 ∋( ) ∗ + 的活性
,(恶% & − . /( 0 ( /1 2 ) 3 4/ 5 6 )(4/5 6 / (2  4(7 3 (8 9 (/ : 8 ()); 5;  / 5 ; <
/ ;  / (2  = 2 4; ; 3 46 5 9 ; (> : / ? )2 5 (  6 ; / (0 6 / ( > ∋ () ∗ + %
/%4/ ; 5
、产> < = 4一∃ ≅
注 Α − % 配制的标准 ∋ () ? + 溶液 ∗ /6  8 6 5 8 5( )6 = 1 ; ( ∗+
? 2 43 / (2  Β 5 ; Β 6 5 ; 8 , Χ % ∃ 一 & Δ ∃ Ε Φ 的超 滤 液 4/ 56 )(4/ 56 / ;
9 (/ : ΓΗ Ι 一 & Δ ∃Ε Φ ϑ <
表 Φ 钝化 ∋( 5 ?0 物质的分离纯化及活性
Κ % Λ 4; Φ Ι∗ 2 46 /( 2 6  8 Β 3 5 ( )(; 6‘(2  2 ) ∋ () ∗ + 一(皿 ; / (0 6 / (2  ? 3 加/ 6  ; ; 6  8 4妞 % . / (村/ 1
样 品
∗6 = Μ4;
总体积 蛋白质总/ 蛋白质浓度
Κ 2 / 6 4 Κ 2 / 6 4 Ν 2讹;  / 56 <
+ 2 43 = ; 6 = 2 3  / / (2  2 )
Ο = 4≅ 2 ) Β 52 /; ( Β 52 /; (
活 性 % 比 活 提纯倍数 活性回收率
− ; / (0 (/ 1 ∗ Β ; ; ( )(; Μ 3 5 ()(; 6 一 − ; /(0 (/ 1
Ο拌 · = 4 4 ≅ 6 ; /(0 (/ 1 /(2  )2 48 5 ; ; 2 0 ; 叮
Ο产 · = > 一∃ ≅ Ο Π ≅
Ο里望
Θ & Ε Ρ
Ο = > · = 4一 ∃ ≅
发醉液
,; 5=;  / 6 /(2  4(7 3 (8ϑ Σ − Σ 纤维家层析洗脱液
Σ 43 6 / ; 2 ) ϑ Σ − Σ 一 ; ; 443 42 ? ;
. :52 = 6 /2 > 5 6 Β :1
葡聚搪凝胶 Τ , Α 层析洗脱液
Σ 43 6 /; 2 ) ? ; Μ: 68 ; Υ Τ ( ?
; : 5 2 = 6 /姐 5 6 Β :1
葡聚糖凝胶 Τ 42 层析洗脱液
Σ 43 6 /; 2 ) ?; Β : 6 8 ; Υ Τ 一。
ς Φ Ε
∃ ς Ε
& ∃ Φ ς ∃ ∃ Ε Ε
Θ # Ω Φ % ς Ρ ΡΘ & % ς Ε Ξ Ε % ∃ Φ
付5犷!)一曰卜二妇Ψ曰曰月七汤川到卜&ΖΑ匕曰日∃ ∃ % Θ #
Θ Ε ∃ Ω Φ % Ω & 。 Ε Ω &Ω Θ % Θ ς & Θ % Ε Θ
∃Ω # % ∃ Θ Φ Ε % & Ξ Ω Ρ Θ Ω Ε Ω ς % & Ξ % Θ Ξ
; :52 = 6 /2 > 5 6 Β :1
% 比活 [ 活性 ∴ 蛋白浓度 %
从表 & 看出 , − ] Χ 反应后效价下降 活性回收率为 Ξ % ΘΞ Π , 说明采取的实验方
了 & ς & Ω拜> · = 4一, , 说明此超滤液中含有的 法是可行的·
钝化 ∋( ) ∗ + 物质是分子量为 ∃ 一 & 又 ∃Ε 勺 & % ς 分离提纯 的钝化 ∋( ) ∗ + 物质的纯
之间的大分子物质 % 用 , 24 ( 酚法测 出滤 度 、等电点 、分子量以及氨基酸组成
液蛋白含量为 ∃# % # = > · = 4一, , 由此可以认 在分离提纯的过程中 , 各步获得 的样
为钝化 ∋( ) ∗ + 的物质是蛋 白质 , 暂称为 品均采用聚丙烯酞胺凝胶圆盘电泳鉴定纯
∋ () ∗0 钝化酶 % 度 , 其结果为 ϑ Σ − Σ 纤维素柱分离样品 ,
& % Φ 钝化 ∋( ) ∗ + 物质的活性及分离纯化 经常呈现 Φ 一 ς 条蛋 白带 , 再经葡聚糖凝胶
效果 Τ 巧和 Τ 42 相继分离 的样 品 , 前者一般为 Ρ
由各步分离提纯 得到 的能钝 化 ∋( ) 一 & 条后者为 ∃ 条蛋白带 % 因此 , 经分离提
∗ 0 物质其活性及分离效果等列于表 Φ % 由 纯的钝化 ∋( ) ? + 物质达到了电泳纯 % 等电
表 Φ 看出 , 各步分离 、纯化效果较好 , 比活 点 ΟΜΙ ≅为 ς % # 一 Θ % ∃ % 分子量 ΟΓΗ ≅约 Ρ % ς
逐步提高 , 最终提纯倍数达到 Ως 倍左右 , Υ 42 吸ϑ%
应 用 生 态 学 报 ∀ 卷
分纯的钝化 −= > ) Α 物质经 日立 < # Σ
≅ 型氨基酸分析仪分析氨基酸组成 , 结果
表明 , 该蛋 白质由谷 氨酸 、天冬氨酸 、苯丙
氨酸 、赖氨酸 、撷 氨酸 、丙氨酸 、酪氨酸 、异
亮氨酸 、亮氨酸 、甘氨酸 、苏 氨酸 、丝氨酸 、
甲硫氨酸和精氨酸
Χ 种常见氨基酸组成 Β
# Β ∀ ϑ % 值和温度对钝化 − => ) Α 物质活
性的影响
在 ϑ% 值为 ε Χ Β ∀ 一
≅ Β ∀ 范围时 , 钝化
− => ) Α 物质作用于 − => ) Α 的最适 ϑ% 为
! Β Χ 一 < Β ∀ 8表 9 Β
表 不同 ϑ % 值余件下钝化 −= > )? 物质的活性 ‘
Ψ Λ Θ 6Π 弓 . 亡Μ =? =Μ Π Κ Γ > − => ) Α 一=Γ Λ Π Μ=? Λ Μ=Γ Ι Κ 5 Θ Κ Μ Λ Ι沈 Λ Μ
Ν =>>Π Ο Π Ι Μ 1%
1%
Χ Β ∀ ∀ Β ≅ ! Β Χ < 。 ∀
≅ 。 ∀
剩余生物效 价 ’ ‘
;∀ !   ; ∀ # ; ‘∀ ∀
# # Χ− Π Η Λ =Ι =Ι Υ Θ =Γ 6Γ Υ =Π Λ 6
Μ=Μ Π Ο 8拌 Β Η 6一
9
活性 8效价降低值9 Χ # !
≅
≅ ! ≅
≅ # ∀ # ∀ <
. Π Μ =? =Μ 78Μ =Μ Π Ο Ν Π Π ΟΠ Λ Κ Π
—地中海拟无枝菌酸菌在生物合成 −= >) Α 时 , 能产生一种使 −= > )Α 活性降低的
胞外物质 Β 用分离蛋白质的生化技术 已分
离并纯化了这一物质 Β
Χ Β ; 用蛋白质和酶学研究方法 , 已证实此
物质是蛋白质 Β 它由
Χ 种氨基酸组成 , 具
有典型酶学性质 , 明确了它作用于 −= > ) Α
的基本条件 , 初步证实是一种抗生素酶 Β
Χ Β # 此酶的研究 , 为今后生产上发酵过程
的代谢调控和从基因水平改造生产菌种 ,
为提高 −= > ) Α 的生产水平提供科学依据 Β
致谢 本文稿承单慰曾研究员修改审定 Β 氨基酸
分析和高压液相色谱分析分别由张剑秋高级实
验师和刘海玲工程师协助完成 Β 蛋白质的分离纯
化得到杨俊森副研究员的帮助 Β 在此一并致谢 Β
参考文献
, ϑ % ! Β Χ ≅ Β ≅ Η Γ 6 · / ”磷酸缓冲液 配制的标准 − => )Α
的效价为 ; ! ≅ ;拌Υ · Η 6一 , Β Ψ =Μ Π Ο Γ > − => Κ? Κ Μ Λ Ι Ν Λ Ο Ν : Γ 一5 Σ
Μ =Γ Ι ϑ Ο Π ϑ Λ Ο Π Ν Θ 7 ≅ Β Γ ςΗ Γ 6 Β / 一
ϑ Ω Γ Κ ϑ Ω Λ Μ Π Θ 5 >>Π Ο Ε =Μ Ω
ϑ % ! Β Χ

!≅ ;拌 Β Η 6一
Β
, , 钝化 −= > ) Α 物质与不 同 ϑ % 缓 冲液 配制的标准
− => ) Α 溶液 于 ;  ℃反应 ςΩ 后的 剩余效价 Β − Π Η Λ =Ι =Ι Υ
Μ =Μ Π Ο Κ Γ > − => ) Α Κ Μ Λ Ι Ν Λ Ο Ν Κ Γ 65 Μ =Γ Ι Κ ϑ ΟΠ ϑ Λ Ο Π Ν Θ 7 Θ 5 >>Π Ο Κ
Ε =Μ Ω Ν =>>Π Ο Π Ι Μ ϑ % ? Λ 65 Π Κ Λ >Μ Π Ο Ο Π Λ Π Μ=Ι Υ Ε =ΜΩ − => ) Α 一=Ι Σ
Λ Π Μ =? Λ Μ =Γ Ι Κ 5 Θ Κ Ο Λ Ι Π Π Λ Μ ; ℃ >Γ Ο ςΩ Β
温度对钝化 −= > ) Α 物质活性 的影响
结果列入表 ∀ Β 表 ∀ 表 明 , ; 一 #! ℃为该钝
化 −= > ) Α 物质的适宜作用温度范围 , 最适
温度为 ; ℃ , 当温度达 ! ℃维持 ;Ω , 钝化
− => ) Α 物质已失去活性 Β
表 ‘ 温度对钝化 −= > Κ? 物质活性的影响
Ψ Λ Θ 6Π ∀ ( >>Π Π Μ Γ > ΜΠΗ 1Π Ο Λ Μ5 Ο Π Γ Ι ΛΠ Μ=? =Μ7 Γ > − => ) Α 一=Ι Σ
Λ ∃ Μ=?白Μ =Γ Ι δ 5 Θ Κ Μ肠Ι ∃Π
温 度 Ψ Π Η 叶 Ο Λ Μ 5 Ο Π 8℃ 9
; ; ;  # ! Χ !
剩余效价伽 Υ · Η 6· , 9 ;
# ! <  Χ < ! ;
Χ < ;
! ; ;
− Π Η Λ =Ι =Ι Υ Μ =ΜΠ Ο
活性年Υ · Η 6, , 9

<

# ; Χ

≅ < < #≅ ;
 ≅
. ΡΜ =? =Μ 7 Β 一——
Χ 结 论
Χ Β
研究结果表明 , 利福霉素 ) Α 生产菌

上海第三制药厂 、上 海第四制药厂 、上海化工学院
抗菌素教研组合编 Β
 ! Β 抗菌素的质量分析与检
验 Β 抗菌素生产 Β 化学工业出版社 , 北京 , #
一 # ! ;Β
; 抗苗家生物理化特性编写组 Β
 <
Β 利福霉素 Β 抗菌
索生物理化特性第二分册 Β 人民出版社 , 北京 , ;≅
一 ; Β
# 陈冬兰 、吴有梅 Β
 <
Β 聚丙烯酞胺凝胶等电聚焦 Β
植物生理 学通讯 , < ‘8Χ 9 : Χ< 一 ;Β
Χ 张宽厚编 Β
 ∀# Β 蛋 白质的测定 Β 细菌生理学 Β 人 民
卫生出版社 , 北京 , ; ! Χ 一 ; ! Β 袁静明编 Β
 ! Β 凝胶层析的实验技术 , 凝胶层析法
及其应用 Β 科学 出版社 , 北京 , ≅ 一! Β
‘ 压Δ Λ=Ι , . Β / Β
 ! Χ Β % Γ Ε Ν Γ Λ Ι Μ =Θ =ΓΜ =Π ϑ ΟΓ Ν 5 Π=Ι ΥΓ Ο Υ Λ Ι =Κ Η Κ Λ ?Γ =Ν Κ 5 =Π=Ν Π Β . Ι Ι Β ∋ Β 4 Β .Ρ Λ Ν Β ) Ρ汇Β ,
; # : ∀ ≅
一 ∀
; Β
! 3 ΛΘ Ο =Π 6 , ≅ Β
 !
Β . Ι Λ 67 Μ =Π Λ 6 Ν =Κ Ρ Υ Π6 Π
Π Π ΜΟ Γ ϑ Ω Γ Ο Π Σ

Β &Ι Δ Π ΜΩΓΝ =Ι ( Ι ∴ 7 Η Γ6 Γ Υ 7 Α Γ 6Β ; ; , Π Ν =Μ ΠΝ Θ7
Τ Β δ Β 如Ζ Γ Θ7 Β . Π Λ Ν Π Η =Π 1 Ο Π Κ Κ , ∋ Π Ε 4 Γ Ο Ζ , / Γ Ι Ν Γ Ι ,
∀ 一 ! < Β
< % =Η Η Π 6Ω倪卜 , ) Β − Β
 ! = Β ∃ ΩΟΓ Η Λ Μ Γ Υ ΟΛ ϑ卜7 Γ > ϑ Ο Γ Σ
Μ Π =Ι Κ Γ Ι =Γ Ι Π Φ Π ΩΛ Ι Υ Π Λ Ν Κ Γ Ο Θ Π Ι Μ Κ Β &Ι Δ Π ΜΩΓΝ =Ι
( Ι Υ 7 Η Γ 6Γ Υ 7 Α Γ 6Β ;; , Π Ν =ΜΠ Ν Θ 7 Τ Β δ Β ∗Λ Ζ Γ Θ 7 Β . Π Λ Σ
Ν Π Η =Π 1 ΟΠ Κ Κ , ∋ ΠΕ 4 Γ Ο Ζ , / Γ Ι Ν Γ Ι , ; ! #一 ; < ∀ Β
 1 =Π 名 , ] Β . Β , )Λ Ο Γ >> , % Β . Β
∀
Β ∃ ΩΟΓΗ Λ Μ Γ Υ Ο Λ ϑ Ω 7 Γ >Λ Η =Ι Γ Λ Π =Ν Λ Ι Ν ϑ Π ϑ Μ =Ν Π Β &Ι ∃ Ω ΟΓ Η Λ ΜΓ Υ Π Λ ϑ Ω7 Π Ν =Μ Π Ν
Θ丫 ( Β % Π>Μ Η Λ Ι Ι Β − Π =Ι Ω Γ 6Ν 1 5 Θ 6=Κ Ω =Ι Υ ∃ Γ Ο ϑ Γ Ο Λ Μ =Γ Ι ,
∋ Π Ε 4 Γ Ο Ζ , / Γ Ι Ν Γ Ι , #Χ ! 一 #  Β

≅ Ψ Κ Λ φ= , ] Β
 ! Β % =Υ Ω ϑ ΟΠ Κ Κ 5 Ο Π 6=β 5 =Ν ΠΩ Ο Γ Η Λ Μ Γ Υ Ο Λ Σ
ϑ Ω 7 Γ > Λ Ι Ο=Θ =Γ Μ =Π Β &Ι Δ Π ΜΩΓΝ =Ι ( Ι Υ 7Η Γ 6Γ Υ 7 Α Γ 6Β
# Χ , Π Ν =ΜΠ Ν Θ7 ∗Β % Β % Λ Κ Ω Β . Π Λ Ν Π Η =Π 1Ο Π Κ Κ , ∋ Π Ε
4 Γ Ο Ζ , ) Λ Ι 0 Ο Λ Ι Π =Κ Π Γ , / Γ Ι Ν Γ Ι , # ≅ ≅一 # ; ≅ Β


Τ Π玩Ο , ] Β , Γ Κ Θ Γ Ο Ι , Δ Β
 ∀  Β Ψ Ω Π ΟΠ 6=Λ Θ =6=Μ7 Γ >Η Γ 6Π ‘ 廿&Λ Ο Ε Π =Υ Ω Μ Ν Π Μ Π Ο Η =Ι Λ Μ =Γ Ι Θ 7 Ν Γ Ν Π Π 76 Κ 5 6>Λ Μ Π
ϑ Γ 67 Λ Π Ο 76Λ Η =Ν Ρ 级Π 6 Π 6Π Π Μ Ο Γ ϑ Ω Γ Ο Π Κ =Κ Β ∗ Β δ =Γ6 Β ∃Ω 翻 Β ,
; Χ Χ 8
∀ 9 γ Χ Χ ≅ ∀ 一 Χ 咬
; Β