全 文 ：基金项目:科技部 2010 年度科技型中小企业技术创新基金(编号:10C26214204534);湖北省 2011 计划资助项目(编号:4)
通讯作者:杜士明 Tel:(0719)8801393 E-mail:
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dsmch@ sina． com
4 张崇禧，鲍建才，李向高，等． HPLC 法测定人参、西洋参和三七不
同部位中人参皂苷的含量［J］． 药物分析杂志，2005，25(10):
1190-1194
5 周莉，袁燕，马红梅．探究人参药材与饮片的含量差异［J］． 医药
世界，2005，7(7):640-642
6 金世元，王琦．中药饮片炮制研究与临床应用［M］．北京:化学工
业出版社，2004． 42-51
7 李向高．人参加工原理研究新进展［J］．中药材，1990，13(2):22-
25
8 郑虎占，金頀哲．中药饮片应用与标准化研究［M］．北京:学苑出
版社，2004． 634-640
(2014-01-06 收稿 2014-03-10 修回)
鄂西北地区竹叶柴胡 UPLC-MS指纹图谱研究
蔡华1 叶方1 杨光义1 肖凌2 杜士明1 (1．湖北医药学院附属十堰市太和医院 湖北十堰 44200;2．湖北省食品
药品监督检验研究院)
摘 要 目的:对鄂西北地区竹叶柴胡的 UPLC-MS指纹图谱进行研究，建立鄂西北地区竹叶柴胡药材的质量评价体系。方
法:采用 UPLC-MS测定鄂西北竹叶柴胡 10 批样品的指纹图谱。色谱条件为 ACQUITY UPLC ＲBEH C18色谱柱( 100 mm ×
2． 1 mm，1． 7 μm) ，采用梯度洗脱，流动相为乙腈-0． 3%甲酸水，流速为0． 2 ml·min －1，检测波长为 203 nm;电喷雾离子源: ESI
( -) 。结果:鄂西北地区竹叶柴胡化学成分指纹图谱共检出 8 个分离度良好的共有峰;通过质谱信息结合文献报道，分离鉴定
了 6 个化合物。结论:该方法简便、快速，所得 UPLC-MS指纹图谱及其评价指标为科学评价鄂西北地区竹叶柴胡药材的质量
提供了依据。
关键词 竹叶柴胡; 指纹图谱; 质量控制;超高压液相色谱-质谱法
中图分类号:TQ460． 7 + 2 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2014)05-0797-04
Study on UPLC-MS Fingerprint of Bupleurum Marginatum in Northwest Hubei
Cai Hua1，Ye Fang1，Yang Guangyi1，Xiao Ling2，Du Shiming1(1． Department of Pharmacy，Taihe Hospital Affiliated with Hubei U-
niversity of Medicine，Hubei Shiyan 442000，China;2． Hubei Institute for Food and Drug Supervision and Inspection)
ABSTＲACT Objective:To study the UPLC-MS fingerprint of Bupleurum marginatum DC． in northwest Hubei and establish the
quality evaluation system for the herb． Methods:A UPLC-MS method was used to analyze 10 samples of B． marginatum DC with the
following chromatographic conditions:an ACQUITY UPLC ＲBEH C18 column (100 mm × 2． 1 mm，1． 7 μm)was used，the mobile
phase consisted of acetonitrile-0． 3% formic acid water with gradient elution，the flow rate was 0． 2 ml·min －1，and the detection
wavelength was 203nm with ESI(-)． Ｒesults:There were 8 common peaks in the UPLC-MS fingerprint of B． marginatum DC． Through
analyzing the information of mass spectrometry and combining the references，6 peaks were identified． Conclusion:The UPLC-MS fin-
gerprint method is simple，rapid and feasible． The acquired UPLC-MS fingerprint of B． marginatum DC． and the evaluation indices can
provide the scientific quality assessment of B． marginatum DC．
KEY WOＲDS Bupleurum marginatum;Fingerprint;Quality control;UPLC-MS
柴胡是传统大宗药材，在中国、韩国、日本等地
广范应用于解热、镇痛，保肝护肝等疾病的治疗。在
柴胡的药用历史上，药材的来源比较复杂，除多数为
伞形科柴胡属植物外，还有石竹科等其他科植
物［1］。目前我国药材市场上的柴胡主要包括伞形
科植物北柴胡(BupLeurum chinese DC．)、狭叶柴胡
(B． scorzonerifoLium willd．)和竹叶柴胡(B． mar-
ginatum WaLL． ex DC．)三大品种，但我国药典只收
录了北柴胡和狭叶柴胡作为正品柴胡。虽然没有明
确收录竹叶柴胡(B． marginatum WaLL． ex DC．)，但
在我国的云南、贵州、四川北部、陕西南部、湖北等多
个地区均广泛使用，资源调查结果也显示鄂西北地
区称为“北柴胡”的柴胡药材实际均为竹叶柴胡，没
有在鄂西北地区发现北柴胡生长［2］，而鄂西北“北
柴胡”以品质优良而远销海内外，说明竹叶柴胡的
药用价值在药材市场上已获得广泛认可。另一方
面，柴胡药材面临着用量在逐年增加、而野生资源日
益减少的矛盾［3］，如何解决这个矛盾是一个重要的
课题。扩大柴胡的药材资源、推广中药材优良生产
质量管理规划(good agricultural practice，GAP)种植
是解决这一矛盾的重要手段。根据资源调查的结果
可知，竹叶柴胡是鄂西北地区柴胡药材的优势品种，
797
中国药师 2014 年第 17 卷第 5 期 China Pharmacist 2014，Vol． 17 No． 5
可以充分利用本地区良好的气候、地理条件，大力推
广 GAP种植。由于指纹图谱具有综合、宏观、“模
糊”的非线形特征［4］，适合进行中药的质量控制研
究。本试验利用超高效液相-质谱联用(UPLC-MS)
建立竹叶柴胡的指纹图谱，为本地区竹叶柴胡规范
使用、质量控制和 GAP种植提供理论基础。
1 仪器与试药
UPLC Xevo TQ 液相色谱-质谱联用仪 (美国
Waters 公司)和 Masslynx软件数据处理系统;GWA-
UN型超纯水机(北京普析通用);AUW120D型电子
天平(岛津公司);CQX25-06 型超声波震荡器(上海
必能信超声有限公司)。
柴胡皂苷 a(SSa)对照品(中国食品药品检定研
究院，批号:110777-200406);柴胡皂苷 d(SSd)对照
品(中国食品药品检定研究院，批号:110778-
200505);柴胡皂苷 c(SSc)对照品(上海源叶生物科
技有限公司，批号:20120726)。
不同产区柴胡样品见表 1，经湖北中医药大学
中药资源和中药复方教育部重点实验室陈科力教授
鉴定。样品粉碎，过 4 号筛备用。乙腈、甲醇、甲酸
为色谱醇，水为自制超纯水，其他试剂均为分析纯。
表 1 柴胡样品及来源表
样品
编号 药材品种 拉丁名 样品产地 样品来源
1 竹叶柴胡 B． marginatumWaLL． ex DC．
湖北房县野人
谷镇野生
秋季
现采
2 竹叶柴胡 B． marginatumWaLL． ex DC．
湖北保康
高桥镇种植
秋季
采集
3 竹叶柴胡 B． marginatumWaLL． ex DC．
湖北秭归
县野生
湖北神农本草饮
片有限公司提供
4 竹叶柴胡 B． marginatumWaLL． ex DC． 郧西安家 秋季采集
5 竹叶柴胡 B． marginatumWaLL． ex DC． 神家架 1
湖北神农本草饮
片有限公司提供
6 竹叶柴胡 B． marginatumWaLL． ex DC． 郧县大柳 秋季采集
7 竹叶柴胡 B． marginatumWaLL． ex DC． 郧县鲍峡 秋季采集
8 竹叶柴胡 B． marginatumWaLL． ex DC． 神农架 2
湖北神农本草饮
片有限公司提供
9 竹叶柴胡 B． marginatumWaLL． ex DC． 丹江凉水河 秋季采集
10 竹叶柴胡 B． marginatumWaLL． ex DC． 竹溪水平 秋季采集
2 方法与结果
2． 1 液相色谱与质谱联用条件和系统适应性试验
色谱柱:ACQUITY UPLC ＲBEH C18(100 mm ×
2． 1 mm，1． 7 μm);检测波长:203 nm;柱温:30℃，样
品室温度 10℃;以乙腈为流动相 A，以0． 3%甲酸水为
流动相 B，梯度洗脱:0 ～ 20 min，25 ～ 90% A;20 ～ 22
min，90 ～ 25% A;22 ～ 25 min，25% A;流速:0． 2 ml·
min －1;进样量 2 μl;电喷雾离子源:ESI(-)。柴胡药
材和柴胡皂苷 c、a、d对照品的 TIC图谱见图 1。
A．对照品 B．竹叶柴胡药材
2．柴胡皂苷 c 3．柴胡皂苷 a 6．柴胡皂苷 d
图 1 LC-MS色谱图
2． 2 对照品溶液的制备
精密称取 SSa、SSd、SSc 适量，加甲醇制成每 ml
含 SSa 0． 48 mg和 SSd 0． 48 mg、SSc 0． 46 mg的溶
液，摇匀，0． 22 μm滤膜滤过即得对照品贮备液。
2． 3 供试品溶液的制备
精密称取柴胡粉末(四号筛)0． 5 g，置具塞锥形
瓶中，加入 5%浓氨试液的甲醇溶液 25 ml，密塞，
30℃水温超声处理(200 W，40 kHz)30 min，滤过，用
甲醇 20 ml分两次洗涤容器及药渣，洗液与滤液合
并，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至 5 ml量
瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，0． 22 μm滤过，取续滤液
5 μl加 25%乙腈至 1 000 μl，即得供试品溶液。
2． 4 方法学考察
2． 4． 1 精密度试验 取房县野人谷镇的同一批供
试品溶液，按“2． 1”项下方法连续进样 6 次。结果 8
个共有峰相对保留时间的 ＲSD 小于0． 5%，图谱峰
相对峰面积 ＲSD 均小于 5%;采用国家药典委员会
“中药指纹图谱相似度评价系统(2004A 版)”软件
处理结果表明，其相似度均 ＞ 0． 95，符合指纹图谱技
术要求，说明精密度良好。
2． 4． 2 重复性试验 取房县野人谷乡柴胡样品 6
份，按“2． 3”项下方法制备供试品溶液，按“2． 1”项
下方法进样测定。结果 8 个共有峰相对保留时间的
ＲSD小于0． 6%，图谱峰相对峰面积 ＲSD 均小于
5%;将测量结果采用国家药典委员会“中药指纹图
谱相似度评价系统(2004A 版)”软件处理，结果表
明，其相似度均 ＞ 0． 95，符合指纹图谱技术要求，说
明重复性良好。
2． 4． 3 稳定性试验 取同一样品溶液在 0，4，8，
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12，24 h分别进样，按“2． 1”项下方法进样测定。结
果 8 个共有峰相对保留时间的 ＲSD 小于0． 5%，图
谱峰相对峰面积 ＲSD 均小于 5%;将测量结果采用
国家药典委员会“中药指纹图谱相似度评价系统
(2004A版)”软件处理，结果表明，其相似度均 ＞
0． 95，符合指纹图谱技术要求，表明样品供试品溶液
在 24 h内检测对结果无影响，稳定性良好。
2． 5 指纹图谱相似性评价
2． 5． 1 竹叶柴胡药材指纹图谱的建立及对照指纹
图谱的生成 按“2． 1”项下色谱条件，对 1 ～ 10 批
竹叶柴胡供试品进样分析，记录 TIC 图谱。采用
《中药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004 版》软件
对所有图谱进行比较，根据 10 批供试品溶液的 TIC
图谱给出的相关技术参数，采用自动匹配法生成共
有指纹图谱 Ｒ并分析各样品之间共有峰和相似度，
确定共有峰。结果发现 10 批供试品有共有峰 8 个
(图 2)。通过保留时间定性可知 5． 79、7． 69、
10． 17 min时分别为柴胡皂苷 c、a、d 的图谱峰，SSa
的图谱峰峰形较好，含量较高，将其设为参照峰
(S)，计算各共有峰对它的相对保留时间和相对峰
面积，便于用数字统一标定各个柴胡样本的指纹图
谱特征，结果见表 2、表 3。
表 2 竹叶柴胡指纹图谱共有峰相对保留时间
峰号
样品号
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10
ＲSD
(%)
1 0． 165 0． 165 0． 165 0． 165 0． 165 0． 166 0． 166 0． 165 0． 165 0． 165 0． 26
2 0． 766 0． 766 0． 766 0． 766 0． 768 0． 767 0． 767 0． 766 0． 768 0． 766 0． 11
3 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 0． 00
4 1． 084 1． 084 1． 084 1． 084 1． 084 1． 086 1． 084 1． 084 1． 086 1． 084 0． 08
5 1． 179 1． 177 1． 176 1． 175 1． 176 1． 195 1． 204 1． 176 1． 176 1． 192 0． 88
6 1． 323 1． 321 1． 322 1． 321 1． 322 1． 324 1． 323 1． 323 1． 323 1． 321 0． 08
7 1． 404 1． 403 1． 403 1． 401 1． 403 1． 405 1． 406 1． 402 1． 404 1． 403 0． 10
8 1． 601 1． 597 1． 600 1． 598 1． 601 1． 623 1． 616 1． 615 1． 615 1． 614 0． 59
表 3 竹叶柴胡指纹图谱共有峰相对峰面积
峰号
样品号
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10
ＲSD
(%)
1 0． 419 0． 390 0． 392 0． 368 0． 432 0． 504 0． 642 0． 386 0． 379 0． 852 32． 72
2 0． 087 0． 112 0． 090 0． 197 0． 091 0． 060 0． 086 0． 090 0． 309 0． 076 63． 59
3 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 1． 000 0． 00
4 0． 299 0． 132 0． 036 0． 533 0． 190 0． 157 0． 094 0． 124 0． 304 0． 131 72． 02
5 0． 046 0． 054 0． 078 0． 024 0． 032 0． 022 0． 053 0． 056 0． 017 0． 023 48． 80
6 0． 849 0． 872 0． 973 1． 131 0． 916 0． 904 0． 886 0． 906 0． 921 1． 014 8． 86
7 0． 299 0． 171 0． 082 0． 653 0． 200 0． 117 0． 145 0． 200 0． 393 0． 171 69． 76
8 0． 148 0． 135 0． 147 0． 162 0． 166 0． 194 0． 208 0． 136 0． 181 0． 295 27． 06
由表 2、表 3 可知，10 批竹叶柴胡各共有峰平均
相对保留时间的 ＲSD小于0． 90%，而相对峰面积的
ＲSD较大，表明各样品主要成分基本一致，但各成分
含量有较大区别，证明相同品种不同产区柴胡的化
学成分含量有明显影响。
2． 5． 2 相似度分析 将 10 批竹叶柴胡供试品的图
谱数据导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统
(2004A)”，经校正后采用自动匹配模式，生成匹配
图谱(图 2)，对色谱峰差异性和整体相似性进行评
价。结果 10 批样品与共有指纹图谱的相似度在
0． 91 ～ 0． 99之间，其他各样品间的相似度均大于
0． 86，说明各样品间相似程度较高，结果见表 4。
2． 5． 3 聚类分析 采用组间连接法(Between-
groups linkage)选取欧氏距离平方和作为样品的测
度，运用 SPSS16． 0 对竹叶柴胡指纹图谱数据进行聚
类分析，结果见图 3。聚类分析将 11 批竹叶柴胡分
为两类，湖北神农架林区、房县野人谷乡、湖北保康
的样本为一类，郧县鲍峡、郧县大柳、竹溪水平的样
本为一类，郧西安家乡、丹江口市凉水河镇和湖北秭
图 2 竹叶柴胡相似度比较图
归的样本为一类，该结果与指纹图谱的相似度分析
结果相似。
2． 6 指纹图谱共有峰的 UPLC-MS结构鉴定及各成分
以神农架产的样品供试品溶液进行检测，通过
分析 MS 与 MS /MS，并参考文献［5］，分析化合物质
谱裂解规律，推测其可能的化学结构。结果对 8 个
共有峰中的 6 个主要峰的结构进行了鉴定，另有两
个峰未能归属来源。能够归属来源的 6 个成分均为
皂苷类成分(图 1)。其中 2 个色谱峰与对照品比
较，保留时间、MS与MS / MS质谱均一致，分别
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中国药师 2014 年第 17 卷第 5 期 China Pharmacist 2014，Vol． 17 No． 5
表 4 10 批竹叶柴胡的相似度结果
编号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10
S1 1
S2 0． 968 1
S3 0． 922 0． 978 1
S4 0． 951 0． 931 0． 888 1
S5 0． 978 0． 980 0． 955 0． 933 1
S6 0． 900 0． 925 0． 921 0． 860 0． 924 1
S7 0． 890 0． 898 0． 899 0． 834 0． 907 0． 913 1
S8 0． 971 0． 987 0． 969 0． 930 0． 984 0． 921 0． 912 1
S9 0． 966 0． 967 0． 931 0． 971 0． 959 0． 894 0． 878 0． 962 1
S10 0． 902 0． 934 0． 940 0． 868 0． 928 0． 919 0． 914 0． 931 0． 903 1
对照图谱 0． 967 0． 995 0． 981 0． 930 0． 985 0． 933 0． 915 0． 990 0． 964 0． 947
图 3 竹叶柴胡 LC-MS指纹图谱聚类图
鉴定为:SSa、SSd。其他图谱峰的解析如下:
峰 2 质谱解析:m/z:927． 5［M-H］－，脱去吡喃
环，得到 m/z:781． 5的碎片，可归属为柴胡皂苷 F
(SSF)。
峰 4 和峰 7 质谱解析:m/z:821． 4［M-H］－，
761． 4［M-H-OAc］－，761． 4［M-H-OAc-OH］－，再失
去吡喃环，产生 m/z:617． 4的碎片，可归属为 3 ˊ-
O-乙酰基柴胡皂苷 A(3 ˊ-OAcSSa)和 6 ˊ-O-乙酰
基柴胡皂苷 A(6 ˊ-OAcSSa)两种异构体成分。
峰 5 质谱解析:m/z:763． 5［M-H］－，脱去吡喃
糖，得到 m/z:601． 6的碎片，再脱去吡喃环并发生重
排反应得到 m/z:457． 4的碎片，可归属为柴胡皂苷
E(SSe)。
3 讨论
3． 1 根据对竹叶柴胡的 UPLC-MS指纹图谱分析结
果显示，10 批竹叶柴胡共标定了 8 个共有指纹峰，
各共有峰的相对保留时间的 ＲSD 均小于 1%，说明
本方法有较好的重复性和稳定性。但其相对峰面积
ＲSD值较大，说明不同产区的同一品种柴胡的化学
成分含量有很大差异，引起这种差异的原因是否与
产地、采收时期、炮制方法等相关还有待进一步考
察。聚类分析结果显示，房县野人谷乡、神农架林
区、保康县这几个毗邻区域的竹叶柴胡聚为一类，资
源调查结果也证明竹叶柴胡是本地区的优势品种，
说明适合在本地实行竹叶柴胡的 GAP种植研究。
3． 2 根据多维指纹图谱的观点［6］，采用超高效液
相色谱与质谱联用进行指纹图谱研究，可以获得更
丰富的信息，除分析各批样品之间的共有峰外，还可
以根据质谱特性归属共有峰可能的化学成分类别。
本试验对 8 个共有峰其中的 6 个共有峰分析出了相
应的化学成分，可以更准确地进行中药材的质量信
息控制分析。
3． 3 鄂西北地区位于原始森林神农架林区和道教
圣地武当山之间，是南水北调中线工程的上游区域，
得天独厚的生态环境是中药材优良品质的基础。通
过对竹叶柴胡的指纹图谱研究，建立稳定可控的质
量标准控制体系，在此基础上，推动 GAP种植，固定
药材的品种、产地以及固定的采收季节和加工处理
方法，就可以突破中医药的现代化发展瓶颈，具有一
定的经济价值和社会价值［7，8］。
3． 4 试验中，对照品溶液中有柴胡皂苷 C，但在做
指纹图谱分析时，S9 号样品中 SSc 没有在相应的位
置出现吸收，因此没有作为共有峰分析。在对共有
峰的化学成分归属时，峰 3 和峰 7 为同分异构体，由
于没有对照品，所以暂定峰 4 为 3 ˊ-OAcSSa，峰 7
为 6 ˊ-OAcSSa。
参 考 文 献
1 肖培根．新编中药志［M］． 第 1 卷． 北京:化学工业出版社，2002．
784
2 杜士明，叶方，杨光义，等．鄂西北地区柴胡资源调查研究［J］．中
药材，2012，35(6):866-869
3 市场对柴胡的需求量逐年增加·缺口两千吨［EB /OL］． 中国医
药网(http:/ / info． yaozs． com /2009 /0505 /1492． shtml)． 2009-05-
05 /2012-11-01
4 谢培山．中药制剂色谱指纹图谱(图像)鉴别［J］． 中成药，2000，
22(6):391-395
5 王书芳，钱忠直，季申，等．中药质量现代分析技术·中国药典一
部参考手册［M］．杭州:浙江大学出版社，2010． 867-869
6 罗国安，王义明，曹进． 多维多息特征谱及其应用［J］． 中成药，
2000，22(6):395-397
7 叶方，杨光义，杜士明，等．鄂西北地区不同品种、不同生长条件柴
胡的鉴别和质量评价［J］．中国药师，2012，15(10):1380-1382
8 叶方，杨光义，杜士明，等．鄂西北地区柴胡及其地上部分总黄酮
含量比较研究［J］．中国药师，2013，16(1):52-54
(2014-01-17 收稿 2014-03-28 修回)
008
www． zgys． org 中药资源与鉴定专栏