全 文 ：creasedinatherosclerosisrabbits.Paeonol(100 ～ 300
mg· L-1)couldinhibittheproliferationofcultured
vascularsmoothmusclecelanddiminishthelevelof
TC, MDA, pro-inflammatorycytokines, aswelasen-
hanctheconcentrationofSODinaortictissueofather-
osclerosisrabbits.TheexpressingintensityofPCNA
proteinwasweakened.Conclusion　Paeonolcouldin-
hibittheproliferationofvascularsmoothmusclecelin
vivoandinvitro, whichmayberelatedtodecreaseof
contentsoflipid, theextentoflipidperoxidationand
theconcentrationsofproinflammatorycytokines.Pae-
onolmightregulatetheproliferationperiodsofvascular
smoothmusclecelthroughinhibitingtheexpressionof
PCNAprotein.
Keywords:paeonol;atherosclerosis;vascularsmooth
musclecel;proliferation
豹皮樟总黄酮对大鼠非酒精性脂肪性肝炎的防治作用
倪鸿昌 1, 2 , 李　俊 1 , 金　涌 1 , 程文明1 , 彭　磊 1 , 张骏艳 1 , 黄　艳 1
(1.安徽医科大学药学院 ,安徽 合肥　230032;2.江苏大学附属镇江市第一人民医院药剂科 , 江苏 镇江　212002)
中国图书分类号:R-332;R 284.1;R 363-332;R 575.501;
R575.505.31
文献标识码:A 文章编号:1001-1978(2006)05-0591-04
摘要:目的　研究豹皮樟总黄酮(TFLC)对大鼠非酒精性脂
肪性肝炎(NASH)的防治作用。方法　SD大鼠 48只 ,随机
分为 6组(n=8):对照组 、模型组 、烟酸组及 TFLC组(50、
100、 200 mg· kg-1)。除对照组外 , 其余各组每天给予脂肪
乳剂和相应药物。实验开始后 3 d收集 72h的粪便 , 测定粪
便中脂质;于 1 wk后断尾取血 , 测定血清脂质;3 wk后处死
动物 , 测定血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、丙氨酸氨基
转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙二醛(MDA)、
超氧化物歧化酶(SOD)和肝匀浆 TG、TC、MDA、SOD,并行肝
脏病理学检查。结果　模型组大鼠出现 NASH, 烟酸组及
TFLC组(100、200 mg· kg-1)均能降低血清和肝脏 TG, 肝脂
肪变性程度和炎症均明显减轻;TFLC组(200 mg· kg-1)还
能降低血清和肝 MDA, 提高肝组织 SOD活性。结论　TFLC
可以降低大鼠血和肝组织 TG,且能改善 NASH大鼠脂肪变 ,
减轻炎症反应。其机制可能是:TFLC抑制 TG在肠道的吸
收 , 同时减轻脂质过氧化。
关键词:豹皮樟总黄酮;非酒精性脂肪性肝炎;防治作用;大鼠
　　非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholicsteatohepati-
tis, NASH)是以无过量饮酒史以及肝细胞脂肪变
性 、气球样变 、弥漫性肝小叶炎症和(或)肝中央静
脉 、肝窦周围胶原沉积为特征的慢性肝脏疾病 ,
收稿日期:2006-01-09,修回日期:2006-02-25
基金项目:安徽省人才开发基金资助项目(No2004Z030);安徽省自
然科学基金资助项目(No03043001)
作者简介:倪鸿昌(1973-),男 ,硕士;
李　俊(1960-),男 , 教授 , 博士生导师 , 通讯作者 , Tel:
0551-5161001, E-mail:Lijun@ahmu.edu.cn
NASH可发展为肝纤维化和肝硬化 ,导致死亡[ 1] ,但
其发病机制至今尚未明确 ,也缺乏有效的防治手段。
豹皮樟(LitseaCoreanalevel),又称老鹰茶 ,长期饮用
有消食化积 、解毒 、健胃的作用[ 2, 3] ,但其潜在的药
理作用尚无前人探讨。为此 ,我们运用现代药理学
知识 ,经过多次反复实验 ,确定了豹皮樟防治 NASH
的有效部位为黄酮类。研究内容如下:
1　材料与方法
1.1　主要药物与试剂　豹皮樟总黄酮 ,乙醚萃取后
经大孔吸附树脂吸附 ,再经醇洗脱 、减压浓缩后 ,经
过真空干燥得总黄酮 ,总黄酮含量 >75%,主要成份
为黄酮类(由安徽医科大学药学院程文明博士研
制), 烟酸片 (上海九福药业有限公司 , 批号:
030701),胆固醇 〔中国医药(集团)上海化学试剂公
司 , AR级 ,批号:F20030410〕;脱氧胆酸钠(北京双
旋微生物培养基制品厂 ,批号:20030617);丙赛优
(上海复星朝晖药业有限公司 ,批号:030505);吐温
-80(蚌埠化学试剂厂 , 符合药用标准 , 批号:
20030602);1 , 2-丙二醇(淮南市化学试剂厂 , AR级 ,
批号:20021020);猪油自制。 TG、TC测定试剂盒购
自北京福瑞生物工程公司 。AST、ALT、MDA、SOD、
考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒购自南京建成生物工程
研究所。
1.2　主要仪器　电子天平 FA2004(上海精天天平
厂)、79HW-1恒温磁力搅拌器(江苏金坛市金城国
胜实验仪器厂)、722紫外分光光度计(上海分析仪
器厂制造),医学图像分析系统(成都泰盟科技有限
公司)。
1.3　实验动物　Spague-Dawlay(SD)大鼠 48只 , ♀
♂各半 ,体重 180 ～ 200 g,由安徽医科大学实验动物
·591·中国药理学通报　ChinesePharmacologicalBuletin　2006 May;22(5):591 ～ 4
中心提供(皖医实动准第 02号)。
1.4　动物实验 　按体重随机分为 6组 (每组 8
只):对照组 、模型组 、烟酸组(120mg· kg-1)、TFLC
(200、100、50mg· kg-1)组 ,动物模型制备参照前期
研究[ 4] 。除对照组外 , 各组每天上午灌脂肪乳剂
(10ml·kg-1· d-1);下午对照组和模型组予以等
量的羧甲基纤维素钠(CMC-Na),其余治疗组给予
相应药物。于给药 3d后收集 72 h的粪便 ,测定粪
便中脂质;1 wk后 ,断尾取血 ,测定血清脂质;3 wk
后 ,放血处死动物 ,迅速取出肝脏备用 。
1.5　观察指标及测定方法
1.5.1　一般情况　实验前后每周称体重 1次 ,观察
食欲行为 、粪便及动物死亡情况;实验结束时处死动
物并称量肝脏湿重。
1.5.2　粪便脂质变化　于实验开始后 d3用代谢
笼(每笼 1只)收集 72h的粪便 ,低温烤干后用生理
盐水制成 20%的匀浆 , 3 000 r· min-1离心 15 min,
提取上清液 ,测定 TG、TC含量。
1.5.3　血清生化　血清 TG、TC、AST、ALT、SOD、
MDA测定 ,按试剂盒规范操作 。
1.5.4　肝脏生化 　在相同部位精确称取肝脏
0.3g,加入预冷的生理盐水 ,在冰水中制成 10%的
匀浆 , 4℃ 3 000r· min-1离心 15 min,提取上清液 ,
测定 TG、TC、MDA、SOD含量 。
1.5.5　组织学病检　福尔马林固定肝标本 ,石蜡切
片进行 HE染色 ,在光镜下观察肝脂肪变性和炎症
活动情况。肝细胞脂肪变性程度判断标准参照文
献 [ 5] ,以肝小叶内含脂滴细胞数 /总细胞数比值计
算:几乎没有为 -, <1/3为 +, 1/3 ～ 2/3为 , >2/
3为 , ≈1为 。炎症活动度计分标准参考 1981
年 Knodel提出慢性肝炎组织学活动指数(HAI),并
结合王泰龄等[ 6]提出的慢性肝炎炎症活动度计分
方案 ,分为汇管区炎症(P),小叶内炎症(L),碎屑坏
死(PN)及桥状坏死(BN,包括多小叶坏死)四项 ,每
项依次计为 1、2、3、4分 ,因为 BN、PN的严重程度与
预后直接相关 ,故计分 2倍于其它病变 ,计分公式为
P+L+2(PN+BN)。
1.6　统计学处理　计量资料 x±s表示 ,采用方差
分析;等级资料采用秩和检验。
2　结果
2.1　一般情况　实验期间各组体重无明显差异 ,模
型组和给药组实验开始后几天内有少数大鼠出现腹
泻 。与对照组相比 ,模型组肝指数(liverindex,肝湿
重 /体重 ×100%, LI)增大 ,烟酸组及 TFLC组(200
mg·kg-1)则能明显降低肝指数 ,见 Tab1。
Tab1　Changesofbodyweight, liverindex( x±s, n=8)
Group Dose/mg· kg-1
Weight/g
0wk 1stwk　　2ndwk　　3rdwk　　 LI%
Control - 191±6 198±4 208±4 219±5 2.60±0.12
Model - 190±7 199±7 209±8 222±6 3.12±0.16＊＊
NA 120 191±4 198±3 211±4 226±8 2.72±0.21##
TFLC 200 193±4 201±5 212±6 225±7 2.61±0.20##
100 189±6 197±6 208±6 223±10 2.91±0.25
50 193±6 200±5 210±8 226±10 2.96±0.22
　　＊＊P<0.01vscontrolgroup;##P<0.01vsmodelgroup
2.2　粪便脂质变化　给药 3d后 ,模型组粪便 TG、
TC与对照组相比升高;烟酸组 、TFLC组 (100、200
mg· kg-1)TG与模型组相比则明显升高 ,而 TC给
药组之间差异无显著性 ,见 Tab2。
Tab2　ChangesofTG, TCofthestool( x±s, n=8)
Group Dose/mg· kg-1 TG/mmol· L-1 TC/mmol· L-1
Control - 0.27±0.04 0.63±0.06
Model - 0.46±0.14＊＊ 0.83±0.15＊＊
NA 120 0.81±0.19## 0.96±0.24
TFLC 200 1.05±0.36## 0.95±0.24
100 1.04±0.43## 0.78±0.06
50 0.47±0.12 0.77±0.09
　　＊＊P<0.01vscontrolgroup;##P<0.01vsmodelgroup
2.3　血清脂质变化　与对照组相比 ,模型组 1 wk
和 3 wk时 TG、TC均升高;与模型组相比 ,烟酸组 、
TFLC组(200mg·kg-1)TG则明显降低;而给药组
均无降低 TC作用 ,见 Tab3。
2.4　血清 ALT、AST、SOD、MDA变化　与对照组
相比 ,模型组 ALT、MDA明显升高;与模型组相比 ,
TFLC组(200 mg· kg-1)ALT、MDA明显下降 , 见
Tab4。
2.5　肝脏脂质及 MDA、SOD变化 　与对照组相
比 ,模型组 TG、MDA升高 , SOD则降低;与模型组相
比 ,烟酸组 、TFLC组(100、200 mg·kg-1)能降低 TG
和升高 SOD, TFLC组 (200 mg· kg-1)还能降低
MDA,见 Tab5。
2.6　肝脏病理学变化　光镜下 ,对照组大鼠肝脏基
本无异常 。模型组动物均出现程度不同的弥漫性肝
细胞脂肪变性 ,脂变肝细胞极度肿胀 ,成圆形 ,胞质
内充满大量脂肪空泡 ,界限不清;并出现程度不同炎
症 ,且 100%存在小叶内炎症 , 75%出现汇管区炎
症 ,还有汇管区变性及点状坏死或坏死灶 ,炎症细胞
浸润以单核细胞 、淋巴细胞为主 ,并有一些中性粒细
胞浸润 ,但未见纤维化 。与模型组相比 , TFLC组
(200 mg· kg-1)脂肪变性(P<0.05)及炎症活动度
均明显减轻 ,见 Tab6。
·592· 中国药理学通报　ChinesePharmacologicalBuletin　2006 May;22(5)
Tab3　DynamicalychangesofTG, TCoftheserum( x±s, n=8)
Group Dose/mg·kg-1
TG/mmol· L-1
1stwk 3rdwk
TC/mmol· L-1
1stwk 3rdwk
Control - 0.49±0.13 0.46±0.12 1.34±0.24 1.48±0.43　　
Model - 0.64±0.15＊ 0.69±0.16＊＊ 2.13±0.40＊＊ 2.75±0.55＊＊
NA 120 0.42±0.09## 0.51±0.09# 1.79±0.32 2.77±0.18　　
TFLC 200 0.40±0.05## 0.44±0.08## 2.22±0.36 2.79±0.65　　
100 0.49±0.20 0.57±0.17 2.31±0.30 3.16±0.51　　
50 0.65±0.32 0.62±0.12 2.02±0.41 3.07±0.76　　
　　＊P<0.05, ＊＊ P<0.01vscontrolgroup;#P<0.05, ##P<0.01vsmodelgroup
Tab4　ChangesofALT, AST, MDA, SODoftheserum( x±s, n=8)
Group Dose/mg· kg-1 ALT/U· L-1 AST/U· L-1 MDA/μmol· L-1 SOD/kU· L-1
Control - 8.18±2.52 48.12±21.96 15.16±2.49 186.79±24.64
Model - 56.33±26.74 ＊＊ 63.04±22.11 19.66±2.64＊ 176.12±45.28
NA 120 31.33±9.80 53.19±13.79 20.64±6.14 207.86±33.43
TFLC 200 27.23±12.11# 47.09±24.29 14.25±4.29# 184.68±16.37
100 25.44±8.46# 46.57±24.88 17.45±6.28 160.52±61.51
50 33.89±18.00 51.05±17.04 22.63±6.75 192.55±17.54
　　＊P<0.05, ＊＊ P<0.01vscontrolgroup;#P<0.05vsmodelgroup
Tab5　ChangesofTG, TC, MDA, SODoftheliver( x±s, n=8)
Group Dose/mg· kg-1 TG/mmol· L-1 TC/mmol· L-1 MDA/μmol· g-1 SOD/kU· g-1
Control - 0.46±0.09 1.31±0.15 0.27±0.06 7.82±1.26
Model - 1.75±0.36＊＊ 1.35±0.29 0.50±0.08＊＊ 5.93±0.77＊＊
NA 120 0.82±0.43# 1.11±0.16 0.42±0.20 7.26±1.47#
TFLC 200 0.75±0.22## 1.24±0.29 0.36±0.13# 7.26±1.23#
100 0.93±0.36## 1.22±0.18 0.42±0.15 7.18±1.45#
50 1.54±0.23 1.20±0.24 0.47±0.11 6.28±0.47
　　＊＊ P<0.01vscontrolgroup;#P<0.05, ##P<0.01vsmodelgroup
Tab6　Degreeofthehepaticsteatosisandthehepaticinflammationscore( x±s, n=8)
Group Dose/mg· kg-1
Degreeofthehepaticsteatosis
- +
Rateofthehepatic
steatosis/%
Inflammation
score
Control - 8 - - - - 0 0.5±0.76
Model - - 1 6 1 - 100 3.75±0.87＊＊
NA 120 1 4 3 - - 87.5 2.78±0.87#
TFLC 200 3 4 1 - - 62.5 2.38±1.06#
100 1 4 3 - - 87.5 2.62±1.06#
50 - 2 5 1 - 100 3.625±0.74
　　＊＊ P<0.01vscontrolgroup;#P<0.05vsmodelgroup
3　讨论
模型组大鼠通过脂肪乳剂灌胃 3 wk后发现血
清 ALT、TG和肝匀浆 TG、MDA均明显升高 , SOD降
低 ,病理显示大量肝细胞脂肪变性 ,且伴有炎症 、坏
死 ,符合 NASH的病理学 、病理生理学改变[ 5] 。因
此 ,降低血清和肝脏的 TG是防治 NASH基本因素 。
研究发现 , TFLC能够降低血清和肝脏中的 TG,改善
肝脂肪变性程度和炎症活动度 。
本实验通过检测大鼠粪便脂质发现 TFLC组粪
便中 TG含量明显高于模型组 ,说明 TFLC组进入体
内 TG明显减少 ,可能是由于 TFLC与肠道内的脂质
结合从而减少了脂质吸收 ,提示其对高脂血症和脂
肪肝可能有着很好的预防作用。
在 NASH的发病过程中 ,脂质过氧化起着十分
重要的作用[ 7] 。由于大量的脂质吸收到体内 ,使 TG
在肝脏内过度沉积 ,导致了脂质过氧化 ,产生了大量
的 MDA等其它脂质过氧化产物。 MDA可作用于
NF-κB,使致炎因子基因表达 、释放增强 ,并启动粘
附因子的转录 ,包括 IL-8、TNF-α等 [ 8] ;MDA又可与
线粒体的膜脂 、膜蛋白 NH2交联 ,使膜的流动性降
低 ,影响膜中酶的活性 ,干扰了脂肪酸的 β-氧化 [ 9] ,
加重脂肪在肝内蓄积 ,形成恶性循环。本实验显示 ,
·593·中国药理学通报　ChinesePharmacologicalBuletin　2006 May;22(5)
TFLC组能够降低血清和肝匀浆的 MDA和提高肝
脏 SOD活性 ,提示 TFLC有很好的抗脂质过氧化作
用 。
ALT是反应肝细胞损害的敏感指标 ,当肝细胞
膜受到自由基 、细胞因子等攻击时 ,其通透性发生改
变 ,导致血清 ALT明显升高。本研究发现 TFLC能
够降低血清 ALT的水平 ,其机制除了抑制自由基产
物的生成以外 ,是否还有其它机制的参与 ,有待于进
一步探讨。
本实验在造模的同时给予药物治疗 , TFLC使
TG排泄增加;同时 TFLC也能够对抗脂质过氧化和
保护肝细胞膜的作用 ,从而使治疗组有明显疗效 ,但
其作用机制是上述三者同时存在 ,还是仅因为 TFLC
抑制了脂质在肠道里的吸收 ,其所表现出的抗脂质
过氧化和对肝细胞的保护作用是由于进入体内的脂
质减少所致? 后期继续研究内容是 ,先复制 NASH
模型 ,然后予以 TFLC治疗 ,结果发现其机制是三者
同时存在的(限于篇幅 ,另发)。
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Abstract:Aim　Tostudythepreventiveandtherapeu-
ticefectsoftotalflavonoidsofLitseaCoreanalevelon
nonalcoholicsteatohepatitisinrats.Methods　48 SD
ratswererandomizedintocontrol, model, NA, TFLC
(50, 100, 200 mg·kg-1)groups(n=8).Thecontrol
groupwereonlyfedwithastandarddietandtheother
groupswerefedwithastandarddietandfatemulsion(
10 ml· kg-1);Atthesametime, thecontrolandmodel
groupswerefedwithCMC-Na, theothergroupswere
fedwithrelativemedicine.ThestoolTG, TC, theserum
TG, TC, ALT, AST, MDA, SODandhepaticTG, TC,
MDA, SODweredetecteddynamicaly.Results　The
modelgroupdevelopedNASHafter3 weeks.NAand
TFLC(100, 200 mg·kg-1)significantlyreducedTGof
theserumandlivertissue, andamelioratedhepatocel-
lularmacrovesicularsteatosis.TFLC(200 mg· kg-1)
markedlyinhibitedincreasedMDAinserumandliver
tissue, andalsoelevatedSODinlivertissue.Conclu-
sions　TFLCmarkedlyreducedtheTGlevelofserum
andlivertissue.Liverhistopathologicalexamination
showedTFLCamelioratedhepatocelularmacrovesicu-
larsteatosis.Theprotectiveandtherapeuticefectsof
TFLConNASH maybeassociatedwithinhibitory
efectoffatabsorptionandlipidperoxidation.
Keywords:　totalflavonoidsoflitseacoreanalevel;
nonalcoholicsteatohepatitis;protectiveandtherapeutic
efects;rats
·594· 中国药理学通报　ChinesePharmacologicalBuletin　2006 May;22(5)