全 文 ：● 方药研究 ●
△通讯作者:潘晓鹃，研究员，硕士研究生导师，研究方向:中药学。
HPLC法测定满山红提取物中多个黄酮成分总量
徐楠1，2，翟红伟2，3，潘晓鹃2，△，严寒静1，杨新新1，2，王芳2
(1． 广东药学院，广东 广州 510006;2． 四川省中医药科学院，四川 成都 610041;3． 泸州医学院，四川 泸州 646000)
摘要:目的:建立满山红提取物中金丝桃苷、杜鹃素、槲皮素和山奈酚总量的高效液相色谱测定方法。方法:采
用高效液相色谱法测定满山红提取物中 4 种黄酮类成分的总量。结果:金丝桃苷、杜鹃素、槲皮素、山奈酚的线性范
围分别为 19. 248 ～ 481. 2μg·ml－1 (r = 0. 9999)、7. 984 ～ 199. 6μg·ml－1 (r = 0. 9998)、5. 648 ～ 141. 2μg·ml－1 (r =
0. 9996)、1. 408 ～ 35. 2μg·ml－1 (r= 0. 9998)、平均加样回收率分别为 96. 5%、98. 4%、97. 4%、97. 5%，ＲSD 分别
为 1. 25%、0. 70%、0. 71%、0. 89%。四批满山红提取物中多个黄酮成分总量分别为 3. 17%、3. 14%、3. 06%、
3. 19%。结论:该方法简便、重复性好、结果准确可靠，可用于满山红提取物的质量控制。
关键词:高效液相色谱法;满山红;提取物;总量;含量测定
中图分类号:Ｒ 284. 2 文献标识码:A 文章编号:1000－3649 (2015)03－0082－04
Determination of Total Contents of Multiple Flavonoids in Extractive of Dried Leaves of Ｒhododendron Dauricum
by HPLC /XU Nan1，2，ZHAI Hongwei2，3，PAN Xiaojuan2，△，YAN Hanjing1，YANG Xinxin1，2，WANG Fang2 / /1． Guangdong
Pharmaceutical University (Guangzhou Guangdong 510006，China) ;2． Sichuan Academy of Chinese Medicine Science (Cheng-
du Sichuan 610041，China) ;3． Luzhou Medical College (Luzhou Sichuan 646000，China)
Abstract:Objective:To establish a method to determine the total contents of Hyperoside，Farrerol，Quercetin and
Kaempferol in extractive of dried leaves of Ｒhododendron Dauricum． Methods:HPLC was adopted for the determination of the to-
tal contents of four flavonoids in extractive of dried leaves of Ｒhododendron Dauricum． Ｒesults:The Hyperoside，Farrerol，
Quercetin and Kaempferol had good linearity in the range of 19. 248 ～ 481. 2μg． ml－1 (r = 0. 9999) ，7. 984 ～ 199. 6μg． ml－1
(r=0. 9998) ，5. 648 ～ 141. 2μg． ml－1 (r = 0. 9996)and 1. 408 ～ 35. 2μg． ml－1 (r = 0. 9998) ，the average recoveries were
96. 5%，98. 4%，97. 4% and 97. 5% with ＲSD of 1. 25%，0. 70%，0. 71% and 0. 89% respectively，the total contents of
four groups were 3. 17%，3. 14%，3. 06% and 3. 19% ． Conclusion:The method is simple，repeatable and accurate，it can
be used for quality control of extract from dried leaves of Ｒhododendro Dauricum．
Keywords:HPLC;Ｒhododendro Dauricum;Extractive;Total contents;Determination
满山红 (Ｒhododendri Daurici Folium)为杜鹃花
科属植物兴安杜鹃 Ｒhododendron dauricum L． 的干燥
叶，其味辛、苦、性寒，具有止咳、祛痰的功效［1］。
该功效的主要有效成分为黄酮类［2 ～ 5］。目前，满山红
药材含量分析方法主要有紫外－可见分光光度法测定
总黄酮含量［6 ～ 7］ 以及 HPLC 法测定杜鹃素等单一成
分，少见 HPLC 法同时测定两种以上黄酮类成
分［8 ～ 13］。本实验建立 HPLC 测定金丝桃苷、杜鹃素、
槲皮素、山奈酚总量方法目的在于全面、便捷测定
满山红提取物中多个黄酮成分总量。该方法简便、
重复性好、准确性高。该测定方法除了测定金丝桃
苷等 4 种成分总量外，还可根据测定的总量评价满
山红提取工艺的优劣并进行优化，也借鉴用于后续
新药研发中满山红黄酮类有效部位的分离、纯化工
艺的评价。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 Waters 2695 －2489 高效液相色谱系统，
Empower色谱工作站 (Waters公司) ;Agilent 1200 高
效液相色谱仪工作站 (二极管阵列检测器) (安捷伦
科技有限公司) ;超声波仪器 (上海冠特超声仪器有
限公司，功率 100W、频率 59kHz) ;梅特勒． 托利多
XS205 型万分之一、十万分之一电子分析天平 (梅
特勒． 托利多仪器 (上海)有限公司) ;pHS－3C 型
pH计 (上海仪电科学仪器股份有限公司) ;Milli －
QIntegral超纯水系统 (默克化工技术 (上海)有限
公司)。
1. 2 试药 金丝桃苷 (批号:111521－201406)、杜
鹃素 (批号:110850 － 200604)、槲皮素 (批号:
100081－200907)、山奈酚 (批号:110861 －201310)
均从国家食品药品检定研究院购买;甲醇、磷酸等
均为分析纯，均购自成都市科龙化工试剂厂;高效
液相色谱用甲醇为色谱甲醇 (美国 Fisher 公司)、高
效用水为超纯水，满山红提取物为满山红干燥叶
(购于河北安国中药材市场)经 95%乙醇回流提取、
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减压干燥所得干膏 (实验室自制)。
2 方法与结果
2. 1 溶液的制备
2. 1. 1 混合对照品溶液的制备 分别精密称定金丝
桃苷、杜鹃素、槲皮素、山奈酚对照品 12. 03mg、
10. 01mg、14. 12mg、3. 52mg，加甲醇配制成浓度分别
为 481. 2μg·ml－1、199. 6μg·ml－1、141. 2μg·ml－1、
35. 2μg·ml－1 的混合对照品溶液，作为贮备液。
2. 1. 2 供试品溶液的制备 取本满山红提取物约
0. 1g，精密称定，置 10ml 容量瓶中，加甲醇适量，
超声 (功率 100W、频率 59kHz)15 分钟使溶解，冷
却至室温，再加甲醇定容，摇匀，用 0. 45μm微孔滤
膜过滤，取续滤液，即得。
2. 2 色谱条件 色谱柱为 Symmetry C18 (4. 6 ×
150mm，5μm) ，流动相为甲醇 (A)－0. 02%磷酸水
溶液 (B) ，梯度洗脱:0 ～ 9 分钟，42% A ～ 45% A;
9 ～ 15 分钟，45% A ～ 48% A;15 ～ 30 分钟，48%
A ～81% A;30 ～ 32 分钟，81% A ～ 90% A;32 ～
62 分钟，90% A ～ 90% A;62 ～ 65 分钟，90% A ～
42% A，后运行时间 5 分钟;流速 0. 8ml·分钟－1，
检测波长 0 ～ 24 分钟为 360nm，24 ～ 65 分钟为
299nm;柱温 25℃;进样量 10μl。在上述色谱条件
下，取混合对照品溶液、供试品溶液分别进样，色
谱图见图 1。结果各溶剂的色谱峰达到较好分离，且
空白不干扰测定。
2. 3 线性关系考察 取 “2. 1. 1”项下混合对照品
溶液适量，分别稀释 2、4、6、8、25 倍，配制成 6
种不同浓度的混合对照品溶液，按 “2. 2”项下色谱
条件分别进样，测定 4 个组分的峰面积，以峰面积
(Y)对浓度 (X) (μg·ml－1)进行线性回归，得金
A
B
C
图 1 空白甲醇 (A)、混合对照品溶液 (B)和供试品溶液
(C)的 HPLC 图谱 a． 金丝桃苷 b． 槲皮素 c． 山柰酚 d．
杜鹃素
丝桃苷、杜鹃素、槲皮素、山奈酚的回归方程和线
性范围。见表 1。结果表明，4 个组分在各自浓度范
围内呈良好的线性关系。
表 1 金丝桃苷、杜鹃素、槲皮素、山奈酚的回归方程
和线性范围
组分 回归方程 r
线性范围
(μg·mL－1)
金丝桃苷 Y =3×107X －76747 0. 9999 19. 248 ～ 481. 2
杜鹃素 Y =4×107X －37552 0. 9998 7. 984 ～ 199. 6
槲皮素 Y =4×107X －150024 0. 9996 5. 648 ～ 141. 2
山奈酚 Y =4×107X －24385 0. 9998 1. 408 ～ 35. 2
2. 4 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液 10μl，
按“2. 2”项下色谱条件重复进样 6 次，计算金丝桃
苷、杜鹃素、槲皮素、山奈酚峰面积的 ＲSD 分别为
0. 51%、0. 62%、0. 64%、0. 71%。结果表明仪器进
样精密度良好。
2. 5 稳定性试验 取室温放置的同一供试品溶液，
按“2. 2”项下色谱条件分别于 0、2、4、8、12、
18、24、48 小时后进样测定，计算金丝桃苷、杜鹃
素、槲皮素、山奈酚峰面积的 ＲSD 分别为 1. 71%、
1. 12%、1. 62%、1. 19%。结果表明供试品溶液在
48h内稳定。
2. 6 重复性试验 取本满山红提取物约 0. 1g，精密
称定，共 6 份，分别按 “2. 1. 2”项下供试品溶液的
制备方法制备供试品，再分别按 “2. 2”项下色谱条
件分别进样，测定 6 份供试品中金丝桃苷、杜鹃素、
槲皮素、山奈酚的含量。根据峰面积及标准曲线，
计算各组分含量的平均值分别为 2. 01%、0. 52%、
0. 55%、0. 09%; ＲSD 分 别 为 1. 61%、 1. 08%、
1. 13%、1. 82%。结果表明该方法的精密度良好。
2. 7 加样回收试验 取已知含量的满山红提取物约
0. 05g，精密称定，共 9 份，分别精密加入一定量的
混合对照品溶液后，分别按 “2. 1. 2”项下供试品溶
液的制备方法制备供试品，再分别按 “2. 2”项下色
谱条件进样，分别计算金丝桃苷、杜鹃素、槲皮素、
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山奈酚的回收率，结果见表 2。
表 2 加样回收实验结果 (n=9)
组分
取样量
(g)
添加量
(mg)
测得总量
(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
ＲSD
(%)
金丝桃苷 0. 05006 0. 7475 1. 7515 96. 7 96. 5 1. 25
0. 04994 0. 7475 1. 7223 96. 1
0. 05015 0. 7475 1. 7243 95. 8
0. 05018 0. 9200 1. 8901 95. 8
0. 05001 0. 9200 1. 8930 96. 5
0. 05007 0. 9200 1. 8925 96. 3
0. 05002 1. 0925 2. 0581 96. 3
0. 04999 1. 0925 2. 0586 96. 4
0. 04998 1. 0925 2. 0527 95. 9
杜鹃素 0. 05006 0. 1894 0. 4452 98. 5 98. 4 0. 70
0. 04994 0. 1894 0. 4440 98. 2
0. 05015 0. 1894 0. 4435 97. 4
0. 05018 0. 2331 0. 4892 98. 6
0. 05001 0. 2331 0. 4891 99. 0
0. 05007 0. 2331 0. 4876 98. 2
0. 05002 0. 2768 0. 5282 97. 5
0. 04999 0. 2768 0. 5339 99. 6
0. 04998 0. 2768 0. 5305 98. 4
槲皮素 0. 05006 0. 1851 0. 4550 97. 2 97. 4 0. 71
0. 04994 0. 1851 0. 4570 98. 7
0. 05015 0. 1851 0. 4551 97. 0
0. 05018 0. 2420 0. 5122 97. 7
0. 05001 0. 2420 0. 5075 96. 2
0. 05007 0. 2420 0. 5102 97. 1
0. 05002 0. 2847 0. 5526 97. 5
0. 04999 0. 2847 0. 5536 97. 9
0. 04998 0. 2847 0. 5525 97. 6
山奈酚 0. 05006 0. 0235 0. 0663 96. 8 97. 5 0. 89
0. 04994 0. 0235 0. 0663 97. 6
0. 05015 0. 0235 0. 0662 96. 3
0. 05018 0. 0313 0. 0740 97. 0
0. 05001 0. 0313 0. 0739 97. 1
0. 05007 0. 0313 0. 0740 97. 3
0. 05002 0. 0399 0. 0832 99. 3
0. 04999 0. 0399 0. 0825 97. 7
0. 04998 0. 0399 0. 0826 98. 0
2. 8 样品含量测定 取满山红提取物 4 批，分别按
“2. 1. 2”项下方法制备，按“2. 2”项下色谱条件进
样，计算 4 批满山红提取物中四种黄酮成分的总量，
结果见表 3。
表 3 样品含量测定结果
批次
四种成分
总量 (%)
平均含
量 (%)
ＲSD
(%)
第一批提取物 3． 17
第二批提取物 3． 14
第三批提取物 3． 06 3． 17 1． 82
第四批提取物 3． 19
3 讨 论
3. 1 供试品溶液的制备方法 本实验满山红提取物
为满山红的 95%乙醇回流提取所得。因此，在含量
测定方法的溶剂筛选中，针对甲醇、60%甲醇、乙
醇、60%乙醇进行了提取考察，结果没有明显差异，
因此，选用甲醇作为提取溶剂。由于供试品为提取
物，且实验显示在甲醇中溶解性好，因此，采用超
声提取方法，经过实验，最终选用超声提取时间 15
分钟。
3. 2 检测波长的选择 采用 Aglient高效液相二极管
阵列检测器对金丝桃苷、杜鹃素、槲皮素、山奈酚
对照品进行全波长扫描，结果显示金丝桃苷、槲皮
素、山奈酚在 360nm 处有最大吸收，杜鹃素在
299nm处有最大吸收。实验过程发现，在本实验色谱
条件下，金丝桃苷、槲皮素、山奈酚在 24 分钟之前
出峰，而杜鹃素在 24 分钟之后出峰，参照相关文
献［14，15］ 及根据 waters 2695 仪器性能，实验采用分段
设定检测波长来同时测定满山红提取物中四种成分
的含量，以最大吸收波长及出峰次序为设定依据，
在 24 分钟前设定检测波长 360nm 以测定金丝桃苷、
槲皮素、山奈酚，在 24 ～ 65 分钟设定检测波长
299nm以测定杜鹃素。
3. 3 流动相的选择 本文在对流动相进行条件筛选
时，曾采用过甲醇－水等度洗脱、甲醇－水梯度洗脱
的方式，但均难以使所需成分在较短时间内完全分
离。经反复实验，选用甲醇 (A) －0. 02%磷酸水溶
液 (B)梯度洗脱，结果显示，基线平稳、峰形好、
四种成分均达到基线分离。有文献报道采用甲醇 ～
0. 2%磷酸水溶液梯度洗脱的方法测定满山红药材黄
酮类成分［12］，但其流动相 pH 约为 1. 7，对柱子耐酸
性要求较高。在本实验优选的酸浓度下，流动相 pH
值约 2. 5，降低了色谱柱的耐酸性要求降低，可供选
用的色谱柱种类范围更广。且优选的梯度洗脱条件
能在较短时间内分离所需测定成分。
3. 4 实验研究意义 实验建立了 HPLC 法测定 4 种
黄酮成分总量，其精密度、重复性、准确性均好，
操作方法简便、快捷。建立的 HPLC测定 4 种黄酮成
分总量的方法既能监控满山红提取物的 4 种黄酮总
量，也能评价以主要化学成分为客观指标的满山红
提取工艺优劣。实验所测定的提取物为满山红的
95%乙醇回流提取物，该提取物是分离、纯化黄酮
类有效部位的始物料。在满山红黄酮类有效部位的
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檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾
分离、纯化工艺研究中，课题组应用该方法考察黄
酮有效部位总量以评价和优化满山红黄酮类有效部
位的分离、纯化工艺。
参考文献
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(收稿日期 2014－11－17)
炮制减毒原理对中药白花曼陀罗毒性成分
含量的影响分析
舒波，李毅
(川北医学院附属医院，四川 南充 637000)
摘要:目的:研究中药白花曼陀罗炮制减毒对毒性、生物碱含量的影响。方法:制备中药白花曼陀罗生品、炮制
品若干，取雄性健康 SD大鼠 100 只，随机分为生品实验组、生品对照组、炮制品实验组、炮制品对照组，每组 25
只，研究组应用生品、炮制品中药白花曼陀罗溶液静注，对照组应用 CMC－Na混悬液灌胃，观察各组大鼠兴奋性，活
动功能强弱，体重、食欲变化，皮毛表现等。对比生品、炮制品中药白花曼陀罗中的生物碱含量。结果:生品研究组
大鼠有短暂的兴奋表现，但随即活动功能减弱，呈体重减轻、食欲减退等表现，并且皮毛竖立、光泽消失，3 天后恢
复正常，与生品对照组相较，呈明显差异 (P＜0. 05)。炮制品研究组大鼠均未见异常表现，与炮制品对照组相较，不
具差异 (P＞0. 05)。炮制品中药白花曼陀罗中盐酸阿托品、东莨菪碱含量与生品中药白花曼陀罗相较，呈显著差异
(P＜0. 01)。结论:中药白花曼陀罗经中医药学炮制方法处理，不仅能够降低生物碱含量，而且能够降低药学毒性，
二者呈正相关，论证了中药白花曼陀罗毒性随生物碱含量的改变，发生相应变化，为临床治疗提供了充分的理论依
据，也为毒性药材的合理应用提供了宝贵信息。
关键词:中药;白花曼陀罗;炮制减毒;毒性;生物碱含量;相关性
中图分类号:Ｒ 283 文献标识码:A 文章编号:1000－3649 (2015)03－0085－03
Impact Analysis of Attenuated Processing Principle of Datura Toxic Constituents Contents of Chinese Drug Peuce-
danum /SHU Bo，LI Yi / /Attached Hospital of North Sichuan Medical College (Nanchong Sichuan 637000，China)
Abstract:Objective:To study the effect of attenuated Chinese Datura stramonium processing on toxicity，alkaloid content．
Methods:The preparation of traditional Chinese medicine of Datura metel raw products，processed products of several，
100healthy male SD rats were randomly divided into raw materials，experimental group，controlled group，crude processed prod-
ucts，processed products of experimental group，controlled group，25rats in each group，the study group used raw products，
processed products of Chinese medicine white Datura solution for intravenous injection the controlled group was given CMC－Na，
suspension gavage，the excitability of rats were observed，activity function strength，weight，change in appetite，fur perform-
ance etc． The alkaloid content of contrast，white goods processed products of traditional Chinese medicine of Datura stramonium．
Ｒesults:The living research group had the exhilaration short－lived，but then activity weakened，a weight loss，anorexia and
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Vol． 33，No． 3，2015
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