全 文 ：　 2009年 11月第 28卷　第 11期
绵阳师范学院学报
JournalofMianyangNormalUniversity
Nov.2009
Vol.28　No.11　
收稿日期:2009-09-01
基金项目:四川省教育厅青年基金项目(2005B048),绵阳师范学院科研基金资助项目(MA2006011)
作者简介:龚晓莉 ,绵阳师范学院化学与化学工程学院 2004级本科学生。
＊通讯作者:罗娅君(1973-　),女 ,博士 ,副研究员 ,主要研究方向:现代分离分析方法。
抗菌植物乌蕨中总酚酸含量的测定
龚晓莉 ,罗娅君＊ ,史东林 ,陈　佳 ,刘志荣
(绵阳师范学院化学与化学工程学院 ,四川绵阳　621000)
摘　要:用水和 75%乙醇为溶剂 , 采用回流提取法和超声提取法对乌蕨中的总酚酸进行提取 , 并运用分光光
度法测定了总酚酸含量 , 以原儿茶酸为对照品 , 6%FeCl3 ～ 0.9%K3 [ Fe(CN)6 ] (1∶0.9)混合溶液为显色剂 , 在 717
nm波长处测定吸光度 , 并对方法的精密度 、稳定性以及加标回收率进行了考察。结果表明 , 原儿茶酸在 0.440 ～
3.083 μg· ml-1范围内呈现良好的线性关系(r=0.9994),平均回收率为 98.98%, RSD=2.21%(n=6)。实验表
明 , 乌蕨中总酚酸的提取以 75%乙醇为溶剂 , 采用超声提取 , 温度控制为 57 ℃为佳 , 此时测得总酚酸含量为
42.40 mg· g-1。本研究建立了测定总酚酸含量的方法 ,该方法简便可靠 、精密度高 、重现性好 ,可作为乌蕨中总酚
酸检测的质量标准 , 为进一步开发利用乌蕨的药用价值提供有效的测试手段。
关键词:乌蕨;总酚酸;含量测定;分光光度法
中图分类号:TQ460　　文献标识码:A　　文章编号:1672-612x(2009)11-0041-04
乌蕨(StenolomaChusanum(L.)Ching)为鳞始蕨科植物乌蕨的全草和根茎 ,又称大叶金花草 ,民间还称
其为小叶野鸡尾 、蜢蚱参 、细叶凤凰尾等。主产于长江以南和陕西 、四川各地 。其单方和复方均具有清热解
毒 ,利湿 ,止血的功效 。临床用于治疗肠炎 、肝炎 、咽喉炎等症 ,民间用于治疗胃癌 、肠癌 、食物中毒和农药中
毒 ,有 “万能解毒药”之称[ 1] 。其化学成分研究报道较少 ,主要有有机酸类 [ 2]和黄酮类[ 3] 。现代药理证明乌
蕨有着明显的抗菌活性 、解毒作用和保肝 、抗炎 、止血等作用 [ 4] 。其化学成分含有牡荆素 、丁香酸 、原儿茶
醛 、原儿茶酸等成分 [ 5] 。作者对该植物化学成分的研究表明 ,乌蕨中含有多种酚酸类化合物。据文献报
道 [ 6-8] ,酚酸类化合物的生物活性广泛而温和 ,具有抗菌 、消炎 、抑制血小板聚集 、抗凝及血栓形成等作用 ,其
中原儿茶酸具有明显的抑制血小板聚集 、抗菌活性和抗炎作用 。因此测定乌蕨中总酚酸含量对其质量品质
的评价以及进行深入研究药物作用机理具有重要的意义 。
对总酚酸的测定作者未见文献报道 ,本文用水和 75%乙醇为溶剂 ,分别考察了回流提取法和超声提取
法对乌蕨中总酚酸含量的影响 ,并利用分光光度法对其含量进行了分析测定 。实验表明该方法简单快捷 ,重
现性好 ,可作为总酚酸检测的质量标准。
1　材料和试剂
乌蕨 ,购于成都市五块石药材市场偏冷药行;3, 4-二羟基苯甲酸 ,无水乙醇 ,十二烷基硫酸钠 ,三氯化
铁 ,铁氰化钾 ,盐酸均为分析纯;实验用水为二次蒸馏水 。
T6新世纪紫外可见分光光度计 , 2004(C)北京普析通用仪器有限公司;
KQ-300DE型数控超声清洗器 ,昆山市超声仪器有限公司;
SHZ-CB型循环水式多用真空泵 ,河南巩仪市英峪子华仪器厂。
2　方法与结果
2.1　乌蕨总酚酸的提取
2.1.1　回流法提取
DOI :10.16276/j.cnki.cn51-1670/g.2009.11.010
将乌蕨剪碎 ,于 60 ℃烘箱中烘 6h,粉碎过 60目筛 ,得乌蕨样品。精密称取 0.2 g乌蕨粉两份 ,分别置
于 100ml的圆底烧瓶内 ,再分别加入 30ml蒸馏水和 75 %乙醇(体积分数),微沸回流提取 30 min,过滤 ,取
清液;残渣分别加入 20 ml蒸馏水和 75%乙醇(体积分数),微沸回流提取 30 min,过滤 ,合并两次滤液并定
容至 50.00ml。放 4 ℃冰箱备用。
2.1.2　超声波法提取
精密称取 0.2g乌蕨粉两份 ,分别加入 30 ml蒸馏水和 75%乙醇(体积分数),在指定温度下超声提取 30
min(功率为 100%),过滤 ,取清液;残渣分别加入 20 ml蒸馏水和 75 %乙醇(体积分数),超声提取 30 min,
过滤 ,合并两次滤液并定容至 50.00ml。放 4 ℃冰箱备用。
2.2　乌蕨中总酚酸的测定方法———普鲁士兰法 [ 3]
取 1.00 ml待测样品置于 25.00 ml比色管中 ,加无水乙醇至 5 ml,加 0.3 %十二烷基硫酸钠 2 ml及
0.6%FeCl3 ～ 0.9%K3 [ Fe(CN)6 ] (1∶0.9)混合溶液 1 ml,混匀 ,在暗处放置 5min,加 0.1mol· l-1HCl至刻
度 ,混匀 ,在暗处放置 30 min。以试剂为空白 ,用分光光度计在 717 nm波长处测定吸光度 A,根据标准曲线
计算含量。
2.2.1　对照品溶液配制
精密称取原儿茶酸对照品 11.0100 mg,置于 500 ml容量瓶中 ,加无水乙醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,作
为对照品溶液(22.02 μg· ml-1)。
2.2.2　标准曲线绘制
精密吸取原儿茶酸对照品溶液(22.02 μg·ml-1)0.5 ml, 1.0ml, 1.5ml, 2.0 ml, 2.5 ml和 3.5 ml,分别
置于 25 ml比色管中 ,同测定方法操作 ,于 717 nm波长处依次测定吸光度 A,以浓度 C(μg· ml-1)为横坐
标 ,吸收度 A为纵坐标绘制标准曲线 ,得线性回归方程为 A=0.2356C+0.0818, r=0.9994。原儿茶酸含量
在 0.440 ～ 3.083 μg·ml-1范围内呈现良好的线性关系。
2.2.3　精密度实验
精密移取样品溶液 1.00ml置于 25ml比色管中 ,同测定方法项下进行显色和测定 ,连续重复测定 6次 ,
RSD=0.74 %(n=6)。
2.2.4　稳定性实验
精密移取样品溶液 1.00 ml置于 25 ml比色管中 ,同测定方法进行显色 ,分别在 15 ～ 70 min内每隔 5
min测定吸光度 A。在 25 ～ 60 min内基本稳定 , RSD=2.99%,实验选择暗处放置 30min测定。
2.2.5　回收率实验
精密移取同一样品溶液 1.00 ml于 25 ml比色管中(共 6份),分别加入 22.02 μg· ml-1原儿茶酸对照
品溶液 0.3ml, 0.5ml, 0.7 ml, 1.0 ml, 1.2ml, 1.5 ml,然后按测定方法进行操作计算回收率 ,回收率结果见
表 1。
表 1　总酚酸的回收率结果(n=6)
Tab.1　TherecoveryresultofTotalPhenolicAcid
序号 样品含量(μg) 加入量(μg) 测得量(μg) 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%)
1 38.858 6.606 45.437 99.59
2 38.858 11.010 49.576 97.35
3 38.858 15.414 53.714 96.38 98.98 2.21
4 38.858 22.020 61.460 102.64
5 38.858 26.424 65.174 99.59
6 38.858 33.030 71.329 98.31
2.2.6　重现性实验
精密称取 0.2 g同一批乌蕨粉 6份 ,先按提取方法提取得提取液 ,将提取液稀释一定的倍数 ,配得 6份
·42· 绵阳师范学院学报(自然科学版) 第 28卷
样品溶液 ,同测定方法项下进行显色和测定 ,记录吸光度 A, RSD=1.73%。
2.2.7　样品含量测定
按照不同方法制备提取液 ,精密移取同一样品溶液 1.00 ml,同测定方法平行操作 ,于 717 nm波长处测
定吸光度 A(n=3)。将测得的吸光度值代入回归方程 ,并计算 1 g样品中的总酚酸含量。结果表明 ,不同提
取液总酚酸含量不同 ,实验结果见表 2。
表 2　总酚酸含量结果
Tab.2　ThecontentresultofTotalPhenolicAcid
提取方法 ① ② ③ ④ ⑤ ⑥
吸光度 A 0.395 0.216 0.345 0.240 0.446 0.279
0.404 0.219 0.351 0.244 0.445 0.269
0.398 0.225 0.336 0.233 0.453 0.277
平均吸光度 A 0.399 0.220 0.345 0.239 0.448 0.275
RSD(%) 1.15 2.08 2.22 2.33 1.56 1.92
浓度 C(μg· ml-1) 1.346 0.5866 1.117 0.6672 1.5543 0.8200
含量(mg· g-1) 36.70 16.01 30.50 18.21 42.40 35.76
附注:①75℃超声水提取　②20℃超声水提取　③98℃蒸馏水回流提取　④20℃75 %乙醇(体积分数)超声提取　⑤57℃75
%乙醇(体积分数)超声提取　⑥80℃75 %乙醇(体积分数)回流提取
3　讨论
(1)本文采用不同溶剂和不同提取方法对乌蕨中总酚酸进行了提取 ,并用分光光度法测定了总酚酸的
含量。同一方法 ,不同溶剂提取的总酚酸含量:回流提取 , 35.76 mg· g-1(乙醇)>30.50 mg· g-1(水);
20 ℃超声提取 , 18.21 mg· g-1(乙醇)>16.01 mg·g-1(水);高温超声提取 , 42.40 mg· g-1(乙醇)>36.70
mg· g-1(水)。不同方法 ,同一溶剂提取得总酚酸含量:水提液 , 36.70mg·g-1(超声)>30.50 mg·g-1(回
流);乙醇水提液 , 42.40mg· g-1(超声)>35.76 mg·g-1(回流)。结果表明 , 57 ℃ 75%乙醇(体积分数)超
声提取的总酚酸含量最高 ,达 42.40mg· g-1。
(2)乌蕨含有多种酚酸 ,作者曾对乌蕨的化学成分进行研究[ 9] ,鉴定了 10个酚酸类物质 ,其中包括原儿
茶酸 ,故论文以原儿茶酸做对照品测定总酚酸含量 ,具有很好的稳定性 。该方法具有简单快捷 、操作方便 、仪
器普及率高 、易于推广等优点 ,可用于乌蕨的质量控制及定量分析 ,同时对含总酚酸的其它药材分析及质量
控制都具有重要参考价值 。
参考文献:
[ 1] 　国家中医药管理局.中华本草 [ M] .上海:上海科学技术出版社 , 1999:110-112.
[ 2] 　陶晨 , 杨小生 ,罗载刚.乌蕨中抑菌活性成分核磁共振波谱分析 [ J] .贵阳医学院学报 , 2004, 29(6):495-496.
[ 3] 　UenoA, OguriN, HoriK, etal.Pharmaceuticalstudiesonferns.18.ChemicalcomponentsinleavesofSphenomerischusana
Copel.andCyatheafau-Copel[ J] .JpnJPharmacol, 1963, 83:420-422.
[ 4] 　全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编 [ M] .北京:人民卫生出版社 , 1983:532-534.
[ 5] 　CaiJX, HuangXD.PharmacologicalexperimentsofgrossflavoneinStenolomaChusanum(Thunb)Kze.anditswaterextrac-
tion[ J] .JournalofFujianCollegeofTCM, 2004, 14(1):13-14.
[ 6] 　杨东明 , 苏世文 ,李铣 , 等.五灵脂活性成分的研究 [ J] .药学学报 , 1987, 22(10):756-760.
[ 7] 　国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册 [ M] .北京:人民卫生出版社 , 1984:479-481.
[ 8] 　王丽君 , 张鑫毅 ,廖矛川.紫草总酚酸辅助米非司酮对妊娠大鼠的抗早孕作用 [ J] .中国中药杂志 , 2008, 33(20):2378-
2381.
[ 9] 罗娅君 ,肖新峰 , 王照丽.大叶金花草化学成分的研究(Ⅱ)[ J] .中草药 , 2009, 40(2):22-24.
·43·第 11期 龚晓莉等:抗菌植物乌蕨中总酚酸含量的测定
DeterminationofTotalPhenolicAcidinStenolomaChusana(L.)Ching
GONGXiao-li, LUOYa-jun, SHIDong-lin, CHENJia, LIUZhi-rong
(SchoolofChemistry＆ChemicalEngineering, MianyangNormalUniversity, Mianyang, Sichuan　621000)
Abstract:Diferentsolvents(waterand75% ethanol)anddiferentmethods(regurgitationandultrasound)
havebeenadoptedtoextracttotalphenolicacidinStenolomaChusana(L.)Ching.Withprotocatechuicacidasthe
standardreference, 0.6%FeCl3-0.9%K3[ Fe(CN)6 ] (1:0.9)asthedeveloper, thetotalphenolicacidcontent
hasbeendeterminedbyusingspectrophotometryat717 nm.Theresultsshowthatprotocatechuicacidpresentsa
goodlinearrelationattherangeof0.440 ～ 3.083μg· mL-1(r=0.9994), andtheaveragerecoveryis98.98%
withRSD=2.21% (n=6).TheexperimentindicatesthattotalphenolicacidinStenolomaChusana(L.)otal
phenolicacidis42.40 mg· g-1.Inthisdissertation, thedeterminationmethodoftotalphenolicacidisestab-
lisheChingcanbeextractedwith75% ethanolbyusingultrasound, andcontrolingthetemperatureto57 ℃.Td,
whichissimple, reliable, accurateandreproducible.Itcanbeusedasthestandardforqualitycontroloftotalphe-
nolicacid, andasanefectivemeansoftestingforfurtherdevelopmentandutilizationoftheedicminalvalueof
StenolomaChusana(L.)Ching.
Keywords:StenolomaChusana(L.)Ching;totalphenolicacid;determination;spectrophotometry
(上接第 35页)
[ 5] 　王济浩.模拟电子技术 [ M] .济南:山东科学技术出版社 , 2002:50-60.
[ 6] 　张毅刚.单片机原理及应用 [ M] .北京:高等教育出版社 , 1999.
[ 7] 　罗中华.LED信息显示屏系统的设计 [ D] .南昌:南昌大学硕士论文 , 2008.
[ 8] 　陈永甫.电子电路智能化设计实例与应用 [ M] .北京:电于工业出版社 , 2002:31-32.
[ 9] 　DigitalDisplayWorkingGroup.DigitalVisualInterfaeeRevision1.0[ S] .1999.
[ 10] 徐爱钧 , 彭秀华.单片机高级语言 C51Windous环境编程与应用 [ M] .北京:电子工业出版社 , 2001.
Designof32×32 Dot-MatrixLEDWritingDisplay
ScreenBasedonChipMicrocomputerAT89S52
ZHUXiao-gang, FANShun-zhi
(ChangzhouInstituteofMechatronicTechnology, Changzhou, Jiangsu　213164)
Abstract:Thispaperdiscussesthedesignof32×32Dot-MatrixLEDwritingdisplayscreenbasedonChip
MicrocomputerAT89S52.Undertheefectofalightpenandthecontroler, thiswritingdisplayscreencanshowlots
ofwritingfunctions, suchasLEDdots, zonedlight, anti-displayingthedata, entirescreenerasure, strokeera-
sure, multicharacterswritencontinuously, objectdraggingandsoon.
Keywords:Dot-MatrixLED;writingdisplayscreen;scan;lightpen
·44· 绵阳师范学院学报(自然科学版) 第 28卷