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香叶木素-7-O-β-D-葡萄糖苷的抗炎作用研究



全 文 :香叶木素 - 7 - O - β - D -葡萄糖苷的抗炎作用研究
白庆云,梁 辉,袁功文,闻永举
(宜春学院 化学与生物工程学院,江西 宜春 336000)
摘 要:采用二甲苯致炎法,以小鼠腹部皮肤形成蓝色斑块深浅的级别、染料渗出量以及耳平均
肿胀度和肿胀抑制率为指标,观察了香叶木素 -7 -O -β -D -葡萄糖苷的抗炎作用。结果显示香叶木
素 -7 -O -β -D -葡萄糖苷组蓝斑色泽深浅的记分、蓝斑染料渗出量以及耳平均肿胀度均比生理盐水
组低 (p < 0. 05)。对小鼠腹部皮肤毛细血管染料渗出的抑制率为 28. 27%;对耳肿胀的抑制率为
52. 73%。表明香叶木素 -7 -O -β -D -葡萄糖苷对毛细血管渗透性亢进有明显的抑制作用。
关键词:香叶木素 - 7 - O - β - D -葡萄糖苷;二甲苯致炎法;抗炎作用
中图分类号:S682 文献标识码:A 文章编号:1671 - 380X (2015)12 - 0015 - 03
Study on the Anti - inflammatory Effect of Chrysoeriol - 7 - β -D - glucopyra Noside
BAI Qing - yun,LIANG Hui,YUAN Gong - wen,et al
(College of Chemical and Biological Engineering,Yichun University,Yichun 336000,China)
Abstract:Xylene - induced inflammation was used to study the anti - inflammatory effect of Chrysoeriol - 7 - β -
D - glucopyra noside. The levels of blue plaque shades in mice abdominal skin,the amount of dye leakage,the
average ear swelling and the rate of inhibition swelling were detected. Results showed that the above indexes value of
the Chrysoeriol - 7 - β - D - glucopyra noside group were significantly lower than that of the saline group (p <
0. 05). The inhibition rate of Chrysoeriol - 7 - β - D - glucopyra noside on abdominal skin capillary dye exudation
and ear swelling were 28. 27% and 52. 73% respectively. These researches indicate that the Chrysoeriol - 7 - β - D
- glucopyra noside had significant inhibitory effect on capillary permeability.
Key words:Chrysoeriol - 7 - β - D - glucopyra Noside;Inflammation Model Induced by Xylene;Anti - inflam-
matory Effect
香叶木素 - 7 - O - β - D -葡萄糖苷是以橙皮
苷为原料通过脱氢,生成地奥司明,再由地奥司明
去除分子中鼠李糖而获得的新化合物。地奥司明为
黄酮类衍生物,可以改善微循环。调节淋巴系统功
能,降低毛细血管通透性,改善其弹性和脆性,抑
制水肿形成。[1]是临床上治疗痔疮,慢性静脉功能
不全的常用药。[2]此外,地奥司明还具有类似维他
命 P (Vitamin P)的作用,可降低血管脆性,使异
常增高的通透性降低,所以还用于高血压的防治及
动脉硬化的辅助治疗。由于地奥司明不易溶于水及
常见的有机溶剂,导致其生物利用度较低。将其结
构进行改造成为香叶木素 - 7 - O - β - D -葡萄糖
苷后,在溶解性、吸收、分布及代谢等方面均优于
地奥司明,生物利用度大大提高。为探明结构改造
对地奥司明的作用是否有影响,本实验就地奥司明
和香叶木素 - 7 - O - β - D -葡萄糖苷两者的抗炎
作用进行了对比研究。
1 实验材料
1. 1 动物:KM (KunMing)小鼠 (由南昌大学医
学院提供)60 只,雌雄不拘,体重 20 ± 2g。
1. 2 器材:0. 25mL注射器,4号针头,紫外分光光
度计(型号,T6S 型,编号 5 - 1650 - 01 - 0904),精
密电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司,精密
度 0. 0000g),直径 8mm打孔器,剪刀。
1. 3 药品及试剂:地奥司明片剂(南京正大天晴制
药有限公司,0. 45g /片,含有黄酮类化合物 500mg,
其中地奥司明 450mg),香叶木素 -7 - O - β - D -葡
萄糖苷(由宜春学院化学与生物工程学院药化研究室
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第 37 卷 第 12 期
2015 年 12 月
宜春学院学报
Journal of Yichun College
Vol. 37,No. 12
Dec. 2015
收稿日期:2015 - 10 - 09
作者简介:白庆云 (1977 -),女,山东莒县人,讲师,硕士,研究方向:中药活性成分药理作用,Email:baiqingyun@163. com。
提供,经鉴定纯度为 95%),伊文思蓝(上海晶纯试
剂有限公司,批号 20100802),生理盐水,二甲苯
(上海振欣试剂厂,批号 20081108),丙酮(天津市大
茂化学试剂厂),硫酸钠(天津市永大化学试剂开发中
心,批号 20060816)。
2 实验方法
2. 1 5%伊文思蓝生理盐水的配制:精密称取伊文思
蓝 0. 5g,溶于生理盐水中成 100mL,摇匀,备用。
2. 2 丙酮 -硫酸钠液配制:称取无水硫酸钠 1. 5g,
溶于 150mL蒸馏水中,然后向硫酸钠溶液内缓慢
加入 350mL 的丙酮,即得。此液用于提取皮肤内
染料。
2. 3 对照品溶液的配制:精密称取伊文思蓝
2. 5g,置 100mL容量瓶中,加丙酮 -硫酸钠溶解
并稀释至刻度,即得 0. 025g /mL的对照品溶液
2. 4 标准曲线的制备:精密量取对照品溶液 0. 0、
1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5. 0mL,分别置于 10mL 容
量瓶中,加丙酮 -硫酸钠稀释至刻度,摇匀。以第
一瓶作空白,用紫外分光光度计在 590nm 处测其
吸收度,作 A—C标准曲线,计算其回归方程。
2. 5 香叶木素 - 7 - O - β - D -葡萄糖苷溶液、地
奥司明溶液的配制:取地奥司明片 6. 5 片放于研钵
中研成粉末,将其倒入装有 250mL 生理盐水的平
底容量瓶中,并不断用玻璃棒不断搅拌,直至完全
溶解,制成浓度为 11. 7mg /mL 的溶液。精密称取
香叶木素 - 7 - O - β - D -葡萄糖苷粉末 0. 2925g
于 25mL容量瓶中,用生理盐水溶解,并稀释至刻
度制成 11. 7mg /mL的溶液。
2. 6 分组与给药
2. 6. 1 香叶木素 - 7 - O - β - D -葡萄糖苷对小鼠
腹部皮肤毛细血管渗透性的影响
取小鼠 30只,随机分为 3 组,雌雄不拘:A组
(生理盐水)、B 组(地奥司明)和 C 组(香叶木素 - 7
- O - β - D -葡萄糖苷)。B组小鼠分别于背部皮下
注射地奥司明 0. 1mL /10g,C组注射香叶木素 - 7 -
O - β - D -葡萄糖苷 0. 1mL /10g,A 组注射等体积
生理盐水。连续给药 3 天,1 小时后于尾部静脉注
入配制好伊文思蓝溶液,每 10g 体重 0. 1mL,随即
于小鼠腹部正中 (去毛部位)滴二甲苯,每只小鼠
0. 03mL,20min后小鼠脱颈椎致死,剥下腹部皮肤
翻转后贴在白色搪瓷盘上,根据皮片上蓝斑的色泽
深浅将其分为 7 ~10个级别,一个级别记 1 分。[3]评
定蓝斑深浅后,每块皮片用手术剪剪碎,浸入玻璃
试管中,倒入丙酮 -硫酸钠提取液 10mL,用塞子塞
紧,避光放置,每日轻轻摇动该试管 2 ~ 3 次,3 天
后 2000r /min离心 10min,取上清液,用分光光度计
于 590nm处测定吸光度(以未浸泡皮片的丙酮 -硫
酸钠液调零)。[4,5](注意:伊文思蓝注入量一定要准
确;滴二甲苯务须仔细,尽量使二甲苯浸润的皮肤
形成一个近圆形斑块,为此,要注意二甲苯滴上皮
肤时的角度,位置及小鼠安静不挣扎,二甲苯浸润
的皮肤面积各鼠应力求保持大小相近;小鼠腹部皮
肤去毛可用剪毛剪于实验前一日进行)。按下式计算
染料渗出抑制率。
染料渗出抑制率 = (对照组染料量 -实验组
染料量) /对照组染料量 × 100%[5]
2. 6. 2 香叶木素 - 7 - O - β - D -葡萄糖苷对小鼠
耳肿胀的影响
另取小鼠 30 只,随机分为 3 组:I 组(生理盐
水)、II组(地奥司明)、III组(香叶木素 -7 - O - β - D
-葡萄糖苷)。II 组小鼠分别腹腔注射地奥司明
0. 1mL/10g,III组腹腔注射香叶木素 -7 -O -β -D -
葡萄糖苷 0. 1mL/10g,I 组注射等体积生理盐水。每
组小鼠每日腹腔注射给药一次,连续 3d,第三天给完
药后 0. 5h,三组小鼠于左耳廓前后均匀涂抹二甲苯
0. 1mL,右耳不涂以作为自身空白对照。60min 后将
小鼠全部脱颈椎处死,沿耳廓基线剪下双耳,重叠放
置,用打孔器打下圆耳片,用精密电子天平称重,按
以下公式计算肿胀度和抑制率。[6]
肿胀度(mg)=每组左耳片重 -每组右耳片重
平均肿胀度 (mg) =肿胀度 /动物数
耳肿胀抑制率 = (对照组平均肿胀度 -给药
组平均肿胀度) /对照组平均肿胀度 × 100%[7]
2. 7 统计方法 采用 SPSS 10. 0 软件对试验数据
进行统计学分析,计量资料数据以均数 ±标准差
(x ± s)表示,采用 t检验。以 p < 0. 05 为差异具
有统计学意义。
3 实验结果
3. 1 回归曲线与方程见图 1
图 1 显示伊文思蓝浓度和吸光度之间具有良好
的线性关系,R2 = 0. 9997。
图 1 伊文思蓝标准曲线图
3. 2 药物对小鼠皮肤毛细血管通透性亢进的影响,
结果见表 1
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第 12 期 宜春学院学报 第 37 卷
表 1 药物对二甲苯所致小鼠腹部皮肤毛细血管通透性亢进的影响结果表 (x ± s,n =10)
Table 1 Effects of drug induced by xylene in mice capillary permeability of the abdominal skin
药物
Drug
剂量 Dose
(mg /10g)
蓝斑深浅计分
Blue plaque depth score
吸光度
Absorbance
蓝斑染料量
Amount of blue plaque dye(ug)
抑制率
Inhibition ratio(%)
A组 Group A — 7. 5 ± 2. 0 0. 76 ± 0. 07 14. 89 ± 5. 75 —
B组 Group B 0. 5 5. 3 ± 2. 1# 0. 62 ± 0. 05 11. 33 ± 2. 06* 23. 81
C组 Group C 0. 5 4. 8 ± 2. 7## 0. 48 ± 0. 08 10. 68 ± 2. 44** 28. 27
注:与空白对照组 A组 (生理盐水)相比,#p < 0. 05,##p < 0. 05,* p < 0. 01,**p < 0. 01
Notes:Compared with A group,#p < 0. 05,##p < 0. 05,* p < 0. 01,**p < 0. 01
由表 1 可知 B 组 (地奥司明)和 C 组 (香叶
木素 - 7 - O - β - D -葡萄糖苷)蓝斑深浅计分和
染料渗出量均比空白对照组 A组 (生理盐水)低,
分别 p < 0. 05,p < 0. 01,均有统计学意义。地奥
司明抑制率为 23. 81%,香叶木素 - 7 - O - β - D
-葡萄糖苷抑制率为 28. 27%。说明地奥司明和香
叶木素 - 7 - O - β - D -葡萄糖苷可以抑制腹部皮
肤毛细血管通透性亢进。
3. 3 药物对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响结
果见表 2
表 2 药物对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响结果表 (x ± s,n =10)
Table 2 Effects of drug in mice of ear swelling induced by xylene
组别
Group
剂量 Dose
(mg /10g)
动物数
Animal number
平均肿胀度
The average degree of swelling(mg)
抑制率
Inhibition ratio(%)
I组 group I — 10 12. 82 ± 2. 60 —
II组 group II 0. 5 10 7. 01 ± 2. 00* 45. 31
III组 group III 0. 5 10 6. 06 ± 1. 35** 52. 73
注:与空白对照组 I组 (生理盐水)相比,* p < 0. 01,**p < 0. 01
Notes:Compared with group I,* p < 0. 01,**p < 0. 01
由表 3 可知 II组 (地奥司明)和 III组 (香叶
木素 - 7 - O - β - D -葡萄糖苷)平均肿胀度均比
空白对照组 A组 (生理盐水)低,且 p < 0. 01,有
统计学意义。地奥司明抑制率为 45. 31%,香叶木
素 - 7 - O - β - D -葡萄糖苷抑制率为 52. 73% . 说
明地奥司明和香叶木素 - 7 - O - β - D -葡萄糖苷
能抑制炎症引起的小鼠耳肿胀。
4 讨论
本实验结果表明地奥司明和香叶木素 - 7 - O
- β - D -葡萄糖苷对二甲苯所致的腹部皮肤毛细
血管通透性亢进均有抑制作用,抑制率分别为
23. 81%和 28. 27%.
水胀是继血管通透性增高、渗出后发生在炎症
部位的一种变化,是急性炎症的标志性变化之一。
根据药物对肿胀的抑制程度可以评价其抗炎活性。
用致炎剂涂抹于小鼠耳部引起小鼠耳的肿胀,在一
个较短的时间内测定用药组与对照组致炎耳与未致
炎耳重量,计算并比较抑制率,确定抗炎效果。从
实验结果可以看出,与生理盐水比较,地奥司明和
香叶木素对二甲苯致小鼠耳肿胀均具有抑制作用,
差异具有统计学意义,这表明两种药物对小鼠均有
明显的抗炎作用。
本实验以地奥司明为阳性对照药,对经结构改
造后获得的新化合物香叶木素 - 7 - O - β - D -葡
萄糖苷的抗炎作用进行对比研究。结果表明两者对
炎症均有较好的抑制作用,且后者效果更优。这为
药物的结构改造和新药研发提供了药理学依据。
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第 12 期 白庆云,梁 辉,袁功文,等:香叶木素 - 7 - O - β - D -葡萄糖苷的抗炎作用研究 第 37 卷