全 文 ：西　北　师　范　大　学　学　报 （自然科学版）　　　　　　 第４８卷２０１２年第１期　
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ）　　　　　　 Ｖｏｌ．４８　２０１２　Ｎｏ．１　
收稿日期：２０１１－１０－１４；修改稿收到日期：２０１１－１１－１４
基金项目：国家自然科学基金资助项目（３０９６０４６４）；西北师范大学知识与科技创新工程资助项目（ＮＷＮＵ－ＫＪＣＸＧＣ－０３－６５）
作者简介：丁兰 （１９６４—），女，四川德阳人，教授，博士，硕士研究生导师．主要研究方向为分子药理学及植物细胞工程．
Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｉｎｇｌａｎ＠ｎｗｎｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
虎刺醛对人早幼粒白血病细胞ＨＬ－６０的生长抑制、
周期阻滞、凋亡诱导及ＤＮＡ损伤作用
丁　兰，董　刚，周启银，郭　艳，刘国安
（西北师范大学 生命科学学院，甘肃 兰州　７３００７０）
摘　要：利用生长曲线法、流式细胞术、ＡＯ／ＥＢ双染法及单细胞凝胶电泳法，分别检测了蒽醌化合物虎刺醛对人早
幼粒白血病细胞 ＨＬ－６０的生长抑制、细胞周期阻滞、细胞凋亡诱导以及 ＤＮＡ 损伤能力．结果表明，２．５～１２．５
μｇ·ｍＬ
－１的虎刺醛对人早幼粒白血病细胞 ＨＬ－６０具有显著的生长抑制作用；不同浓度（５～４０μｇ·ｍＬ
－１）的虎刺醛，可
引起 ＨＬ－６０细胞Ｇ１ 期、Ｓ期和Ｇ２／Ｍ期周期阻滞；在２．５～１２．５μｇ·ｍＬ
－１浓度范围和２４～４８ｈ培养时间下，虎刺醛
可不同程度诱导 ＨＬ－６０细胞，其凋亡率达到显著水平（Ｐ＜０．０５）或极显著水平（Ｐ＜０．０１），且具有时间和浓度依赖性
关系；与对照组相比，药物处理组（５～１２．５μｇ·ｍＬ
－１）均有极显著性（Ｐ＜０．０１）的彗星率，这表明，该浓度条件下，
虎刺醛可较大程度地导致细胞核ＤＮＡ损伤，这可能是引起周期阻滞进而抑制细胞增殖，最终导致细胞凋亡的原因．
关键词：虎刺醛；人早幼粒白血病细胞 ＨＬ－６０；细胞毒性；周期阻止；凋亡；ＤＮＡ损伤
中图分类号：Ｑ　９４６．８　　　　文献标识码：Ａ　　　　文章编号：１００１－９８８Ⅹ（２０１２）０１－００８４－０７
Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄａｍｎａｃａｎｔｈａｌ　ｏｎ　ａｎｔｉ－ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，
ｃｅｌ　ｃｙｃｌｅ　ａｒｒｅｓｔ，ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ
ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ＨＬ－６０ｃｅｌｓ
ＤＩＮＧ　Ｌａｎ，ＤＯＮＧ　Ｇａｎｇ，ＺＨＯＵ　Ｑｉ－ｙｉｎ，ＧＵＯ　Ｙａｎ，ＬＩＵ　Ｇｕｏ－ａｎ
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ　７３００７０，Ｇａｎｓｕ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｃｕｒｖｅ　ａｓｓａｙ，ＦＣＭ　ａｎａｌｙｓｉｓ，ＡＯ／ＥＢ　ｄｏｕｂｌｅ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｓｉｎｇｌｅ　ｃｅｌ　ｇｅｌ
ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ａｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ，ｃｅｌ　ｃｙｃｌｅ　ａｒｒｅｓｔ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
ａｎｄ　ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ　ｏｆ　ｄａｍｎａｃａｎｔｈａｌ　ｏｎ　ｈｕｍａｎ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ＨＬ－６０ｃｅｌｓ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ
ｔｈａｔ　ｄａｍｎａｃａｎｔｈａｌ　ｅｘｈｉｂｉｔｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｃｅｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｈｕｍａｎ　ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ＨＬ－６０
ｃｅｌｓ　ａｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　２．５～１２．５μｇ·ｍＬ
－１；ｉｔ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｃｅｌ　ｃｙｃｌｅ　ａｒｒｅｓｔ　ｉｎ　Ｇ１，Ｓ　ｏｒ　Ｇ２／Ｍ　ｐｈａｓｅ
ｓｅｐａｒａｔｅｌｙ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｒａｎｇｅ　ｆｒｏｍ　５～４０μｇ·ｍＬ
－１；ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ａｌｓｏ　ｉｎｄｕｃｅｓ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ＨＬ－６０ｃｅｌｓ　ｗｉｔｈ　２４～４８ｈｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ａｎｄ　２．５～１２．５μｇ·ｍＬ
－１　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ，
ｔｈｅ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　ａｐｏｐｔｏｔｉｃ　ｃｅｌｓ　ｉｓ　ｉｎ　ａ　ｔｉｍｅ－ａｎｄ　ｄｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍａｎｎｅｒｓ；ｔｈｅ　ｃｏｍｅｔ－ｌｉｋｅ　ｃｅｌｓ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｒｅａｔｅｄ
ｇｒｏｕｐｓ（５～１２．５μｇ·ｍＬ
－１）ｉｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｉｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ
ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｅｘｅｒｔｓ　ａ　ｓｅｒｉｏｕｓ　ｄａｍａｇｅ　ｏｎ　ｃｅｌ　ｎｕｃｌｅｕｓ　ａｎｄ　ＤＮＡ．Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ　ｗｈｉｃｈ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｂｙ
ｄａｍｎａｃａｎｔｈａｌ　ｉｎ　ＨＬ－６０ｃｅｌｓ，ｉｎ　ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ，ｉｓ　ｐｒｏｂａｂｌｙ　ａ　ｒｅａｓｏｎ　ｃａｕｓｉｎｇ　ｃｅｌ　ｃｙｃｌｅ　ａｒｒｅｓｔ，ｃｅｌ
ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｅｌ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｄａｍｎａｃａｎｔｈａｌ；ｈｕｍａｎ　ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ｃｅｌｓ；ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ；ｃｅｌ　ｃｙｃｌｅ　ａｒｒｅｓｔ；
ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ
４８
　２０１２年第１期　　丁　兰等：虎刺醛对人早幼粒白血病细胞ＨＬ－６０的生长抑制、周期阻滞、凋亡诱导及ＤＮＡ损伤作用
　２０１２　Ｎｏ．１ Ｔｈｅ　ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄａｍｎａｃａｎｔｈａｌ　ｏｎ　ａｎｔｉ－ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｃｅｌ　ｃｙｃｌｅ　ａｒｒｅｓｔ，ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｏｆ　ＨＬ－６０ｃｅｌｓ
　　茜草科（Ｒｕｂｉａｃｅａｅ）植物全世界约有５００属
６０００余种，主要分布于热带和亚热带地区，其中
许多种类是中医传统用药，具有行血、止血、解热
镇痛等作用［１］，如茜草（Ｒｕｂｉａ　ｃｏｒｄｉｆｏｌｉａ　Ｌ）用于
治疗吐血、外伤出血、关节痹痛、跌打肿痛、肝炎
等症［２－４］．此科植物含有多种生物活性成分，其中
蒽醌化合物最为丰富．已有的研究结果证实，蒽醌
化合物具有抗氧化、抗炎、抗菌、抑制肿瘤细胞生
长和诱导肿瘤细胞凋亡的作用［５－９］．
匙萼木（Ｘａｎｔｈｏｐｈｙｔｕｍ　ａｔｏｐｖｅｎｓｉｓ　Ｐｉｅｒｒｅ）为茜
草科匙萼木属（Ｘａｎｔｈｏｐｈｙｔｕｍ）植物，分布于我国广
东、海南、云南等地，民间主要用于治疗黄疸肝
炎［１０］．本实验室对云南产匙萼木的化学成分进行了
系统的研究，从中分离得到８种蒽醌类化合物单体，
并对６种化合物的构效关系进行了探讨，其中虎刺
醛（１－甲氧基－２－醛基－３－羟基蒽醌）在８种分离化合物
中，得率最高，细胞毒性最强，尤其对 ＨＬ－６０细胞
株有更高的敏感性，其ＩＣ５０值为４．６±０．２，具有进
一步研究的价值［１１］．据报道，虎刺醛具有多种生物
学活性，如抗菌、抑制肿瘤细胞增殖［６］、抑制
ＨＩＶ－１病毒蛋白Ｒ诱导的细胞死亡［１２］，并可通过激
活ｐ３８ＭＡＰ激酶途径导致死亡受体途径相关蛋白和
ｃａｓｐａｓｅ　８激活，线粒体释放细胞色素ｃ，激活
ｃａｓｐａｓｅ　３后最终使人肝腺癌细胞ＳＫＨｅｐ　１凋亡［１３］．
有关虎刺醛抗肿瘤研究的报道很少，尤其是对早幼
粒白血病细胞株 ＨＬ－６０的周期阻滞、凋亡诱导及其
机理的研究还未见报道．本实验检测了虎刺醛对
ＨＬ－６０细胞株的生长抑制、周期阻滞和凋亡诱导，
并对其机理进行了初步探讨，为虎刺醛和相关化合
物的抗白血病研究提供科学依据．
１　材料与方法
１．１　材料
蒽醌化合物虎刺醛（图１）由本实验室从云南产
匙萼木中分离得到，并采用现代波谱学方法（红外、
质谱、核磁共振等）对其结构进行了鉴定［１１］．单体
化合物虎刺醛使用前以ＤＭＳＯ（二甲基亚砜）溶解，
４℃下保存待用．
１．２　试剂及仪器
ＲＭＰＩ－１６４０培养基，溴化乙啶（ＥＢ），吖啶橙
（ＡＯ），台盼兰均购自Ｓｉｇｍａ公司；胰蛋白酶购自
Ａｍｒｅｓｃｏ公司；新生小牛血清购自中国杭州四季青
生物技术有限公司；其它试剂均为中国产分析纯．
美国Ｃｏｓｔａｒ　６孔和２４孔细胞培养板；美国Ｆｏｒｍａ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　ＣＯ２ 细胞培养箱；倒置显微镜（Ｏｌｙｍｐｕｓ）；
荧光显微镜（Ｏｌｙｍｐｕｓ）．
图１　虎刺醛的化学结构式
Ｆｉｇ　１ Ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｄａｍｎａｃａｎｔｈａｌ
１．３　细胞培养
人早幼粒白血病细胞株 ＨＬ－６０引自兰州大学生
命科学学院，培养于含１０％新生胎牛血清的ＲＰＭＩ－
１６４０培养基（加１００Ｕ·ｍＬ－１青霉素和１００Ｕ·ｍＬ－１
链霉素）中，置于ＣＯ２ 体积分数为５．０％的３７℃饱
和湿度的培养箱中培养．
１．４　台盼蓝排染法检测ＨＬ－６０细胞的生长
根据Ｌｅｔａｉｏｖ等［１４］的方法，并稍作修改．取对
数生长期ＨＬ－６０的细胞，以５×１０４ 个·ｍＬ－１接种于
直径６０ｍｍ培养板中，每孔０．５ｍＬ，置于３７℃、
５．０％ＣＯ２ 的饱和湿度培养箱中培养２４ｈ后加药．
虎刺醛终浓度分别为０，２．５，５．０，７．５，１０和１２．５μｇ·
ｍＬ－１，培养基中ＤＭＳＯ终浓度不超过０．２％；每隔
１２ｈ收集细胞悬液，加入０．４％的台盼兰溶液直接
进行计数．对照组及实验组均设３个重复．
细胞增殖抑制率和细胞致死率的计算公式如下：
抑制率（％）＝ ［（Ｋ－Ｅ）／（Ｋ－Ｋ０）］×１００％，
致死率（％）＝ ［１－（Ｅ／Ｋ０）］×１００％，
其中，Ｋ０为加药时细胞的数目；Ｋ为在指定时间对照
组的细胞数目；Ｅ为在指定时间加药组的细胞数目．
１．５　流式细胞术分析细胞周期的变化
将浓度为１×１０５ 个·ｍＬ－１的 ＨＬ－６０细胞悬液
接种于培养瓶中培养２４ｈ后，分别用浓度为５，１０，
１２．５，１５，３０，４０μｇ·ｍＬ
－１的虎刺醛，于１２，２４，３６，
４８ｈ和６０ｈ后分别收集细胞；用预冷ＰＢＳ洗２
次，７５％的冷乙醇固定过夜；离心去除乙醇，ＰＢＳ
洗两遍，用１０μｇ·ｍＬ
－１　ＰＩ（碘化丙啶）溶液（ＰＢＳ
溶液，含 ０．２％ Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００，０．１ ｍｍｏｌ·Ｌ－１
ＥＤＴＡ（乙二胺四乙酸）和１００μｇ·ｍＬ
－１　ＲＮａｓｅ　Ａ）
于室温、避光染色３０ｍｉｎ；用ＰＢＳ洗去染液，于
流式细胞仪上检测，并分析细胞周期分布．
５８
西　北　师　范　大　学　学　报 （自然科学版）　　 第４８卷　
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ）　　 Ｖｏｌ．４８　
１．６　吖啶橙／溴化乙啶荧光双染法检测虎刺醛诱导
ＨＬ－６０细胞的凋亡
取对数生长期的 ＨＬ－６０细胞，按每孔３００　０００
个细胞加入到６孔板中预培养２４ｈ后，加入终浓度
为０，２．５，５，７．５，１０和１２．５μｇ·ｍＬ
－１的虎刺醛，其中
ＤＭＳＯ终浓度不超过０．２％；药物处理２４，４８和７２ｈ
后，以５００ｒ·ｍｉｎ－１收集细胞，并用ＰＢＳ洗３次；取
９５μＬ细胞悬液（１×１０
６ 个·ｍＬ－１）与５μＬ　ＡＯ／ＥＢ染
液（１００μｇ·ｍＬ
－１）以１∶１混匀，涂片，于荧光显微镜
下观察并且计数至少３００个细胞．荧光显微镜激发
光波长为５７０ｎｍ．实验重复３次．
细胞凋亡率由以下公式计算：
ＡＥ＋ＡＬ
Ｖ＋Ｎ＋ＡＥ＋ＡＬ ×
１００％，
其中，Ｖ 为活细胞（核染色质着绿色并成正常结
构）；ＡＥ 为早期凋亡细胞（核染色质着绿色呈固缩
状或圆珠状），ＡＬ 为晚期凋亡细胞（核染色质为橘
红色并呈固缩状或圆珠状），Ｎ 为非凋亡的死亡细
胞（核染色质着橘红色并呈正常结构）．
１．７　彗星电泳检测虎刺醛对ＨＬ－６０细胞的损伤
彗星电泳根据Ｓｉｎｇｈ等［１５］的方法，稍加修改．
将浓度１×１０５ 个·ｍＬ－１细胞悬液接种于６孔板，每
孔３ｍＬ，培养２４ｈ后加药；虎刺醛终浓度分别为
０，５，７．５，１０和１２．５μｇ·ｍＬ
－１，ＤＭＳＯ终浓度不超
过０．２％；药物处理２４，４８ｈ后，将细胞悬液与
０．７％的低熔点琼脂糖于３７℃下混匀，滴加在已铺
了一层０．３％常熔点琼脂糖的载玻片上，加盖玻片
使其均匀铺开，置４℃使胶凝固１５ｍｉｎ；去掉盖
玻片，水平放置于细胞裂解液（２．５ｍｏｌ·Ｌ－１　ＮａＣｌ，
１００ｍｍｏｌ·Ｌ－１　Ｎａ２ＥＤＴＡ，１０ｍｍｏｌ·Ｌ－１　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ
ｐＨ　１０，１％肌氨酸钠，用前加１％Ｔｒｉｔｏｎ和１％ＤＭＳＯ）
中，于４℃条件下放置１ｈ以上；取出后置于盛有电
泳缓冲液（１ｍｍｏｌ·Ｌ－１　ＥＤＴＡ，３００ｍｍｏｌ·Ｌ－１　ＮａＯＨ）
的水平电泳槽中，使ＤＮＡ解旋２０ｍｉｎ后进行电泳
（电流为３００ｍＡ，电压３０Ｖ）；２５ｍｉｎ后取出，以缓
冲液（０．４ｍｍｏｌ·Ｌ－１　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ，ｐＨ７．５）中和；滴加
２０μＬ染色剂溴化乙锭，染色２～２０ｍｉｎ，加盖玻
片，置于荧光显微镜下观察照相．每组３张片子，
每张片子至少随机计５０个细胞，其中尾长大于头
部半径的认为是ＤＮＡ损伤细胞［１６］．实验结果以彗
星率％表示．
１．８　数据统计
所有实验数据以 Ｍｅａｎ±ＳＤ形式表示，对照
组与实验组的差异用ＳＰＳＳ　１１．５分析．Ｐ＜０．０５为
显著性差异，Ｐ＜０．０１为极显著性差异．
２　结果
２．１　虎刺醛对ＨＬ－６０细胞生长的抑制作用
采用生长曲线法检测虎刺醛在６０ｈ内对 ＨＬ－
６０细胞生长的抑制作用，结果如图２所示．在药
物处理时间相同的条件下（１２，２４，３６，４８和６０ｈ），
随着药物浓度（０，２．５，５．０，７．５，１０和１２．５μｇ·
ｍＬ－１）的增加，ＨＬ－６０细胞的生长抑制作用逐渐增
强；当药物处理浓度为２．５，５．０和７．５μｇ·ｍＬ
－１
时，随着处理时间的延长，虎刺醛对 ＨＬ－６０细胞
的生长抑制率逐渐升高，该现象在药物处理３６ｈ
后表现得尤为明显；当药物浓度为１０μｇ·ｍＬ
－１时，
各处理组细胞的生长处于完全抑制状态（抑制率为
１００％）；当药物浓度为１２．５μｇ·ｍＬ
－１时，处理时
间在３６ｈ前，处理组细胞的生长处于完全抑制状
态（抑制率为１００％），处理时间在３６～６０ｈ时，有
部分细胞死亡，致死率分别达到３７．６％和５７．６％．
图２　虎刺醛对 ＨＬ－６０细胞的生长抑制作用
Ｆｉｇ　２ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ＨＬ－６０ｃｅｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ
ｔｏ　ｄａｍｎａｃａｎｔｈａｌ　ａｔ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｉｍｅｓ
２．２　虎刺醛对ＨＬ－６０细胞周期的影响
为了检测虎刺醛对 ＨＬ－６０细胞的生长抑制是
否涉及细胞周期阻滞，采用流式细胞术对各处理组
的细胞周期进行检测，结果如图３所示．当药物浓
度为５μｇ·ｍＬ
－１时，仅在１２ｈ处理组表现了较明
显的Ｓ期阻滞，而其它时间处理组差异不显著（图
３（ａ））；当药物浓度为１０μｇ·ｍＬ
－１时，在１２ｈ处
理组表现了较明显的Ｇ１ 期阻滞，同时在２４，３６和
４８ｈ处理组出现了轻微的Ｓ期阻滞（图３（ｂ））；当
药物浓度为１２．５μｇ·ｍＬ
－１时，各处理组 Ｇ１ 细胞
百分率与对照组相比显著升高，均表现了明显的
Ｇ１ 周期阻滞，对照组 Ｇ１ 细胞为４４．６％，处理组
分别为５７．９％，６１．４％，６２．２％，６３．６％和６２．９％
６８
　２０１２年第１期　　丁　兰等：虎刺醛对人早幼粒白血病细胞ＨＬ－６０的生长抑制、周期阻滞、凋亡诱导及ＤＮＡ损伤作用
　２０１２　Ｎｏ．１ Ｔｈｅ　ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄａｍｎａｃａｎｔｈａｌ　ｏｎ　ａｎｔｉ－ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｃｅｌ　ｃｙｃｌｅ　ａｒｒｅｓｔ，ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｏｆ　ＨＬ－６０ｃｅｌｓ
（图３（ｃ））；药物浓度为１５μｇ·ｍＬ
－１时结果与药物
浓度为１２．５μｇ·ｍＬ
－１时的结果相类似，即有明显
的Ｇ１ 周期阻滞现象（图３（ｄ））；当药物浓度为
３０μｇ·ｍＬ
－１时，处理组细胞出现了较明显的Ｓ期
阻滞，在０，１２，２４，３６，４８和６０ｈ时，其Ｓ期细胞
的百分比分别为４９．４％，５３．３％，５３．９％，５３．６％，
５６．５％和５６．９％，而 Ｇ１ 期细胞从４４．６％降低为
３４．７％（图３（ｅ））；当药物浓度为４０μｇ·ｍＬ
－１时，
处理组细胞出现了Ｇ２／Ｍ 期阻滞，在０，１２，２４，３６，
４８和６０ｈ时，Ｇ２／Ｍ 细胞百分比分别为５．９％，
８％，１４．５％，８．２％，２１．６％和１７．９％．Ｓｕｂ－Ｇ１ 期
细胞在３６ｈ后出现，从０％增加到５．８％．Ｇ１ 和Ｓ
期细胞比例均降低（图３（ｆ））．
２．３　虎刺醛诱导ＨＬ－６０细胞凋亡
采用ＡＯ／ＥＢ荧光双染法，对不同浓度虎刺醛诱
导ＨＬ－６０细胞凋亡进行检测．该方法利用ＤＮＡ对与
其结合的荧光染料ＡＯ及ＥＢ有不同的吸收以及被染
的细胞核中染色质浓缩的形态学特点，从而区分活细
胞、凋亡细胞及坏死细胞．经吖啶橙和溴化乙啶双染
后，活细胞呈现均匀的绿色（图４Ａ）；早期凋亡细胞
呈绿色，但由于染色质凝聚或核裂解，细胞核中有鲜
绿色的斑点图（图４Ｂ）；晚期凋亡细胞呈橙色，其核凝
聚并常常裂解（图４Ｂ）；坏死细胞呈橙色，没有染色质
凝聚，具备活细胞的核形态．
图３　流式细胞术（ＦＣＭ）分析虎刺醛对 ＨＬ－６０细胞周期的影响
Ｆｉｇ　３ Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄａｍｎａｃａｎｔｈａｌ　ｏｎ　ｃｅｌ　ｃｙｃｌｅ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｉｎ　ＨＬ－６０ｃｅｌｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ（ＦＣＭ）
７８
西　北　师　范　大　学　学　报 （自然科学版）　　 第４８卷　
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ）　　 Ｖｏｌ．４８　
Ａ．对照组（Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ）；Ｂ．处理组（Ｔｒｅａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ）；Ｖ．活细胞（Ｖｉａｂｌｅ　ｃｅｌｓ）；ＥＡ．早期凋亡细胞（Ｅａｒｌｙ　ａｐｏｐｔｏｔｉｃ
ｃｅｌｓ）；ＬＡ．晚期凋亡细胞（Ｌａｔｅ　ａｐｏｐｔｏｔｉｃ　ｃｅｌｓ）；Ｎ．坏死细胞（ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｃｅｌｓ）．
图４　ＡＯ／ＥＢ双染法检测虎刺醛诱导 ＨＬ－６０细胞凋亡过程中的形态学变化（×２００）
Ｆｉｇ　４ Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ＨＬ－６０ｃｅｌｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｄａｍｎａｃａｎｔｈａｌ　ｗｉｔｈ　ＡＯ／ＥＢ　ｄｏｕｂｌｅ　ｓｔａｉｎｉｎｇ（×２００）
　　不同浓度的虎刺醛均能诱导 ＨＬ－６０细胞凋亡，
其凋亡率呈现时间和浓度依赖关系，即，相同浓度
条件下，处理时间越长，凋亡率越高；相同时间条
图５　ＡＯ／ＥＢ双染法检测虎刺醛诱导 ＨＬ－６０细胞凋亡
Ｆｉｇ　５ Ｔｈｅ　ＡＯ／ＥＢ　ｄｏｕｂｌｅ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ
ｉｎ　ＨＬ－６０ｃｅｌｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｄａｍｎａｃａｎｔｈａｌ
件下，浓度越高，凋亡率越高（图５）．除了２４ｈ时
２．５μｇ·ｍＬ
－１药物处理组的细胞凋亡率与对照组相
比没有显著性差异（Ｐ＜０．０５）外，其余所有处理组
的细胞凋亡率与对照组相比差异极显著（Ｐ＜
０．０１）．最高药物浓度（１２．５μｇ·ｍＬ
－１）处理 ＨＬ－６０
细胞７２ｈ后，其细胞凋亡率已高达５３．３３％．
２．４　虎刺醛对ＨＬ－６０细胞ＤＮＡ损伤的影响
彗星电泳又称单细胞凝胶电泳（ＳＣＧＥ）．若药
物等因素导致细胞核ＤＮＡ的断裂时，细胞核在电
泳条件下，其断裂ＤＮＡ片段的移动速度将高于细
胞核部分，从而形成彗星状图形；尾部越长或面积越
大，表明细胞核ＤＮＡ损伤程度越高，而没有ＤＮＡ
损伤的细胞核成圆形（图６）．
不同浓度（０，５．０，７．５，１０和１２．５μｇ·ｍＬ
－１）虎
刺醛处理ＨＬ－６０细胞后，其细胞核ＤＮＡ表现了不
　　　　　　　　　　　　　Ａ．对照组（Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ）　　　　　Ｂ．药物处理组（Ｔｒｅａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ）
图６　彗星电泳检测虎刺醛诱导的 ＨＬ－６０细胞ＤＮＡ损伤（×２００）
Ｆｉｇ　６ ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ　ｉｎ　ＨＬ－６０ｃｅｌｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｄａｍｎａｃａｎｔｈａｌ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｃｏｍｅｔ　ａｓｓａｙ（×２００）
８８
　２０１２年第１期　　丁　兰等：虎刺醛对人早幼粒白血病细胞ＨＬ－６０的生长抑制、周期阻滞、凋亡诱导及ＤＮＡ损伤作用
　２０１２　Ｎｏ．１ Ｔｈｅ　ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄａｍｎａｃａｎｔｈａｌ　ｏｎ　ａｎｔｉ－ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｃｅｌ　ｃｙｃｌｅ　ａｒｒｅｓｔ，ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｏｆ　ＨＬ－６０ｃｅｌｓ
同程度的损伤（图７）．在２４ｈ和４８ｈ处理组中，
ＨＬ－６０细胞的ＤＮＡ损伤率分别随药物浓度的增加
而增加，表现了时间及浓度依赖性关系，并且，每
一处理组的损伤率与对照组相比差异极显著（Ｐ＜
０．０１）．当处理时间为２４ｈ和４８ｈ时，不同浓度
（５．０，７．５，１０和１２．５μｇ·ｍＬ
－１）下的彗星率分别为
１７．３％ 和 １７．５％，２８．３％ 和 ３８．６％，３７．４％ 和
５８．４％，４５．６％和６５．８％．
图７　虎刺醛对 ＨＬ－６０细胞的ＤＮＡ损伤作用
Ｆｉｇ　７ Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄａｍｎａｃａｎｔｈａｌ　ｏｎ　ｔｈｅ　ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ
ｏｆ　ＨＬ－６０ｃｅｌｓ　ｖｉａ　ｃｏｍｅｔ　ａｓｓａｙ
３　讨论
肿瘤是一种细胞生长失调和细胞凋亡受到阻碍
的疾病．抑制肿瘤细胞生长和诱导细胞凋亡由信号
通路和转录因子的网络所调控，这些信号通路和转
录因子可能是肿瘤治疗的靶分子．有些抗肿瘤药物
能通过干扰细胞周期从而导致细胞死亡［１７－２０］，不同
浓度和不同条件下，虎刺醛对体外培养的 ＨＬ－６０
细胞表现了明显的生长抑制作用，并且有时间－浓
度依赖效应（图２）．较低浓度（２．５，５．０，７．５μｇ·
ｍＬ－１）药物处理组的 ＨＬ－６０细胞表现出明显的增
殖抑制现象．较高浓度（１０和１２．５μｇ·ｍＬ
－１）药物
使 ＨＬ－６０细胞的生长受到完全抑制，并在３６ｈ
后，有部分细胞死亡．流式细胞术及ＡＯ／ＥＢ双染
法的进一步检测结果表明，上述浓度范围内，处理
细胞有明显的周期阻滞和一定比例细胞凋亡发生，
且随着药物浓度的增加凋亡率升高．上述３组实验
证实，蒽醌化合物虎刺醛对 ＨＬ－６０细胞有显著的
细胞毒性作用，并能通过诱导细胞凋亡途径致
ＨＬ－６０细胞死亡．
由外界因子引起的ＤＮＡ损伤可通过细胞周期
检验点使细胞处于周期阴滞状态，以确保细胞有足
够的时间启动修复机制，对损伤ＤＮＡ进行修复，
如若不能进行成功修复，细胞会随即启动凋亡途
径，致细胞死亡［２１，２２］．目前，临床所用的许多抗
肿瘤药物可以使细胞在 Ｇ０／Ｇ１，Ｓ或 Ｇ２／Ｍ 期阻
滞，最终导致周期阻滞细胞凋亡［２３－２７］．上述彗星电
泳、流式细胞术及 ＡＯ／ＥＢ双染法的实验结果证
明，５．０～１２．５μｇ·ｍＬ
－１虎刺醛处理 ＨＬ－６０细胞
２４ｈ和４８ｈ后均能显著地损伤细胞核ＤＮＡ（图７），
该损伤极可能进一步导致不同浓度处理条件下
ＨＬ－６０细胞的Ｇ１ 期阻滞、Ｓ期阻滞或 Ｇ２ 期阻滞
（图３），当这些阻滞不能被解除时，最终导致了
ＨＬ－６０细胞凋亡的发生（图５）．
本实验中，不同浓度的虎刺醛引起不同时期的
细胞周期阻滞（Ｇ１ 期阻滞、Ｓ期阻滞和Ｇ２ 期阻滞）
现象．目前，对于不同浓度药物可诱导不同时期细
胞周期阻滞的机理仍然不清．细胞ＤＮＡ损伤可通
过细胞内信号途径，使肿瘤抑制蛋ｐ５３蛋白可激活
ＷＡＦ１／ＣＩＰ１／ｐ２１基因的表达，从而引起细胞周期
阻滞，启动ＤＮＡ损伤修复机制，使ＤＮＡ损伤可
以修复［２８］．不同浓度的虎刺醛诱导 ＨＬ－６０细胞不
同周期阻滞的原因是否与ｐ５３基因或相关蛋白有
关，尚需要进一步的研究．
Ｆｒａｎｋｆｕｒｔ等指出，如果一种化合物能通过诱
导细胞凋亡而阻滞肿瘤细胞的生长，则该化合物具
有抗肿瘤的潜力［２０，２９］．因此，从匙萼木中提取的
蒽醌化合物虎刺醛可被视为具有研究价值的抗白血
病先导化合物．当然，虎刺醛抑制 ＨＬ－６０细胞生
长，诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡的分子机制，尤
其是细胞信号通路相关分子的明确仍需要更进一步
研究．
参考文献：
［１］　江劲武．刮目相看茜草科（上）［Ｊ］．植物杂志，
２００１，１（５）：２２．
［２］　杨胜利，刘发．茜草的药理作用及应用实例［Ｊ］．中
西医结合杂志，１９９５，８（８）：５８８．
［３］　唐政，黎磊石，俞雨生．茜草双酯治ＩｇＡ肾病对血
的影响［Ｊ］．实用内科杂志，１９９８，８（８）：１４２．
［４］　李筠．重用茜草、茜草治疗慢性肝炎高γ球蛋白血
症 ［Ｊ］．中医杂志，１９９３，３４（１０）：６０．
［５］　ＮＧ　Ｔ　Ｂ，ＬＩＵ　Ｆ，ＣＨＥＮＧ　Ｃ　Ｈ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．
Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｃｉｎａｌ
ｈｅｒｂ　Ａｓｔｅｒ　ｔａｔａｒｉｃｕｓ［Ｊ］．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
ａｎｄ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　Ｐａｒｔ　Ｃ，２００３，１３６：１０９－１１５．
［６］　ＫＡＮＯＫＭＥＤＨＡＫＵＬ　Ｋ，ＫＡＮＯＫＭＥＮＤＨＡＫＵＬ
Ｓ， ＰＨＡＴＣＨＡＮＡ　 Ｒ． Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　 ａｃｔｉｖｉｔｙ　 ｏｆ
９８
西　北　师　范　大　学　学　报 （自然科学版）　　 第４８卷　
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ）　　 Ｖｏｌ．４８　
Ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ　 ａｎｄ　 Ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｏｉｄｓ　 ｆｒｏｍ
Ｐｒｉｓｍａｔｏｍｅｒｉｓ　 ｆｒａｇｒａｎｓ ［Ｊ ］． Ｊｏｕｒｎａｌ　 ｏｆ
Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００５，１００：２８４－２８８．
［７］　ＬＥＮＴＡ　Ｂ　Ｎ，ＷＥＮＩＧＥＲ　Ｂ，ＡＮＴＨＥＡＵＭＥ　Ｃ，
ｅｔ　ａｌ．Ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｓｔｅｍ　ｂａｒｋ　ｏｆ
ｓｔｅｒｅｏｓｐｅｒｍｕｍ　ｚｅｎｋｅｒｉ　ｗｉｔｈ　ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ［Ｊ］．
Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００７，６８：１５９５－１５９９．
［８］　ＫＵＯ　Ｙ　Ｃ，ＳＵＮ　Ｃ　Ｍ，ＯＵ　Ｊ　Ｃ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌ
ｇｒｏｗｔｈ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｆｒｏｍ　ｐｏｌｙｇｏｎｕｍ　ｈｙｐｏｌｅｕｃｕｍ　Ｏｈｗｉ
［Ｊ］．Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９９７，６１：２３３５－２３４４．
［９］　ＳＲＩＮＩＶＡＳ　Ｇ，ＡＮＴＯ　Ｒ　Ｊ，ＳＲＩＮＩＶＡＳ　Ｐ，ｅｔ　ａｔ．
Ｅｍｏｄｉｎ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｃｅｒｖｉｃａｌ　ｃａｎｃｅｒ
ｃｅｌｓ　ｔｈｏｕｇｈ　ｐｏｌｙ（ＡＰＤ－ｒｉｂｏｓｅ）ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｌｅａｖａｇｅ
ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｓｐａｓｅ－９［Ｊ］．Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ
Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００３，４７３：１１７－１２５．
［１０］　中国植物志编辑委员会．中国植物志［Ｍ］．北京：
科学出版社，１９９９．
［１１］　周启银，丁兰，张琼．等．匙萼木中六种蒽醌化合
物构效关系的研究［Ｊ］．西北师范大学学报：自然科
学版，２００８，４４（５）：７４－７７．
［１２］　ＫＡＭＡＴＡ　Ｍ，ＷＵ　Ｒ　Ｐ，ＡＮ　Ｄ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｅｌ－
ｂａｓｅｄ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｓｃｒｅｅｎ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｓ　ｄａｍｎａｃａｎｔｈａｌ
ａｓ　ａｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｏｆ　ＨＩＶ－１Ｖｐｒ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃｅｌ　ｄｅａｔｈ［Ｊ］．
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　 ａｎｄ　 Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ　 Ｒｅｓｅａｒｃｈ
Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２００６，３４８：１１０１－１１０６．
［１３］　ＬＩＮ　Ｆｅｎｇ－ｌａｎｇ， ＨＳＵ　Ｊｕｅ－ｌｉａｎｇ，ＬＩＵ　Ｈｕｎｇ－ｊｅｎ
ｅｔ　ａｌ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐ３８ ＭＡＰＫ　ｂｙ　ｄａｍｎａｃａｎｔｈａｌ
ｍｅｄｉａｔｅｓ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ＳＫＨｅｐ　１ｃｅｌｓ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｔｈｅ
ＤＲ５／ＴＲＡＩＬ　ａｎｄ　ＴＮＦＲ１／ＴＮＦ－αａｎｄ　ｐ５３ｐａｔｈｗａｙｓ
［Ｊ］．Ｅｕｒｏｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１１，
６５０：１２０－１２９．
［１４］　ＬＥＴＡＩＯＶＳ，ＪＡＮＴＯＶＳ，ＣˇＩＰＫ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．
Ｂｅｒｂｅｒｉｎｅ－ａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｄ
ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ／ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｕ９３７ａｎｄ　Ｂ１６
ｃｅｌｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００６，２３９：２５４－２６２．
［１５］　ＳＩＮＧＨ　Ｎ　Ｐ，ＭＣＣＯＹ　Ｍ　Ｔ，ＴＩＣＥ　Ｒ　Ｒ，ｅｔ　ａｌ．Ａ
ｓｉｍｐｌｅ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ　ｆｏｒ　ｌｏｗ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ　ｉｎ
ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ　ｃｅｌｓ［Ｊ］．Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｃｅｌｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，
１９８８，１７５：１８４－１９１．
［１６］　ＥＶＥＲＥＴＴ　Ｓ　Ｍ，ＷＨＩＴＥ　ＫＬＭ，ＳＣＨＯＲＡＨ　Ｃ　Ｊ，
ｅｔ　ａｌ．Ｉｎ　ｖｉｖｏ　ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ　ｉｎ　ｇａｓｔｒｉｃ　ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ｃｅｌｓ
［Ｊ］．Ｍｕｔａｔｉｏｎ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ－Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ　ａｎｄ
Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ，２００４，６８：７３－８５．
［１７］　ＴＨＯＭＰＳＯＮ　Ｃ　Ｂ．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ
ａｎｄ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９５，２６７：
１４５６－１４６２．
［１８］　ＫＩＮＬＯＣＨ　Ｒ　Ａ，ＴＲＥＨＲＮＥ　Ｊ　Ｍ，ＦＵＲＮＥＳＳ　Ｌ
Ｍ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．
Ｔｒｅｎｄｓ　ｉｎ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９９９，２０：３５－
４２．
［１９］　ＤＩＲＳＣＨ　Ｖ　Ｍ，ＡＮＴＩＳＰＥＲＧＥＲ　Ｄ　Ｓ，ＨＥＮＴＺＥ　Ｈ，
ｅｔ　ａｌ．Ａｊｏｅｎｅ，ａｎ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ａｎｔｉ－ｌｅｕｋｅｍｉｃ　ｄｒｕｇ：
ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｃｅｌ　ｄｅａｔｈ［Ｊ］．Ｌｅｕｋｅｍｉａ，２００２，１６：
７４－８３．
［２０］　周启银．匙萼木可蒽醌类化合物体外抗肿瘤活性研
究［Ｄ］．兰州：西北师范大学，２００９．
［２１］　ＲＯＯＳ　Ｗ　Ｐ，ＫＡＩＮＡ　Ｂ．ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃｅｌ
ｄｅａｔｈ　ｂｙ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２００６，１２：４４０－４５０．
［２２］　ＷＯＯＤ　Ｒ　Ｄ．ＤＮＡ　ｒｅｐａｉｒ　ｉｎ　ｅｕｋａｒｙｏｔｅ［Ｊ］．Ａｎｎｕａｌ
Ｒｅｖｉｅｗｓ　ｉｎ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９６，６５：１３５－１６７．
［２３］　ＯＲＲＥＭ　Ｄ　Ｋ，ＰＥＴＥＲＳＥＮ　Ｌ　Ｎ，ＢＯＨＲ　Ｖ　Ａ．
Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ　ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ　Ｓｐｈａｓｅ　ａｎｄ　Ｇ２
ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｃｅｌｌ，１９９７，８：１１２９－１１４２．
［２４］　ＦＵＪＩＭＯＴＯ　Ｋ，ＨＯＳＯＴＡＮＩ　Ｒ，ＤＯＩ　Ｒ，ｅｔ　ａｌ．
Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｅｌ－ｃｙｃｌｅ　ａｒｒｅｓｔ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｂｙ　ａ　ｎｏｖｅｌ
ｒｅｔｉｎｏｂｅｎｚｏｉｃ－ａｃｉｄ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ，ＴＡＣ－１０１，ｉｎ　ｈｕｍａｎ
ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ－ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｓ［Ｊ］．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ
Ｃａｎｃｅｒ，１９９９，８１：６３７－６４４．
［２５］　ＫＥＳＳＥＬ　Ｄ，ＬＵＯ　Ｙ．Ｃｅｌｓ　ｉｎ　ｃｒｙｐｔｏｐｈｙｃｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ
ｃｅｌ－ｃｙｃｌｅ　ａｒｒｅｓｔ　ａｒｅ　ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ　ｔｏ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．
Ｃａｎｃｅｒ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，２０００，１５１：２５－２９．
［２６］　ＣＯＵＬＴＡＳ　Ｌ，ＳＴＲＡＳＳＥＲ　Ａ． Ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｄａｍａｇｅ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃｅｌ　ｄｅａｔｈ［Ｊ］．
Ａｐｏｔｏｓｉｓ，２００５，５：４９１－５０７．
［２７］　ＭＵＲＲＡＹ　Ａ　Ｗ．Ｒｅｖｉｓｉｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃｅｌ　ｃｙｃｌｅ：ｃｙｃｌｉｎｓ
ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，２００４，１１６：２２１－２３４．
［２８］　ＳＨＡＯ　Ｌ，ＨＩＴＴＥＬＭＡＮ　Ｗ　Ｎ，ＬＩＮ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．
Ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｏｆ　ｃｅｌ　ｃｙｃｌｅ　ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔｓ　ａｎｄ　ＤＮＡ　ｒｅｐａｉｒ
ｓｙｓｔｅｍ　ｐｒｅｄｉｓｐｏｓｅ　ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ　ｔｏ　ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ　ｃａｎｃｅｒ
［Ｊ］．Ｍｕｔａｔｉｏｎ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００６，６０２：１４３－１５０．
［２９］　ＦＲＡＭＬＦＩＲＴ　Ｏ　Ｓ，ＫＲＩＳＨＡＮ　Ａ．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ－ｂａｓｅｄ
ｄｒｕｇ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ　ｔｏｘｉｃｉｔｙ　ｔｏ
ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｓ［Ｊ］．Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　Ｄｒｕｇｓ，２００３，１４：５５５－
５６１．
（责任编辑　俞诗源）
０９