全 文 ：基层医学论坛2008年第12卷12月中旬刊
*通讯作者：程齐来
六月雪中齐墩果酸提取工艺的研究
陈达林 1 熊绵丽 2 程齐来 3*
（1 赣州卫生学校，江西 赣州341000）（2 赣州市市立医院，江西 赣州341000）（3 赣南医学院，江西 赣州341000）
【摘要】目的 筛选六月雪中齐墩果酸的最佳提取工艺。方法 采用正交设计L9（34）考察药材粒度、
乙醇用量、乙醇浓度和提取次数4个因素，用高效液相色谱法测定六月雪中齐墩果酸的含量。结果 六月雪中
齐墩果酸的最佳提取工艺为A3B2C2D1，即100目的药材，加入12倍的60%乙醇水浴回流1次（2h）。结论 本
实验方法工艺合理，质量稳定，可为工业化生产提供理论依据。
【关键词】六月雪 齐墩果酸 提取工艺 正交设计
Study of extraction technique about oleanlic acid from serissa serissoides
Chen Dalin1，Xiong Mianli2，Cheng Qilai3.1.The health school of Ganzhou，Ganzhou，Jiangxi，341000；2.Dept.of
Pharmacy，The municipal hospital of Ganzhou，Ganzhou，Jiangxi，341000；3.Dept.of Pharmacy，Gannan Medical
College，Ganzhou，Jiangxi，341000
【Abstract】 Objective TooptimizetheconditionsofextractiontechniqueofoleanlicacidfromSerissaSeris-
soides.Methods Totakeherbalgranularity，ethanolusage，ethanolconcentrationandextractiontimesasevaluation
factors by orthogonal design L9（34）and determine the content of oleanlic acid by HPLC.Results The optimum
conditionsofextractiontechniquewereA3B2C2D1asfollows:toadd100meshherbalpowderto12-fold 60%ethonal
andrefluxonetime（2houreachtime）.Conclusions Thetechniquewasreasonablewithstablequalityanditcould
providetheoreticalfoundationforindustrializationproduction.
【Key Words】SerissaSerissoides Oleanlicacid Extractiontechnique Orthogonaldesign
六月雪系茜草科植物六月雪 SerissaSerissoides的干燥全
草，全国各地均产，江西赣南地区资源丰富，为常用民间草药，
早在《本草拾遗》中就有记载：能活血、凉血、疏肝泻湿、消肿止
痛。主要用于急慢性肝炎、黄疸、流行性腮腺炎、肾性水肿、血尿
及高血压等症[1]。另据药理及临床报道六月雪对急性黄疸型肝
炎及高血压有明显疗效，并无毒性反应[2~4]，齐墩果酸（Oleanlia
acid）则是六月雪中治疗肝炎的主要有效成分。笔者采用正交试
验设计，以药材六月雪中齐墩果酸含量为参考指标，对其提取
工艺进行了初步探讨，以期为该药材工业化生产（制剂工艺）提
供理论依据。
1 材料
1.1 仪器 美国Agilent1100高效液相色谱仪，DAD检测器，
色谱柱为ZORBAXEclipseXDB-C18（4.6mm×150mm，5μm），
20μl手动六通阀微量进样器；RE-52AA旋转蒸发仪（上海亚荣
生化仪器厂生产）；Academic Millepore 超纯水发生器；FA2104
电子天平（上海良平仪器仪表有限公司生产）等。
1.2 试药 六月雪生药购自江西樟树药材市场。齐墩果
酸对照品购自中国药品生物制品检定所，编号为
110709-200304，供含量测定用；使用超纯水，其余试剂均为分
析纯。
2 方法与结果
2.1 正交试验设计 以药材六月雪中齐墩果酸含量为参
考指标，选择药材粒度、乙醇用量、乙醇浓度、提取次数为考察
因素，应用L9（34）正交设计进行试验，因素水平的安排见表1。
t：每次2h。
2.2 供试品溶液的制备[5]精密称取六月雪粗粉1g，按
L9（34）正交试验表所列条件进行水浴回流提取，合并提取液，
抽滤，抽滤时用相同浓度乙醇溶液少量、多次地洗涤药渣，定容
到50ml容量瓶，不足以相同浓度乙醇溶液补足。然后精密吸取
定容提取液10ml，加入10ml20%盐酸，100℃水浴加热回流2h，
加20ml蒸馏水，蒸去部分乙醇，用氯仿萃取5次，每次20ml，合
并氯仿层，加入活性炭1g，趁热过滤，取滤液，浓缩至干，用流动
相甲醇∶水（80∶20）定容于10ml容量瓶中，作为供试品溶液。
2.3 色谱条件 色谱柱为 ZORBAX Eclipse XDB-C18
（4.6 mm×150 mm，5μm）；流动相甲醇：水（80∶20）；流速
1.0ml/min；检测波长210nm；柱温室温。
2.4 标准曲线 精密称取齐墩果酸标准品10.4mg、5.1mg
表1 六月雪正交试验考察因素水平
水平
因素分布
A/药材粒度
（目）
B/乙醇用量
（倍）
C/乙醇浓度
（%）
D/提取次数
（t）
1 30 6 40 1
2 60 12 60 2
3 100 18 80 3
论 著
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分别置于50 ml和10 ml容量瓶中，加流动相定容至刻度，精
密吸取 50 ml 容量瓶中的溶液 2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 ml 于
10ml量瓶中，加流动相稀释到刻度。各取以上6个10ml标准品
溶液20μl进样，以色谱峰积分面积（Y）对齐墩果酸进样量（X）
作回归分析计算，得回归方程：Y=18432.2X+13520.3，r=0.9997。
齐墩果酸进样浓度在0.04082~0.41253mg/ml范围内，线性关系
良好。
2.5 精密度测定 精密吸取齐墩果酸标准液0.20321mg/ml，
连续进样5次，每次20μl，齐墩果酸峰面积RSD为1.43%。
2.6 稳定性试验 将对照品溶液和样品溶液在室温下贮
存，于0，1.0，2.0，4.0，8.0h测定，结果对照品溶液和样品溶液
在8h稳定，齐墩果酸峰面积RSD分别为2.84%和2.21%。
2.7 加样回收率试验 精密量取已知含量的六月雪样品
溶液5份，每份10ml，分别精密加入1ml浓度为0.51mg/ml的
对照品溶液，余下的操作按样品制备方法制备，加样回收率试
验供试品溶液，按上述色谱条件检测，平均回收率为95.47%，
RSD=2.14%。
2.8 样品测定 精密吸取上述正交设计提取的样品溶液
各20μl进样，测定结果见表2。
2.9 方差分析 用SPSS11.0统计学软件进行数据处理，
结果见表3。
F0.05（2，2）=19，P<0.05*
2.10 验证试验[6]取生药六月雪10g，按上述最佳提取工
艺条件（A3B2C2D1）提取，测定其中齐墩果酸含量，在此条件下平
行测定 3 次，齐墩果酸含量分别为 1.0716‰，0.9956‰，
1.1054‰，3次平均提取率大于上述9次正交试验条件下的提
取率，说明该工艺条件合理。
3 讨论
3.1 文献报道[7]齐墩果酸的紫外光谱在210nm处有较大
吸收，本实验中齐墩果酸紫外最大吸收峰也出现在210nm处。
若用纯甲醇为溶剂定容供试品，溶剂甲醇在206nm处有较强
吸收峰，导致基线不稳。而用流动相（甲醇∶水=90∶10）为溶
剂定容供试品溶液明显减少了干扰，同时选择210nm为检测
波长，基线平稳，灵敏度高，分离效果也较好。
3.2 从R值来看，影响六月雪中齐墩果酸含量的因素主
次顺序为：C>A>B>D（C为乙醇浓度，A为药材粒度，B为乙醇
用量，D为提取次数）。
3.3 方差结果分析表明C因素（乙醇浓度）差异最显著，
结合K值，用60%乙醇提取六月雪中齐墩果酸含量最高。A因
素（粒度）也有一定的差异，但不显著，故选择 100 目药材进
行提取，而 B、D 因素无明显差异。综合分析，最佳工艺条件
为：A3B2C2D1，即 100 目的药材，加入 12 倍的 60%乙醇水浴回
流1次（2h）。
参考文献
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4 夏勇，傅剑云，吴蕙岭，等.中草药六月雪的毒性试验[J].浙江预防医
学，1998，10（2）：126
5 李江，张士军，黄忠仕，等.高效液相色谱法测定复方六月雪颗粒中
齐墩果酸的含量[J].中国药师，2005，8（11）：907
6 李春花，李春香，李清，等.乳香、檀香混合挥发油的提取工艺研究[J].
中国药房，2007，18（12）：894
7 赵培西，王四旺，王剑波.牛膝中齐墩果酸提取工艺研究[J].陕西中
医，2005，26（10）：1099
作者简介：陈达林，男，1969 年出生，本科学历，讲师。E-mail：
a_abc666@163.com
（收稿日期：2008-07-24）
表2 不同提取工艺对六月雪中齐墩果酸含量的影响
样品
号
因素
齐墩果酸的含量
（‰）
A/药材
粒度（日）
B/乙醇用
量（倍）
C/乙醇浓
度（%）
D/提取
次数（t）
1 1 1 1 1 0.2511
2 1 2 2 2 0.8658
3 1 3 3 3 0.6705
4 2 1 2 3 0.9558
5 2 2 3 1 0.8647
6 2 3 1 2 0.4775
7 2 1 3 2 0.9773
8 3 2 1 3 0.7304
9 3 3 2 1 0.9980
K1 1.7874 2.1842 1.4590 2.1138
K2 2.2980 2.4609 2.8196 2.3206
K3 2.7057 2.1460 2.5125 2.3567
R 0.9183 0.3149 1.3606 0.2429
SS 0.0937 0.0110 0.2057 0.0066 SS=R2/n（n=9）
表3 不同提取工艺六月雪中齐墩果酸含量的方差分析
方差分析 离均差平方和 自由度 方差 F
A 0.0937 2 0.0469 14.21
B 0.0110 2 0.0055 1.67
C 0.2057 2 0.1029 31.18*
D（误差） 0.0066 2 0.0033
论 著
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