全 文 ：天然产物研究与开发 Nat Prod Ｒes Dev 2015，27:73-76，88
文章编号:1001-6880(2015)1-0073-05
收稿日期:2014-06-20 接受日期:2014-09-16
基金项目:国家自然科学基金项目(81260688、81160516) ;国家科
技支撑计划(2013BAI11B01) ;贵州省国际科技合作计
划(2012-7040)
* 通讯作者 Tel:86-851-6908468;E-mail:mailofzl@ 126． com
UPLC-MＲM-MS法测定头花蓼药材中 7 个指标成分
刘 跃1，胡 杰1，谢玉敏1，黄 勇1，廖尚高2，郑 林*
1贵阳医学院 药学院 贵州省药物制剂重点实验室;2 贵阳医学院 民族药与中药开发应用教育部工程研究中心，贵阳 550004
摘 要:建立头花蓼药材中没食子酸、原儿茶酸、陆地棉苷、槲皮苷、儿茶素、槲皮素-3-O-(2″-没食子酰基)-鼠李
糖苷及槲皮素的 UPLC-MＲM-MS检测方法。色谱采用 Waters BEH C18(2． 1 mm × 50 mm，1． 7 μm)色谱柱，以
0. 1%甲酸乙腈-0． 1%甲酸水溶液为流动相，梯度洗脱，质谱采用多反应离子监测(MＲM)检测。没食子酸、原儿
茶酸、陆地棉苷、槲皮苷、儿茶素、槲皮素-3-O-(2″-没食子酰基)-鼠李糖苷及槲皮素分别在 0． 136 ～ 32． 965、0. 031
～ 7． 481、0． 022 ～ 5． 300、0． 076 ～ 18． 433、0． 085 ～ 20． 737、0． 017 ～ 4． 147、0． 128 ～ 31． 029 μg /mL浓度范围线性关
系良好，平均回收率为 91． 23% ～ 105． 33%，ＲSD ＜ 3%，精密度、重复性和稳定性良好。此方法操作简便，快速，
灵敏度高，可用于头花蓼药材中主要活性成分的含量测定，并为头花蓼药材质量控制提供了新方法。
关键词:头花蓼;UPLC-MＲM-MS;没食子酸;原儿茶酸;槲皮素;含量测定
中图分类号:Ｒ927． 2 文献标识码:A DOI:10． 16333 / j． 1001-6880． 2015． 01． 015
Determination of Seven Components in Polygonum capitatum by UPLC-MＲM-MS
LIU Yue1，HU Jie1，XIE Yu-min1，HUANG Yong1，LIAO Shang-gao2，ZHENG Lin1*
1Guizhou Provincial Key Laboratory of Pharmaceutics，School of Pharmacy，Guiyang Medical College;
2Engineering Ｒesearch Center for the Development and Application of Ethnic Medicine and TCM (Ministry of
Education) ，Guiyang Medical College，Guiyang 550004，China
Abstract:To establish a UPLC-MＲM-MS method for the determination of gallic acid，protocatechuic acid，que-3-O-β-D-
Glc，quercitrin，catechin，que-3-O-(2″-O-galloyl)-β-D-Glc and quercetin in Polygonum capitatum． The analysis was a-
chieved by BEH C18 column with a mobile phase composed of 0． 1% formic acid in acetonitrile and 0． 1% formic acid in
water using gradient elution． A TQD tandem mass spectrometry was used as detector and operated by multiple reaction
monitoring (MＲM)mode． Good linearity was achieved for these components in the range of 0． 136-32． 965，0． 031-7．
481，0． 022-5． 300，0． 076-18． 433，0． 085-20． 737，0． 017-4． 147，0． 128-31． 029 μg /mL，respectively． The average re-
coveries were 91． 23% -105． 33%，with ＲSD less than 3% ． Precision，repeatability and stability were good． The devel-
oped method was simple，rapid，sensitive and suitable for the determination of the main active constituents in P． capita-
tum． It provided a new method for the quality control of P． capitatum．
Key words:Polygonum capitatum;UPLC-MＲM-MS;gallic acid;protocatechuic acid;quercetin;content determination
头花蓼又名四季红、石莽草等，为蓼科植物头花
蓼 Polygonum capitatum Buch． -Ham． ex D． Don 的干
燥全草或地上部分，在《苗族医药学》、《中华本草·
苗药卷》、《贵州植物志》、2003 版《贵州省中药、民
族药质量标准》中均有收载，现广泛用于治疗泌尿
系统感染，泌尿系统结石，急、慢性尿道炎等泌尿系
统疾病［1］。目前，以头花蓼为原料药已开发并上市
了热淋清颗粒、宁泌泰胶囊、四季草颗粒等各种单复
方苗药制剂。据文献报道，头花蓼的化学成分主要
包括挥发油、黄酮类及酚酸类等化合物［2-6］，其药理
活性研究表明，其内含有的酚酸及黄酮类具有一定
的抗氧化活性，为头花蓼的主要药效成分［7-9］。
2003 版《贵州省中药、民族药质量标准》中仅收
录用高效液相法测定槲皮素这一单一成分，尽管目
前已有不少学者对头花蓼当中的没食子酸、槲皮苷
及槲皮素等成分进行了含量测定［10，11］，以多指标成
分对头花蓼药材进行全面质量评价尚未报道。基于
此，本文以没食子酸、原儿茶酸、杨梅苷、陆地棉苷、
槲皮苷、槲皮素-3-O-(2″-没食子酰基)-鼠李糖苷、槲
皮素及儿茶素这 7 个成分为检测指标，应用专属性
强，灵敏度高，快速准确的 UPLC-MＲM-MS法对头花
蓼药材进行全面的含量测定，进一步为头花蓼及其
相关制剂质量评价及其资源的综合开发、利用提供
参考。
1 材料与仪器
1． 1 材料
葛根素对照品(中国食品药品检定研究院，批
号 0752-9605，纯度≥98%) ，没食子酸(中国固体制
剂制造技术国家工程研究中心，批号 M20-101209，
纯度≥98%) ，原儿茶酸、杨梅苷(四川省维克奇生
物科技有限公司，批号 110306，111018，纯度≥
98%) ，陆地棉苷、槲皮苷、槲皮素-3-O-(2″-没食子酰
基)-鼠李糖苷、槲皮素及儿茶素实验室自制(采
用1H NMＲ、13 C NMＲ、MS、UV、IＲ 波谱进行结构鉴
定，用 UPLC-PDA在多个检测波长下测定，其峰面积
归一化结果均大于 98) ，甲醇(天津科密欧化学试剂
有限公司)、乙腈(德国 Merck 公司)为色谱纯，其余
溶剂均为分析纯，水为超纯水。头花蓼药材:共 6 批
样品，来源于贵州施秉头花蓼 GAP基地及贵州主要
产地，由贵阳医学院龙庆德副教授鉴定为蓼科植物
头花蓼 Polygonum capitatum Buch． -Ham． ex D． Don
的干燥全草。
1． 2 仪器设备
ACQUITY 系统超高液相色谱-三重四级杆串联
质谱仪(美国 Waters公司，包括二元梯度泵、自动进
样器、柱温箱、三重四级杆质谱分析器和 Masslynx4．
1 质谱工作站)。
2 实验方法
2． 1 标准溶液的配制
对照品溶液:精密称取没食子酸等 7 种对照品
适量，分别置于 10 mL 容量瓶中，加甲醇定容至刻
度，摇匀。得没食子酸(1． 073 mg /mL)、原儿茶酸
(0． 974 mg /mL)、陆地棉苷(0． 690 mg /mL)、槲皮苷
(1． 020 mg /mL)、儿茶素(0． 902 mg /mL)、槲皮素-3-
O-(2″-没食子酰基)-鼠李糖苷(0． 540 mg /mL)及槲
皮素(1． 010 mg /mL)的对照品储备液。分别精密量
取没食子酸等七种对照品储备液适量，用甲醇按梯
度稀释成所需浓度，得混合系列标准溶液。置冰箱
(-20 ℃)保存，备用。
内标溶液:精密称取葛根素 10． 33 mg，用甲醇
定容至 25 mL，获得葛根素 0． 413 mg /mL 的储备液。
取内标储备液适量至 5 mL容量瓶中，用甲醇定容至
刻度，配制成 20 μg /mL 的内标溶液，置冰箱(-20
℃)保存，备用。
2． 2 供试品溶液的制备
取本品细粉约 0． 5000 g，精密称定，置 50 mL具
塞锥形瓶中，精密加入甲醇-25%盐酸溶液(4∶ 1)混
合液 25 mL，称定重量(精确至 0． 01 g) ，置水浴中加
热回流 1 h，放冷，称重，用提取液补足减失的重量，
摇匀，滤过，精密吸取续滤液 5 mL至 25 mL量瓶中，
加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0． 45 μm)滤
过，取续滤液，即得。
2． 3 色谱条件
色谱柱:Waters BEH C18(2． 1 mm × 50 mm，1． 7
μm)柱，保护柱:Waters Van Guard BEH C18(2． 1 mm
×5 mm，1． 7 μm) ;流速:0． 35 mL /min;柱温:45 ℃;
进样体积为 1 μL;流动相:0． 1% 甲酸乙腈(A)
-0. 1%甲酸水(B) ;梯度洗脱程序如下:0 ～ 1． 5 min，
5% ～30%(A) ;1． 5 ～ 3 min，30% ～ 90%;3 ～ 4 min，
90%;4 ～ 5 min，90% ～5%。
2． 4 质谱条件
采用电喷雾电离源(ESI) ，毛细管电离电压 3
kV，离子源温度 120 ℃ ;去溶剂气 N2，流速 650 L /
h，去溶剂气温度 350 ℃;碰撞气 Ar，流速 0． 16 mL /
min。扫描方式为多反应离子监测(MＲM) ，监测离
子见表 2。
表 1 多反应离子检测质谱条件
Table 1 MＲM analysis parameters for the 7 targeted compounds
分析物
Analyte
母离子
Parent ion (m/z)
子离子
Daughter ion(m/z)
锥孔电压
Cone voltage (v)
碰撞电压
Collision voltage (v)
1 169． 0 125． 0 35 15
2 152． 9 109． 0 35 15
3 465． 2 303． 0 30 15
4 449． 2 303． 1 20 10
47 天然产物研究与开发 Vol. 27
5 289． 1 245． 1 45 15
6 601． 3 299． 1 30 10
7 303． 2 153． 1 45 40
注:分析物 1 ～ 7 分别为没食子酸、原儿茶酸、陆地棉苷、槲皮苷、儿茶素、槲皮素-3-O-(2″-没食子酰基)-鼠李糖苷及槲皮素．
Note:Analyte 1-7 are gallic acid，protocatechuic acid，que-3-O-β-D-Glc，quercitrin，catechin，que-3-O-(2″-O-galloyl)-β-D-Glc and quercetin，respectively．
3 实验结果
3． 1 专属性试验
精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液适量并
分别加入内标(葛根素)溶液，15000 rpm 离心 5
min，取上清液分别进样，结果见图 1。由此结果可
看出成分间分离良好，未见杂质干扰，供试品溶液中
被测成分与 7 个对照品的保留时间相同，通过比较
被测定成分和对照品的母离子、子离子质谱图，两者
一致，表明本法专属性良好。
图 1 混合对照品溶液(A)和供试品溶液(B)的 UPLC-MＲM-MS图谱
Fig. 1 UPLC-MＲM-MS chromatogram of reference substances (A)and sample (B)
注:1．没食子酸，2．原儿茶酸，3．儿茶素，4．葛根素，5．陆地棉苷，6．槲皮苷，7．槲皮素-3-O-(2″-没食子酰基)-鼠李糖苷，8．槲皮素
Note:1:gallic acid，2:protocatechuic acid，3:catechin;4:puerarin;5:que-3-O-β-D-Glc，6:quercitrin，7:que-3-O-(2″-O-galloyl)-β-D-Glc，8:quercetin
3． 2 线性试验
精密吸取“2． 1”项下制备的混合对照品溶液适
量，依次稀释，制得 6 个浓度的系列浓度线性工作
液，分别进样测定。以待测物的峰面积与内标峰面
积之比(A /Ai)为纵坐标 Y，各物质浓度(C)为横坐
标 X 进行直线回归，权重系数为 1 /X，求得直线方
程，即为标准曲线。回归方程见表 2。
表 2 7 种成分的线性关系
Table 2 Linear relationships of 7 components
标准品
Analyte
回归方程
Ｒegression equation
相关系数 r
Correlation coefficient
线性范围
Linear range (μg /mL)
1 Y = 0． 6582X + 0． 5781 0． 9968 0． 136 ～ 32． 965
2 Y = 1． 5825X + 0． 2754 0． 9976 0． 031 ～ 7． 481
3 Y = 3． 9670X + 0． 2816 0． 9991 0． 022 ～ 5． 300
4 Y = 4． 4664X + 2． 0688 0． 9966 0． 076 ～ 18． 433
5 Y = 0． 8575X + 0． 1205 0． 9979 0． 028 ～ 20． 737
6 Y = 1． 8269X + 0． 0527 0． 9995 0． 017 ～ 4． 147
7 Y = 0． 7657X + 0． 8232 0． 9945 0． 128 ～ 31． 029
57Vol. 27 刘 跃等:UPLC-MＲM-MS法测定头花蓼药材中 7 个指标成分
3． 3 重复性试验
取同批次头花蓼药材，按“2． 2”项下方法平行
制备 6 份供试品溶液，在 UPLC-MＲM-MS 条件下分
别进样测定，根据内标法计算没食子酸、原儿茶酸、
陆地棉苷、槲皮苷、儿茶素、槲皮素-3-O-(2″-没食子
酰基)-鼠李糖苷及槲皮素的平均含量分别为
1. 276、0． 179、0． 041、1． 326、0． 069、0． 061 及 2． 681
mg /g，ＲSD分别为 1． 07%、3． 58%、1． 43%、2． 23%、
2． 62%、2． 62%及 2． 59%，结果表明此方法重复性
良好。
3． 4 精密度试验
取同一份供试品溶液，在相同条件下连续测定
3 d，每天进样 6 次，根据内标法计算含量，结果 7 种
成分的日内和日间精密度(n = 6)分别为 0． 92% ～
3． 49%和 1． 21 ～ 4． 41%，表明仪器精密度良好。
3． 5 稳定性试验
取同一供试品溶液，分别处理后于 0、2、4、8、
12、18、24 h 进样分析，7 种成分的 ＲSD 分别为
1. 03%、2． 66%、1． 83%、0． 93%、2． 95%、2． 73%、
3. 23%，表明供试品溶液在 24 h内稳定性良好。
3． 6 加样回收率试验
精密称取 6 份已知含量的头花蓼样品 0． 5000
g，平均分为 3 组，分别精密加入 0． 5、1． 0、2． 0 mL混
合标准溶液［没食子酸、原儿茶酸、陆地棉苷、槲皮
苷、儿茶素、槲皮素-3-O-(2″-没食子酰基)-鼠李糖苷
及槲皮素浓度分别为 0． 407、0． 092、0． 065、0． 228、
0． 256、0． 051、0． 383 μg /mL］，制成低、中、高浓度的
质控样品，按“2． 2”项下方法制备供试品溶液，按上
述条件进样测定，计算加样回收率，结果低、中、高浓
度水平下原儿茶酸等 7 种成分回收率分别为
93. 22% ～ 100． 32%、95． 37% ～ 102． 68%、97． 37%
～ 102． 11%、94． 89% ～ 103． 35%、91． 23% ～
104. 35%、95． 54% ～ 103． 12%、93． 83% ～
105. 33%。
3． 7 样品测定
按“2． 2”项下方法制备 6 批样品的供试品溶
液，处理后分别进样测定，根据内标法计算样品中各
成分的含量，结果见表 3。
表 3 6 批样品中 7 个成分的含量(mg /g，n = 3)
Table 3 Determination of 7 components in six batches of P． capitatum sample (mg /g，n = 3)
批号
Lot No．
分析物 Analyte
1 2 3 4 5 6 7
合计
Total content
1 1． 283 0． 172 0． 041 1． 252 0． 067 0． 062 2． 678 5． 555
2 1． 992 0． 106 0． 049 2． 135 0． 058 0． 071 2． 061 6． 472
3 0． 988 0． 115 0． 038 1． 187 0． 029 0． 057 1． 284 3． 698
4 2． 243 0． 208 0． 051 2． 486 0． 072 0． 091 3． 126 8． 277
5 2． 103 0． 109 0． 048 2． 379 0． 045 0． 058 2． 323 7． 065
6 1． 532 0． 124 0． 033 1． 393 0． 038 0． 066 1． 674 4． 860
4 讨论
2010 年版《中国药典》中对热淋清颗粒的质量
控制方法仅以没食子酸为指标［12］，然而不同批次间
没食子酸含量略有差异，因此建立一种灵敏、快速、
可靠的的定量分析方法以同时测定头花蓼药材中主
要活性成分的含量是极其有必要的。
本研究采用 UPLC-MＲM-MS系统建立了头花蓼
药材中七个指标成分灵敏、快速、可靠的定量分析方
法，5 min即完成样品的分析，显著提高了定量分析
的重复性和可靠性。从表 4 的 6 批头花蓼药材含量
测定结果可看出原儿茶酸，陆地棉苷在不同批次药
材中含量较稳定，但含量较低，没食子酸、槲皮苷、槲
皮素含量较高，6 批药材槲皮素的含量均符合 2003
版《贵州省中药、民族药质量标准》。经对不同产地
的头花蓼中 7 种化学成分含量测定，表明本方法能
达到有效分离各组分的目的，可作为头花蓼的质量
控制方法;同时表明不同地域的头花蓼中 3 种成分
的含量存在明显差异，说明生态环境、采收时间和储
存条件等可能对含量产生影响。上述结果提示，为
保证头花蓼相关制剂批次间质量的一致性，应加强
头花蓼的质量控制，必要时固定药材的来源。
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