全 文 ：中国药物与临床 2013年 4月第 13卷第 4期 Chinese Remedies & Clinics，April 2013,Vol.13,No.4
珠子草总多酚含量研究
李彩东
【摘 要】 目的 建立珠子草总多酚含量测定方法，并对珠子草中总多酚含量进行测定。方法 采用普鲁
士蓝法使酚类物质配位显色，紫外分光光度法测定。结果 在 0．5274～1．5821 μg/ml范围内，没食子酸浓度与吸
光度呈良好的线性关系。平均加样回收率 99．26％，相对标准偏差（RSD）1．46％。结论 分析方法操作简便，精密
度及准确度高，重现性及稳定性好，可用于珠子草药材中多酚含量的测定。
【关键词】 分光光度法-紫外线；普鲁士蓝法反应；珠子草；总多酚
珠子草（Phyllanthus niruri Linn）为大戟科叶下
珠属植物，是我国传统的中草药，具有平肝清热、利
水解毒之功效，用于肠炎、肝炎、痢疾、尿路感染、无
名肿痛等疾病的治疗，具有明显的抗乙型肝炎病毒
活性及对肝损伤的保护作用，且毒副作用低，是一种
值得深入开发的天然药物。其药效成分主要为多酚
类化合物。植物多酚与黄酮类、酚苷类、简单酚和木
质素等在植物体内共存并且性质相似，其本身更是
一类结构和性质都极为相似的混合物，并且多酚类
物质性质较为活泼，很容易发生缩合或者降解，因此
对其进行精确定量比较困难。目前植物多酚的定量
检测方法主要有化学分析法、紫外可见分光光度法
（UV）和高效液相色谱法（HPLC）等［1-4］，其中 UV 法
较为普遍；本文就珠子草中多酚类成分含量测定进
行研究，旨在为珠子草质量综合评价提供进一步的
参考。
1 资料与方法
1.1 实验材料
珠子草（采自云南蛮耗），经鉴定为珠子草。
1.2 试剂与仪器
1.2．1 试剂：没食子酸标准品 （批号：11672-
200901），购自中国药品生物制品检定所；乙醇、三氯
化铁、铁氰化钾［K3Fe（CN）b］及其他试剂均为分析
纯 （AR级），购自国药集团化学试剂有限公司。
1.2．2 仪器：TU-122紫外可见分光光度计 （北京普
析通用仪器有限责任公司）；FA-2004N电子天平（上
海精密科学仪器有限公司）；CQX25-12超声波提取
器（上海必能信超有限公司）；MODEL-3旋转蒸发器
（上海医械专机厂）。
2 方法与结果
2．1 样品溶液的制备：称取经过预处理的珠子草
2．5 g，加入 50％乙醇 200 ml，常温超声提取 30 min，
提取液减压浓缩后转至容量瓶中，用 50％乙醇定容
至 100 ml。然后准确吸取该溶液 5 ml，加 50％乙醇
定容至 100 ml，待测。
2．2 标准溶液的配制：准确称取充分干燥后的没食
子酸 10．3 mg，用 50％乙醇溶解后，转入 25 ml容量
瓶中，用 50％乙醇定容，得浓度为 412 μg/ml标准溶
液。
2．3 测定波长的选择：准确移取样品溶液和没食子
酸标准溶液的稀释液各 1．0 ml，分别与比色试剂混
匀，定容至 5 ml，室温避光反应一段时间，然后用紫
外-可见分光光度计在 400～800 nm波长范围内进行
DOI：10.11655/zgywylc2013.04.009
基金项目：兰州市科技发展计划项目（2007-1-75）
作者单位：730046 兰州市第二人民医院制剂中心
Determination of total polyphenol in Phyllanthus niruri Linn LI Cai-dong. Medical Preparations Center, the Sec-
ond People′s Hospital of Lanzhou, Gansu 730046, China
【Abstract】 Objective To establish the methodology for determination of total polyphenol in Phyllanthus niruri
Linn. Methods Prussian blue was employed for assessment of polyphenol coloration by ultraviolet spectrophotome -
try. Results A linear correlation between density and absorption of galic acid solution was noted at the concentration
of 0.527 4~1.582 1 μg/ml, with a mean recovery of 99.26% and RSD of 1.46%. Conclusion The analytic approach
using Prussian blue is characterized by convenience, high precision and accuracy, preferable repeatability and stabili-
ty and may be feasible for assessment of galic acid in Phyllanthus niruri Linn.
【Key words】 Spectrophotometry ultraviolet； Prussian blue reaction； Phyllanthus niruri Linn； Total polyphe-
nol
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中国药物与临床 2013年 4月第 13卷第 4期 Chinese Remedies & Clinics，April 2013,Vol.13,No.4
扫描，确定测定波长。
酚类成分与普鲁士蓝试剂反应后可以生成深蓝
色化合物，用紫外分光光度计在可见光范围内进行
全波长扫描，分析图谱，测定波长选择为最大吸收波
长。珠子草酚类提取液和没食子酸标准溶液与普鲁
士蓝试剂发生显色反应后其最大吸收峰均出现在
690～750 nm，并且于 700 nm处有最大吸收，所以选
择 700 nm为测定波长。
2．4 显色时间和温度的确定：酚类物质的显色反应
属于氧化还原反应，如果反应时间过短，氧化还原不
充分，显色不完全。比色效果尚受反应温度的影响，
过高的温度或过低的温度都不适宜于显色反应的进
行。
将样品溶液和各显色剂混匀后，室温下避光反
应，分别测定其反应 0、30、60、90、120 min时的吸光
度（A）值，确定显色反应完全进行时的显色时间。从
测定结果可知，60 min之前，随反应时间的增加，A
值增大，此时溶液颜色变为深蓝色。60 min后，随反
应时间增长，A值增加速率较缓慢，溶液颜色基本保
持不变。说明显色反应基本完全，所以选择 60 min
作为显色反应时间。
对于反应温度，准确移取等量的样品溶液 5份
于 5个比色管中并编号 1~5，相同操作下分别与各
显色剂混合均匀，分别将 1~5号管置于 10、20、30、
40 ℃温度下，避光反应相同时间后测定各体系的 A
值，确定最适宜显色反应进行所需的温度。由测定
结果可知，30 ℃以前，随温度升高，A值增加，溶液
颜色变深。30 ℃以后，温度继续升高，A值不再增
加，而且显色体系溶液颜色变浅，可能是因为反应生
成的蓝色络合物在高温环境下性质不稳定被分解，
导致溶液颜色变浅。同时观察到，25 ℃和 30 ℃时络
合物的 A值变化不太大，所以，显色反应进行的温
度选择接近室温的 25 ℃。
2．5 样品测定前处理：精密量取 1．0 ml，于 25 ml容
量瓶中，加 0．100 mol/L FeCl3 1 ml，0．008 mol/L
K3Fe（CN）6 1 ml后，用 0．100 mol/L HCl定容至 25
ml，然后在 25 ℃温度下避光放置反应 60 min，于
700 nm波长处测定 A值。
2．6 标准曲线的绘制：准确移取上述没食子酸标准
溶液 （412 μg/ml）2 ml于 25 ml容量瓶内，取 0．4、
0．6、0．8、1．0、1．2 ml，分别加入 0．100 mol/L FeCl3溶
液 1 ml，0．008 mol/L K3Fe （CN）6 溶液 1 ml 后，用
0．100 mol/L HCl定容至 25 ml，摇匀，然后在室温避
光放置反应 60 min，在 700 nm处测定 A值，以 A为
纵坐标，以没食子酸的浓度（C）为横坐标，绘制标准
曲线。得线性回归方程 C＝2．7516A-0．0925，相关系数
R2＝0．9983。结果表明，在 0．5274～1．5821 μg/ml范围
内，没食子酸浓度与 A值呈良好的线性关系。标准
曲线见图 1。
2．7 方法学验证：稳定性实验：精确移取珠子草酚
类提取样品液 1．0 ml按“2．5”的方法处理，分别测定
样品液与 FeCl3，K3Fe （CN）6和 HCl反应 1、2、3、4、5
h后的 A值，相对标准偏差（RSD）0．38％。
重现性实验：精密移取珠子草酚类提取样品液
1．0 ml 5份，按“2．5”的方法处理，测定其多酚含量，
计算 RSD为 0．21％。
精密度实验：精确移取珠子草酚类提取样品液
1．0 ml，按 2．5的方法处理，对其多酚含量测定 5次，
计算结果的 RSD为 0．74％。
回收率实验：精确移取珠子草酚类提取样品液
1．0 ml共 5份于比色管中，并编号 1~5，分别向 1~5
管中加入没食子酸标准溶液，然后按“2．5”的方法处
理，分别测定 1~5管的多酚含量，并计算回收率和
RSD，平均回收率 99．26％，RSD为 1．46％，见表 1。
从上述结果中可知，该分析方法在体系反应完
全后放置 5 h 内测定的 A 值变化很小，RSD 为
0．38％，说明分析方法稳定性较好。重现性实验测得
的 5个珠子草样品中多酚含量值比较接近，RSD为
0．21％，说明该分析方法重现性较好。对该分析方法
的精密度进行评价，同一样品 5次测定的多酚含量
值相差较小，RSD为 0．74％，显示该分析方法具有较
高的精密度，可以满足样品分析的要求。
3 样品溶液中多酚的含量测定
精密称取 2．50 g珠子草 5份，按“2．1”方法制备
珠子草样品溶液，精密量取 1．0 ml，于 50 ml容量瓶
中，加 0．100 mol/L FeCl3 1 ml，0．008 mol/L K3Fe（CN）6
1 ml后，用 0．100 mol/L HCl定容至 50 ml，然后在
图 1 没食子酸酸标准工作曲线
A值
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8
浓度（μg/ml）
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中国药物与临床 2013年 4月第 13卷第 4期 Chinese Remedies & Clinics，April 2013,Vol.13,No.4
25 ℃温度下避光放置反应 60 min，于 700 nm波长
处测定 A值，将 A值带入回归方程即得多酚浓度
（μg/ml），按以下公式计算多酚含量 （g/100 g）。P＝
（C×Vn/M×106）×100％，式中：P：总多酚含量（g/100
g）；C：珠子草多酚浓度 （μg/ml）；V：提取液体积
（ml）；n：稀释倍数；M：珠子草质量（g）。测得珠子草
平均含量 3．07％，RSD 1．91％，见表 2。以随行试剂作
为空白。
4 讨 论
以珠子草为原料，没食子酸为标准品，建立了
UV法测定珠子草多酚含量的方法。适用于测定珠
子草多酚含量的 UV法的比色条件是：最适显色温
度为室温，显色时间为 60 min，测定波长为 700 nm。
显色后溶液在 5 h内稳定，该方法的精密度高，RSD
为 0．74％；重现性好，RSD为 0．21％；加样平均回收
率为 99．26％，RSD为 1．46％。测得珠子草药材中总
多酚平均含量为 3．07％，RSD为 1．91％。该分析方法
操作简便，精密度及准确度高，重现性及稳定性好，
可用于珠子草药材中多酚含量的测定。
参 考 文 献
［1］ 石碧，狄莹．植物多酚．北京：科学出版社，2002：21-26．
［2］ 张凯农，肖纯．K3Fe（CN）6分光光度法测定茶多酚．中国茶叶，
1995，8（5）：28-29
［3］ 杨雁芳，艾铁民．紫外分光光度法测定松果菊提取物中多酚．中
草药，2005，36（11）：1649-1650．
［4］ 刘琨，杨再雍． 均匀设计法优化珠子草中总多酚超声波提取工
艺研究． 时珍国医国药，2010，21（3）：754-755．
（收稿日期：2012-12-12）
表 1 回收率试验结果
取样量
（μg/ml）
加入量
（μg/ml）
测得量
（μg/ml）
回收率
（％）
平均回收率
（％）
RSD
（％）
1．52 1．31 2．81 97．75
1．52 1．31 2．85 101．32
1．63 1．31 2．94 98．84 99．26 1．46
1．52 1．31 2．81 98．27
1．58 1．31 2．90 100．08
表 2 样品中多酚含量测定结果
编号 A值 含量（％） 平均含量（％） RSD（％）
1 0．5865 3．04
2 0．5976 3．10
3 0．5836 3．02 3．07 1．91
4 0．5852 3．03
5 0．6087 3．16
·消 息·
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