全 文 ：2014，Vol．17 No．1Journal of Guangxi University of Chinese Medicine
HPLC法测定瑶药定心藤中
豆甾醇-3β-葡萄糖苷的含量
陈 昭 1，邱宏聪 2，毕晓黎 1，刘布鸣 2
（1.广东省中医药工程技术研究院，广东 广州 510095；
2.广西壮族自治区中医药研究院，广西 南宁 530022）
摘 要：［目的］对瑶药定心藤药材中所含豆甾醇-3β-葡萄糖苷化合物进行定量测定。［方法］采用高效液相色谱法，色谱
柱：迪马 C18钻石柱（5 μm，250 mm×4.6 mm）；流动相：以 1%磷酸水溶液为 A相（水相），乙腈为 B相（有机相），采用梯度洗脱；检
测波长：210 nm；柱温：25 ℃；进样量：10 μl；流速 0.8 ml/min。［结果］豆甾醇-3β-葡萄糖苷在 1～100 μg/ml（r2=0.9995）内线性
良好，平均回收率为 96.6% ，RSD为 4.73%。9批次定心藤中豆甾醇-3β-葡萄糖苷含量相差较大，在 1.713～14.351 mg/g之间。
［结论］定心藤中豆甾醇-3β-葡萄糖苷含量相差较大，可能与不同产地及采收时间有关；HPLC法测定定心藤中豆甾醇-3β-葡
萄糖苷的含量，准确性和重复性较好，方法简便易行，可为定心藤药材的质量控制提供科学依据。
关键词：定心藤；豆甾醇-3β-葡萄糖苷；含量测定；HPLC法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：2095-4441（2014）01-0074-03
收稿日期：2013-11-23
基金项目：广西壮族自治区中药质量标准研究重点实验室开放课题（桂中重开 201201）
作者简介：陈昭（1985-），男，广西南宁市人，药学博士，研究方向：药物分析及质量控制
通讯作者：刘布鸣
定心藤（Mappianthus iodoides Hend.-Mazz.）为茶茱萸科
植物甜果藤的干燥树藤，其药用部位为藤茎，因其效用强劲而
被瑶族人称为“铜钻”，为瑶药“九牛十八钻”中的一种［1］。瑶
医传统认为，“铜钻”有通达经络、透利关节的功效，民间常用
于消除炎症、肿痛以及祛风除湿。现代科学研究表明，定心藤
具有抗风湿、抗氧化和活化心血管等功效，其活性成分为黄酮
及挥发油类化合物［2］。为有效地控制定心藤的药材质量，本
文采用 HPLC法对其中豆甾醇-3β-葡萄糖苷有效成分进行
含量测定，报道如下。
1 实验材料
1.1 试药 定心藤样本采购于广西壮族自治区金秀县药材
市场，9批样品分别来自不同季节和不同采集地。样本经过广
西壮族自治区中医药研究院赖茂祥研究员鉴定为茶茱萸科定
心藤（Mappianthus iodoides Hend.-Mazz.）；豆甾醇-3β-葡萄糖
苷对照品（由广东省中医药工程技术研究院制备，纯度≥98%，
符合含量测定要求）。
1.2 试剂 分离提取所用乙醇为分析纯（广州化学试剂厂，
批号：20130804-2）；乙腈为色谱纯（批号：I646930 227）。
1.3 仪器 Waters 2695高效液相色谱仪，DAD检测器（Wa－
ters公司，美国 Maryland Milford）。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备 取豆甾醇-3β-葡萄糖苷对照品适
量，精密称定为 20.0 mg，置 10 ml容量瓶中，以甲醇定容至刻
度，即得 2 mg/ml的对照品溶液。
2.2 供试品溶液的制备 取定心藤药材粗粉约 5 g，精密
称定，置 100 ml圆底烧瓶中，加 10倍量 65%乙醇加热回流
3 h［3］，提取液用微孔滤膜（0.45 μm）过滤后，旋转蒸发干燥，
以甲醇复溶，移至 10 ml容量瓶中，定容，即得。
2.3 色谱条件 色谱柱：迪马 C18钻石柱（5 μm，250 mm×
4.6 mm）；流动相：1%磷酸水溶液为 A相（水相），乙腈为 B相
（有机相）。采用梯度洗脱，洗脱程序如下：0～40 min，B：15%～
40%（V/V，下同）；40～50 min，B：40%～60%；50～60 min ，B：
60%～75%。检测波长：210 nm；柱温：25 ℃；进样量：10 μl；流
速：0.8 ml/min。在上述色谱条件下，精密吸取对照品溶液、供
试品溶液各 10 μl进样测定，色谱图见图 1。
2.4 线性关系考察 取对照品溶液，稀释为 1，2，5，10，20，
50，100 μg/ml的溶液，进样后记录各浓度点色谱峰峰面积积
分数值。以浓度为横坐标 X，峰面积为纵坐标 Y进行线性回
归，回归方程为 Y= 23 230X+ 15 503（r2= 0.9995）。结果显示，
豆甾醇-3β-葡萄糖苷在 1～100 μg/ml范围内线性关系良好。
2.5 精密度试验 取同一批号供试品 6份，按 2.2项方法制
备供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，结果峰面积积分值
的RSD为 1.1%（n=6）。
2.6 重复性试验 取定心藤药材粗粉 5份，按 2.2项方法制
备供试品溶液，进样测定，计算其平均含量为 5.034 mg/g，
RSD为 1.6%（n=5）。
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2014年 第 17卷 第 1期 广西中医药大学学报
2.9 样品测定 取 9批样品，分别按 2.2项方法制备供试品
溶液，再根据 2.3项色谱条件进行高效液相色谱分析，每个样
品测定 3次。结果见表 2。
3 讨 论
3.1 由于目前尚无 HPLC法测定定心藤活性成分含量的报
道，本研究借鉴了文献［4-5］中关于芦丁、豆甾醇等的含量测
定方法，选择了系列浓度的磷酸（0.1%～1.0%，V/V）作为水相
添加剂，并通过改变梯度洗脱程序，最终获得了定心藤中豆甾
醇-3β-葡萄糖苷的最优分离。
3.2 常用的中药提取技术有加热回流、超声和浸渍等，本文
在预实验中曾对上述提取方法进行考察，其中以加热回流所
得化合物含量较高，故选为最优提取方法。此外，在考察的两
种溶剂中，乙醇较甲醇提取效率更高，故采用乙醇作为提取
溶剂。
3.3 实验结果表明，9批定心藤样品中，豆甾醇-3β-葡萄糖
苷含量为 1.713～14.351 mg/g，提示不同产地、采收时间对于活
性成分含量有较大影响，有待进一步开展大样本证实。
3.4 HPLC法测定定心藤中豆甾醇-3β-葡萄糖苷的含量，具
有较好的精密度、准确性和重复性，同时简便易行，可为定心
藤药材的质量控制提供科学依据。
（本实验研究得到广西壮族自治区中医药研究院赖茂祥
研究员的技术指导，谨致谢忱。）
参考文献
［1］曾立，尹文清，朱琪，等.定心藤挥发油抗氧化活性研究
［J］.广东农业科学，2011，1（18）：80-82.
［2］蔡晨秋，马瑛，唐丽，等.药用植物定心藤的研究进展及民
族应用概况［J］. 中央民族大学学报：自然科学版，
表 2 定心藤中豆甾醇-3β-葡萄糖苷的含量测定结果
（n=3）
样品编号 平均含量（mg/g） RSD（%）
TZ002 10.192 2.7
TZ003 1.713 1.9
TZ004 2.400 3.2
TZ005 5.034 1.1
TZ006 8.010 2.4
TZ007 12.873 1.5
TZ008 8.698 1.6
TZ011 14.351 3.3
TZ90 4.418 2.2
2.7 稳定性试验 将同一供试品溶液在室温下放置，分别于
0，2，4，6，12，24 h进样测定含量，结果 RSD为 0.8%（n=6），表
明供试品在 24 h内稳定性良好。
2.8 加样回收率试验 取同一批号（TZ006）已知含量的药材
约 2 g，共 6份，精密称定，分别加入 100 μg/ml的对照品 1 ml，
以甲醇稀释至 10 ml，每份样品平行测定 3次，计算出平均回
收率为 96.6%，RSD为 4.73%，结果见表 1。
表 1 加样回收率试验结果 （n=3）
样品
取样量
（g）
原有量
（mg）
对照品加入量
（mg）
测出量
（mg）
回收率
（%）
平均
回收率（%）
RSD
（%）
1 2.0316 16.273 10.0 26.41 101.4
96.6 4.73
2 2.1223 17.000 10.0 26.26 102.1
3 2.0705 16.585 10.0 25.87 92.6
4 1.9928 15.962 10.0 26.15 92.9
5 2.0433 16.367 10.0 26.20 98.3
6 2.1147 16.939 10.0 26.17 92.3
A 对照品溶液 B 供试品溶液 1豆甾醇-3β-葡萄糖苷
图 1 HPLC色谱图
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2014，Vol．17 No．1Journal of Guangxi University of Chinese Medicine
2011，20（4）：70-73.
［3］曾立，尹文清，王安伟.正交试验优选定心藤中总黄酮提取
与纯化工艺［J］.中国药房，2008，6（19）：418-420.
［4］邓亚宁，刘文娟，曲婷丽.HPLC法测定鬼针草总黄酮部位
中芦丁的含量［J］. 山西医科大学学报，2011，42（11）：
896-898.
［5］魏志奇，陈幸，李彬.高效液相色谱法测定川木通中豆甾醇
的含量［J］.时珍国医国药，2009，20（3）：574-575.
（编辑 陈明伟）
长柱十大功劳木生物碱提取物的质量标准研究
陈明生，孙 翠，邱宏聪，黄 艳，何开家，刘布鸣
（广西壮族自治区中医药研究院，广西 南宁 530022）
摘 要：［目的］建立长柱十大功劳木生物碱提取物的质量标准。［方法］采用高效液相色谱法，色谱柱为 Kromasil ODS-
BP C18（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾缓冲液（磷酸调 pH值至 3.0）（3∶7）为流动相；检测波长为 265 nm；
柱温：室温；流速：1 ml/min。［结果］盐酸小檗碱在 0.0697～1.3944 μg范围内线性关系良好（r=0.9997），平均回收率为 100.7%，
RSD为 1.35%（n=6）；盐酸巴马汀在 0.2070～4.1400 μg范围内线性关系良好（r=0.9997），平均回收率为 102.8%，RSD为 0.91%
（n=6）；盐酸药根碱在 0.1086～2.172 μg范围内线性关系良好（r=0.9997），平均回收率为 103.0%，RSD为 1.21%（n=6）。［结论］
该方法简便、准确，专属性强，重现性、回收率好，可作为长柱十大功劳木生物碱提取物的质量控制方法。
关键词：长柱十大功劳；生物碱；质量标准；高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：2095-4441（2014）01-0076-03
收稿日期：2014-02-06
基金项目：广西科学研究与技术开发计划项目（桂科攻 11107010-2-1）；广西卫生厅中医药科技专项（GZPT1228）
通讯作者：刘布鸣
长柱十大功劳（Mahonia duclouxiana Gagnep.）为小檗科
十大功劳属植物，与阔叶十大功劳、细叶十大功劳为同一科
属。十大功劳属植物主要分布于北半球的东亚、东南亚、中美
及南美西部，全世界约有 100种，大多数植物是分布国的传统
药或民间药。该属植物在我国约有 35种，分布于南方各地，
主要以根、茎入药。2005年版中国药典一部“功劳木”项下收
载其中两个品种：阔叶十大功劳 Mahonia bealei（Fort.）Carr与
细叶十大功劳 Mahonia fortunei（Lindl.）Fedde的干燥茎，具有
清热燥湿、泻火解毒功能［1］。主要用于湿热泻痢，黄疸，目赤
肿痛，胃火牙痛，痈肿，痢疾，黄疸型肝炎［2-3］。本课题组前期
研究表明，长柱十大功劳中生物碱成分主要有药根碱、巴马汀
和小檗碱［4-5］，而生物碱是中药的重要有效成分。本文采用
HPLC法对长柱十大功劳生物碱提取物中药根碱、巴马汀、小
檗碱进行同时测定，所建立的方法可作为长柱十大功劳提取
物中生物碱的定量分析方法，同时也为十大功劳属植物化学
成分分析、扩大功劳木药源以及新药开发提供科学依据。
1 实验材料
1.1 仪器 美国Water 515高效液相色谱仪，2487可变波长
检测器；威玛龙色谱工作站；Agilent Syr.LC 50 μl FN 微量进
样器；KQ5200B型超声清洗器。
1.2 试剂与材料 盐酸小檗碱（批号 110713-200911，含量
按 86.8%计），盐酸药根碱（批号 110733-201108，含量按
90.3%计），盐酸巴马汀（批号 110732-201108，含量按 86.2%
计），均购于中国药品生物制品检定所；长柱十大功劳提取物
（由广西中药质量标准研究重点实验室自制）；乙腈为色谱纯；
水为超纯水；其它试剂为分析纯。
1.3 药材来源 长柱十大功劳采自广西凌云县，经广西壮族
自治区中医药研究院何开家主任药师鉴定为小檗科十大功劳
属植物长柱十大功劳 Mahonia duclouxiana Gagnep.。
2 方法与结果
2.1 长柱十大功劳生物碱提取物的制备 取长柱十大功劳
粉碎成粗粉，加 15倍量 70%的乙醇∶盐酸（100∶0.5）于 80 ℃水
浴加热提取 3次，每次 1 h，滤过，滤液减压浓缩至无醇味，加
水稀释为 0.16 g/ml，再用四层纱布过滤至澄清，滤过，过 AB-
8大孔吸附树脂柱（上样液为 6倍树脂体积），用 2倍水洗涤，
水洗液弃去，以 10倍量 10%乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液
减压浓缩至浸膏，60 ℃干燥，即得。
2.2 生物碱提取物的含量测定
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