全 文 ：·40· Chinese Journal of Information on TCM Jan.2010 Vol.17 No.1
地锦草不同萃取部位体外抗真菌作用研究
安惠霞 1,斯拉甫·艾白 2,3,古力娜·达吾提 3,李治建 2
(1.石河子大学药学院,新疆 石河子 832000；2.新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所,新疆 乌鲁木齐 830049；
3.新疆维吾尔自治区维吾尔医医院,新疆 乌鲁木齐 830049)
摘要：目的 对地锦草不同萃取部位进行体外抗真菌实验,测定其最小抑菌浓度值(MIC)。方法 采用溶剂萃取
法分离地锦草乙醇提取液,得到水、石油醚、氯仿、正丁醇等 4个萃取部位；根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)
推荐的《产孢丝状真菌的液基稀释法抗真菌药物敏感性试验方案》(M38-A),测定地锦草各萃取部位对 23 株临床常见
皮肤癣菌的 MIC。结果 由于地锦草萃取分离后的石油醚和氯仿部位在药敏试验中的溶解度甚小,影响结果的科学观
察,本研究主要针对正丁醇和水部位的体外药敏进行了检测,正丁醇和水部位对真菌有明显的抑制作用,并且正丁醇
部位的作用优于水部位。结论 地锦草萃取部位具有体外抗真菌作用。
关键词：地锦草；M38-A 方案；体外试验；抗真菌作用；最低抑菌浓度
中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2010)01-0040-03
Study on Antifungal Susceptibility of Different Extract Parts of Euphorbia humifusa AN Hui-xia1,
Silafu·Aibai2,3, Gulina·Dawuti3, et al (1.Pharmacy College of Shihezi University, Shihezi 832000, China；2.Institute of
Xinjiang Uighur Medicine, Urumqi 830049, China；3.Xinjiang Uighur Medical Hospital, Urumqi 830049, China)
Abstract：Objective：To examine the antifungal effect of different extraction parts of Euphorbia humifusa
in vitro, and measure the minimum inhibition concentrations (MICs). Methods Separated the Dijincao
extract and got four parts by solvent extraction. Applied the standard which was approved by the National
Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS)：Reference Method for Broth Dilution Antifungal
Susceptibility Testing of Filamentous, Fungi (M38-A). MICs of different parts of Dijincao extract against 23
strains of common clinical dermatophytes were investigated. Results Chloroform extract and petroleum
ether extract could not get clear and definite MIC because their solubility disturbed the determination of
experiment’s results. However, water and n-butanol fraction could get definite and clear results. Both of
these two parts could clearly inhibit fungal growth. Conclusion Euphorbia humifusa extract parts have
antifungnal activity against dermatophytes in vitro.
Key words：Euphorbia humifusa extract parts；M38-A；antifungal effect；in vitro；MIC
地锦草,维吾尔名为夏塔热其尼(Xiahatereqini)、雅丽蔓
(Yalmankulake),为大戟科植物地锦 Euphorbia humifusa
Willd.或斑地锦 Euphorbia maculata L.的干燥全草,是维吾
尔医常用药材,临床主要用于治疗手癣、体癣、足癣、花斑癣、
银屑病[1]。研究发现,地锦草具有显著的抗皮肤癣菌作用[2-3]。
为进一步明确其化学成分与药效之间的相关性,本研究通过化
学萃取分离方法将地锦草主要化学组分分成 4 个部位,并参照
美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的《产孢丝状真菌
的液基稀释法抗真菌药物敏感性试验方案》(M38-A)[4],探讨其
各部位的体外抗真菌活性。
1 材料与方法
1.1 药物
地锦草药材由新疆维吾尔医药研究所药剂室提供,经生药
学鉴定为大戟科植物地锦草(Euphorbia humifusa Willd.)；

基金项目：国家“十一五”科技支撑计划(2007BAI30B03)；国
家自然科学基金(30760308)
通讯作者：斯拉甫·艾白,Tel：0991-2557731,13999809948
阳性对照药：盐酸特比奈酚(TBF),瑞士诺华公司,批号 010482。
1.2 试验菌种
红色毛癣菌 10 株；石膏样毛癣菌 10 株；质量控制菌株为
近平滑念珠菌 1株。本试验所采用的菌株均来自新疆医科大学
真菌与真菌病研究中心菌种保藏库(XYZ)。疣状毛癣菌 1 株,
许兰毛癣菌1株,犬小孢子菌1株,新疆维吾尔自治区人民医院
皮肤科临床检验室提供。
1.3 培养基
RPMI-1640 培养基,美国 Sigma 公司；三氮吗啡琳丙磺酸
(MOPS),美国 Sigma 公司；沙堡氏琼脂培养基(SDA),批号
20080228,北京奥博星生物科技有限公司。
RPMI-1640 培养基的配制：将10.4 g RPMI-1640 和 34.53 g
MOPS 粉末溶于 900 mL 蒸馏水中,用 1 mol/L NaOH 溶液调整其
pH 至 7.0(25 ℃),加蒸馏水定容至 1 L,G-6 漏斗滤过灭菌,存
于 4 ℃冰箱备用。
SDA 培养基的配制：称取 PDA 粉末 67 g,加入 1 000 mL
蒸馏水,摇匀加热煮沸溶解,121 ℃高压灭菌 20 min,分装,4 ℃
保存,备用。
2010 年 1 月第 17 卷第 1期 中国中医药信息杂志 ·41·
1.4 仪器
BHC-1300ⅡA 型生物安全柜,苏州安泰空气技术有限公
司；FMspx-250B 型生化培养箱,上海福玛试验设备有限公司；
Leica DM-2500 型显微镜,德国。
1.5 地锦草不同部位的提取分离方法
取地锦草全草 10 kg,粉碎,加 70%乙醇回流提取 2次(8、6
倍),每次 2 h,药渣加水煎煮提取 1 次(10 倍,2 h),分别滤过,
合并醇提液,减压回收至流浸膏状(相对密度 1.1,热测),另水
提液减压回收至流浸膏状(状态同上)。合并以上醇提及水提浸
膏(体积约 5～10 L,若粘稠可加水稀释),依次用石油醚、氯仿、
正丁醇萃取,每种有机溶剂萃取 5 次,合并有机溶剂萃取液,分
别将各有机溶剂萃取液及萃取后的水相减压回收至干,分别得
到石油醚、氯仿、正丁醇及水相 4个溶剂萃取部位,称重,粉碎,
即得。
1.6 最低抑菌浓度测定
根据 NCCLS 推荐的《产孢丝状真菌的液基稀释法抗真菌药
物敏感性试验方案》(M38-A)[4],测定地锦草不同萃取部位对 23
株皮肤癣菌的最低抑菌浓度值(MIC)。
1.6.1 抗真菌药物储备液、稀释液的制备 称取地锦草各萃
取部位分别为 204.8 mg,用 1 mL 二甲基亚砜(DMSO)溶解,制成
浓度为 204 800 μg/mL 的储备液,存于-20 ℃冰箱备用；称取
TBF 8 mg,用 1 mL DMSO 溶解,制成浓度为 8 000 μg/mL 的储备
液。从中吸取 1 μL 加 RPMI-1640 培养基 499 μL,使之稀释 500
倍,此时,TBF 储存液浓度为 16 μg/mL,存于-20 ℃冰箱备用。
将地锦草各萃取部位储备液、TBF 储备液分别用
RPMI-1640 培养基倍比稀释成 2倍终浓度。地锦草的 2倍终浓
度由高到低依次为：2 048、1 024、512、256、128、64、32、
16、8、4 μg/mL；TBF 的 2 倍终浓度由高到低依次为：0.16、
0.08、0.04、0.02、0.01、0.005、0.002 5、0.001 25、0.000 625、
0.000 312 5 μg/mL。
1.6.2 菌接种液的制备 ①皮肤癣菌：将受试的皮肤癣菌接
种于 SDA 上,26 ℃培养 7～14 d。吸取 2 mL 无菌的 0.85%NaCl
溶液,冲洗菌落表面的菌丝和孢子,将含有菌丝和孢子的冲洗
液用血细胞计数板记数,将其浓度调至 0.4×106～5×106 cfu/mL
之间,用RPMI-1640培养基稀释50倍至2倍终浓度。②念珠菌：
将受试的念珠菌接种于 SDA 上,36 ℃培养 48 h。挑取菌落,加
入2 mL无菌的0.85% NaCl溶液中,用0.5# McFarland standard
比浊管比浊,用 RPMI-1640 液基稀释 100倍后再稀释 20倍至 2
倍终浓度。
1.6.3 接种 将 100 μL 的 2 倍终浓度的药液,由第 1 孔至第
10 孔分别由高浓度到低浓度加入无菌 96 孔细胞培养板中,第
11 孔为生长对照孔(仅加菌悬液 100 μL 和 RPMI-1640 培养基
100 μL,不加药物),第 12 孔为空白对照孔(真菌、药物都不加,
只加 RPMI-1640 培养基 200 μL)。将调好的菌接种液 100 μL,
分别加入相应的微孔内,这将使每一梯度的抗真菌药物和菌接
种液(2 倍终浓度)分别被 1∶1稀释到终浓度。
1.6.4 结果判定 皮肤癣菌,26 ℃孵育 7～14 d 读结果。念
珠菌,36 ℃孵育 48 h 读结果。读取 MIC 值时,应在不搅动的情
况下与对照孔按下列标准比较。0：肉眼清晰；1：略模糊(80%
受抑制)；2：浊度显著减低(50%受抑制)；3：浊度轻度减低；
4：浊度未减低。本试验药物取 1或 2为判定终点。
1.6.5 质量控制 按照 NCCLS 方案,对近平滑念珠菌 XYZ
5001 进行反复测定,其两性霉素 B 的 MIC 值 0.5～4.0 μg/mL,
氟康唑的MIC值 1.0～4.0 μg/mL,5-氟胞嘧啶的MIC值 0.12～
0.5 μg/mL。
每次试验以此菌株为对照,只有当其 MIC 值介于其质控范
围之内时,方认为试验操作准确可靠。且只有当生长对照孔生
长良好,空白对照无生长,其他孔随药物浓度升高,呈现真菌生
长梯度受抑制时,方证明试验成功。
2 结果(见表 1)
表 1 地锦草不同萃取部位和 TBF 抗真菌药物敏感性试验结果
[平均 MIC/(μg·mL)]
药物 红色毛癣菌 石膏样毛癣菌 疣状毛癣菌 许兰毛癣菌 犬小孢子菌
1
2
3 338 338 1 024 512 512
4 832 813 1 024 128 ＞1 024
5 0.017 0.030 0.066 0.040 0.080
注：1.地锦草石油醚萃取部位；2.地锦草氯仿萃取部位；3.地锦草
正丁醇萃取部位；4.地锦草水部位；5.TBF
3 讨论
地锦草是维吾尔医常用药材,临床主要用其复方百癣夏塔
热(由地锦草、诃子肉、毛诃子肉、司卡摩尼亚酯、芦荟、西青
果药材组成)治疗手癣、体癣、足癣、花斑癣、银屑病等皮肤疾
病[5]。地锦草主要含有黄酮、三萜、香豆素、甾醇、鞣质及酚酸
类等化合物[6]。药理研究表明,地锦草及其复方具有抗菌、抗炎、
抗过敏、免疫调节、抗氧化、保肝、止血及解毒等多种作用[7-11]。
本研究通过不同极性溶剂萃取分离的方法将地锦草主要
化学组分分成几部分,通过体外药敏试验筛选,验证其不同萃
取部位体外抗真菌活性。结果发现,地锦草 4 个不同萃取部位
中,由于分离后的石油醚和氯仿部位在药敏试验中的溶解度甚
小,不能很严谨地读出药敏结果,正丁醇及水部位对皮肤癣菌
有明显的抑制作用,其强度正丁醇部位＞水部位。本研究将中
药化学提取分离手段与药理试验密切结合,方法快捷、简捷,
结果可靠,初步完成了地锦草不同部位的分离与体外药敏检测,
为进一步研究其抗真菌有效单体及作用机制奠定了基础。
参考文献：
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[4] National Committee for Clinical Laboratory Standards. Reference
Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of
·42· Chinese Journal of Information on TCM Jan.2010 Vol.17 No.1
·质量标准研究·
HPLC 法测定复方抗病毒口服液中绿原酸的含量
唐德智
(南宁食品药品检验所,广西 南宁 530001)
摘要：目的 建立 HPLC 法测定复方抗病毒口服液中绿原酸含量的方法。方法 采用 Shim-pack VP-ODS C18反相
色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-0.2%磷酸(12∶88)为流动相；流速为 1.0 mL/min；检测波长：327 nm；柱
温：30 ℃。结果 绿原酸在 0.051～0.922 μg 范围内线性关系良好(r＝0.999 9,n＝6),平均回收率为 99.04%,RSD＝
1.31%(n＝6)。结论 该方法准确、重复性好、简便易行,可作为复方抗病毒口服液的质量控制方法。
关键词：复方抗病毒口服液；绿原酸；高效液相色谱法；含量测定
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2010)01-0042-02
Determination of Chlorogenic Acid in Compound Oral Liquid of Kangbingdu by HPLC TANG De-zhi
(Nanning Institute for Food and Drug Control, Nanning 530001, China)
Abstract：Objective To establish a method for detecting chlorogenic acid in compound oral liquid of
Kangbingdu with HPLC. Methods The chromatographic column of Shim-pack VP-ODS C18 (4.6 mm×
250 mm, 5 μm) was used, the mobile phase was consisted of acetonitrile-0.2% phosphoric acid aqueous
solution (12∶88). The flow rate was 1.0 mL/min, the detective wavelength was 327 nm and column
temperature was 30 ℃. Results The linear range of the method was 0.051～0.922 μg (r＝0.999 9, n＝6),
the average recovery was 99.04%, RSD was 1.31% (n＝6). Conclusion The method is accurate, reproducible,
simple and easy to do, which can be used in quality control of compound oral liquid of Kangbingdu.
Key words：compound oral liquid of Kangbingdu；chlorogenic acid；HPLC；content determination
复方抗病毒口服液为医院制剂,是由金银花、射干、蒲公
英、大青叶、柴胡、佩兰、板蓝根等药材制成的中药复方制剂,
具有清热解毒、祛湿、凉血的功效,临床上用于治疗流行性感
冒、上呼吸道感染、流行性腮腺炎、急性淋巴结炎、带状疱疹
和急性病毒性肝炎、急性黄疸性肝炎等。方中金银花为主药,
绿原酸为其主要活性成分之一[1]。本试验参考文献[2],建立高
效液相色谱(HPLC)法测定复方抗病毒口服液中绿原酸的含量,
用于其质量控制。
1 仪器与试药
LC-2010A HT 高效液相色谱仪(日本岛津公司)；日本岛津
UV-1601 紫外分光光度计；KQ-300 型超声波清洗器(江苏昆山
市超声仪器有限公司)。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定
所,供含量测定用,批号 110753-200413)；复方抗病毒口服液
(广西 A县人民医院生产)。乙腈为色谱纯,磷酸为色谱纯,水为
超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：岛津Shim-pack VP-ODS C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；
流动相：乙腈-0.2%磷酸(12∶88)；检测波长：327 nm；流速：
1.0 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品 10.25 mg,置 100 mL 棕色量瓶中,
加 50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得 0.102 5 mg/mL 对照
品储备溶液。精密量取 5 mL 置 10 mL 棕色量瓶中,加甲醇稀释
至刻度,摇匀,作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
精密量取复方抗病毒口服液样品 3 mL,置 50 mL 棕色量瓶
中,加50%甲醇溶液至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,

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(收稿日期：2009-07-21,编辑：华强)