全 文 ：作者简介:范源(1966 ～)，男，副教授，硕士生导师，云南省中青年学术和技术带头人、昆明市科技创新团队领军人才(中药健康饮
品)。
余甘子中没食子酸等活性成分在自然储藏时的变化及分析
范 源1，赵江盛2，徐志平2，张建博1，林 青1
(1. 云南中医学院，云南 昆明 650500;2. 龙润集团爱尼食品厂，云南 昆明 650100)
摘要:目的 对云南澜沧江、金沙江、元江流域的 7个县同时采集的余甘子进行统一存放后没食子酸、维生素 C、超氧化物歧化
酶(SOD)等成分进行测定及比较。方法 将余甘子果榨汁，应用紫外分光法、HPLC法测定没食子酸、维生素 C 含量及 SOD 活性。
结果 随着储藏时间的延长，7个采集点的余甘子所含的没食子酸明显增加，维生素 C的含量逐渐下降，超氧化物歧化酶 SOD活性
多数降低，其中没食子酸含量变化最为显著。结论 没食子酸含量变化可作为余甘子储藏中早期褐变的指标，并为中药储存及养
护提供相关参考。
关键词:余甘子;没食子酸;维生素 C;SOD;中药储存
中图分类号:Ｒ284 文献标志码:A 文章编号:1007 －2349(2014)02 －0057 －03
Changes and Analysis of Active Ingredients of Gallic Acid in Phyllanthus Emblica in Natural Storage
FAN Yuan1，ZHAO Jiang-sheng2，XU Zhi-ping2，ZHANG Jian-bo1，LIN Qing1
(1． Yunnan University of Traditional Chinese Medicine，Kunming 650000，Yunnan;
2． Longrun Group Aini Food Factory，Kunming 65000，Yunnan)
【Abstract】Objective:To measure and compare gallic acid，vitamin C，superoxide dismutase (SOD)and other ingredients of Fructus
Phyllanthi which were picked and stored at the same time in 7 counties around basins of Jinsha Ｒiver，Lancang Ｒiver and Yuanjiang Ｒiver in
Yunnan． Methods:The fruit juice of Fructus Phyllanthi was squeezed and the content of gallic acid，vitamin C and the activity of superoxide
dismutase (SOD)were measured by UV spectrophotometry and HPLC． Ｒesults:The results showed that with the extension of storage time，
the content of gallic acid of Fructus Phyllanthi collected from 7 points increased obviously，the content of vitamin C gradually declined and the
activity of superoxide dismutase(SOD)reduced more，among which the change of gallic acid’s content was the most significant． Conclution:
The change of gallic acid’s content can be used as one of early browning indicators in storage and can provide reference for storing and con-
serving for traditional Chinese medicine．
【Key Words】Fructus Phyllanthi，gallic acid，vitamin C，SOD，storage
余甘子(Phyllanthus emblica)是大戟科(Euphorbiaceae)叶下
珠属(Phyllanthus)的一种生长在中国亚热带、热带部分地区，特
别是干热河谷地区的落叶乔木或灌木资源植物［1］。余甘子因
其具有抗氧化、抗衰老、防癌症、抗心血管病、治糖尿病等多种
保健与治疗的作用而广泛应用［2 －5］。余甘子果实在贮运中易
发生褐变对其保存与加工及产品的稳定性均有较大的影响。
1 实验材料与方法
1. 1 实验材料 余甘子果实:本文采用对云南澜沧江、金沙
江、元江流域的 7个县同时采集获得的余甘子作为实验材料。
1. 2 试验方法
1. 2. 1 没食子酸含量测定方法
1. 2. 1. 1 仪器与试剂 Agilent1100(VWD检测器)、甲醇(色谱
纯)、磷酸、纯化水、没食子酸对照品(购自云南省药检所)含
量 98%。
1. 2. 1. 2 测定方法 以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂;以甲
醇 －0. 2%磷酸溶液(5:95)为流动相;检测波长为 273 nm。理
论板数按没食子酸峰计算应不低于 2000。对照品制备:取没食
子酸对照品适量，精密称定，加 50%甲醇制成每 1 mL含 25 μg
的溶液。供试品制备:取约 200 g橄榄果实榨汁后，称取原果汁
约 1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 50%甲醇 50 mL，
称定重量，加热回流 1 h，放冷，再称定重量，用 50%甲醇补足减
失的重量，摇匀，滤过，取续滤液。分别精密吸取对照品溶液
10 μL与供试品溶液 10 μL，注入液相色谱仪，测定，外标法
计算。
1. 2. 2 超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定
1. 2. 2. 1 仪器与试剂 紫外 －可见分光光度计:岛津 UV2450、
精密酸度计(0. 01 pH)、离心机、10 mL 比色管、10 mL 离心管、
玻璃乳钵、A液:pH 8. 20 的 0. 1 mol /L三羟甲基氨基甲烷 －盐
752014 年第 35 卷第 2 期 云 南 中 医 中 药 杂 志
酸缓冲液(内含 1 mmol /L EDTA 2Na)、B 液:4. 5 mmol /L 邻苯
三酚盐酸溶液、10 mmol /L盐酸溶液、蒸馏水。
1. 2. 2. 2 测定方法 (1)在 25℃左右，于 10 mL比色管中依次
加入 A液 2. 35 mL，蒸馏水 2. 00 mL，B液 0. 15 mL，加入 B液立
即混合并倾入比色皿，分别测定在 325 nm 波长条件下初始时
和 1 min 后吸光值，二者之差即邻苯三酚自氧化速率 ΔA325
(min －1)。本试验确定 ΔA325(min
－1)为 0. 060。(2)样液和
SOD酶液抑制邻苯三酚自氧化速率测定按步骤 1 分别加入一
定量样液或酶液使抑制邻苯三酚自氧化速率约为 1 /2ΔA325
(min －1)，即 ΔA325(min
－1)为 0. 030。
计算公式:SOD活力(U/mL)=
ΔA325 －ΔA325
ΔA325
× 100%
50% × 4. 5
× 1V × D (公式 1)
式中:U/mL———SOD酶活力单位。ΔA325—邻苯三酚自氧
化速率。ΔA325—样液或酶液抑制邻苯三酚自氧化速率。
V———所加酶液或样液体积，单位为毫升(mL)。D———酶液或
样液的稀释倍数。4. 5———反应液总体积，单位为毫升(mL)。
1. 2. 3 抗坏血酸(维生素 C)含量的测定
1. 2. 3. 1 仪器与试剂 恒温箱:(37 ±0. 5)℃、可见 －紫外分光
光度仪:岛津(UV2450)、捣碎机、4. 5mol /L 硫酸、85%硫酸、2，4
－二硝基苯肼溶液(20 g /L)、草酸溶液(20 g /L)、草酸溶液
(10 g /L)、硫脲溶液(10 g /L)、硫脲溶液(20 g /L)、1 mol /L 盐
酸、抗坏血酸标准溶液:称取 100 mg纯抗坏血酸溶解于 100 mL
浓度为 10 g /L草酸溶液中，此溶液每毫升相当于 1mg 抗坏血
酸、活性炭:将 100 g活性炭加到 750 mL浓度为 1 mol /L的盐酸
中，回流 1 ～2 h，过滤，用水洗数次，至滤液中无铁离子(Fe3 +)
为止，然后置于 110℃烘箱中烘干。
1. 2. 3. 2 测定方法 在避光的条件下，称取 100 g鲜余甘子果
肉及吸取 100 mL浓度为 20 g /L草酸溶液，倒入捣碎机中打成
匀浆，取 0. 2 g ～1 g匀浆(含 1 mg ～2 mg抗坏血酸)倒入100 mL
容量瓶中，用 10 g /L草酸溶液稀释至刻度，混匀;过滤取25 mL
滤液，加入 2 g活性炭，振摇 1 min，过滤，弃去最初数毫升滤液。
取 10 mL此氧化提取液，加入 10 mL浓度为 20 g /L硫脲溶液，
混匀，此试样定为稀释液。
呈色反应:于三个试管中各加入 4 mL 稀释液。一个试管
作为空白，在其余试管中加入 1. 0 mL浓度为 20 g /L的 2、4 －二
硝基苯肼溶液，再将所有试管放入(37 ± 0. 5)℃恒温箱或水浴
中，保温 3h后取出，除空白管外将所有试管放入冰水中。空白
管取出使其变为室温，然后加入 1. 0 mL浓度为 20 g /L的 2、4 －
二硝基苯肼溶液，在室温中放置 10 min ～ 15 min 后放入冰水
内。其它步骤同其余 3个试样。当试管放入冰水后，向每一试
管加入 85%硫酸 5 mL，后将试管自冰水中取出，在室温放置
30 min后比色。
标准曲线的绘制:加 2 g活性炭于 50 mL标准溶液中，振摇
1 min，过滤，取 10 mL 滤液放入 500 mL 容量瓶中，加 5. 0 g 硫
脲，用 10 g /L草酸溶液稀释至刻度、抗坏血酸(20 μg /mL)，取
5，10，20，25，40，50，60 mL稀释液，分别放入 7个 100 mL容量瓶
中，用 10 g /L硫脲溶液稀释至刻度，使最后稀释液中抗坏血酸
的浓度分别为 1，2，4，5，8，10，12 μg /mL，按试样测定步骤形成
脎并比色，以吸光值为纵坐标，抗坏血酸浓度(μg /mL)为横坐
标绘制标准曲线。
计算公式:X = c × Vm × F ×
100
1000 (公式 2)
式中:X———试样中总抗坏血酸含量，单位为毫克每百克
(mg/100 g)。c———由标准曲线查得或由回归方程算得“试样
氧化液”中总抗坏血酸的浓度，单位为微克每毫升(μg /mL)。
V———试样用 10 g /L草酸溶液定容的体积，单位为毫升(mL)。
F———试样氧化处理过程中的稀释倍数。m———试样的质量，
单位为克(g)。计算结果表示小数点后两位。
2 结果与分析
7个不同产地的余甘子储藏前与储藏中相比，其没食子酸
的含量变化均上升(见表 1);不同产地余甘子储藏前及储藏中
比较，含维生素 C 量变化有 5 例呈上升趋势，2 例呈下降趋势
(见表 2);余甘子中 SOD在不同产地储存前及储存中的活性变
化在表中可以看出有 5例活性减弱，2 例活性增强(见表 3);结
果显示，在余甘子储藏前及储藏中，与维生素 C和 SOD的变化
相比，在余甘子储藏中，没食子酸含量上升的比例最为明显(见
表 1 ～3及图 1)。
表 1 滇橄榄不同产地储藏前及储藏中没食子酸含量的变化(x ± s，n =2)
产地
测定数据(%) 平均值(%) ＲSD%
第1次数据 第2次数据 第1次数据 第2次数据 第1次数据 第2次数据
临沧
0. 0170
0. 0194
0. 0414
0. 0390
0. 018% 0. 040 9. 3 4. 2
鹤庆
0. 0627
0. 0622
0. 151
0. 153
0. 062% 0. 15 0. 57 0. 93
宾川
0. 0259
0. 272
0. 0607
0. 0630
0. 027% 0. 062 3. 5 2. 6
大姚
0. 0523
0. 0566
0. 0726
0. 0754
0. 054% 0. 074 5. 6 2. 7
禄劝
0. 0494
0. 0497
0. 0586
0. 0604
0. 050% 0. 060 0. 43 2. 1
元谋
0. 0659
0. 0644
0. 105
0. 101
0. 065% 0. 10 1. 6 2. 7
墨江
0. 0406
0. 0410
0. 215
0. 218
0. 041% 0. 22 0. 69 0. 98
85 云 南 中 医 中 药 杂 志 2014 年第 35 卷第 2 期
表 2 滇橄榄不同产地储藏前及储藏中维生素 C含量的变化(x ± s，n = 2)
产地
测定数据(mg /100 g) 平均值(mg /100 g) ＲSD%
第1次数据 第2次数据 第1次数据 第2次数据 第1次数据 第2次数据
临沧
185. 82
190. 86
203. 17154. 34 188. 34 204. 6 1. 9 1. 0
鹤庆
169. 64
163. 37
129. 51
124. 38
166. 5 126. 9 2. 7 2. 9
宾川
161. 37
166. 87
138. 86
136. 01
164. 1 137. 4 2. 4 1. 5
大姚
238. 88
246. 96
202. 15
198. 07
242. 9 200. 1 2. 4 1. 4
禄劝
130. 97
132. 34
111. 6
133. 0
131. 6 158. 8 0. 7 23
元谋
166. 87
166. 87
95. 50
106. 15
166. 87 100. 8 0 7. 5
墨江
161. 85
162. 20
124. 30
116. 50
162. 0 120. 4 0. 15 4. 9
表 3 余甘子不同产地储藏前及储藏中 SOD活性的变化(x ± s，n = 2)
产地
测定数据(u /ml) 平均值(u /ml) ＲSD%
第1次数据 第2次数据 第1次数据 第2次数据 第1次数据 第2次数据
临沧
5714. 28
4813. 67
4885. 7
5170. 8
5263. 98 5028. 25 12. 1 4. 0
鹤庆
5532. 79
5717. 21
4389. 6
4891. 3
5625 4640. 4 2. 3 7. 6
宾川
4278. 69
4426. 23
4678. 6
4755. 4
4306. 8 4717 2. 5 1. 2
大姚
5723. 68
5833. 3
4821. 4
4821. 4
5833. 3 4821. 4 0 0
禄劝
3477. 75
3811. 48
3913. 0
4048. 0
3644. 62 3980. 5 6. 5 2. 4
元谋
4943. 8
4943. 8
4628. 57
4574. 18
4943. 2 4628. 6 0 0
墨江
3875
3500
2960. 5
3045. 1
3687. 5 3002. 8 7. 2 2. 0
图 与储存前相比储存中没食子酸含量变化的比率
没食子酸含量增多，可能因为采摘后发生呼吸跃变［5］，膜
透性降低，果实多酚化合物与氧结合，导致余甘子中复杂的多
酚化合物如单宁酸、五没食子酰基葡萄糖、槲皮素、糅花酸等
发生分解反应使没食子酸从这些化合物中解离、脱落，致使没
食子酸增多，并发生褐变［7 ～ 9］;Vc 含量多为减少趋势，可能因
为果实采摘后呼吸链发生断裂等环境变化导致 Vc 降解反应
使其含量降低，或发生非酶褐变从而导致 Vc 含量的下降［10］;
SOD活性多为降低的现象可能是采摘后呼吸链断裂使果实内
部成分发生变化致使有机酸浓度升高、pH下降导致铜锌氧化
酶铜离子解离、PPO逐渐失活引起 SOD失活等，当采摘后由于
褐变等一系列变化导致酶类分解，SOD 活性降低［11］。部分余
甘子采摘后 SOD活性增高，可能是由于当地环境胁迫导致果
实中产生大量的 ＲOS的积累促使 SOD活性增加。
3 结论
从以上实验数据可以看出:不同产地余甘子中的没食子
酸、维生素 C、SOD等活性成分在贮藏中会发生变化，其中没
食子酸含量变化尤为突出，可以考虑将没食子酸作为余甘子
早期褐变的质量控制指标之一。研究并分析余甘子贮藏中活
性产物含量及变化对余甘子等果实类中药的贮藏及养护有较
高价值。
参考文献:
［1］蔡英娜 . 我国余甘子种植资源与开发利用研究的进展［J］．福建果
树，2000，01:2007 ～ 2010.
［2］聂东，马骁，田徽 . 余甘子果实化学成分及现代药理研究进展［J］．
绵阳师范学院学报，2012，11(31):61 － 66.
［3］王飞 . 余甘子抗癌化学物质组分及作用机制研究［D］．中国辽宁 .
辽宁中医药大学 . 2011.
［4］胡炜 . 余甘子提取物对糖尿病大鼠肌肉和脂肪组织胰岛素信号通
路的影响［J］．中国组织工程研究 . 2012，11:2007 － 2010.
［5］王辉 . 余甘子的化学成分和药理作用研究进展［J］． 中国现代
中药 . 2011，13(11):52 － 56.
［6］林河通，陈莲，陈绍军，等 . 橄榄果实采后生物学研究进展［J］．福
建农林大学学报 . 2005，31(4):464 － 469.
［7］张楚晗，梁晓，龚力民，等 . 五倍子中单宁酸转化为没食子酸的酶
法实验探讨［C］．第三届中国中药商品学术年会暨首届中药葛根
国际产业发展研讨会论文集 . 2012.
［8］邱栋梁，刘星辉 . 果肉褐变机理［J］．福建农业大学学报 . 1998，27
(01):37 － 41.
［9］孔祥佳，林河通，陈雅平，等 . 低温储藏对“长营”橄榄果实采后生
理和品质的影响［J］．包装与食品机械 . 2011，29(02):1 － 5.
［10］邓启辉，余爱农 . 二阶导数光谱法测定非酶褐变反应中抗坏血酸
的含量［J］．湖北民族学院学报 . 2010，28(02):194 － 198.
［11］窦俊辉，喻树迅，范术丽，等 . SOD与植物胁迫抗性［J］．分子植物
育种 . 2010，8(02):359 － 364.
(收稿日期:2013 － 11 － 09)
952014 年第 35 卷第 2 期 云 南 中 医 中 药 杂 志