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〔2015-04-25 修回〕
(编辑 曲 莉)
地锦草对移植性肝癌 H22 小鼠抑瘤率和免疫功能的影响
王晓敏 高增光1 邹志坚1 (江西中医药大学，江西 南昌 330004)
〔摘 要〕 目的 研究地锦草对移植性肝癌 H22 小鼠抑瘤率和免疫功能的影响。方法 将肝癌 H22 肿瘤细胞接种到小鼠皮下后，用高、中、低
3 个剂量的地锦草灌胃 2 w，观察地锦草对移植性肝癌 H22 小鼠肿瘤生长的抑制率和脾指数的影响;ELISA 法测定血清白介素(IL)-2 的变化;采用
HE染色，光镜下观察地锦草对肿瘤组织形态学的影响。结果 与模型组比较，地锦草组瘤重明显减轻(P ＜ 0. 05) ，但无剂量依赖效应;地锦草组小
鼠肿瘤抑制率随剂量升高而增加(P ＜ 0. 05) ，且高剂量组肿瘤抑制率达 59. 63%;地锦草组脾指数升高，但无显著差异(P ＞ 0. 05) ;地锦草组血清 IL-2
水平升高(P ＜ 0. 01) ;地锦草组肿瘤细胞数量明显减少，瘤组织的炎性细胞浸润增多。结论 地锦草可抑制移植性肝癌 H22 小鼠的肿瘤细胞生长，
与提高 IL-2 水平增加免疫力有关。
〔关键词〕 地锦草;白介素(IL-2) ;抑瘤率;脾指数;移植性肝癌 H22 小鼠
〔中图分类号〕 Ｒ285 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 1005-9202(2015)13-3505-03;doi:10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2015. 13. 007
基金项目:江西省卫计委中医药项目(2014B046) ;江西省自然基金项目
(2008GZY0018) ;江西省教育厅科技项目(14103)
1 南昌大学第四附属医院
通讯作者:邹志坚(1971-) ，男，主任医师，硕士，硕士生导师，主要从事
肿瘤临床研究。
第一作者:王晓敏(1972-) ，女，副教授，博士，硕士生导师，主要从事中
药对肿瘤防治研究。
清热解毒中药地锦草具有体内抗肿瘤、体外诱导肿瘤细胞
凋亡的作用，但其机制尚不清楚〔1，2〕。本实验以小鼠 H22 移植
性实体瘤为模型，观察地锦草水提液对移植性肝癌 H22 小鼠的
抑制作用及免疫功能影响，探讨地锦草的体内抗肿瘤机制。
1 材料与方法
1. 1 实验动物 H22 腹水瘤小鼠(中科院细胞库提供) ;昆明
种近交系雄性小鼠，SPF级，体重(28 ± 2)g，江西中医药大学实
验动物中心提供，许可证号 SXCK(赣)2011-0001。
1. 2 药物与仪器 地锦草:购自毫州市永刚饮片厂有限公
司，经江西中医药大学中药组鉴定为 Euphorbiae humifusae her-
ba，环磷酰胺注射液(江苏恒瑞医药股份有限公司，批号
12060125)。小鼠酶联免疫(ELISA)白介素(IL)-2 测试盒(上
海西唐生物科技有限公司批号 20120712)。电子分析天平(瑞
士梅特勒-托利多，0. 001g)。UV-2102 紫外分光光度计(尤尼柯
仪器有限公司) ;切片机和脱水机(徕卡) ，徕卡 DL2500 显微镜
(德国徕卡) ;徕卡 CCD图像采集系统(德国徕卡)。
1. 3 造模、分组及给药 将接种 H22 瘤种 7 d的腹水瘤小鼠
以脱颈法处死，无菌条件下抽取腹水瘤细胞悬液 5 ml经离心稀
释，用生理盐水重新悬浮细胞，细胞悬液浓度为 1 × 106 /ml。以
每只 0. 2 ml接种于 60 只昆明种小鼠右腋下，制成实体瘤动物
模型〔3〕。接种 24 h后，分别随机分成 5 组，每组 12 只。低、中、
高剂量组、阳性对照组和模型组。分别灌胃不同剂量的地锦草
低、中、高剂量组按照(66、132、265 mg·kg-1·d-1)剂量灌胃
2 w，阳性对照组按照 50 mg·kg-1·d-1尾静脉注射 1 次，模型组
和阳性对照组小鼠灌胃给予生理盐水 0. 8 ml，连续 2 w。
1. 4 抑瘤率 给药后 14 d称重后处死小鼠，严格剥离干净皮
下肿瘤组织和脾脏使用电子秤称重，计算各组脾脏指数和肿瘤
抑制率。
1. 5 血清 IL-2 的测定 离心分离血清，按试剂盒说明采用
ELISA法进行检测。
1. 6 肿瘤细胞形态学的观察 瘤体固定在 10%甲醛中做石
蜡包埋切片，HE染色，光镜下观察细胞形态。
1. 7 统计学方法 数据以 x ± s表示，采用 SPSS13. 0 软件，组
间进行单因素方差分析，两两比较方差齐时 LSD检验。
·5053·王晓敏等 地锦草对移植性肝癌 H22 小鼠抑瘤率和免疫功能的影响 第 13 期
2 结 果
2. 1 地锦草对移植性肝癌 H22 小鼠生长的影响 用药后高
剂量地锦草与阳性对照组对移植实体瘤均有明显抑制作用。
高剂量地锦草组瘤重量较模型组明显缩小(P ＜ 0. 05) ，但其抑
制作用不如阳性对照组;低剂量和中剂量地锦草组与模型组比
较无统计学差异(P ＞ 0. 05)。与模型组比较，高剂量与阳性对
照组的抑制率明显上升(P ＜ 0. 01) ，但中剂量和低剂量无统计
学差异(P ＞ 0. 05)。见表 1。
表 1 各组移植性肝癌 H22 瘤重及抑
瘤率比较(x ± s，n =10)
组别 移植瘤重量(g) 抑瘤率(%)
模型组 4. 418 7 ± 1. 907 0
阳性对照组 1. 472 3 ± 2. 610 89. 311)
高剂量组 1. 784 0 ± 1. 6982) 59. 631)
中剂量组 4. 024 3 ± 0. 860 8. 92
低剂量组 4. 122 8 ± 2. 721 6. 70
与模型组比较:1)P ＜ 0. 05，2)P ＜ 0. 01
2. 2 地锦草对移植性肝癌 H22 小鼠脾指数和血清 IL-2 的影
响 用药后地锦草与阳性对照组小鼠脾指数均有升高，但地
锦草组与模型组比较无统计学差异(P ＞ 0. 05) ，其抑制作用不
如阳性对照组。地锦草与阳性对照组小鼠血清 IL-2 均有升高，
高、中、低剂量地锦草组与模型组比较有显著差异(P ＜ 0. 05) ;
见表 2。
表 2 各组移植性肝癌 H22 小鼠脾指数和血清
IL-2 比较(x ± s，n =10)
组别 脾指数(g /g) IL-2(ng /L)
模型组 0. 217 ± 0. 051 262. 2 ± 18. 1
阳性对照组 0. 313 ± 0. 062 296. 3 ± 12. 5
高剂量组 0. 252 ± 0. 105 302. 0 ± 8. 91)
中剂量组 0. 256 ± 0. 049 280. 8 ± 8. 21)
低剂量组 0. 250 ± 0. 113 290. 6 ± 22. 91)
与模型组比较:1)P ＜ 0. 05
2. 3 组织形态学变化 模型组瘤区肿瘤细胞部分呈椭圆或
圆形，胞核大深染，病理性核分裂象多见，核质比增大，有明显
的异型性，细胞排列成团块状。地锦草组和阳性对照组肿瘤细
胞数量明显减少，可见明显的核固缩和核碎裂;部分瘤组织内
有不同程度的坏死呈红染区及淋巴细胞浸润，以高剂量组最为
显著。见图 1。
图 1 各组肿瘤的形态(HE，×20)
3 讨 论
中医学认为热毒是恶性肿瘤发生、发展的重要原因之一。
如《灵枢·百病始生篇》云“积之始生，得寒乃生，厥乃成积矣。”
和明·徐春围在《古今医统》中亦指出“气血日亏，相火渐炽，几
何不致噎膈。”即热邪久留体内，血遇热则凝，津液遇火灼为痰，
热与痰、瘀等蕴结形成热毒，热毒阻塞于经络脏腑形成肿瘤〔4〕。
且肿瘤的机械压迫致使脏器血管受压或梗阻，造成脏器功能失
调及血循环障碍，容易发生感染。炎症或感染往往是促使肿瘤
恶化和发展的因素之一。清热解毒中药能控制和消除肿瘤及
其周围的炎症和水肿，临床上常使用清热解毒药物治疗肿瘤，
阻止肿瘤发展〔5，6〕。如清热解毒中药白花蛇舌草可使癌细胞有
丝分裂象受到显著的抑制，使癌组织变性坏死〔7，8〕。本研究观
察给予清热解毒中药地锦草后瘤重明显减轻，抑制率升高，且
光学显微镜下肿瘤细胞数明显减少，出现核深染、异形细胞减
少，固缩和死亡的肿瘤细胞增多，淋巴细胞浸润增多的形态学
变化，提示地锦草能够抑制肿瘤细胞的生长。脾脏的脏器系数
是衡量机体免疫功能的初步指标〔9〕，IL-2 是参与免疫应答的重
要细胞因子，并参与抗肿瘤效应和移植排斥反应。IL-2 促进 T
细胞激活，增强 T细胞杀伤活性，延长 T细胞在体内时间，同时
还可以诱导 T细胞产生 IFN-γ、TNF等细胞因子，增强机体杀伤
肿瘤细胞能力〔10〕。本实验结果显示地锦草能提高脾指数、增加
血清 IL-2 的水平，推测这是地锦草提高机体的免疫力来抑制肿
瘤细胞生长机制之一。现代药理学研究证明地锦草的抗炎、抗
真菌及调节免疫作用与黄酮、三萜、香豆素、甾醇、鞣质及酚酸
类等化合物的有效成分有关〔11〕。地锦草提高机体免疫力来抑
制癌细胞生长的具体成分有待深入研究。
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〔2013-12-09 修回〕
(编辑 赵慧玲 /曹梦园)
甘草对雄性小鼠睾丸生殖毒性的影响
孙新明 肖 莺1 周剑莉 杨亚军 杨赣军 胡红梅 孙 弋
(井冈山大学医学院基础部，江西 吉安 343009)
〔摘 要〕 目的 探讨甘草对雄鼠睾丸生殖毒性的影响。方法 对给以甘草制剂的母鼠所产雄性后代及给药雄性个体的生殖行为和配种能
力、血液睾酮浓度、睾丸指数及组织结构进行测评，并检测给药对小鼠睾丸间质细胞体外培养及其分泌睾酮的影响。结果 长时间内服 450 mg甘草
提取物 /kg体重对雄鼠的性行为和配种能力产生一定程度的影响，对雄性鼠睾丸组织结构及其分泌睾酮的功能有显著影响，但存在个体差异。结论
长时间内服 450 mg甘草提取物 /kg体重对雄性小鼠有一定的生殖毒性作用。
〔关键词〕 甘草;生殖毒性;间质细胞
〔中图分类号〕 Ｒ285 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 1005-9202(2015)13-3507-04;doi:10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2015. 13. 008
基金项目:江西省教育厅科学技术研究项目(GJJ1053) ;井冈山大学博
士科研启动金项目(JZB11018)
1 吉安市食品药品检验所
第一作者:孙新明(1968-) ，男，博士，副教授，主要从事中西医结合与基
础研究。
不孕不育症是全球性复杂的医学和社会学问题之一。随
着工业的日益发达及对环境污染控制的相对不足和临床药物
滥用对男性生殖健康日益严重的影响，男性因素所引发的不育
不孕症发生率越来越高而逐渐引起人们的重视〔1 ～ 3〕。长期以
来，甘草等植物中草药及其复方常作为中药材食品添加物及临
床常用药得以广泛应用，甘草的主要化学成分是甘草甜素、甘
草次酸。而中药药理学认为，大剂量的甘草甜素有雌激素样作
用，而甘草次酸具有抑制雄性小鼠生殖腺产生睾酮的作用〔4〕，
且近代药理研究也发现，不少临床常用的中药如甘草、补骨脂
等可促进雌性动物乳腺发育和子宫明显增重及血清雌激素水
平升高〔5〕，但其雌激素样作用是否与环境雌激素一样具有男性
生殖毒性作用?特别是甘草对男性生殖系统的毒性作用目前
未见系统、详细的研究报道。鉴于此，本研究从中药体内给药
及研究甘草对睾丸结构及功能的影响，同时对分离的睾丸间质
细胞进行体外给药研究甘草制剂对睾丸间质细胞的生长及其
分泌睾酮功能的影响，以了解含雌激素样作用的中草药对睾丸
的生殖毒性作用。
1 材料与方法
1. 1 实验动物和材料 清洁级 BABL /c雄鼠 20 只(购于湖南
斯莱克景达实验动物有限公司) ;市售药用甘草采用超声提取
法和树脂吸附技术自制成浸膏(含甘草提取物 62. 5 mg /ml)
后，灌服液用前以蒸馏水稀释成给药所需药物浓度后经高压灭
菌后冷却备用，培养用液以 PBS 溶液配制成 10 mg /ml 药物浓
度，过滤除菌，置冰箱冷藏备用;
1. 2 主要试剂 DMEM、DMEM/F12、小牛血清、苔盼蓝购于
Gibco公司;胶原酶、透明质酸酶、percoll 分离液、HEPEs 购于
Sigma公司;胰蛋白酶购于 Amresco 公司;HE 染色液、PBS、D-
hanks液培养基均为自制试剂;其他常规普通试剂均为国产分
析纯。
1. 3 体内给药剂量的确定及实验分组 通过预实验确定甘
草浸膏药物高、低剂量组。预实验中低剂量组剂量为人类临床
实际接触水平(临床成人每日常用给药量为含 12 mg甘草酸的
甘草剂量，换算成甘草为 45 mg /kg 体重) ;首次设置的高剂量
组剂量为低剂量组的 30 倍，结果若能使亲代动物出现轻度中
毒，但不出现死亡或死亡率不超过 10%〔6〕，则此剂量确定为高
剂量组给药剂量，否则要调节给药剂量，直至达到要求。
确定高、低给药剂量后，将体内实验分为成年雄性鼠给药
组和妊娠期母鼠给药组。其中雄性鼠给药组的个体为 60 只 8
周龄雄性鼠，在实验前适应性喂养 5 ～ 7 d后，随机分为高、低剂
量组和对照组各 20 只，各组灌胃等量溶液(给药组每只小鼠给
予相应高、低剂量各 0. 4 ml药液，给对照组小鼠每只 0. 4 ml生
理盐水) ，每天 1 次，连续给药60 d。妊娠期母鼠给药组同样分
为高、低剂量组和对照组各 20 只，所有配种母鼠挑选发情雌鼠
(阴门潮湿、发红的性成熟个体) ，按公母比例 1∶ 1放入公鼠笼
内合笼交配，于次日凌晨 7 ～ 8 点检查白色阴道栓者为怀孕鼠，
·7053·孙新明等 甘草对雄性小鼠睾丸生殖毒性的影响 第 13 期