全 文 ：书收稿日期:2014-03-28
作者简介:陈雪(1991-)，女(汉族)，辽宁沈阳人，本科生，E-mail 741490004@ qq． com;* 通讯作者:赵春杰(1960-)，
男(汉族)，吉林农安人，教授，博士，博士生导师，主要从事中西药质量控制技术研究，Tel． 024-23986299，E-mail zcjjljj@
sina． com。
文章编号:1006-2858(2015)06-0441-04 DOI:10． 14066 / j． cnki． cn21-1349 /r． 2015． 06． 006
苘麻中木槿素 A在大鼠体内的药动学研究
陈 雪1，肇鑫宇1，王 淼2，李 木3，赵春杰1*
(1. 沈阳药科大学 药学院，辽宁 沈阳 110016;2. 沈阳药科大学 生命科学与生物制药学院，辽宁 沈阳 110016;
3. 吉林大学 生命科学学院，吉林 长春 130012)
摘要:目的 应用 HPLC法测定大鼠血浆中木槿素 A的质量浓度，对木槿素 A在大鼠体内的药动学
进行研究。方法 采用 Diamonsil C18色谱柱(250 mm × 4. 6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-体积分数为
0. 1%甲酸水溶液(体积比 79∶ 21)，流速为 1. 0 mL·min －1，检测波长为 228 nm，柱温为 25 ℃。应用
液-液萃取法处理血浆，测定 6 只大鼠静脉给予 20 mg·kg －1木槿素 A 后不同时刻血浆中木槿素 A
的质量浓度，采用 DAS2. 1. 1 药动学软件计算药动学参数。结果 木槿素 A 质量浓度在 50 ～
5 000 μg·L －1内线性关系良好，日内、日间精密度均不大于 9. 2%。木槿素 A 的药动学参数如下:
末端消除半衰期 t1 /2为 0. 884 h，末端消除速率 ke 为 1. 412 h
－1。结论 该方法操作简便，准确度高、
灵敏度强、专属性好，可作为测定大鼠血浆中木槿素 A质量浓度的方法，为探讨木槿素 A的药动学
行为提供方法依据，对于评价木槿素 A疗效和安全性有重要意义。
关键词:苘麻;木槿素 A;药物动力学;高效液相色谱法
中图分类号:Ｒ 971;Ｒ 917 文献标志码:A
苘麻(Abutilon theophrasti Medic．)为锦葵科
苘麻属植物苘麻的全草，分布于热带和亚热带地
区，世界多个国家都有生长或栽培，全草具有解
毒、祛风功效。木槿素 A(syriacusin A)(化学结
构式见图 1)为苘麻根的主要成分之一，其主要药
理作用［1］有:对脂质过氧化呈抑制作用，半数致
死量 (50% inhibitive concentration，IC50 )为
0. 54 mg·L －1，其脂质过氧化抑制活性是维生素 E
的 3 倍;具有细胞毒活性，对黑色素瘤、乳腺、肺、
肾脏、前列腺、结肠和中枢神经系统等数种人型癌
细胞呈细胞毒活性，但都低于阿霉素;同时木槿素
A还具有抗皮肤老化的作用。本文作者建立了大
鼠血浆中木槿素 A 的 HPLC 测定方法，研究木槿
素 A在大鼠体内的药动学行为，为木槿素 A 的临
床前研究给予一定的理论指导。
Fig． 1 The chemical structure of syriacusin A
图 1 木槿素 A的化学结构式
1 仪器与材料
Agilent 1100 系列高效液相色谱仪、Chemsta-
tion色谱工作站(美国 Agilent 科技有限公司)，
BSA124S电子分析天平(北京赛多利斯科学仪器
有限公司)，TG332A 微量分析天平(上海分析天
平厂)，XW-80A微型涡旋混合仪(上海沪西分析
仪器有限公司)，D10 氮气吹扫仪(杭州蓝焰科技
有限公司)，HH-2 数显恒温水浴锅(上海亚荣生化
仪器厂)，80-1 电动离心机(江苏金坛医疗仪器
厂)，TGL-16C离心机(上海安亭科学仪器厂)。
甲酸(分析纯，山东禹王实业有限公司)，乙
酸乙酯(色谱纯，天津康科德科技有限公司)，甲
醇(色谱纯，山东禹王实业有限公司)，重蒸水(自
制)，泊洛沙姆 188(巴斯夫中国有限公司)，肝素
注射液(天津市生物化学制药有限公司)，质量分
数 0. 9%的氯化钠注射液(沈阳市志鹰制药厂)。
雄性 SD大鼠，体质量 180 ～ 220 g，沈阳药科
大学实验动物中心提供，合格证号 SCXK(辽)
2012-0001。
木槿素 A(syriacusin A)为苘麻根中提取分离
所得到，其结构经 1H-NMＲ、13C-NMＲ、HMBC 和
第 32 卷 第 6 期
2 0 1 5 年 6 月
沈 阳 药 科 大 学 学 报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol. 32 No. 6
Jun． 2015 p. 441
HSQC 鉴定，HPLC 法测定含量质量分数为
99. 0%;西尼地平(cilnidipine，HPLC 法测定含量
质量分数为 99. 0%，中国药品生物制品检定所，
批号 100303)。
2 方法与结果
2. 1 溶液的制备
精密称取木槿素 A 对照品适量，用甲醇溶解
至质量浓度为 40 mg·L －1的木槿素 A标准储备液，
再用甲醇将木槿素 A标准储备液定量稀释至质量
浓度分别为 0. 25、0. 50、1. 25、2. 50、5. 00、12. 50 和
25. 00 mg·L －1的系列标准溶液和质量浓度分别为低
(0. 1 mg·L －1)、中(0. 5 mg·L －1)、高(4. 0 mg·L －1)
的质量控制(QC)溶液，置 4 ℃下保存备用。
精密称取适量西尼地平对照品适量，用甲醇
溶解至质量浓度为 4. 0 mg·L －1的内标溶液，置
4 ℃下保存备用。
2. 2 色谱条件
色谱柱:Diamonsil C18柱(250 mm × 4. 6 mm，
5 μm);流动相:甲醇-体积分数为 0. 1%甲酸水溶
液(体 积 比 为 79 ∶ 21);柱 温:25 ℃;流 速:
1. 0 mL·min －1;检测波长:228 nm;进样量:80 μL。
2. 3 血浆样品的处理
移取 SD 大鼠空白血浆 200 μL，依次加入
4 mg·L －1西尼地平内标溶液 50 μL、甲醇 50 μL
和乙酸乙酯 600 μL，涡旋 1 min，4 × 103 r·min －1条
件下离心 10 min。移取上清液置离心管中，重复
操作 1 次。合并上清液，在 37 ℃下氮气流吹干。
然后用 100 μL 流动 相 溶 解，涡 旋 1 min，
1 × 104 r·min －1条件下高速离心 10 min。取
80 μL上清液进样分析［2 － 5］。
2. 4 专属性试验
分取 SD 大鼠空白血浆 200 μL，除不加内标
溶液外，其余均按“2. 3”条的方法操作［6］，按
“2. 2”条色谱条件进样 80 μL，记录色谱图，获得
色谱图 2A。向空白血浆中加入质量浓度
50 μg·L －1的木槿素 A 标准溶液和质量浓度
4 mg·L －1的西尼地平内标溶液各 50 μL，按同法
操作，获得色谱图 2B，其中木槿素 A 和西尼地平
的保留时间分别为 8. 01 min和 14. 02 min。取 SD
大鼠注射给药后的血浆样品按相同方法进行操
作，获得色谱图 2C。结果表明，木槿素 A 和西尼
地平的分离度良好;血浆中的内源性物质对木槿
素 A和西尼地平的测定不产生干扰。
1—Syriacusin A;2—Cilnidipine(IS);A—Blank plasma;B—QC plasma samples spiked with syriacusin A and cilnidipine;
C—Plasma sample 3 h after an intravenous administration of syriacusin A
Fig． 2 Chromatograms of blank plasma，QC plasma samples spiked with syriacusin A(50 μg·L －1)and cilnidipine(IS，
4 mg·L －1)，plasma sample 3 h after an intravenous administration of syriacusin A
图 2 空白血浆、50 μg·L －1木槿素 A和 4 mg·L －1西尼地平的 QC血浆样品和静脉给予 20 mg·kg －1木槿素 A 3 h后的
血浆样品的液相色谱图
2. 5 标准曲线的绘制和线性范围考察
取 SD大鼠空白血浆 8 份，每份 200 μL，分别
加入不同质量浓度的系列标准溶液 50 μL，依次
配制成相当于木槿素 A 的质量浓度为 50、100、
250、500、1 000、2. 5 × 103 和 5. 0 × 103 μg·L －1的
标准血浆样品，按“2. 3”条的方法操作，按“2. 2”
条色谱条件进样分析。以血浆中待测物质量浓度
(ρ，μg·L －1)作为横坐标，待测物与内标物的色谱
峰面积比值(A)作为纵坐标，用加权最小二乘法进
行回归运算［7］，求得的标准曲线方程为 A = 1. 29 ×
10 －3ρ +2. 777 × 10 －2，r = 0. 997 3。结果表明木槿
素 A质量浓度在 50 ～ 5 × 103 μg·L －1内与峰面积
比值呈良好线性关系，定量下限为 50 μg·L －1。
2. 6 精密度和准确度试验
分取 SD大鼠空白血浆 200 μL，按“2. 3”条取
QC溶液，由其替代甲醇，制备木槿素 A 质量浓度
244 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 32 卷
分别为 50、100 和 4 × 103 μg·L －1的低、中、高 QC
样品，每个质量浓度均进行 6 样本分析，按
“2. 2”条色谱条件连续测定 3 d 并与标准曲线同
时进行，依据当日的标准曲线计算 QC 样品的测
得质量浓度，与配制质量浓度对照，求方法的精密
度和准确度，结果见表 1。
Table 1 The precision and accuracy for analysis of syriacusin A in rat plasma(n =3)
表 1 木槿素 A精密度和准确度试验结果(n =3)
No． ρadded /(μg·L
－1) ρfound /(μg·L
－1)
ＲSD /%
Intra-day Inter-day
ＲE /%
1 100 98 8. 18 8. 52 2. 0
2 500 488 1. 55 2. 85 2. 4
3 4 000 3 925 2. 08 2. 88 1. 9
2. 7 提取回收率试验
分取 SD大鼠空白血浆 200 μL，按“2. 6”条下
的方法制备质量浓度分别为低(100 μg·L －1)、中
(500 μg·L －1)和高(4 × 103 μg·L －1)3 个质量浓
度的木槿素 A 的 QC 样品，每个质量浓度均进行
6 样本分析，记录色谱峰面积 A。另取 SD 大鼠空
白血浆 200 μL，除了标准溶液和内标溶液在有机
溶剂吹干之后再加入外，其余按“2. 5”条下方法
制成低、中、高 3 个质量浓度(木槿素 A 血浆质量
浓度分别为 0. 1、0. 5 和 4. 0 mg·L －1)的样品，取 80
μL进样分析，获得色谱峰面积 B(3 次测定的平均
值)。以同一质量浓度样品峰面积 A和峰面积 B均
值比值 A/B × 100%求算木槿素 A 的提取回收率。
结果低、中、高 3个质量浓度的木槿素 A的提取回收
率分别为 84. 3%、89. 8%和 95. 5%。内标西尼地平
经同法处理，提取回收率为 87. 2%。
2. 8 稳定性试验
按“2. 6”条的方法分别制备低、中、高 3 个不
同质量浓度的木槿素 A 的 QC 样品，然后对每个
质量浓度的 QC样品进行 3 样本分析。实验中考
察了木槿素 A 血浆样品室温放置 2 h、预处理后
室温放置 24 h、血浆样品零下 20 ℃下冻存 1 周和
血浆样品经历 3 次冷冻-解冻循环的稳定性。比
较低、中、高 3 个不同质量浓度下的 QC 样品中木
槿素 A的测定值和加入值，相对标准偏差均不大
于 ± 10%，结果表明木槿素 A 的血浆样品在上述
4 种条件下均具良好稳定性。
2. 9 木槿素 A的药动学研究
2. 9. 1 药动学试验方案
取健康雄性、体质量(200 ± 20)g SD 大鼠
6 只，给药前禁食 12 h，自由饮水。单次尾静脉注
射 20 mg·kg －1含质量分数为 5% 泊洛沙姆 188 的
木槿素 A生理盐水注射液。于给药前(0 h)和给
药后 0. 03、0. 08、0. 17、0. 25、0. 33、0. 5、0. 75、1. 0、
1. 5、2. 0、2. 5、3. 0 和 4. 0 h 采集眼底静脉丛血
0. 5 mL，置 于 预 先 肝 素 化 的 离 心 管 内，
3 × 103 r·min －1条件下离心 5 min，分离出血浆，保
存在零下 20 ℃冰箱中冷冻待测。
2. 9. 2 药时曲线及药动学参数
血浆样品的测定按“2. 3”条下的方法操作，
以当日的标准曲线计算每个时间点样品中木槿素
A的质量浓度，同时制备低、中、高 3 个不同质量
浓度的 QC样品，每个质量浓度样品进行双样本
分析。QC样品数量不少于每个分析批中样品总
量的 5%，求算未知样品和 QC 样品的质量浓度，
QC样品测定结果的相对标准偏差应小于 15%，
低质量浓度点相对标准偏差应小于 20%，最多允
许 1 /3 的 QC 样品质量浓度结果超过上述限度，
但不能出现在同一质量浓度的 QC 样品中，否则
此批数据不被接受。6 只大鼠单次给药后，以待
测组分峰面积与内标峰面积比值用当日标准曲线
计算木槿素 A的血药质量浓度，木槿素 A 的平均
血药质量浓度-时间曲线见图3。并将各时间点
Fig． 3 The mean blood concentration-time curve of syri-
acusin A
图 3 木槿素 A的平均血药质量浓度-时间曲线
344第 6 期 陈 雪等:苘麻中木槿素 A 在大鼠体内的药动学研究
的血药质量浓度采用非室模型法计算各药动学参
数，应用 DAS2. 1. 1 药动学软件计算所得 6 只大
鼠尾静脉注射木槿素 A(20 mg·kg －1)后的主要药
动学参数见表 2。
Table 2 The main pharmacokinetics parameters of syriacusin A
表 2 6 只大鼠尾静脉注射木槿素 A(20 mg·kg －1)后的主要药动学参数
t1 /2 /h ke /h
－ 1 CL /
(L·kg －1·h)
Vd /
(L·kg －1)
t(MＲ(0-t))/
h
t(MＲ(0-∞))/
h
AUC(0-t)/
(mg·L －1·h)
AUC(0-∞)/
(mg·L －1·h)
0. 884 1. 412 1. 4 × 10 －2 1. 9 × 10 －2 0. 725 0. 983 1 360. 347 1 443. 513
3 讨论
a. 本实验建立了 HPLC 法测定大鼠血浆中
木槿素 A 的分析方法。研究了单次大鼠尾静脉
注射木槿素 A 20 mg·kg －1的药物动力学行为。测
得的木槿素 A在大鼠体内的药动学参数如下:t1 /2
为 0. 884 h，ke 为 1. 412 h
－1。该方法可作为大鼠
血浆中木槿素 A质量浓度的测定方法，为探讨木
槿素 A的药动学行为提供了方法依据。
b. 实验中，对检测波长进行了考察。参照文
献和紫外扫描图谱［8］，分别考察了在波长228、
244、258、274 和 364 nm下测定木槿素 A 的含量。
结果表明，在 228 nm 下测定木槿素 A 峰面积响
应最大且色谱峰对称。
c. 本实验作者也对内标物进行了考察。预
试了氯霉素、氟康唑、普萘洛尔、异欧前胡素和西
尼地平，但在该色谱条件下氟康唑和异欧前胡素
保留时间过长(大于 15 min)，氯霉素和普萘洛尔
与血浆中内源性物质分离度不好，只有西尼地平
能够实现与木槿素 A 完全分离，保留时间合适，
且与内源性物质实现较好地分开。
d. 常用的生物样品前处理方法有沉淀蛋白
法(PPT)、液-液萃取法(LLE)和固相萃取法
(SPE)［9］。其中，固相萃取法所需样品量少，可以
避免乳化现象的产生，且便于自动化操作，但成本
比较高。本实验作者考察了有机溶剂沉淀蛋白法
和液液萃取法对血浆样品进行前处理。结果表
明，有机溶剂沉淀法中，测得的血浆质量浓度依次
是:甲醇 ＞丙酮 ＞乙腈;液液萃取法中，测得的血
浆质量浓度依次是:乙酸乙酯 ＞乙醚 ＞石油醚。
液液萃取次数考察了 1 次和 2 次。综合分析，选
择了乙酸乙酯萃取 2 次的提取方法。
e. 本实验作者也对给药溶液制备方法进行
了选择。为了增大木槿素 A 的溶解度，考察了不
同浓度的羧甲基纤维素钠(质量分数为 0. 5%、
1%、5%)和泊洛沙姆 188(质量分数为 2%、4%、
5%)2 种在制剂中常用的助溶剂，最终选定了溶
解较完全的、且动物能够耐受的质量分数为 5%
泊洛沙姆 188 生理盐水溶液。
参考文献:
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(下转至第 456 页)
444 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 32 卷
Ｒesearch and control of impurities in levetiracetam
MA Ping* ，WANG De-gang，ZHONG Ya-ni，WANG Ping，LIU Jun-hua
(Zhuhai United Laboratories Co．，Ltd．，Zhongshan 528467，China)
Abstract:Objective To establish an HPLC method for simultaneous determination of process impurities，
degradation impurity and intermediate products in levetiracetam．Methods The determination was performed
on a Kromasil 100-5 C18 column(250 mm × 4. 6 mm，5 μm)with 0. 1% triethylamine in water adjusted by
phosphoric acid to pH 5. 5-acetonitrile(V ∶ V = 90∶ 10)as mobile phase． The flow rate was 1. 0 mL·min －1 ．
The detection was set at 205 nm． The column temperature was maintained at 35 ℃ ． Ｒesults There was a
good linear relationship in the experimental concentrations of the eight impurities(r ≥0． 999 9)over the test-
ed ranges． The detection limit ranges were from 7 － 240 μg·L －1 and the recoveries ranged from 99. 2% －
107. 3% with ＲSD less than 3. 0%(n = 9)． Conclusions The method is simple，accurate with good specifici-
ty and high sensitivity，which can be used in quality control of related substances in levetiracetam．
Key words:levetiracetam;HPLC;

quality control
(上接第 444 页)
Studies on pharmacokinetics of syriacusin A in Abuti-
lon theophrasti Medic． in rats
CHEN Xue1，ZHAO Xin-yu1，WANG Miao2，LI Mu3，ZHAO Chun-jie1*
(1． School of Pharmacy，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China;2． School of Life
Science and Biopharmaceutics，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China;3． College of
Life Science，Jilin University，Changchun 130012，China)
Abstract:Objective To develop a rapid and sensitive method for the determination of syriacusin A in rat
plasma by HPLC for pharmacokinetics study．Methods The separation was performed on a Hypersil ODS C18
column(250 mm × 4. 6 mm，5 μm)with the mobile phase consisting of methanol and 0. 1% formic acid
(V ∶ V = 79∶ 21)． The detective wavelength was set at 228 nm，the column temperature was 25 ℃ and the
flow rate was 1. 0 mL·min －1 ． The plasma was prepared by liquid-liquid extraction． Six male rats were given
a single dose of syriacusin A(20 mg·kg －1)，and the pharmacokinetics parameters were calculated by DAS
2. 1. 1 software． Ｒesults The linearity of syriacusin A was ranged from 50-5 000 μg·L －1 ． The ＲSD of intra-
day and inter-day variations were no more than 9. 2% ． The main pharmacokinetics parameters for syriacusin
A were as follows:t1 /2 was 0. 884 h，ke was 1. 412 h
－1 ． Conclusions This method is simple and sensitive
which can be applied to investigate the pharmacokinetics of Syriacusin A in rats．
Key words:Abutilon theophrasti Medic．;syriacusin A;pharmacokinetics;HPLC
654 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 32 卷