全 文 :Study on the sedative hypnotic effect and effect of analgesia
of the alcohol extract of Jasmine root in mice
Ning Tian1,Liang Hong1,Huang Weizhen2,Duan Xuelin3,Peng Yue3,Zhao Tiejian3
(1Department of Pharmacology,Guangxi Health Vocational & Technical College,Nanning 530023;2 Guangxi Maternal and
Child Health Hospital,Nanning 530003;3 Basic Medical College,Guangxi University of TCM,Nanning 530001)
Objective:Explored the effect on the central nervous system of the water and alcohol extract of Jasmine root in mice to elucidate the
working mechanism and to provide expremental basis for the development and application of jasmine root. Methods:Hot plate method and
glacial acetic acid torsion body method are used to observe the analgesic action. The independent activity determination method is applied to
observe the drug sedation action ;Sodium pentobarbital synergy is taken to observe this drug's hypnotic effect. Results:Aqueous extract of
jasmine root no analgesic and sedative hypnotic effect. Alcohol extract of jasmine root(9. 0,12. 0,18. 8 g /kg)can reduce mice body torsion
times(P < 0. 05)and increase mice pain threshhold indicating its analgesic action(P < 0. 05). can make mice independent activity decreases
indicating its sedative hypnotic effect;Alcohol extract of jasmine root(9. 0,18. 8g /kg)has synergistic effect with pentobarbital sodium indica-
ting its hypnotic effect(P < 0. 01). Conclusion:Jasmine root alcohol extract have sedative-hypnotic effect and the effect of analgesia in
mice.
Key words Jasmine root;analgesic;sedative;hypnotic
地锦草对红色毛癣菌感染豚鼠的影响
*
郭 鑫1,李治建1**,古力娜·达吾提2,斯拉甫·艾白1**
(1 新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所;2 新疆维吾尔自治区维吾尔医医院,乌鲁木齐 830049)
摘 要 目的:评价地锦草提取部位对红色毛癣菌感染豚鼠皮肤模型的影响。方法:建立豚鼠皮肤癣菌感染模型,实验前 24
h剪除实验动物背部毛发,用无菌粗砂纸轻轻磨破豚鼠背部皮肤,以观察到点状渗血为宜,将红色毛癣菌涂抹于豚鼠皮肤表面。造
模成功后,病变部位分别涂抹地锦草提取部位乳膏低剂量( 0. 1 g /cm2 ) 、中剂量( 0. 2 g /cm2 ) 、高剂量( 0. 4 g /cm2 ) 、阳性药特比萘芬
乳膏( 0. 2 g /cm2 ) ,以皮肤病变程度、治愈率和真菌镜检转阴率为评价指标,观察地锦草提取部位对豚鼠皮肤癣菌感染模型的治疗作
用。结果:与模型组比较,地锦草提取部位对豚鼠皮肤红色毛癣菌感染治疗效果显著,其中地锦草提取部位高剂量组( 0. 4 g /cm2 ) 治
愈率为 88. 90%,中剂量( 0. 2 g /cm2 ) 为 87. 50%,低剂量( 0. 1 g /cm2 ) 为 77. 80%。通过病理切片观察高、中剂量可明显改善感染组
织皮肤毛囊生长情况。结论:地锦草提取部位涂抹对豚鼠皮肤红色毛癣菌感染有一定的治疗作用。
关键词 地锦草;红色毛癣菌;豚鼠
近年来,真菌感染的发病率和致死率呈上升趋势[1],浅部
真菌病的发病率持续性增加,尤其是在边疆少数民族地区发病
率高,一直是影响人民健康的重大问题。红色毛癣菌(Tricho-
phyton rubrum)是临床最常见的皮肤癣菌,是浅部真菌病的主要
病原菌,其中 69. 5 % 的皮肤癣菌病是由红色毛癣菌感染所
致[2],主要侵犯人的皮肤、指(趾)甲、毛发,所致癣菌病病程持
久,难治愈,易复发。地锦草是维吾尔医常用药材,临床主要用
于治疗皮肤癣菌病。前期研究发现,地锦草提取物及其不同分
离部位均具有显著的抗皮肤真菌作用,且对红色毛癣菌较为敏
感,但其药效学基础不够完善。本研究考察了地锦草提取部位
乳膏对红色毛癣菌感染豚鼠模型治疗作用,为临床治疗由红色
毛癣菌引起的皮肤病和新药开发提供实验依据。
1 材料与方法
1. 1 试验药物 地锦草药材产自新疆(购买于乌鲁木齐百草
堂药店),经新疆维吾尔自治区维吾尔医医院药剂科主任药师
艾尼瓦尔鉴定为地锦草(Euphoria humifusa Willd.)的干燥全草。
地锦草提取部位(EHAC批号:20121225),由新疆维吾尔自治区
维吾尔医药研究所实验室自制,采用分光光度法和 HPLC 法测
其中总黄酮含量为 400. 7 mg /g,鞣酸含量为 159. 61 mg /g。
将液体石蜡 20 克,白凡士林 700 克和羊毛脂 60 克于烧杯
中,置于水浴上加热至 80℃左右混合熔化,加入地锦草有效部
位 200 克,混匀。另将氮酮 20 克,对羟甲基苯甲酸乙酯 0. 2 克
置小烧杯中,于水浴上亦加热至 80 ℃左右,在等温并搅拌下将
其以细流状加入上述油相成分中,于水浴上继续保持恒温并搅
拌至呈乳黄色半固体状,将其置于室温下继续搅拌至冷凝,既得
地锦草提取部位乳膏 1000 克。每克地锦草提取部位相当于生
101中药药理与临床 2014;30(2)
* [基金项目]新疆维吾尔自治区自然科学基金资助项目( 2011211B52) **通讯作者
DOI:10.13412/j.cnki.zyyl.2014.02.032
药 26 克。
1. 2 动物 豚鼠 80 只,雌雄各半,普通级,体重 250 ~ 300 g,
新疆维吾尔自治区医学实验动物研究中心提供,动物生产许可
证号:SCKK(新)2011-0002。
1. 3 试剂 地塞米松(湖南润弘制药股份有限公司,批号;
H41020330);醋酸曲安奈德(浙江仙琚制药股份公司产品,批
号;H38020762);特比萘芬乳膏(通药制药集团股份有限公司,
批号;H320066125)。
1. 4 仪器 DM2500 显微镜,德国 LEICA;BHC-1300ⅡA 型生
物安全柜,苏州安泰空气技术有限公司。
1. 5 方法 普通级豚鼠 60 只,每组 10 只,按体重、性别随机分
为 6 组:空白对照组、模型对照组、阳性药特比萘芬组、地锦草提
取部位涂抹低、中、高剂量组。实验动物预处理:除空白对照组
外,接种前 3d开始,每日 1 次股部肌肉注射给予曲安奈德注射
液 20 mg /kg·d。将红色毛癣菌菌株接种于 PDA 培养基,10 d
后轻轻刮取表面菌落,移至无菌的 PBS,无菌研钵内研磨成菌丝
段(含分生孢子)悬液,调整菌丝段 /孢子浓度为 1 × 108 cfu /ml
待用。
实验前 24 h 剪除实验动物背部毛发,面积 2. 5 cm × 2. 5
cm[4]。无菌生理盐水冲洗,电吹风吹干。24 h后用 75%酒精擦
拭脱毛部位,待脱毛部位残余酒精挥发干燥后,用无菌粗砂纸
轻轻磨破豚鼠背部皮肤,以观察到点状渗血为宜,涂布菌悬液,
空白对照组涂无菌生理盐水。除空白对照组外的各组动物马
上腹腔注射给予地塞米松注射液 7. 5 mg /kg,隔日重复注射 1
次,共 3 ~ 4 次。每日观察实验动物接种处皮肤红肿、渗出、鳞片
样改变、脱屑、结痂和毛发生长变化。接种后第 4 d开始刮取少
许动物背部接种处皮屑进行 10%氢氧化钾常规镜检,隔日进行
1 次,至接种后第 8 天,同时接种于含氯霉素和放线菌酮的 PDA
培养基,以镜检和培养阳性为造模成功。
造模成功后 48 h 内开始实验治疗,每日一次,空白对照组
和模型对照组不给药。按体表面积计算,地锦草提取部位乳膏
低剂量(0. 1g /cm2),中剂量(0. 2g /cm2),高剂量(0. 4g /cm2),每
日一次;阳性对照盐酸特比奈芬乳膏组每次用药量为 0. 2g /
cm2,空白组、模型组给予基质 0. 2g /cm2,每日一次[5]。局部涂
搽各种药物时,至少应超过皮损边缘 0. 5cm,共给药一周。受试
物组前 7 天每天 1 次于感染区涂受试物,后 7 天停止涂药,阳性
对照组前 7 天每天 1 次于感染区涂受试物,后 7 天停止涂药,观
察并比较受试物和对照组的结果。各组豚鼠处死后,取病变部
位皮肤一分为二,其中一块 10%甲醛溶液中固定 72 h 后,石蜡
包埋,切片厚 3μm,进行常规苏木精-伊红(HE)染色后镜检;与
此同时,另外一部分皮肤用 Carnoy 固定液固定,进行过碘酸-雪
夫(PAS)染色后镜检。
2 结果
2. 1 造模后一般观察 造模前各组豚鼠一切活动正常,造模
后,豚鼠性情暴躁,时常相互间厮打,四肢及头部常见被抓伤,精
神萎靡,毛发粗糙无光,反应迟钝,造模部位皮肤第 4 天大量脱
白色鳞屑,后续几天陆续出现蔓延、红肿、渗出,病变逐渐向四周
扩散,真菌镜检结果呈阳性,至造模第七天菌丝和孢子浓度为
0. 4 × 106 ~ 5 × 106 cfu /mL之间可用于后续试验,见图 1。
图 1 各组豚鼠造模后一般观察与皮肤镜检
2. 2 地锦草提取部位乳膏对豚鼠皮肤癣菌感染模型的治疗作
用 造模成功后 48 h内开始实验治疗,分别给予地锦草提取部
位乳膏低剂量(0. 1 g /cm2),中剂量(0. 2 g /cm2),高剂量(0. 4
g /cm2),每日一次;阳性对照盐酸特比奈芬乳膏组每次用药量
为 0. 2 g /cm2,每日一次。给药一周后,高剂量组与阳性药组病
变部位皮肤恢复平整、光滑状,真菌镜检结果为阴性。而模型组
与低剂量组皮肤仍呈现成块白色鳞屑状,真菌镜检结果为阳
性。与特比奈芬乳膏对比,高剂量组治愈效果较好,治愈率接近
盐酸特比奈芬乳膏。其中地锦草提取部位高剂量组(0. 4 g /
cm2)治愈率为 88. 90%,中剂量(0. 2 g /cm2)为 87. 50%,低剂量
(0. 1 g /cm2)为 77. 80%,提示地锦草有效部位提取物对豚鼠皮
肤癣菌感染模型有一定的治疗作用,见图 2,表 1。
201 中药药理与临床 2014;30(2)
图 2 各组豚鼠给药后一般观察与皮肤镜检
表 1 地锦草提取部位乳膏对豚鼠皮肤癣菌感染模型治愈率
组别
剂量
(g /cm2)
鼠数
(只)
治愈数 未治愈数
治愈率
(%)
空白对照 0. 2 9 0 0
模型对照 0. 2 8 0 8 0
特比萘芬乳膏 0. 2 8 8 0 100**
地锦草提取部位乳膏 0. 4 9 8 1 88. 89**
地锦草提取部位乳膏 0. 2 8 7 1 87. 50**
地锦草提取部位乳膏 0. 1 9 7 2 77. 78*
与模型组比较 * P <0. 05,** P <0. 01
2. 3 组织病理学变化 光镜下观察,病理切片 HE 结果显示,
除空白与阳性药组外,其余各组均具有不痛成都的皮炎和毛囊
炎等病变,肌纤维间隙明显增大,肌细胞中有较多淋巴细胞、浆
细胞等炎症细胞侵润。其中高剂量组病变程度较小,其余炎症
在图片中清晰可见。PAS染色图中可见,模型组毛囊为红色,显
示其糖组织被破坏,其余各组均具有较好的治疗效果,阳性药
和高剂量涂抹组,毛囊中未见菌丝,证明其作用效果良好,分别
见图 3,图 4。
图 3 各组豚鼠治疗后光镜下形态学图 ( HE,× 400)
图 4 各组豚鼠治疗后光镜下形态学图 ( PAS,× 400)
3 讨论 红色毛癣菌是一种人源的皮癣菌,引起常见的皮肤浅部真
301中药药理与临床 2014;30(2)
菌病,如手癣、足癣、头癣等。普通短毛的豚鼠是著名的实验动
物,对红色毛癣菌较其它动物敏感,故选择豚鼠进行皮肤癣菌
造模实验。古力娜·达吾提[6]等报道,维药地锦草乳膏对豚鼠
皮肤红色毛癣菌感染的治疗效果,优于石膏样毛癣菌等其它菌
种,并且各组治愈率均在 75%以上。在本实验中由于造模期间
个别豚鼠抵抗力较差,各组均出现了少量死亡现象。
本实验过程与结果显示,造模第 4 天开始,豚鼠皮肤开始大
量的脱屑,造模第 6 天与造模第 7 天红肿较严重,部分豚鼠皮肤
表面出现渗出液,菌检结果图显示,豚鼠第 3 天开始,皮肤表面
便可以检查到真菌存在,造模第 4 天到造模成功,皮肤皮屑均可
以培养出红色毛癣菌,综合上述结果判定造模成功。给药第 3
天开始,皮屑减少较明显,并且皮肤逐渐恢复了平整,到给药第
7天,镜检基本成阴性并且皮屑培养也基本上呈现阴性,提示药
物作用效果良好。动物处死后,病理切片 HE结果显示,除空白
与阳性组外组外,其余各组均具有不痛成都的皮炎和毛囊炎等
病变,其中阳性药组与高剂量组病变程度较小,其余炎症在图
片中清晰可见。PAS染色图中可见,模型组毛囊为红色,显示其
糖组织被破坏,其余各给药组均具有较好的治疗效果,与阳性
药对比高剂量涂抹组毛囊中未见菌丝,证明其作用效果良好。
参考文献
1 Dixon DM,McNeil MM,Cohen ML,et al. Fungal infections a growing
threat. Public Health Rep,1996;111(3)∶ 226 ~ 235
2 斯拉甫,阿布都热依木,努尔买买提,等.夏塔热片合用其乳膏的免
疫调节功能.中国免疫学杂志,2000;16(5)∶ 269 ~ 270
3 国家药典委员会.中华人民共和国药典. 2010 版一部. 北京;中国医
药出版社,2010;118
4 盛国荣,谢勇.肤康涂膜剂对豚鼠石膏样毛癣菌感染的作用研究.中
国药师,2005;8(5)∶ 395 ~ 397
5 Rogers J F,Nafziger A N,Jr Bertino J S. Pharmacogenetics affects dosing,
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6 古力娜·达吾提,尤丽都孜,努尔买买提,等.维药地锦草乳膏的体
外抗真菌及其对豚鼠皮肤真菌感染的治疗作用研究. 中药药理与临床,
2007;23 (5)∶ 178 ~ 180
Effect of Euphorbia humifusa extract on guinea pig skin infectionmodel of Trichophyton rubrum
Guo Xin1,Li Zhijian1,Gulnar·Dawuti2,Silafu·Aibai1
(1 Xinjiang Institute of Traditional Uyghur Medicine;2 Uighur Medicine Hospital of Autonomous Region,Urumqi 830049)
Objects:The treatment effect of effective parts of evaluation at the Euphoria humifusa Willd on guinea pig Trichophyton rubrum skin in-
fection. Methods:Establishing the model of guinea pig skin ringworm fungi infection experiments for 24 h before cut off animal hair back,
covers an area of 2. 5 cm × 2. 5 cm. With sterile sandpaper gently worn out the back of the guinea pig skin,dotted with observed ooze blood
advisable,Trichophyton rubrum smeared on the surface of the skin of guinea pigs in order to establish guinea pig dermatophytes infection mod-
el. After the success of the building,respectively the lesion site spread it to humifusa extract cream low doses (0. 1 g /cm2),middle dose
(0. 2 g /cm2),high doses (0. 4 g /cm2),positive-controlled than naphthalene finn cream (0. 2 g /cm2). To evaluate the degree of skin le-
sions,the cure rate and fungal microscopy negative rate indicators. Therapeutic effect is observed though guinea pigs dermatophytes infection
model in Euphoria humifusa. Results:Compared with model group,the area of grass dissolving of guinea pig skin red hair versicolor bacteri-
um infection treatment effect is remarkable,Which parts in euphorbia humifusa extract high dose group (0. 4 g /cm2)cure rate was 88. 90%,
middle dose (0. 2 g /cm2)was 87. 50%,low dose (0. 1 g /cm2)was 77. 80%,compared with model group positive-controlled (P < 0. 01),
high dose (P < 0. 01) ,middle dose group (P < 0. 01) ,low dose group (P < 0. 05) ,infection by pathological observation can obviously im-
prove the skin hair follicle growth situation. Conclusion:The effective parts of Euphoria humifusa daubed had certain therapeutic effect on
guinea pig skin Trichophyton rubrum infection.
Key words Euphorbia humifusa(地锦草);Trichophyton rubrum;guinea pigs
不同产地丹参所组成的复方丹参影响大鼠血液流变及血栓形成的比较研究
*
张 磊,杨 薇,吴诗惠1,邓 谦2,陈 雏,李东晓**,徐学民
(四川省中医药科学院,成都 610041;1四川逢春泰瑞制药有限公司,成都 611731;
2四川省第二中医医院,成都 610031)
摘 要 目的:评估丹参产地对复方丹参活血化瘀药效的影响及与法定指标性成分含量的关系,探索药理学方法作为一种复
方丹参片质量表征方式的可能性。方法:按现行中国药典方法制备含不同产地丹参的复方丹参样品,高效液相色谱法测定其中丹
酚酸 B和丹参酮 IIA的含量;灌胃给予上述样品,考察其对鹿角菜胶致小鼠鼠尾血栓、大鼠动-静脉体外血栓形成的影响,及对实验
401 中药药理与临床 2014;30(2)
* 国家中医药管理局中药质量生物学评价重点研究室建设项目;四川省科技支撑计划( 2011NZ0069) 资助项目 **通讯作者