全 文 ：甘遂醋炙前后对脾淋巴细胞活力和腹腔
巨噬细胞释放 NO的量效关系比较研究
颜晓静，李 璘，李征军，李 媛，高 兰，曹雨诞，唐于平，张 丽
(南京中医药大学·江苏省方剂研究重点实验室，江苏 南京 210046)
doi:10． 3969 / j． issn． 1001 － 1978． 2011． 05． 009
文献标识码:A 文章编号:1001 － 1978(2011)05 － 0629 － 04
中国图书分类号:R-332;R282． 71;R329． 24;R392． 12
摘要:目的 比较甘遂醋炙前后对脾淋巴细胞活力和腹腔巨
噬细胞释放 NO的量效关系，初步探讨甘遂醋炙减毒机制。
方法 采用 MTT法分析脾淋巴细胞活力和 Griess法分析大
鼠腹腔巨噬细胞 NO释放情况，比较甘遂生品、清炒品、醋润
品和醋炙品的致炎毒性及量效关系比较。结果 在 9. 5 ～ 4
750 mg·L －1浓度范围内，甘遂生品组与阴性对照组比较，能
够促进脾淋巴细胞增殖和腹腔巨噬细胞 NO 的释放(P ＜
0. 01) ，药物作用呈现一定的量效关系;甘遂清炒组、醋润组
和醋炙组与甘遂生品组比较，均能抑制脾淋巴细胞增殖和腹
腔巨噬细胞 NO释放(P ＜ 0. 05) ，其抑制顺序为醋炙品 ＞醋
润品 ＞清炒品，且抑制作用呈现一定的量效关系。结论 在
9. 5 ～ 4 750 mg·L －1浓度范围内，甘遂清炒品、醋润品和醋
炙品均能降低甘遂的致炎毒性，且降低毒性作用呈现一定的
量效关系，并提示在甘遂醋炙过程中加热和醋润两个炮制程
序能够起到降低甘遂致炎毒性的协同作用，从而为探讨甘遂
醋炙减毒机制提供了一定的依据。
关键词:甘遂;醋炙甘遂;致炎毒性;醋炙减毒;脾淋巴细胞;
腹腔巨噬细胞;量效关系
收稿日期:2011 － 01 － 26，修回日期:2011 － 03 － 07
基金项目:国家重点基础研究发展计划(973 计划)资助项目(No
2011CB505300-03) ;国家自然科学基金资助项目(No
30973940) ;国家教育部“新世纪优秀人才支持计划”资助
项目(No NCET-09-0163) ;江苏省中医药管理局课题资助
项目(No H05075) ;江苏高等学校优秀科技创新团队支持
计划资助项目(2009 年度)
作者简介:颜晓静(1987 －) ，女，硕士生，研究方向:中药炮制，E-mail
yanxiaojing963@ 163． com;
张 丽(1971 －) ，女，博士，副教授，研究方向:中药炮制
与质量控制，通讯作者，Tel:025-85811519 ，E-mail zhangli
@ njutcm． edu． cn
甘遂为大戟科大戟属植物甘遂 Euphorbia Kan-
sui T． N． Liou ex T． P． Wang的块根［1］，始载于《神
农本草经》，列为下品［2］。其味苦，性寒，有毒，具有
泻水逐饮、破积通便之功效，用于水肿胀满、胸腹积
水、痰饮积聚、气逆咳喘、二便不利等症［3］。临床上
广泛用于治疗肝硬化腹水、渗透性胸膜炎、肾炎水肿
以及晚期血吸虫病所致的腹水等。但是，甘遂对口
腔、胃肠道、眼及皮肤粘膜等具有严重的刺激性［4］，
其致炎［5］、促发肿瘤［4］等毒性严重制约着该药的临
床使用。中医传统采用醋炙来降低甘遂的毒性和刺
激性，缓和其泻下作用［6］，但对于醋炙降低甘遂毒
性作用的物质基础及作用机制，国内外迄今尚未见
明确报道。现代研究表明［7］，甘遂的毒性成分具有
明显的致炎毒性作用，因此，本实验采用小鼠脾淋巴
细胞和大鼠腹腔巨噬细胞模型，通过对甘遂生品、清
炒品、醋润品和醋炙品的致炎毒性及量效关系进行
比较，初步探讨了甘遂醋炙减毒机制。
1 材料
1． 1 试剂 MTT为 Solarbia公司产品;优级新生牛
血清为中美合资兰州民海生物工程有限公司产品;
RPMI1640 培养基为 Gibco公司产品;LPS为 Solarbio
公司产品;三羟甲基氨基甲烷为 Sigma 公司产品;
NH4Cl为汕头市西陇化工厂有限公司产品;对氨基
苯磺酸为上海青析化工科技有限公司产品;N-(1-萘
基)乙二胺二盐酸盐为国药集团化学试剂有限公司
产品。其他试剂均为分析纯。
1． 2 仪器 超净工作台，苏州净化设备有限公司;
CO2 恒温干燥箱，SANYOA公司;低速自动平衡离心
机，北京医用离心机厂;倒置相差显微镜，Olympus
公司;酶标仪，Bio-Rad 公司;水平摇床，沃德生物医
学仪器分公司。
1． 3 药材 甘遂采自陕西宝鸡县赤沙乡，经南京中
医药大学王春根教授鉴定为大戟科植物甘遂 Eu-
phorbia Kansui T． N． Liou ex T． P． Wang的块根。
1． 4 供试品溶液的制备 甘遂生品(GS-1) :取大
小分档后的甘遂 100 g 打粉备用(打粉得率为
99. 3%) ;甘遂加热清炒品(GS-2) :取大小分档后的
甘遂 100 g 置已加热到 260 ℃的炒锅中，不断翻炒
至颜色加深略有焦斑时，取出，放凉，打粉备用(打
粉得率为 99. 6%) ;甘遂醋润品(GS-3)取大小分档
后的甘遂 100 g置烧杯中，用 30 g 米醋拌匀，闷润，
待醋被充分吸尽后，晾干，打粉备用(得率为
98. 0%) ;甘遂醋炙品(GS-4)取大小分档后的甘遂
100 g 置烧杯中，用米醋 30 g 拌匀，闷透，待醋被充
·926·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2011 May;27(5) :629 ～ 32
分吸尽后，置已加热到 260 ℃的炒锅中，不断翻炒至
颜色加深略有焦斑时，取出，放凉，打粉备用(得率
为 96. 6%)。
分别取上述 4 种甘遂供试品粗粉(过 24 目筛)
各 25 g，加乙醇 50℃温浸 4 次，每次 500 ml，合并温
浸液，50℃减压回收溶剂，浓缩液转移至 100 ml 量
瓶中，加乙醇至刻度。准确量取 5 ml 留样，其余
50℃减压回收溶剂至近干，用乙酸乙酯萃取 5 次，每
次 50 ml，合并萃取液，50℃减压回收溶剂至干，残渣
用 DMSO溶解并转移至 5 ml 量瓶，加 DMSO 至刻
度，摇匀。再以 RPMI1640 培养液配制为不同浓度
的溶液，0. 22 μm滤器推滤除菌，即得。
1． 5 动物 ICR 小鼠，♂，体质量(20 ± 2)g;SD 大
鼠，♂，体质量(200 ± 20)g，均由浙江省动物实验中
心提 供。动 物 合 格 证 号 分 别 为 SCXK (浙)
20080020、SCXK(浙)20080033。
2 方法
2． 1 甘遂醋炙前后对小鼠脾淋巴细胞活力的影
响［8 － 9］ 取小鼠脾脏制备小鼠脾细胞悬液，调整细
胞密度为 1 × 109·L －1。将新分离的小鼠脾淋巴细
胞加入 96 孔培养板 180 μl /孔，然后加入不同浓度
的甘遂各供试品的 RPMI1640 培养液 20 μl /孔，甘
遂各供试品的终浓度分别为 9. 5、95、950、4 750、
9 500 mg·L －1，阳性对照组加入 LPS，终浓度为 10
mg·L －1，设阴性对照组(加等体积细胞培养液) ，同
时设无细胞对照组，以排除假阳性。每个浓度设 6
个复孔，置于 37 ℃，5% CO2 的饱和湿度培养箱中
培养 24 h 后，加新鲜配制的 5 mg·L －1的 MTT 20
μl /孔，继续培养 4 h，离心，轻轻吸去上清，加 DMSO
150 μl /孔，水平摇床混匀，酶标仪于 490 nm 波长处
测定吸光度(A)。
2． 2 甘遂醋炙前后对大鼠巨噬细胞 NO 释放的影
响［10 － 11］ 揉取大鼠腹腔巨噬细胞制备巨噬细胞悬
液，调整细胞密度为 1 × 109·L －1。将巨噬细胞加
入 96 孔培养板 180 μl /孔，然后加入不同浓度的甘
遂各供试品的 RPMI1640 培养液 20 μl /孔，甘遂各
供试品的终浓度分别为 9. 5、95、950、4 750、9 500
mg·L －1，阳性对照组加入 LPS，终浓度为 10 mg·
L －1，设阴性对照组(加等体积细胞培养液) ，同时设
无细胞对照组，以排除假阳性。每个浓度设 6 个复
孔，置于 37 ℃，5% CO2 的饱和湿度培养箱中培养 24
h后，吸取上清液，与新鲜配制的 Griess 试剂等体积
混合，于温室下反应 15 min，酶标仪于 550 nm波长处
测定吸光度(A) ，检测 NO浓度，计算 NO释放量。
2． 3 数据分析 实验数据采用 SPSS 15. 0 软件进行
统计分析，各组定量检测数据以珋x ± s 表示，多组间比
较采用单因素方差分析，两两间比较采用 LSD检验。
3 结果
3． 1 甘遂醋炙前后对小鼠脾淋巴细胞活力的影响
由 Fig 1 可见，在 9. 5 ～ 4 750 mg·L －1浓度范围内，
甘遂生品组与阴性对照组比较，能够促进脾淋巴细
胞增殖(P ＜ 0. 01) ，且促进作用呈一定的量效关系;
甘遂清炒组、醋润组和醋炙组与甘遂生品组比较，均
能抑制脾淋巴细胞增殖(P ＜ 0. 05) ，其抑制顺序为
醋炙品 ＞醋润品 ＞清炒品，且抑制作用呈现一定的
量效关系;但当药物浓度上升到 9 500 mg·L －1时，
显示出明显的细胞抑制作用，推测其原因可能为高
浓度的药物产生了细胞毒作用，细胞本身的功能受
到损害的缘故。
Fig 1 Effects of crude Radix kansui，stir-baking Radix kansui，
Radix kansui infiltrated with vinegar and Radix kansui stir-baked
with vinegar on splenic lymphocyte activity
Control:0. 369 ± 0. 009，LPS:0. 979 ± 0. 049;＊＊P ＜ 0. 01 vs con-
trol;#P ＜ 0. 05，##P ＜ 0. 01 vs GS-1
3． 2 甘遂醋炙前后对腹腔巨噬细胞 NO 释放的影
响 由 Fig 2 可见，在 9. 5 ～ 4 750 mg·L －1浓度范围
内，甘遂生品组与阴性对照组比较，能增强腹腔巨噬
细胞释放 NO 的能力(P ＜ 0. 01) ，且增强作用呈一
定的量效关系;甘遂清炒组、醋润组和醋炙组与甘遂
生品组比较，均能抑制腹腔巨噬细胞释放 NO 的能
力(P ＜ 0. 05) ，其抑制顺序为醋炙品 ＞醋润品 ＞清
炒品，且抑制作用呈现一定的量效关系;但当药物浓
度上升到 9 500 mg·L －1时，NO的量反而下降，推测
其原因可能为高浓度的药物产生了细胞毒作用，细
胞本身的功能受到损害的缘故。
4 讨论
脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞是机体重要的免疫
细胞，它们在受到抗原刺激后，可大量增殖以及分泌
释放多种细胞因子和炎症介质，其中 NO 就是其分
·036· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2011 May;27(5)
泌的重要炎症介质之一，过量的 NO 会导致炎症扩
大化和多种疾病［12］，淋巴细胞活力的大小和增殖情
况可以反映炎症反应的程度，有文献报道甘遂的乙
酸乙酯部位毒性最强［13］，因此，本实验选用小鼠脾
淋巴细胞模型和大鼠腹腔巨噬细胞模型考察甘遂生
品、清炒品、醋润品和醋炙品乙酸乙酯部位的致炎毒
性差异，以初步探讨甘遂醋炙减毒机制。
Fig 2 Effects of crude Radix kansui，stir-baking Radix kansui，
Radix kansui infiltrated with vinegar and Radix kansui stir-baked
with vinegar on peritoneal macrophage NO release
Control:12. 359 ± 0. 302，LPS:23. 838 ± 0. 592;＊＊ P ＜ 0. 01 vs
control;#P ＜ 0. 05，##P ＜ 0. 01 vs GS-1
本实验结果表明，在 9. 5 ～ 4 750 mg·L －1浓度
范围内，甘遂的毒性成分与其致炎毒性呈现一定的
量效关系;但当药物浓度达到 9 500 mg·L －1时，甘
遂的致炎毒性降低，推测其原因可能为高浓度的药
物产生了细胞毒作用，细胞自身功能受到损害的缘
故;甘遂各炮制品对小鼠脾淋巴细胞活力和对大鼠
腹腔巨噬细胞 NO释放的实验结果均表明，在 9. 5 ～
4 750 mg·L －1浓度范围内，甘遂清炒品，醋润品和
醋炙品均能降低甘遂的致炎毒性，其降低甘遂致炎
毒性的顺序为甘遂醋炙品 ＞甘遂醋润品 ＞甘遂清炒
品，且降低毒性作用呈现一定的量效关系，并提示在
甘遂醋炙过程中加热和醋润两个炮制程序能够起到
降低甘遂致炎毒性的协同作用。
甘遂因其毒性，因此历代均采用炮制以降低其
毒性，但其具体炮制减毒机制迄今尚不清晰。本实
验结果对甘遂醋炙过程中加热和醋润两个炮制程序
降低甘遂致炎毒性协同作用的揭示，为进一步阐明
甘遂醋炙减毒机制奠定了重要的基础，为后续整体
动物实验提供了一定的依据。
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·136·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2011 May;27(5)
The comparison of dose-effect relationships of crude and
vinegar processed Euphorbia kansui with splenic lymphocyte
activity and peritoneal macrophage NO release
YAN Xiao-jing，LI Lin，LI Zheng-jun，LI Yuan，GAO Lan，CAO Yu-dan，TANG Yu-ping，ZHANG Li
(Jiangsu Key Laboratory for TCM Formulae Research，Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210046，China)
Abstract:Aim To dissect the mechanism of detoxica-
tion after vinegar-processing by experimenting the com-
parison of dose-effect relationships of crude and vinegar
processing Euphorbia kansui with the splenic lympho-
cyte activity and peritoneal macrophage NO release．
Methods The methods of MTT and Griess were a-
dopted to analyze the splenic lymphocyte activity and
peritoneal macrophages in release of NO so that differ-
ent inflammatory properties of the crude Radix kansui，
stir-baking Radix kansui，Radix kansui infiltrated with
vinegar and Radix kansui stir-baked with vinegar could
be found． Results Compared with control group，the
crude Radix kansui of the concentration from 9. 5 to
4750 mg·L －1，significantly promoted the splenic lym-
phocyte activity and NO release from peritoneal macro-
phages(P ＜ 0. 01)and it showed a certain dose-effect
relationship;the stir-baking Radix kansui，Radix kan-
sui infiltrated with vinegar and Radix kansui stir-baked
with vinegar inhibited splenic lymphocytes activity as
well as NO release from peritoneal macrophage com-
pared with the crude Radix kansui(P ＜ 0. 05) ，with
inhibition in descending order by Radix kansui stir-
baked with vinegar，Radix kansui infiltrated with vine-
gar，Stir-baking Radix kansui，and it showed a certain
dose-effect relationship． Conclusions Stir-baking Ra-
dix kansui，Radix kansui infiltrated with vinegar and
Radix kansui stir-baked with vinegar can significantly
reduce the inflammatory toxicity of the crude Radix
kansui of the concentration from 9. 5 to 4750 mg·
L －1，and the results indicate synergic action of both
stir-baking and infiltration with vinegar，which pro-
vides a basis for the exploration of detoxication mecha-
nism of vinegar-preparation．
Key words:Radix kansui;Radix kansui stir-baked
with vinegar;inflammatory;detoxication of vinegar-pre-
parion;splenic lymphocytes;peritoneal macrophages;
dose-effect relationship
塞来昔布联合多柔比星对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响
苏 方，刘 浩，程 秀，方 琳，宋乐乐，马琳艳，陈 超，蒋志文
(蚌埠医学院药学系，安徽省生化药物工程技术研究中心，安徽 蚌埠 233030)
doi:10． 3969 / j． issn． 1001 － 1978． 2011． 05． 010
文献标识码:A 文章编号:1001 － 1978(2011)05 － 0632 － 07
中国图书分类号:R329． 24;R329． 25;R737． 905;R979. 1
收稿日期:2010 － 10 － 27，修回日期:2011 － 03 － 16
基金项目:国家自然科学基金资助项目(No 81000992，81072207) ;安
徽省自然科学基金项目(No 090413135) ;安徽省高等学校
优秀青年人才基金项目(No 2009SQRZ134ZD)
作者介绍:苏 方(1982 －) ，女，硕士生，研究方向，生化药理学，Tel:
0552-3175323，E-mail:sufang123@ yahoo． cn;
刘 浩(1979 －) ，男，博士，副教授，硕士生导师，研究方
向:生化药理学，通讯作者，Tel:0552-3175323，E-mail:li-
uhao6886@ yahoo． com． cn;
蒋志文(1951 －) ，男，教授，硕士生导师，研究方向:生化
药理学，通讯作者，Tel:0552-3175228，E-mail:zzwwjj51@
yahoo． com． cn
摘要:目的 研究 COX-2 选择性抑制剂塞来昔布与多柔比
星(doxorubicin，ADM)联合应用对乳腺癌 MCF-7 细胞和 Sk-
Br-3 细胞的抗肿瘤作用，探讨塞来昔布是否对多柔比星具有
减毒增效作用。方法 实验分为对照组，塞来昔布组，多柔
比星组和联合用药组。用 MTT法检测药物对 MCF-7 细胞和
Sk-Br-3 细胞的生长抑制效应;Western blot 测定 MCF-7 细胞
和 Sk-Br-3 细胞 bcl-2 的表达;PI 染色检测细胞凋亡;克隆形
成法测定药物对 MCF-7 细胞和 Sk-Br-3 细胞系的细胞毒作
用。结果 MTT 结果显示，30 μmol·L －1塞来昔布与 0. 625
mg·L －1多柔比星联合作用于 MCF-7 细胞的 72 h 存活率为
68. 53%，作用于 Sk-Br-3 细胞的 72 h 存活率为 32. 66%，较
多柔比星单用能明显降低乳腺癌细胞的存活率，且具有时间
和剂量依赖性。流式细胞仪 PI 染色结果显示，联合用药诱
导的细胞凋亡率分别为 MCF-7 细胞 59. 7%，Sk-Br-3 细胞
65. 8%，较单用多柔比星诱导的凋亡率 (MCF-7 细胞
25. 9%，Sk-Br-3 细胞 28. 7%)明显提高。Western blot 结果
·236· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2011 May;27(5) :632 ～ 8