全 文 ：农林牧草害 }交链抱真菌对乳浆大戟的致病性
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M
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Y an g 等
【提要】 乳装大软是北美草原上的一种多年生杂草 , 在美国常年造成 J 千万美元的
经济损失 , 片其进行化学防治既不经济又相当困难 . 经接种试验 , 交健抱真菌可用于防治
乳菜大软 , 该菌时乳菜大找以 外的植物 , 要在较长的落湿期才能俊染 . 经毒素的生物浏
定 , 交健艳真菌能产生毒素已得到初步浏定 .
关健词 交链艳真菌 ; 乳装大找 ; 致病性 .
乳浆大戟 ( uE 动or b at e sl, oI L ), 一种多生物
型多变种的多型复杂生物 , 是北美草原上的一种
多年生杂草 . 据估计这种杂草常年给美国造成 5
千万美元的经济损失 , 对其进行化学防治既不经
济又相当困难 . 即使最有效的除草剂 , 由于常常
有其它不需除去的阔叶草种与该杂草混生而无法
使用 . 因此利用植物病原菌对该杂草进行生物防
治是一种可行的防治手段 .
S im m o n : 认 为 交 链 抱 真 菌 月打e r o r必
创 g “ st 勿 ,口`倪口 可用于乳浆大戟的生物防冶 , 我们
也曾报道过关于这种真菌对收集的几个乳浆大戟
侵染的初步研究 . 当被接种的杂草放于露湿培养
箱在 20 ℃条件下培养 12 小时 , 收集的 14 份乳浆
大戟中有 10 份抗此真菌 . 给被接种的杂草延长露
湿培养期 , 这些抗病收集品能否变得感病尚不清
楚 , 链格抱 (月 . a lt e r朋 ra (F ` e s ) K e i s l e r )为矢车
菊植物 (ce nt a ur ea , ac “ oI as L a m . ) 的黑叶枯病病
原 物 , 该病原 物 能 产 生 一 种次 级代 谢产 物
(m a c川。 isn ) , 这是一种仅对矢车菊植物有毒的毒
素 . 然而是否 A .朋月公 :勿阳: de a 产生对乳浆大戟
有毒的次级代谢物至今还不清楚 .
本项研究的目的是 : l) 确定不同露湿培养期
对该菌侵染乳浆大戟的影响 . 2) 研究不同的乳浆
大戟材料和其他植物种对该真菌的反应 . 习 获得
这种病原菌在培养过程中能否产生毒素的初步证
据 .
材料和方法
接种体准备 : 将 K ur iP n sk y 和 L o cr nz 两人最
先分离获得的 月 . an gu sl vo ot de a 在和 P D A 培养基
上培养 , 或者在皮 氏培养皿内湿润滤纸上放有经
2 10 ℃ 30 分钟高压灭菌的乳浆大戟叶片上培养该
真菌 . 培养箱温度控制在 20 ℃ ( 12 小时光照 , 光
照强度 90 拜E / 秒 · 米 2 ) . P色A 上培养 4一 5周
或高压灭菌的乳浆大戟叶片上培养 2 周后收集分
生抱子 . 收集抱子用无菌水溶液 (蒸馏水 + 0 . 1%
叶温 2肝2 % 明胶+ 2% 蔗糖) 冲刷培养物 , 并用刮
刀 刮其表面 . 将混合抱子悬浮液用 2 层纱布过
滤 , 调整到浓度为 l x lo ` 一 l x l护 个抱子 / m l .
将接种体喷到植物上 ( 3 m l 喷 10 株 ) . 接种后的
植株立即放到露湿培养箱内在 20 一 25 ℃下培养 48
小时 , 然后移到温室 . 对照植株用无菌水溶液喷
雾 .
乳浆大戟的培育 : 试验使用的所有乳浆大戟
都是由 2 ~ 3 个根芽繁殖而来 , 繁殖时根芽放在
可控温室中直径为 10 c m 的盆内 , 盆内装有混合
土 . 试验在马里兰州 F re d er i ck 进行 . 盆内混合
土壤由 4 0 铲田间土 、 40 铲泥炭 、 40 铲蛙石 、 30
铲珍珠岩 、 加 铲沙子 、 2 升石灰石 、 l 升肥料
( 10一 10一 10 ) 和 l 升 ` G ’ 粒型液培剂配制而成 .
, G
’ 粒型液培剂由非离子表面表活性土壤湿润
一 2 4一 国外农学一植物保护 第 J 卷 第 4 期 拍刃 年 12 月
剂 , 环酸聚乙烯醋 18 . 8 % , 烷基苯酸聚乙烯醋
18
.
8%
, 硅酮反式乳剂 .2 4 % , 蛙石 60 % 组成 . 培
养期间每隔 l 天加 1 次水 , 接种试验是在乳浆大
戟开花前的不同生育阶段进行 . 初步研究表明老
龄植株和幼龄植株一样感染 月 . “ 别isI ` ,山口 .
尽湿期对乳浆大戟浸染的影晌 : 用该菌分生
抱子悬浮液接种后 , 乳浆大戟 ( ! 9 82 M T o OO) 放
在温室生长台 ( O小时露湿 ) 或在移到温室前先
在露湿培养箱中 (2 5℃ ) 暗培养 2 、 4 、 6 、 12 或
24 小时 . 在每一个初始露湿培养期后的 I 、 2 、 3
或 4 天再给予 O 、 2 、 4 、 6 或 12 小时的第 2 个露
湿培养期 . 每一处理 6 株 ( 1个试验共 12 6 个处
理 , 756 株) . 试验重复 l 次 .
接种 2 周后按发病程度划分等级 . 用 。一 4 数
字表示发病程度 , 其中 。 二无侵染 ; l = 叶片褪绿
或有 l一 2 个棕 色小斑 ; 2 二 叶上有 3一 巧 个病
斑; 3 二 叶萎蔫易脱落 ; 4 = 叶片呈棕色 、 植株干
枯或死亡 . 病情指数计算为 : Z 〔 〔等级数 x 株
数) / 总株数〕 . 病情指数等于或小于 .2 9 时为抗
病 , 大于 .2 9 为感病 . 记录后再一次用选取轻微
的和严重侵染的叶片组织在 P D A 上分离病原
菌 , 组织薄片 (0 . 3 x 0 . 8 e m ) 表面用 3% N a O C I
溶液消毒 5~ 10 分钟 , 再用无菌水冲洗 5一 10 分
钟 , 放在 P D A 平板上 (每一平板内 4 片 ) , 在
20 ℃条件 下培养 3 ~ 4 周 , 在显微镜下检查分生抱
子来证实 A , an 和而 vo 诚 a 的存在 .
另一试验中 , 接种收集的 I98 2 M T 0 0 植株
或者给予 0 、 6 、 12 、 24 或 48 小时的露湿培养
期 , 或者先在温室放置 1 , 2 , 3 或 4 天 , 然后再
给予 0 , 6 、 12 , 24 或 48 小时的露湿培养期 . 每
一处理 5 株 (每次试验共 125 株 ) , 试验重复 1
次 , 接种 2 周后确定发病程度 .
乳桨大戟和其它植物种收集品的接种 : 乳浆
大戟材料由 W . L B r cu k a rt 等人从欧洲和美国收集
而来 . 收集的材料按 D va i , 系统编号 , 依次是 :
收集年份 . 卜或 2一加上表示收集国家或州的字
母 , 3一加上表示收集顺序的数字 . 2 个试验中每
一收集品中的 16 一 24 植株用 汪 .翻君。 oI , o盆绘a 接
种 , 在露湿培养箱 25 ℃下培养 4 8 小时 , 同时接
种其他植物的幼苗有首拾 、 朝鲜蓟 、 玉蜀黍 、 班
豆 、 黄麻 、 绿豆 、 燕麦 、 黄秋葵 、 花生 、 水稻 、
红花 、 高梁 、 同日葵 、 小麦和百曰草 , 并在露湿
培养箱 25 ℃下培养 12 , 24 或 48 小时 . 每次试验
每一种植物接种 5 株 , 重复 1 次 , 接种 2 周后记
录发病情况 .
毒素的生物测定 : 取在 P D A 上培养 3一 4 天
后的带有菌丝的琼脂一小片 , 放在 25 Om l烧瓶内
(每次试验 10 个瓶 ) . 烧瓶内装有 50m l 去抓化锉
的弗利斯培养液 . 只含弗利斯培养液的烧瓶作为
对照 . 烧瓶放在培养箱 25 ℃ ( 12 小时光照 , 每天
光照强度 20拜E / 秒 · 米 l) 下培养 l 一 2 周后 , 将
每一烧瓶内的培养物分别放在 “ o 转 / 分的离
心机上离心 10 分钟 , 使菌丝体成球状 . 每一离心
试 管 内 的 _ L 层 清 液 分 别 用薄膜 滤 纸 ( 孔隙
0
.
4 5料m ) 过滤 , 然后装在 15 m l 灭菌的聚乙烯离
心试管内 . 将温室种植的乳浆大戟剪去健康茎尖
部立刻浸泡在该溶液内 , 放在 20 土 2℃ 条件下 ,
每天光照 10 小时 , 光照强度 .9 5拼E / 秒 · 米 2 . 放
在弗利斯培养液 (取 自对照烧瓶 ) 或蒸馏水中的
剪枝作为对照 . 24 一 4 8 小时后观察剪枝的反应 .
叶片表现褪绿和萎蔫说明培养滤液内有毒素存
在 . 这项研究的目的是获得这种病原菌产生毒素
的初步证据 , 因此只记录症状的有无 , 试验重复
2 次 .
结果与讨论
皿湿期对病原菌俊染乳浆大戟的影晌 : 2 组
试验结果相似 , 6 小时或不足 6 小时的初始礴湿
培养期和 12 小时或不足 12 小时的第二茸湿期抑
制病害发生 . 至少 , 2 小时的单个茸湿期才能在乳
浆大戟上引起轻度侵染 (接种叶片上只有几个斑
点 ) . 接种后 , 给乳浆大戟 24 小时的露湿培养
期 , 其发病程度明显大于 12 小时露湿期 . 同样 ,
给予 24 小时第二露湿期 (接种后给予 24 小时
初始露湿期后的 I~ 4 天 ) 的乳浆大戟发病率明显
大于给予 12 小时第二露湿期的乳浆大戟 . 在 12
小时初始期露湿期后 1 天内给予 12 小时的第二露
国外农学一植物保护 第 J 卷 第 4 期 I卯 2 年 12 月 一 2了e
湿期的乳浆大戟 , 其发病程度与给予单个 24 小时
雌湿期的植株发病相近 . 接种后 2 . 3 、 或 4 天给
予 12 小时或 24 小时的第二露湿期 , 发病程度明
显降低 .
要使乳浆大戟受到严重侵染 (干枯或死亡 ) ,
至少需要 48 小时的单个露湿培养期 . 接种后推迟
2 天或更长时间才给予 12 小时的初始露湿培养
期 , 植株不会侵染 . 接种后推迟 4 天才给 24 小时
或 4 8 小时的初露湿培养时 , 其发病程度与接种后
立即给予尽湿期的植株一样 . 两组试验结果数据
相似 . 月 . , g。 ,勿。 t de n 在 20 ~ 25 ℃ 条件下至少
需要 48 小时的露湿培养期才能引起病害严重发
生 , 这可能是该病原菌不能在大平原上引起病害
流行原因之一 从重病株上和 40 % 的轻度侵染株
上可再一次分离到病原菌 .
乳桨大毅和其他植物种收集材料的接种 : 接
种的乳浆大戟植株在露湿培养箱中培养 48 小时
后 , 收集的 25 份材料中有 2 份感染 通 .朋胆打 io
一。 ,山口 感病材料包括来 自奥地利 、 意大利 、 土耳
其 、 前南斯拉夫 、 爱达荷州 、 马里兰州 、 马萨诸
塞州 、 密执安州 、 明尼苏达州 、 蒙大拿州 、 内华
达州 、 新泽西州 、 北达科他州和俄勒冈州的收集
材料 . 在一个收集材料群体中发现既有抗病又有
感病个体的材料是奥地利 ( 1978 A 0 001 ) , 加拿大
。 9 82 B e 0() 一)和 土耳其 ( 一9 s 2 T U 0() 2 ) 不清楚的
是抗病个体是否会对该真菌的不同培养物表现感
病反应 . 收集的 10 份在 20 ℃条件下 12 小时露湿
期抗病的乳浆大戟 , 在 25 ℃下露湿培养 48 小时
后表现为感这种病原菌 . 这个结果证实 了以前关
于这个病原菌需要长的露湿培养期才能导致乳浆
大戟严重发病的试验 . 对照植株无症状表现 . 从
所有严重侵染的植株和表现抗病的 30 % ~ 50 % 的
植株上可再一次分离到病原菌 . 从对照株上未能
分离到病原菌 . 重复试验得到了相似的结果和数
据 .
月 .
anR
“ “ 。 iot de 月 不侵染首拾 、 黄麻 、 花生 、
水稻 、 高梁 , 向日葵和小麦 , 但接种株在露湿培
养箱 25 ℃ 下培养 48 小时 , 此病原菌能在朝鲜
蓟 、 玉蜀黍 、 孤豆 、 绿豆 、 燕麦 、 黄秋葵 、 红花
和百 日草上引起一些病斑 . 从这几种被侵染株上
也分离到了病原菌 . 然而当接种株只给予 12 小时
或 24 小时的露湿培养期时 , 该病原菌不能侵染这
几种植物 .
本研究中使用的这种真菌只有给予较长露湿
期才能侵染除乳浆大戟以外的植物 . 在大田条件
下比较不 同寄主体上病害的严重度是非常重要
的 , 因为确知 了寄主的相对感病性 , 就可确定该
真菌能否作为真菌性除草剂 .
毒素的生物测定 : A .朋g us iot vo l de 月 在弗利斯
培养液中产生了植物毒索 . 试管中该真菌在 25 ℃
下 l 周内就能产生毒素 , 2 周后仍有毒索 . 毒素
作用可在 3 个试验共 30 个烧瓶 中的 27 个里看
到 , 没有毒素作用的 3 个烧瓶要么被细菌要么被
其它真菌所污染 . 叶片褪绿和萎蔫是在乳浆大戟
放到培养液后 24 小时观察到的 . 毒素作用没有明
显的寄生专化性 . 因为部份纯化的毒素也能引起
乳萍褪绿 . 毒素的特性 、 结构和在温室中防治乳
浆大戟的有效性现正在进一步观察研究 .
我们研究该真菌的结果和其他人获得的结果
相似 , 说明这种真菌可用于乳浆大戟 的生物防
治 . 然而在考虑大面积田间试验以前 , 需要掌握
以下几方面 : l) 如何提高该真菌在乳浆大戟上的
有效性 ; 2) 该真菌潜在的二次传播能力 ; 3) 越
冬能力 ; 4) 对其他作物的潜在危险 .
李子钦 译自 〔美国 ) ( P一a n t D t二 a sc 》 (英
文 ) I夕夕0 , 74 f 8 ) : 60 1 ~ 6 04 .
陈 宇 审校 .
一 2石一 国外农学一植粉保护 第 s 卷 第 4 期 I卯2 年 12 月