全 文 ：第 26卷第 4期 　　　西　南　农　业　大　学　学　报 (自然科学版) Vol.26 , No.4
2004年 8月 Journal of Southwest Agricultural University(Natural Science) Aug.2004
文章编号:1000-2642(2004)04-0441-04
正交法筛选藏药余甘子复方的水提工艺研究①
刘　圆1 ,白志川2 ,于　杰2
(1.西南民族大学 少数民族药物研究所 , 四川 成都　610041;2.西南农业大学 园艺园林学院 , 重庆　400716)
摘要:采用正交实验筛选余甘子复方最佳水提工艺 ,测定了不同水提工艺提取物的干膏收率和余甘子鞣质百分含量 ,
结果表明:最佳水提工艺为加水量 10 倍 ,提取 3 次 , 每次 1 h。
关　键　词:余甘子复方;干膏收率;鞣质百分含量;正交法
中图分类号:R 282.4　　　　　　文献标识码:A
SEECTING TECHNOLOGY FOR WATER EXTRACTION OF FRUCTUS PHYLLANTHI
COMPOUND WITH ORTHOGONAL DESIGN
LIU Yuan1 , BAI Zhi-chuan2 , YU Jie2
(1.Ethnic Pharmaceutical Institute, Southwest Univ ersity of Nationalities , Chengdu , Sichuan 610041 , China;2.Horticulture Depar t-
ment , Southw est Agricultural University , Chongqing 400716 , China)
Abstract:The or thogonal design w as adopted to screen for the optimum technology of the w ater ex traction of compounds in Fructim
phyllanthi.The content of tannin in F .phyllanthi and the yield of its dried cream w ere determined as markers to evaluate the effect of
the extraction of different w ater ex traction processes.The results show that the optimum ex traction condition is 10-fold amount of w a-
ter , 3 times of extraction and 1 hour each time.
Key words:Fructim phy llanthi Compound;dried cream yield;percentag e of Fructim phyllanthi Tannin;orthogonal design
　　余甘子作为藏族传统药物有近 2 000 a 的历史。
如“二十五味余甘子丸” 、“二十五味余甘子散” ,主要
功能为凉血降压 ,用于败血症 、高血压症 、肝胆疼痛 、
胸背酸痛等。此外还有用于治疗中毒 、肝热 、肝肿大
等新旧肝病的“二十五味绿绒蒿丸” ;用于支气管炎
和肺气肿 、咳嗽气喘 ,声音嘶哑的“十五味龙胆花丸”
等;解表散寒 ,用于血龙等 3邪紊乱 、恶性发热 、关节
疼痛的“七珍汤散”等 ,但皆为散剂 ,疗效不显著 ,用药
剂量大 ,储运携带使用不方便 。
本课题拟通过正交法筛选出余甘子复方的最佳
水提工艺 ,提取余甘子复方的有效成分入药 ,改变以
原药材服用的现状。
1　工艺研究
1.1　实验材料来源
购于成都五块石荷花池药材市场 ,药材符合中华
人民共和国药典 2000版一部余甘子等项下的有关规
定 。
1.2　实验设计
根据查阅大量文献表明 ,余甘子复方中的其他几
味药材不含鞣质;薄层色谱的结果亦表明 ,余甘子阴
性复方提取液不含余甘子鞣质的主要有效成分没食
子酸。余甘子鞣质为水溶性 ,水价廉易得 、提取范围
广 ,而且是制备口服液 、糖浆剂型 ,所以考虑用水作溶
剂 。
① 收稿日期:2004-05-09基金项目:西南民族大学博士基金资助项目作者简介:刘　圆(1968-),女 ,重庆忠县人 ,西南民族大学副教授 ,从事民族药及中药新药开发研究。
DOI :10.13718/j.cnki.xdzk.2004.04.018
选以直接影响水提效果的提取水量 、提取时间 、
提取次数作为考察因素 ,以干膏收率和鞣质百分含量
为指标 ,运用 L9(34)正交实验设计实验 ,因素水平表
见表 1。
1.3　供试液的提取
仪器:2 000 mL 圆底烧瓶 ,1 000 mL ,2 000 mL ,
500 mL 烧杯 ,500 mL , 100 mL ,50 mL 量筒 ,45 ～ 200
W 远红外可控调温电炉。
药材:余甘子
称取含余甘子药材 10 g 的复方 70 g ,按表 2 的
实验方案分别提取 ,并分别浓缩到 500 mL ,密封放入
冰箱中冷藏备用 。
1.4　干膏收率的计算
仪器:水浴锅 、蒸发皿 、移液管 、恒温鼓风电热干
燥箱 、干燥器 、1/万天平。
将蒸发皿放于烘箱中于 105℃温度下烘 3 h ,后
放入干燥器中 30 min ,称重得 m1 ,再放入烘箱中于
105℃烘 1 h ,放入干燥器中干燥 30 min ,称重得 m2 ,
且 Δm =m1-m2在±0.003范围内 ,取平均值 m平 。
取正交提取液 50 mL 分别放入相应蒸发皿内 ,
水浴蒸干 ,于恒温鼓风电热干燥箱 105℃烘 3 h ,干燥
器内干燥 0.5 h 后称重得 m总 , m总-m平 为 m干 ,500
mL 提取液相当于复方 70 g ,故 50 mL 正交液相当于
复方 7 g 。
干膏收率=(m干/7)×100%
表 1　实验因素和水平表
Table 1　Factors and levels of experiment
水　平
Levels
因 　素　factors
水用量/倍
Volume of w ater
A
提取时间/ h
Ext raction Time
B
提取次数
Ext ract ion Times
C
空　白
Blanks
D
1 8 0.5 1
2 10 1 2
3 12 1.5 3
表 2　干膏收率
Table 2　Dried cream yield
实验号 Orders 1 2 3 4 5 6 7 8 9
干膏收率/ %Dried cream yield 14.16 20.47 18.51 14.96 19.97 17.78 22.80 15.70 18.58
1.5　余甘子复方鞣质含量的测定
1.5.1　仪器与试药　仪器:75 ml蒸发皿 18个 , 250
mL 容量瓶 9个 ,水浴锅 2台 ,200 mL 烧杯 9个 ,玻璃
棒 9支 ,25 mL 移液管 1 支 , 250 mL 锥形瓶 9 个 ,真
空循环水泵 1台 ,抽滤瓶 、布氏漏斗各 2个。试药:皮
粉(含铬)、分析纯 ,符合 Q/CYDZ-384-49 ,中国医
药(集团)上海化学试剂公司生产。
1.5.2　余甘子复方鞣质含量的测定方法探索
1.5.2.1　明胶沉淀法　取正交提取液 10 mL ,加醋
酸乙酯萃取 2次 ,每次 20 mL ,合并萃取液 ,用 NaOH
0.5 mol/L 萃取 2 次 ,每次 20 mL , NaOH 层为红色 ,
合并 NaOH萃取液层 ,加入稀 HCl调 pH 至 4 ,加 5%
明胶水溶液 ,边加边搅拌 ,发现无沉淀生成。但在提
取液中加入鞣质指示剂 FeCl3 ,却有蓝黑色沉淀 ,表明
提取液中含有鞣质。结果见表 3 。
由表 3 可知 ,余甘子复方鞣质不与明胶发生反
应 ,故不能用明胶沉淀法来测定余甘子复方中鞣质的
含量 。
1.5.2.2　络合量法[ 1] 　取明胶沉淀法中经 NaOH
萃取完全后的残液加入 0.1 mol/L 乙酸锌溶液 3滴 ,
无沉淀生成 ,说明余甘子复方非鞣质部分不与乙酸锌
发生络合反应产生沉淀。
表 3　鞣质的检验
Table 3　The test of tannin
方　法
Methods
现　象
Phenomenons
结　论
Conclusions
正交提取液+FeCl3 蓝黑色沉淀 含鞣质
乙酸乙酯萃取液+Fe-
Cl3
蓝黑色沉淀 含鞣质
乙酸乙酯萃取后的残液+FeCl3 蓝黑色沉淀 含鞣质 ,提取不完全
乙酸乙酯萃取液加入
NaOH 后的萃取液+
FeCl3
蓝黑色沉淀 含鞣质
加入 NaOH 后的萃取残液+FeCl3 无反应 不含鞣质 ,提取完全
NaOH 提取液+明胶 无反应 余甘子鞣质不与明胶反应
　　取余甘子复方提取液用乙酸乙酯萃取 2次 ,每次
20 mL ,合并萃取液 ,加水到 400 mL ,精密吸取 0.1
mol/ L 乙酸锌 20 mL ,置 500 mL 容量中 ,加饱和氨水
15 mL ,摇匀使白色沉淀溶解 ,将上述萃取液加温至
35±2℃,移入容量瓶中 ,置于 35±2℃水浴中继续升
温 30 min(间歇振摇数次 ,冷至室温后过滤 ,弃去初
滤液 ,精密吸取续滤液 20 mL ,置 200 mL 锥形瓶中 ,
加蒸馏水 20 mL , pH 10.0 缓冲溶液 20 mL ,铬黑 T
442 西　南　农　业　大　学　学　报　(自然科学版)　　　　　　　　2004年 8月
指示剂 3滴 ,然后以 EDTA-2Na(5×10-4mol/L)标
液滴定 ,溶液由红至蓝为终点 。
按文献[ 5]中式计算:
　鞣质含量/ %
=0.1556×(20×mol/L -Zn-25×mol/L-E×Q)
W
×100%
其中　mol/L-Zn为 Zn2+浓度 , mol/L-E 为 EDTA
浓度 ,Q为 EDTA用量 ,W 为样品质量(相当于干药
材重)。
得出结果在 1.21%与 1.37%之间 ,与文献报道
相差过大 ,可能是由于药材中只有一部分鞣质与乙酸
锌发生络合反应 ,所测的鞣质只是总鞣质的一小部
分 ,因此本方法仍然不能作为余甘子复方鞣质含量的
测定。
1.5.2.3　皮粉法　用皮粉法测余甘子复方鞣质所
得的结果基本符合文献记载 。由于是从复方提取液
中测定余甘子鞣质含量 ,所得数据稍低 ,这是因为药
材提取液的转移率一般在 80%左右。因此测定余甘
子复方中总鞣质的含量 ,可采用皮粉法。
本课题的创新点在于:用余甘子复方的主要有效
成分之一总鞣质含量和干膏收率为指标筛选出了余
甘子的最佳水提工艺 ,以改变传统藏医药中把余甘子
药材与其他药材配成复方散剂的传统剂型 ,为把余甘
子复方制成符合卫生要求 、便于服用与储藏的新剂型
糖浆打下基础。
表 4　余甘子复方鞣质含量
Table 4　The content of tannin of Fructus Phyllanthi Compound
实验号 Orders 1 2 3 4 5 6 7 8 9
T1/ g 0.255 0.387 0.396 0.345 0.447 0.314 0.356 0.311 0.356
T2/ g 0.212 0.338 0.344 0.272 0.350 0.273 0.353 0.259 0.315
鞣质含量/ %　Content of tannin 18.43 20.17 21.23 28.03 27.67 17.77 22.97 21.23 17.43
表 5　L9(34)正交试验筛选余甘子复方水提工艺结果
T able 5　The results of technology of w ater ext raction of Fructus Phyllanthi compound in orthogonal experiments
实验号
Orders
因 　素　Factors
A B C D
干膏收率/ %
X
Dried cream yield
鞣质含量/ %
Y
Con tent of tannin
综合评分
Z
Synthet ic value
1 1 1 1 1 14.16 18.43 64.88
2 1 2 2 2 20.47 20.17 75.53
3 1 3 3 3 18.51 21.23 76.83
4 2 1 2 3 14.96 28.03 93.12
5 2 2 3 1 19.97 27.67 96.49
6 2 3 1 2 17.78 17.77 66.32
7 3 1 3 2 22.80 22.97 85.56
8 3 2 1 3 15.70 21.23 74.36
9 3 3 2 1 18.58 17.43 66.05
Ⅰ j 217.24 243.56 205.56 227.42
Ⅱ j 255.93 246.38 234.70 227.41 其中Z=
Ⅲ j 225.93 209.20 258.88 244.31 (X/ 最高值)×20+(Y/最高值)× 80
Rj 38.69 37.18 53.32 16.90
Sj 274.5257 285.6572 475.2039 63.4314
表 6　方差分析表
Table 6　Variance analysis of the test results
变异来源
Variance source
离差平方和
Sum of sequare
of deviat ions
自由度
Freedom
方　差
Variance
F 值
F value
显著性
Significance
A 274.5257 2 137.2629 4.3279
B 285.6572 2 142.8286 4.5034
C 475.2039 2 237.6020 7.4916 ﹡
误(D:空白) 63.4314 2 31.7157
误 Δ(D) 63.4314 2 31.7157
443第 26卷第 4期　　　　　　刘　圆等　正交法筛选藏药余甘子复方的水提工艺研究
　　注:F0.95(2 , 2)=19 　 F0.99(2 , 2)=99
1.5.3　含量测定　按中华人民共和国药典 2000版
一部附录 XB鞣质含量测定方法测定[ 6] 。
取正交提取液 150 mL(约含鞣质 1 g),移入 250
mL 容量瓶 ,定容至刻度 ,滤过 ,滤液作为供试品溶
液。总水溶性部分的测定:精密量取 25 mL 提取液 ,
蒸干 ,残渣于 105℃干燥 3 h ,称重(T1)。
不与皮粉结合的水溶性部分的测定:精密量取
提取液 100 mL ,加皮粉 6 g ,振摇 15 min ,抽滤 ,精密
量取滤液 25 mL ,蒸干 ,残渣于 105℃干燥 3 h ,称重
(T 2)。
皮粉水溶性部分的测定:精密量取水 100 mL ,加
皮粉 6 g ,振摇 15 min ,抽滤 ,精密量取 25 mL 滤液 ,
蒸干 ,残渣于 105℃干燥 3 h ,称重(T0)。
鞣质含量/ %=[(T 1 -T2 +T 0)×10/W] ×
100%
W 为干燥药材取样量 ,因 500 mL 正交提取液相
当于干燥余甘子药材 10 g ,故 150 mL 正交提取液相
当于余甘子药材 3 g ,即W=3 , T0 =0.0114(g),结果
见表 4。
1.6　实验结果
根据 L9(34)正交实验设计 ,筛选余甘子复方最
佳水提工艺 ,结果见表 5 、表 6 。
结论:由表 5 、表 6可知 ,因素 C 对试验结果的影
响最显著 ,因素 A ,B 对结果无显著影响 。直观分析
和方差分析结果表明最佳工艺为 A 2 B 2 C 3 ,即:加
水 10倍量 ,提取时间 1 h ,提取 3次 。
据此条件 ,验证 3次 ,结果见表 7 。
表 7　验证实验结果
Table 7　the results of the tested experiments
样　品
Sam ples
干膏收率/ %
Dried cream
yield
鞣质含量/ %
The content
of tannin
综合评分 Z
Synthet ic
value
平均值Z
Average　
1 19.80 27.82 96.77
2 19.79 27.87 96.90 96.91
3 19.77 27.93 97.05
　　验证结果与正交实验结果较一致 ,说明余甘子复
方水提工艺的工艺条件稳定。
2　结论与讨论
2.1　结论
采用正交实验筛选余甘子复方最佳水提工艺 ,测
定了不同水提工艺提取物的干膏收率和余甘子鞣质
百分含量 ,结果表明:最佳水提工艺为加水量 10倍 ,
提取 3次 ,每次 1 h。
2.2　讨论
鞣质是复杂的多元酚类化合物 ,可溶于乙酸乙
酯 、丙酮 、乙醚和乙醇的混合液 、乙醇及水 ,不溶于石
油醚 ,二硫化碳及氯仿等 ,但余甘子鞣质分子中含呈
缩酚酸式结合的没食子酸 ,因可被甲醇或乙醇长时间
作用而解离 ,而且用有机溶剂提取的有效成分中可能
含有有机溶液对人体有毒副作用 ,且费用较昂贵 ,故
最好用水为提取溶剂 ,因为水价廉无毒 ,提取范围较
广[ 4] 。
参考文献:
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23(11):577-578.
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杂志 , 1999 , 14(3):185-186.
[ 3] 　国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)2000 版
[ M] .附录 XB ,附录 63.
[ 4] 　王　曙.常用藏药理化鉴别与含量测定[ M] .成都:四川
科学技术出版社 , 2002:141.
[ 5] 　肖培根.中药现代研究与临床应用(第三册)[ M] .北京:
中医古籍出版社 , 1997:135.
[ 6] 　卫生部药品生物制品检定所.中国民族药志(第一卷)
[ M] .北京:人民出版社 , 1984:788.
[ 7] 　侯开卫.余甘子的化学成分及在民族民间传统医药中的
应用[ J] .中国民族民间医药杂志 , 2000 ,(6):345-348.
[ 8] 　谢秀琼.中药新制剂开发与应用[ M] .北京:人民卫生出
版社 , 2000:342.
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