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植物药瓜子金抗抑郁活性部位初步研究



全 文 :— 32 — 现代中药研究与实践2015年第29卷第1期Chin. Med. J. Res. Prac., 2015 Vol. 29 No.1
·药理药化·
植物药瓜子金抗抑郁活性部位初步研究
王洪兰 1,王怡然 1,周 荧 1,徐学玲 1,单进军 2,李宜威 1,李 祥 1*
(1.南京中医药大学药学院,江苏 南京 210023;2. 南京中医药大学第一临床医学院,江苏 南京 210023)
摘要:目的 探讨远志属药用植物瓜子金提取物及不同部位的抗抑郁作用。 方法 瓜子金用常规醇提
法得瓜子金醇提物,通过系统溶剂法得石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水残留部位。采用小鼠
强迫游泳、悬尾模型评价瓜子金醇提物及各萃取部位的抗抑郁作用。结果 瓜子金醇提物及正丁醇部位能
明显缩短小鼠强迫游泳及悬尾的不动时间。结论 瓜子金醇提物及正丁醇部位可以改善小鼠的抑郁状态行
为,具有一定的抗抑郁作用。
关键词:瓜子金;远志属;抗抑郁;三萜皂苷
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1673-6427(2015)01-32-04
doi:10.13728/j.1673-6727.2015.01.011
基金项目:江苏高校优势学科建设工程资助项目 -南京中医药大学中药学一级学科开放课题基金(2011ZYX6-004);高等学校博士学科点专项科研基金
(20103237120011);江苏省高等学校大学生实践创新创业训练计划项目(201410315050Z)
作者简介:王洪兰(1977 -),女,博士,副教授,主要从事中药及复方的药效物质基础研究。 E-mail: honglanwang2004@163.com
* 通讯作者:李祥(1953 -),女,教授,博士生导师,主要研究方向:中药及复方药效物质基础研究。 E-mail: lixiang_8182@163.com
Study on Antidepression Effect of Polygala japonica
WANG Hong-lan1, WANG Yi-ran1, ZHOU Ying1, XU Xue-ling1, SHAN Jin-jun2, LI Yi-wei1, LI Xiang1*
(1. School of Pharmacy, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, China; 2. The First Medicine
College, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, China)
Abstract: Objective To evaluate the antidepressant effect of the enthanol extract and its different fractions
from Polygala japonica. Methods The enthanol extract from Polygala japonica and its fractions (petroleum
ether fraction, ethyl acetate fraction, n-butanol fraction and water residure fraction) were obtained by solvent
partition of its total extract. Antidepressant effect was evaluated through mice forced swimming test and mice
tail suspension test. Results Polygala japonica signifi cantly decreased the accumulative immobility time of mice
treated with the enthanol extract and the n-butanol fraction in mice forced swimming test and mice tail suspension
test. Conclusion Polygala japonica can improve the depressive condition of mice and have obvious effect of
antidepression.
Key words: Polygala japonica; polygalae; antidepression effect; triterpenoid saponins
抑郁症已成为影响人类健康的第五大疾病,据世
界卫生组织和哈佛公共卫生学院统计资料显示,到
2020 年抑郁症将是仅次于缺血性心脏病威胁人类健
康的第二大杀手 [1]。因此,对于抑郁症的治疗及其治
疗药物的研发越来越受到世界和中国医疗卫生同仁
的重视。近年来国内外对于单一药用植物的提取物的
抗抑郁活性研究报道较多,并且从这些植物中分离得
到了一些具有抗抑郁活性的化合物。因而,从中药中
寻找抗抑郁活性成分 ( 或部位 ),进而研发新的抗抑
郁药物,具有广阔的前景。鉴于远志属药用植物在益
智安神方面的功效由来已久,从该属植物中寻找开发
抗抑郁药有着深远的意义和广阔的前景,已有研究表
明远志醇提物及相关寡糖酯类成分可以改善小鼠的
抑郁状态行为,具有一定的抗抑郁作用,其作用机理
可能与阻断单胺类神经递质的重摄取有关 [2]。对该属
植物的药理学研究显示远志属的其它药用植物具有
与远志相近或相同的药理作用。刘贤明等通过对江浙
闽台地区远志类药用植物资源整理发现,从资源分布
情况来看,分布较广的是瓜子金,其次是远志和西伯
利亚远志,从资源利用情况来看,远志的利用历史较
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为悠久,其次是西伯利亚远志、瓜子金、小花远志
等 [3]。瓜子金始载于《植物名实图考》,又名小远志、
地藤草、银不换,是远志科远志属植物瓜子金(Polygala
japonica Houtt.)的全草,多年生草本,主要分布于我
国南方各省。瓜子金味苦、微辛、性平,能镇咳祛
痰、益智安神、活血散瘀,民间应用十分普遍且疗效
显著。本研究拟采用小鼠悬尾实验、强迫游泳实验,
从行为学角度观察瓜子金醇提物中石油醚部位、乙酸
乙酯部位、正丁醇部位和水残留部位的抗抑郁活性。
1 材料
1.1 试药和试剂
瓜子金药材购于江苏省药材公司,经南京中医药
大学药学院陈建伟教授鉴定为远志科远志属药用植物
瓜子金Polygala japonica Houtt. 的全草:氟西汀胶囊(苏
州礼来制药,批号:0935A,生产日期:2010-05);乙醇、
石油醚、乙酸乙酯、正丁醇(分析纯,江苏汉邦公司)。
单体化合物 polygalasaponin XXI、polygalasaponin F 由本
实验室分离得到,其结构经MS、1H-NMR、13C-NMR
和 2D-NMR鉴定,纯度经HPLC测定大于 95%。
1.2 实验动物
健康雄性 KM小鼠,体重 18 ~ 22 g,由上海斯莱
克实验动物有限责任公司提供,许可证号 SCXK(沪)
2007-0005。
1.3 药液的制备
瓜子金药材 9 kg,乙醇(70%)回流提取后,滤过,
回收溶剂,所得浸膏为乙醇总提物(GZJ-Et,1500 g,
得率 15.8%),取浸膏 1 000 g 用 5 倍量水稀释溶解后
依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到石油醚
部位(PEF,10.3 g,得率 1.03%)、乙酸乙酯部位(EAF,
80.7 g,得率 8.07%)、正丁醇部位(nBF,127.0 g,
得率 12.7%)和水残留母液(HF,49 g,得率 4.9%)。
受试样品:分别取瓜子金总提物浸膏和各萃取部
位(石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位及水残
留部位)浸膏,用 0.5%CMC - Na 溶液制成相当于每
ml 含生药 0.2 g 的混悬溶液,备用。
阳性对照:氟西汀胶囊,临用前以 0.5%CMC-Na
溶液配成 1.0 mg·ml-1 的混悬液。
2 方法与结果
2.1 瓜子金醇提物对小鼠强迫游泳不动时间的影响
健康雄性 KM小鼠 50 只,体重 18 ~ 22 g,随机
分组,一组空白对照、一组阳性对照,另三组为给药
组醇提物低剂量(1 g·kg-1)、中剂量(2 g·kg-1)、
高剂量(4 g·kg-1),正常进水进食,室温恒温,保
持昼夜节律,饲养七天适应环境。一星期后开始给
药,连续给药 7天。空白组灌胃 0.5%CMC-Na 溶液,
给药组连续 7天给不同剂量的瓜子金总提物混悬液,
对照组第 7 d 给氟西汀悬液。各组均在第 7天进行强
迫游泳实验 [4],给药 1 h 后,将小鼠放入高 20 cm、
直径 14 cm 的圆柱形玻璃缸中,缸内水深 10 cm,水
温 25℃。各组小鼠平行操作,观察 6 min,记录后 4
min 内的累计不动时间(小鼠不动行为的评判标准为
小鼠微卷身体,但保持垂直姿势,鼻孔露出水面,四
肢不动或只有后肢为保持平衡的轻微摆动)。
表 1 不同剂量瓜子金醇提物对小鼠强迫游泳不动时间的影响
Tab.1 The accumulative immobility time of mice treated with the enthanol
extract of Polygala japonica in forced swimming test
剂量 不动时间
空白组 ------ 121.0±20.4
氟西汀组 10 mg·kg 70.6±34.5**
醇提-低剂量组 1 g 生药 /kg 78.6±39.6**
醇提-中剂量组 2 g 生药 /kg 68.4±23.6*
醇提-高剂量组 4 g 生药 /kg 90.5±53.6
注:**P<0.01, *P<0.05 vs Control
结果显示,氟西汀组和瓜子金醇提组(低、中剂
量)均可显著缩短强迫游泳小鼠的不动时间。瓜子金
醇提组低、中、高剂量缩短小鼠游泳不动时间的比例
分别为 35.0%、43.5% 和 25.2%,其中中剂量组的疗
效和阳性药氟西汀(41.7%)相当,但中、低、高三
个剂量组间差别并没有统计学意义,故选择中剂量组
即 2 g·kg-1 进行后续实验。
2.2 瓜子金醇提取物不同部位对小鼠强迫游泳不动
时间的影响
雄性 KM小鼠 60 只,18~22 g,随机分组,一组
空白对照、一组阳性对照,另四组为给药组分别为石
油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位及水残留部
位。正常进水进食,室温恒温,保持昼夜节律,饲养
七天适应环境。一星期后开始给药,连续给药 7 d。
空白组灌胃 0.5%CMC-Na 溶液,给药组连续 7 d 均按
相当于 2 g·kg-1 瓜子金生药给药,对照组第 7 d 给氟
西汀悬液。各组均在第 7天进行强迫游泳实验,给药
1 h 后,将小鼠放入高 20 cm、直径 14 cm 的圆柱形
玻璃缸中,缸内水深 10 cm,水温 25℃。各组小鼠平
行操作,观察 6 min,记录后 4 min 内的累计不动时间 ,
评判标准及统计方法如前 2.1。
表2 瓜子金醇提物中各萃取部位对小鼠强迫游泳不动时间的影响
Tab. 2 The accumulative immobility time of mice treated with the different
fractions from enthanol extract of Polygala japonica in forced swimming test
组别 剂量 游泳不动时间(s)
空白组 ------ 133.6 35.9
氟西汀组 10 mg·kg 63.7±28.2**
石油醚部位组 2 g·kg 84.2±55.8*
乙酸乙酯部位组 2 g·kg 124.9±34.1
正丁醇部位组 2 g·kg 69.3±20.1**
水残留部位组 2 g·kg 92.2±43.1
注:**P<0.01, *P<0.05 vs Control
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结 果 显 示( 见 表 2), 各 组 中 氟 西 汀(10
mg·kg-1)和正丁醇部位 ( 相当于生药 2 g·kg-1) 能显
著缩短强迫游泳小鼠不动时间(P <0.01),抑制率分
别为 52.4%、48.1%,石油醚部位也可缩短强迫游泳
小鼠不动时间,但抑制率较低,说明瓜子金中具有显
著抗抑郁活性的化学成分主要集中在正丁醇部位。
2.3 瓜子金醇提物不同部位对小鼠悬尾不动时间的
影响
雄性 KM小鼠 60 只,18 ~ 22 g,随机分组,一
组空白对照、一组阳性对照,另四组为给药组分别
为石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位及水残
留部位。正常进水进食,室温恒温,保持昼夜节律,
饲养 7 d 适应环境。一星期后开始给药,连续给药 7
d。空白组灌胃 0.3%CMC-Na 溶液,给药组连续 7 d
均按相当于 2 g·kg -1 瓜子金生药给药,对照组第 7 d
给氟西汀悬液。各组均在第 7 d 进行悬尾实验 [5],给
药 1 h 后,将小鼠尾端距末端 2 cm 处用胶带固定在
高 15 cm 的支架上,使小鼠垂直悬挂,并以不透明板
隔开小鼠视线。小鼠悬挂 2 min 后,立即开始观察,
观察持续 4 min 内小鼠的不动时间(当小鼠被悬挂期
间,停止因体位失常而引起的挣扎,身体及四肢无任
何活动时为不动状态,统计后 4 min 累计保持不动状
态的时间为不动时间)。
表 3 瓜子金醇提物中各萃取部位对小鼠悬尾不动时间的影响
Tab. 3 The accumulative immobility time of mice treated with the different
fractions from enthanol extract of Polygala japonica in tail suspension test
组别 剂量 悬尾不动时间(s)
空白组 ------ 118.1±32.9
氟西汀组 10 mg·kg-1 61.3±25.0**
石油醚部位组 2 g·kg-1 87.2±29.8
乙酸乙酯部位组 2 g·kg-1 82.8±38.0
正丁醇部位组 2 g·kg-1 67.2±23.0**
水残留部位组 2 g·kg-1 91.9±32.6
注:**P<0.01, *P<0.05 vs Control
结 果 显 示( 表 3), 各 组 中 氟 西 汀(10
mg·kg-1)和正丁醇部位 ( 相当于生药 2 g·kg-1) 能显
著缩短悬尾小鼠的不动时间(P <0.01),抑制率分别
为 48.1%、43.1%,说明瓜子金中具有显著抗抑郁活
性的化学成分主要集中在正丁醇部位。
2.4 单体化合物 polygalasaponin XXI、polygalasaponin
F 对小鼠强迫游泳不动时间的影响
雄性 KM小鼠 40 只,18 ~ 22 g,随机分组,一
组空白对照、一组阳性对照,另两组为给药组分别
为单体化合物 polygalasaponin XXI、polygalasaponin
F。正常进水进食,室温恒温,保持昼夜节律,饲
养七天适应环境。一星期后开始给药,空白组灌胃
0.5%CMC-Na 溶液,给药组均按 0.1 g·kg-1 给药,
对照组给氟西汀悬液。各组进行强迫游泳实验,给
药 1 h 后,将小鼠放入高 20 cm、直径 14 cm 的圆柱
形玻璃缸中,缸内水深 10 cm,水温 25℃。各组小鼠
平行操作,观察 6 min,记录后 4 min 内的累计不动
时间。评判标准及统计方法如前 2.1。
表 4 瓜子金正丁醇部位中单体化合物对小鼠游泳不动时间的影响
Tab. 4 The accumulative immobility time of mice treated with the two
triterpenoid saponins from n-butanol fraction in forced swimming test
剂量 不动时间
空白组 ------ 112.7±23.4
氟西汀组 10 mg·kg-1 61.3±25.1**
polygalasaponin XXI 组 0.1 g·kg-1 61.8±29.2**
polygalasaponin F 组 0.1 g·kg-1 126.9±23.1
注:**P<0.01, *P<0.05 vs Control
结果显示,各组中氟西汀(10 mg·kg-1)和化
合物 polygalasaponin XXI(100 mg·kg-1)能显著缩
短强迫游泳小鼠不动时间(P < 0.01),抑制率分别为
61.3%、61.8%。
3  讨论
抑郁症是一种特征性的以生理行为缺损,包括情
绪、睡眠、食欲和认知为核心表现的疾病,其表现特
点是一种持续性的心境低落,对周围事物失去各种兴
趣及快乐感。目前,抑郁症的发生率已呈现出逐年增
长的趋势,世界卫生组织和哈佛大学的一项联合研究
表明,抑郁症已经成为中国疾病负担的第二大疾病。
抑郁症的发病机制非常复杂,多数研究认为抑郁症的
发生与脑内单胺递质不足有关,尤其与 5- 羟色胺、
多巴胺等关系密切。
远志属的多种药用植物在民间均有广泛的应
用,远志益智安神的作用由来以久,瓜子金为远志属
的草本植物,民间用于失眠疗效较好,本研究主要通
过活性部位和活性成分的分离,期望为益智安神类药
物的开发提供基础。
小鼠强迫游泳实验(FST)是由 Porsolt 于 1977
年首先提出,小鼠悬尾实验(TST)是受 FST 的启发
而创建的,现已证实小鼠悬尾实验对各种抗抑郁药均
很敏感。在悬尾实验模型和强迫游泳模型中,小鼠处
于不动状态,反映了动物的绝望行为,可模拟人类的
抑郁状态。与空白对照相比,瓜子金醇提物有一定的
抗抑郁作用,其中的正丁醇部位能显著减少小鼠强迫
游泳不动时间和小鼠悬尾不动时间,进一步的化学研
究显示,正丁醇部位以三萜皂苷类成分为主,我们
对其中两个代表性单体化合物 polygalasaponin XXI、
(下转第 38 页)
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清热解毒类中草药,据文献报道 3味中草药均有不同
程度抗革兰氏阳性菌或阴性菌的作用 [5-7]。苍术、艾
叶属于芳香化湿类中草药,其烟雾或提取液对多种细
菌和真菌亦有杀灭和抑制作用 [8~9]。中药抗菌洗液采
用传统水提取方法制备而成,实验结果表明,以含体
积分数 25% 的中药抗菌洗液分别作用大肠杆菌、金
黄色葡萄球菌、白色念珠菌 3、5、3 min,杀灭率达
到 99.0% 以上,杀菌效果随其作用时间延长而增强,
随其浓度增大杀灭微生物作用时间缩短;密封保存于
37℃下 90 d,杀菌效果无明显变化;对试验动物皮肤
无刺激性和致敏性,说明该抗菌洗液对细菌繁殖体和
真菌具有较好的杀灭作用,性能稳定,安全性较高。
中草药抗菌的作用机制主要是破坏菌细胞壁、细
胞膜的完整,或者影响其核酸、脂质代谢等方面 [10]。
中药抗菌洗液含有大量具有抗菌活性的物质,如蛇床
子素、苦参碱、白花蛇舌草总黄酮,盐酸小檗碱等,
上述成分存在于同一复方制剂中是否通过影响细菌
结构、生理功能或干扰细菌代谢过程等方面而产生杀
灭微生物的作用,本文未进行相关方面的实验,杀菌
试验也未涉及更多的微生物种类,因此抗菌谱和抗菌
机制还有待于作进一步的研究。
中药抗菌洗液除了杀菌作用外,各味中草药还有
其它方面的药理或临床作用,如配方中的蛇床子 [11]、
苦参 [12]、白花蛇舌草 [7] 还具有抗炎止痒功能;艾叶
可以抑制炎症细胞主要是中性粒细胞浸润,有促进
创面肉芽组织生长的作用,减少组织细胞脱落和坏
死 [13]。这体现中药抗菌洗液还具有一定的健肤作用,
开发成皮肤类消毒剂性能优于化学消毒剂。
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收稿日期:2014-04-28
polygalasaponin F(化学结构见图1)
polygalasaponin XXI    polygalasaponin F
图 1 单体化合物的化学结构
Fig.1 Chemical structures of the two triterpenoid saponins
进行了进一步的活性测试,发现其中苷元为
medicagenic acid 的单体化合物 polygalasaponin XXI 有
显著的抗抑郁作用。瓜子金抗抑郁作用的机制及化合
物结构和活性之间的相关性有待进一步研究。
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收稿日期:2014-05-28
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