全 文 :甘草与大戟、甘遂、芫花的反药组合对大鼠离体回肠运
动的影响
丁爱华,华永庆,段金廒*,陈艳琰,宿树兰,陶伟伟,姜玮
(南京中医药大学江苏省方剂高技术研究重点实验室,江苏 南京 210046)
摘要:目的 从离体回肠运动的角度,探讨中药“十八反”中甘草与大戟、甘遂、芫花存在配伍禁忌的科学依据。方法 制作大
鼠离体回肠模型,以回肠收缩张力为指标,观察不同浓度的甘草与大戟、甘遂、芫花的单煎液、合并液、合煎液对大鼠离体回肠
运动的影响。结果 甘草单煎液呈现抑制回肠收缩作用,而大戟、甘遂、芫花各单煎液则表现为不同程度促进回肠收缩作用;
甘草分别与大戟、甘遂、芫花合并给药后,可减弱后者促进回肠收缩的作用;各合煎液促进回肠收缩的作用均弱于其单煎液,
其中甘草-甘遂合煎液的作用弱于其合并液,而甘草 -大戟合煎液与甘草 -芫花合煎液强于其合并液。结论 甘草与大戟、甘
遂、芫花合用后能显著抑制后者促进回肠收缩作用,从该角度探讨和揭示了甘草与具有峻下逐水功效的各药物存在配伍禁忌
的作用特点与机制。
关键词:十八反;甘草;大戟;甘遂;芫花;离体回肠;配伍禁忌
中图号:R285 文献标志码:A 文章编号:1672-0482(2012)04-0345-05
Effects of Incompatible Combination of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma with Euphorbiae Pekinensis Radix,Kansui Radix or
Genkwa Flos on Rat Ileal Motility in vitro
DING Ai-hua,HUA Yong-qing,DUAN Jin-ao*,CHEN Yan-yan,SU Shu-lan,TAO Wei-wei,JIANG Wei
(Jiangsu Key Laboratory for High Technology Research of TCM Formulae,Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing,
210046,China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To find out the scientific basis of existing incompatibility of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma with
Euphorbiae Pekinensis Radix,Kansui Radixor Genkwa Flos among Eighteen Incompatible Medicament of TCM .METHODS
The effects of single decoction,mixed decoction(mixed water extract of each individual herbs)and co-decoction(water ex-
tract of mixed two herbs)at different concentrations were observed with the index of rat ileal smooth muscle tension.RESULTS
Single Glycyrrhizae Radix et Rhizoma decoction could inhibit the contraction of rat ileum,while each single decoction of
Euphorbiae Pekinensis Radix,Kansui Radix or Genkwa Flos could promote the ileal contraction to different degrees.The
effect of Euphorbiae Pekinensis Radix,Kansui Radixor Genkwa Flos would be weakened when it was mixed with Glycyr-
rhizae Radix et Rhizoma.The contraction-promoting effect of each co-decoction was weaker than the single decoction.And
the effect of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma-Kansui Radixco-decoction was weaker than the mixed decoction,whereas the
effects of another two co-decoctions were stronger than the mixed decoction.CONCLUSION The contraction-promoting effect
of Euphorbiae Pekinensis Radix,Kansui Radixor Genkwa Flos was markedly weakened when combined with Glycyrrhizae
Radix et Rhizoma,And from this perspective,the characteristics and mechanism of imcompatiblity between Glycyrrhizae
Radix et Rhizoma combined with drugs with purgative and eliminating fluid effects can be explored and indicated.
KEY WORDS:Eighteen Incompatible Medicament;Glycyrrhizae Radix et Rhizoma;Euphorbiae Pekinensis Radix;Kansui
Radix;Genkwa Flos;isolated ileum;incompatibility
“十八反”是传统中医用药配伍禁忌的核心内
容。《神农本草经》提出“勿用相恶、相反”的原则,以
避免可能导致的毒性反应或拮抗药效[1-3]。“十八
反”是历代医家临床实践的经验集成,然而其配伍禁
—543—
南京中医药大学学报2012年7月第28卷第4期
JOURNAL OF NANJING UNIVERSITY OF TCMVol.28No.4Jul.2012
收稿日期:2012-01-05;修稿日期:2012-05-18
基金项目:国家重点基础研究发展计划(“973”计划)(2011CB505300,2011CB505303)
作者简介:丁爱华(1988-),女,江苏盐城人,南京中医药大学2010级硕士研究生。*通信作者:dja@njutcm.edu.cn
DOI:10.14148/j.issn.1672-0482.2012.04.021
忌理论的科学内涵还有待深入研究。
为了探讨和揭示“藻戟遂芫俱战草”配伍禁忌的
作用特点和机制,围绕甘草甘缓守中之药性可能影
响大戟类药材具有的峻下逐水功效的科学假说,建
立了大鼠离体回肠运动模型,考察甘草与大戟、甘
遂、芫花合用后对大鼠回肠收缩作用的影响,为揭示
反药组合配伍禁忌机制提供科学依据。
1 材料
1.1 动物
SD大鼠,体质量200~270g,雌雄各半,由浙江
省实验动物中心提供,动物合格证号:SCXK(浙)
2008-0033。
1.2 药材与试剂
甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis
Fisch.的根及根茎,产自宁夏灵武市美康甘草基
地;大戟为大戟科植物大戟Euphorbia pekinensis
Rupr.的根,产自广西双定;甘遂为大戟科植物甘遂
Euphorbia kansui T.N.Liou ex T.P.Wang的
块根,产自陕西宝鸡红河谷地区;芫花为瑞香科植物
芫花Daphne genkwa Sieb.et Zucc.的花蕾,产自
安徽吴家店。以上药材均经南京中医药大学段金廒
教授鉴定,符合《中华人民共和国药典》(2010年版)
项下标准。
Krebs缓冲液:称取 NaCl 6.9g,KCl 0.35g,
KH2PO40.16g,MgSO4·7H2O 0.29g,NaHCO3
2.1g,CaCl20.17g,葡萄糖1g,加蒸馏水溶解定容
至1 000mL,pH调至7.4。
1.3 仪器
智能数显调温电热套(通州市申通电热器厂);
RE-852旋转蒸发仪(南京金正教学仪器有限公司);
MSI Minishaker型震荡器 (IKA Works Guang-
zhou);SB5200-型超声清洗机(上海 Branson公
司);Z-323台式离心机(德国 Hermle公司);AE100
电子天平(METTLER公司);超级恒温器CS501型
(重庆大型设备制造厂);TSZ-04离体组织灌流系
统,FSG-01压力传感器,PowerLab/8s多道生理记
录仪(澳大利亚 AD Instrument公司)。
2 方法与结果
2.1 样品制备
1)单煎液制备:称取甘草2kg,加入10倍量的
水浸泡1h,加热回流提取2次,每次2h,合并滤液,
减压浓缩至1g/mL;大戟、甘遂和芫花单煎液的制
备方法同甘草。2)合并液制备:甘草单煎液分别与
大戟、甘遂、芫花各单煎液等比混合即得合并液。3)
合煎液制备:甘草分别与大戟、甘遂、芫花等量混合
后,加10倍量水提取两次,均浓缩至含总生药量1
g/mL。
各单煎液、合并液和合煎液均用蒸馏水稀释至
0.000 5、0.001、0.003 5、0.01、0.035、0.1、0.35g/
mL(按单味药生药量计),涡旋后超声30min,2 500
r/min离心5min,取上清液。甘草单煎液再另稀释
成0.2、0.4、0.8g/mL。
2.2 大鼠离体回肠运动试验
取禁食24h的大鼠,脱颈椎处死,立即剖腹,在
距回盲部约10cm 处取一段回肠,置于盛有预冷
Krebs液的平皿中,去除附着的系膜及脂肪组织,洗
净肠内容物。取1cm 左右肠管,两端对角用线结
扎,一端固定于浴槽底部,另一端与张力换能器相
连,悬挂于盛有Krebs液的麦氏浴槽(20mL)中,浴
槽温度为(37±0.5)℃,持续通入氧气。给与肠管1
g的基础负荷,稳定1h左右,用PowerLab/8s多道
生理记录系统进行记录,Chart 4.2软件进行数据采
集。
待回肠收缩稳定后,开始给药:1)累加法加入不
同浓度的甘草、大戟、甘遂、芫花单煎液;2)分别加入
0.2、0.4、0.8g/mL的甘草单煎液,待肠管稳定15
min后,再分别累加不同浓度的大戟、甘遂、芫花单
煎液;3)累加法加入不同浓度的甘草与大戟、甘遂、
芫花的合并液和合煎液。各浓度药物加入间隔时间
为3min,各受试药物观察结束后换用新的肠管进
行下一次实验。记录给药前3min及给药后每个时
间段内肠管收缩的张力均值,求得张力差。
2.3 统计方法
药物对肠管的作用以张力差来表示,张力差=
(给药后值-给药前值)×1 000,数据均以珚x±s表
示。采用t检验作两组间比较,P<0.05为有统计
学意义。
2.4 结果
2.4.1 甘草、大戟、甘遂和芫花单煎剂对大鼠离体
回肠运动的影响
甘草单煎液能浓度依赖性地抑制回肠平滑肌收
缩,当达到最高浓度2mg/mL时,其抑制作用最强;
甘草在0.1~2mg/mL时与溶媒组相比有显著性差
异(P<0.01)。大戟、甘遂、芫花各单煎液能不同程
度地促进回肠平滑肌收缩,其中甘遂和芫花均在2
mg/mL时,作用最强(张力差分别为1 391、1 329
—643— 南京中医药大学学报2012年7月第28卷第4期
mg),而大戟在1mg/mL时作用最强(张力差为
640mg);大戟和芫花在0.3~2mg/mL与溶媒组
相比有显著性差异(P<0.05),而甘遂在0.1~2
mg/mL时有显著性差异(P<0.05),见表1。
表1 甘草、大戟、甘遂和芫花单煎液对大鼠离体回肠运动的影响(珚x±s,n=6)
终浓度/
(mg/mL)
给药前后的张力差/mg
溶媒组 甘草 大戟 甘遂 芫花
0.001 0.3±33.5 -1.9±28.2 -5.3±22.4 7.3±17.4 15.1±21.6
0.003 18.0±44.3 -8.5±33.4 -0.8±26.1 10.8±31.7 30.9±53.4
0.010 11.4±44.0 -21.0±49.8 0.8±25.9 27.5±32.6 27.4±68.3
0.030 17.6±48.7 -36.8±65.1 26.0±52.3 39.0±35.6 20.1±84.2
0.100 14.5±44.9 -91.0±57.4** 172.6±150.5 89.6±61.8* 93.2±103.2
0.300 14.8±50.4 -112.5±81.2** 587.6±272.7**277.2±136.3** 406.7±215.9**
1.000 29.2±50.4 -172.9±101.0** 640.0±141.8**781.3±260.5** 904.8±372.3**
2.000 30.0±62.3 -241.9±135.8** 403.2±251.9*1 391.5±408.9**1 328.9±382.8**
注:与溶媒组比较,*P<0.05,* *P<0.01。
2.4.2 大戟、甘遂、芫花单煎液对甘草预处理的大
鼠离体回肠运动的影响
甘草预处理后,大戟、甘遂、芫花各单煎液对回
肠收缩的促进作用均显著减弱,且减弱程度随甘草
浓度的增大而增强。其中,给予1、2、4mg/mL甘草
后,大戟和甘遂与单用时相比均显著减弱 (P
<0.05);而芫花仅在4mg/mL甘草预处理后作用
显著减弱(P<0.05)。结果见表2~4。
表2 给予1mg/mL甘草后大戟、甘遂、芫花对大鼠离体回肠运动的影响(珚x±s,n=6)
终浓度
(mg/mL)
甘草预处理后,大戟、甘遂、芫花给药前后的张力差/mg
溶媒组 大戟 甘遂 芫花
0.001 -14.7±28.5 6.0±19.1 19.5±23.9 -1.6±18.4
0.003 -7.6±20.9 5.6±32.6 11.0±28.7 10.1±52.2
0.010 -8.8±33.2 14.8±14.4 11.9±52.5 35.6±87.2
0.030 -4.6±36.4 38.1±27.2* 44.4±66.2 60.0±123.5
0.100 -2.5±42.2 70.3±31.6** 64.8±46.7* 80.3±126.6
0.300 -2.6±60.1 160.8±79.8** 13.34±80.6* 218.0±159.6*
1.000 -0.3±65.4 224.4±56.9** 491.6±108.0** 619.0±256.7**
2.000 -11.4±76.8 145.5±29.0** 1 124.9±223.4**1 118.2±358.8**
注:与溶媒组比较,*P<0.05,**P<0.01。
表3 给予2mg/mL甘草后大戟、甘遂、芫花对大鼠离体回肠运动的影响(珚x±s,n=6)
终浓度
(mg/mL)
甘草预处理后,大戟、甘遂、芫花给药前后的张力差/mg
溶媒组 大戟 甘遂 芫花
0.001 5.1±24.0 13.3±16.0 34.7±12.3 11.1±41.1
0.003 11.8±37.9 16.5±20.7 40.0±29.9 2.5±63.8
0.010 -11.7±28.0 18.7±33.6 38.0±35.3* 3.6±81.3
0.030 -17.4±34.8 35.3±33.4* 43.3±35.8** 3.8±115.1
0.100 -20.6±36.3 71.3±26.4** 86.1±47.1** 61.8±105.6
0.300 -14.0±38.1 110.5±26.0** 118.9±68.7** 223.0±126.5**
1.000 -27.1±42.0 136.8±18.4** 233.6±81.1** 606.4±200.3**
2.000 -14.6±46.4 38.0±55.1 454.7±93.7** 1058.7±367.7**
注:与溶媒组比较,*P<0.05,**P<0.01。
—743—丁爱华,等:甘草与大戟、甘遂、芫花的反药组合对大鼠离体回肠运动的影响 第4期
表4 给予4mg/mL甘草后大戟、甘遂、芫花对大鼠离体回肠运动的影响(珚x±s,n=6)
终浓度
(mg/mL)
甘草预处理后,大戟、甘遂、芫花给药前后的张力差/mg
溶媒组 大戟 甘遂 芫花
0.001 -11.3±4.2 16.1±23.5 -0.1±9.9 -2.8±34.6
0.003 -5.1±16.7 10.6±26.9 27.4±44.9 11.8±35.8
0.010 -6.8±32.6 14.8±23.7 31.0±53.6 31.6±31.3*
0.030 -10.3±29.2 17.5±24.4 17.7±69.9 40.5±41.2*
0.100 4.5±42.7 65.8±64.3 18.6±71.8 73.7±46.8*
0.300 1.7±42.6 96.7±84.2* 42.7±65.5 187.1±89.4**
1.000 -0.3±35.6 21.8±55.0 172.0±102.2** 515.0±182.6**
2.000 -5.5±41.0 -62.6±53.6 308.7±92.9** 927.0±282.3**
注:与溶媒组比较,*P<0.05,**P<0.01。
2.4.3 甘草与大戟、甘遂、芫花的合并液和合煎液
对大鼠离体回肠运动的影响
甘草与大戟、甘遂、芫花的合并液促进回肠收缩
的作用均弱于其单煎液,其中2mg/mL时各合并液
与大戟、甘遂、芫花各单煎液相比有显著性差异(P
<0.05)。各合煎液促进回肠收缩的作用也弱于其
单煎液。其中,在1~2mg/mL浓度下甘草-大戟合
煎液和甘草-甘遂合煎液与大戟、甘遂各单煎液相比
均有显著性差异(P<0.05),甘草 -芫花合煎液的最
大效应值与芫花单煎液相比差异不显著(P >0.
05)。然而,低浓度的甘草 -芫花合煎液促进回肠收
缩的作用却显著强于芫花单煎液,其中0.1~0.3
mg/mL时有显著性差异(P<0.05)。
各合并液与合煎液对回肠收缩的作用强度也存
在差异,其中0.3mg/mL甘草-大戟合煎液及0.1~
2mg/mL甘草-芫花合煎液,作用强度显著强于其合
并液(P<0.05);而1~2mg/mL甘草 -甘遂合煎液
的作用强度却显著弱于其合并液(P<0.01)。见表
5。
表5 甘草与大戟、甘遂、芫花的合并液和合煎液对大鼠离体回肠运动的影响(珚x±s,n=6)
终浓度
(mg/mL)
给药前后的张力差/mg
甘草-大戟合并液甘草-甘遂合并液甘草-芫花合并液甘草-大戟合煎液甘草-甘遂合煎液甘草-芫花合煎液
0.001 23.7±26.6 14.1±34.6 10.1±24.1 5.7±31.1 19.2±16.4 7.2±18.1
0.003 29.3±30.6 4.1±50.9 30.2±51.9 15.5±38.7 22.8±28.5 -1.7±30.5
0.010 34.7±35.6 12.6±34.3 39.5±63.4 28.7±26.3 6.4±50.8 14.9±46.8
0.030 48.5±42.4 21.4±44.9 45.8±89.6 69.3±81.8 11.2±73.4 81.0±87.9
0.100 154.8±64.4 98.8±110.5 56.2±102.1 282.5±150.3 77.3±75.7 376.8±237.6* *
0.300 476.7±133.6 242.3±112.3 200.2±132.0 727.6±213.2* 241.1±70.8 889.0±408.7* *
1.000 395.4±98.9 596.6±154.0 648.3±257.6 423.2±203.1 460.9±94.5* *1 224.5±411.0* *
2.000 95.2±63.6 1 038.2±212.1 867.2±232.1 114.7±196.7 638.6±92.4* *1 115.5±322.4* *
注:合煎液与合并液比较,*P<0.05,**P<0.01。
3 讨论
大戟、甘遂、芫花均为峻下逐水之剂,能使水邪
经大小便迅速排出。中药通过刺激肠管,促进肠蠕
动,增加肠道内肠液,加速肠内容物的推动而产生泻
下作用,从而减少内容物在肠内的停留时间以及增
加水肿组织内水分的吸收,最终达到消除腹水、胸腔
积液等目的。而甘草能“缓急止痛”,其中的黄酮类
物质可能导致其抑制肠管运动[4]。因此本实验考察
大戟、甘遂、芫花单味药及其与甘草合用后对肠管运
动方面的影响。
与甘草合用后,无论是先后使用、合并使用或者
是合煎使用,大戟促进肠管运动的作用均减弱,表明
甘草可能会减弱大戟的“峻下”作用,不宜合用。
甘遂与甘草合用后,其促进肠管运动的作用减
弱,提示了甘草可能影响甘遂的“峻下逐水”功效而
不宜合用。上述结果与前期在体研究结果[5]基本一
—843— 南京中医药大学学报2012年7月第28卷第4期
致。甘草-甘遂合煎液对大鼠离体回肠收缩的促进
作用弱于甘遂单煎液和合并液,这可能是甘草-甘遂
合煎液的总提取率比甘遂单煎液低,以及其中的总
巨大戟二萜醇类化合物和假白榄酮型二萜类化合物
的含量也低于甘遂单煎液所致[6]。
高浓度甘草预处理、甘草与芫花合并使用以及
高浓度合煎使用,均会导致芫花促进肠管运动的作
用减弱,表明两药合用会使芫花的“峻下”作用减弱。
而低浓度甘草 -芫花合煎液的作用却显著强于合并
液和芫花单煎液,有研究表明甘草-芫花合煎液中甘
草和芫花的某些特征成分的含量高于合并液[7],提
示合煎后芫花有效成分溶出率的增加可能是促进肠
管运动作用增强的原因。值得注意的是,芫花在此3
种峻下逐水药中毒性最强,其刺激肠管运动的作用
在上述药物中亦较强。合煎后芫花特征成分溶出的
增加,导致其促进肠管运动功能的增强,是否会导致
其毒副作用的进一步增强,还有待进一步毒理学研
究。
“峻下逐水”药大戟、甘遂、芫花等与“甘缓”的甘
草合用后,表现出促进回肠运动作用减弱的共同特
征,可能引起其“峻下”功效的减弱。上述研究提示
临床配伍使用时在某些条件下可能存在着配伍禁
忌,为进一步阐明中药“十八反”配伍禁忌理论的科
学内涵奠定了基础。
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(编辑:董宇)
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—943—丁爱华,等:甘草与大戟、甘遂、芫花的反药组合对大鼠离体回肠运动的影响 第4期