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千根草乙醇总提物抗炎镇痛作用研究



全 文 :千根草乙醇总提物抗炎镇痛作用研究
盛亚丽,王红刚,杨超燕,张晓英,蔡羡晓
(广东药学院 中药学院,广东 广州 510006)
摘要:目的 观察千根草乙醇总提取物的抗炎镇痛作用。方法 采用二甲苯小鼠耳肿胀模型和毛细血管
通透性实验研究千根草乙醇总提取物的抗炎作用;采用小鼠热板法和扭体法观察千根草乙醇总提取物
的镇痛作用。结果 千根草乙醇总提取物高、中、低剂量(40、20、10 g /kg)均能显著抑制二甲苯所致的小
鼠耳肿胀,高、中剂量组能显著抑制乙酸所致的小鼠腹腔通透性增高(P < 0. 05),显著减少乙酸所致的
小鼠疼痛扭体次数,提高热刺激所致的小鼠痛阈百分率(P < 0. 05)。结论 千根草乙醇总提取物有显著
的抗炎作用和一定的镇痛作用。
关键词:千根草;抗炎;镇痛
中图分类号:R285. 5 文献标志码:A doi:10. 3969 / j. issn. 1006-8783. 2015. 03. 017
文章编号:1006-8783(2015)03-0359-03
Study of the extract of Euphorbia thymifolia L. on anti-inflammatory and analgesic
effects
SHENG Yali,WANG Honggang,Yang Chaoyan,ZHANG Xiaoying,CAI Xianxiao
(Department of Chinese Materia Medica,Guangdong Pharmaceutical University,Guangzhou 510006,China)
Abstract:Objective To study of the extract of Euphorbia thymifolia L. on anti-inflammatory and analgesic
effects. Methods The mice model of acute auricle swelling induced by dimethylbenzene and capillary
permeability induced by acetic acid were used to observe anti-inflammatory effects. The pain models of
mice induced by acetic acid or hot plate were used to observe analgesic effects. Results The ethanol extract
of Euphorbia thymifolia L. at the doses of 10,20 and 40 g /kg obviously reduced auricle swelling and at the
doses of 20,40 g /kg inhibited capillary permeability (P < 0. 05). The extract of Euphorbia thymifolia L.
at the doses of 20 and 40 g /kg inhibited writhing response and improved the percentage of the pain
threshold in the hot-plate procedure (P < 0. 05). Conclusion The ethanol extract of Euphorbia thymifolia
L. displays anti-inflammatory and analgesic effects.
Key words:Euphorbia thymifolia L.;anti-inflammatory;analgesic
收稿日期:2015-03-20
作者简介:盛亚丽,女,2014 级硕士研究生,Email:1574139861@ qq. com;通信作者:王红刚,男,高级实验师,主要从事中药鉴定
与物质基础研究。
网络出版时间:2015-05-19 16:22 网络出版地址:http:/ /www. cnki. net /kcms /detail /44. 1413. R. 20150519. 1622. 003. html
千根草又名小飞扬草,为大戟科大戟属植物千
根草 Euphorbia thymifolia L. 的全草,分布于我国广
东、广西、云南、江西和福建等省。其味微酸、涩,性
微凉,具有清热利湿、消肿解毒、收敛止痒等功效,内
服治疟疾、泄泻、乳痈、痔疮,外用治湿疹、飞疡疮、天
疱疮、烂头胎毒、过敏性皮炎、皮肤瘙痒等症[1]。有
研究[2-3]报道从其全草中地上部分分离得到一些具
有抗病毒活性黄酮类化合物,但研究不够系统。其
全草的粗提物具有抗氧化、抗病毒、降血糖及镇痛等
作用[3-4]。本课题组对千根草 70%乙醇总提物及其
醋酸乙酯、石油醚和正丁醇萃取部位抑菌活性进行了
研究[5],发现其抑菌活性大小顺序依次为醋酸乙酯、
石油醚、正丁醇,并从千根草 70%乙醇总提取物中分
离得到了木犀草素等 13种化学成分[6]。为进一步探
索千根草的抗炎药理作用,本文对千根草乙醇总提取
物进行了小鼠体内抗炎镇痛作用的实验研究。
1 实验材料
1. 1 动物
SPF 级 KM小鼠,体质量 18 ~ 22 g,由广东省医
广东药学院学报
Journal of Guangdong Pharmaceutical University Jun. 2015,31(3)
学实验动物中心提供,生产许可证号:SCXK (粤)
2008-0002。正常饲养 3 d后供试。
1. 2 药物与制备
千根草药材,购于广州市清平药材市场,经广东
药学院刘基柱副教授鉴定为大戟科大戟属千根草
Euphorbia thymifolia L.全草。
取千根草药材 4 000 g,除去泥土灰尘洗净,烘
干得净重 3 283 g,粉碎,75%(φ)乙醇加热回流提取
3 次,第 1 次 2 h,第 2、3 次均为 1. 5 h,滤过,合并提
取液,浓缩、冷冻干燥得千根草样品 821 g。根据收
率换算成用药剂量以 0. 5% CMC-Na配成相应浓度。
1. 3 试剂
吲哚美辛片(临汾奇林药业有限公司,批号:
2012071);乙酸(分析纯,国药集团化学试剂有限公
司,批号:20130503);二甲苯(化学纯,广州化学试
剂厂,批号:20130701-2);伊文思蓝(Aiaddin公司)。
1. 4 主要仪器
AY120 电子天平 (Shimadzu 公司);UV-1800
紫外分光光度计 (北京瑞利分析仪器公司);YLS-
6A智能热板仪 (山东医学科学院设备站)。
2 方法与结果
2. 1 千根草乙醇总提取物对二甲苯所致小鼠耳郭
肿胀的影响[7]
取小鼠 50 只,按体质量随机分为 5 组 (每组 10
只):0. 5% CMC-Na 空白对照组、吲哚美辛阳性组
(0. 75 mg /mL)、千根草乙醇总提取物高剂量组(0. 5
g /mL)、中剂量组(0. 25 g /mL)、低剂量组(0. 125 g /
mL)。每天灌胃给药 1 次,给药容积为 20 mL /kg,空
白对照组给予等容积的 0. 5% CMC-Na,连续 5 d,末
次给药后 1 h,将二甲苯 50 μL 涂于小鼠右耳两面,
左耳不涂作为对照,30 min后将小鼠脱颈椎处死,用
直径 6 mm 打孔器分别在左、右耳同一部位打下圆
耳片,精密称质量,计算肿胀度和抑制率。结果以 珋x
± s表示,采用 t检验进行统计学处理,见表 1。
肿胀度 =右耳片质量 -左耳片质量
抑制率 = (空白组耳肿胀度 - 用药组耳肿胀
度)/空白组耳肿胀度 × 100%
实验表明:吲哚美辛组、千根草高、中、低剂量组对
鼠耳肿胀有明显的抑制作用,与空白组比较差异有统
计学意义(P <0. 05),其中,高剂量组作用强于吲哚美
辛组和低剂量组,差异有统计学意义(P <0. 05)。
2. 2 千根草乙醇总提取物对小鼠腹腔毛细血管通
透性的影响[8]
取小鼠 50 只,分组及给药同“2. 1”。连续给药 5
d,末次给药 1 h后尾静脉注射 0. 25% 伊文思蓝生理
盐水溶液0. 1 mL /10 g,立即腹腔注射0. 6% 乙酸 0. 1
mL /10 g,20 min 后处死,剖开腹腔,用 5 mL 生理盐
水冲洗数次,收集洗液,离心,取上清液在 UV-1800 型
分光光度计 590 nm处测定吸收度 A值,结果见表 2。
表 1 千根草乙醇总提取物对二甲苯所致小鼠耳郭肿胀的
影响(珋x ± s,n = 10)
Table 1 Effect of the extract of Euphorbia thymifolia L. on
dimethylbenzene-induced auricle swelling in mice
组别
剂量 /
(g·kg -1)
肿胀度 /
mg
抑制率 /
%
空白对照组 - 7. 21 ± 1. 15 -
吲哚美辛组 0. 015 5. 70 ± 1. 79* 20. 9
千根草 高剂量组 40 3. 77 ± 1. 53**★▲47. 7
中剂量组 20 5. 06 ± 2. 65* 29. 8
低剂量组 10 5. 56 ± 1. 94* 22. 9
与空白对照组比较:* P < 0. 05,**P < 0. 01;与吲哚美辛组比
较:★P < 0. 05;与千根草低剂量组比较:▲P < 0. 05。
表 2 千根草乙醇总提取物对小鼠腹腔毛细血管通透性的
影响
Table 2 Effect of the extract of Euphorbia thymifolia L. on
capillary permeability in mice(珋x ± s,n = 10)
组别 剂量 /(g·kg -1) A值
空白对照组 - 0. 39 ± 0. 08
吲哚美辛组 0. 015 0. 19 ± 0. 11**
千根草 高剂量组 40 0. 23 ± 0. 15*
中剂量组 20 0. 28 ± 0. 17*
低剂量组 10 0. 36 ± 0. 21
与空白对照组比较:* P < 0. 05,**P < 0. 01。
实验表明:吲哚美辛组、千根草高、中剂量组均
能抑制乙酸所致的小鼠腹腔通透性增高,与空白对
照组比较差异有统计学意义(P < 0. 05)。
2. 3 千根草乙醇总提取物对乙酸所致小鼠扭体反
应的影响[9]
取小鼠 50 只,分组及给药同“2. 1”。连续给药
5 d,末次给药后 60 min,各鼠腹腔注射 0. 6%乙酸
0. 1 mL /10 g,观察 15 min 内各组小鼠由乙酸引起
的扭体次数,结果见表 3。
实验表明:吲哚美辛能延长小鼠疼痛反应潜伏
期 (P < 0. 05),且能减少小鼠 15 min 扭体次数,与
空白对照组比较差异有统计学意义(P < 0. 05);千
根草乙醇总提取物高、中剂量能减少小鼠 15 min 扭
体次数(P < 0. 05),但对于延长小鼠疼痛反应潜伏
期作用不明显(P > 0. 05)。
063 广东药学院学报 第 31 卷
表 3 千根草乙醇总提取物对乙酸所致小鼠疼痛的影响
Table 3 Effect of the extract of Euphorbia thymifolia L. on
acetic acid-induced pain in mice(珋x ± s,n = 10)
组别
剂量 /
(g·kg -1)
扭体潜伏期 /
min
15 min
扭体次数 /次
空白组 - 3. 73 ± 1. 62 23. 73 ± 15. 32
吲哚美辛组 0. 015 7. 14 ± 3. 08* 12. 14 ± 5. 18*
千根草 高剂量组 40 3. 83 ± 2. 55 11. 83 ± 10. 29*
中剂量组 20 3. 75 ± 14. 07 15. 83 ± 14. 08*
低剂量组 10 4. 58 ± 2. 47 16. 5 ± 6. 72
与空白对照组比较:* P < 0. 05。
2. 4 千根草乙醇总提取物对小鼠热板法致痛作用
的影响[10]
取雌性小鼠 50 只,采用热板法,热板温度为(55
± 0. 5)℃,给药前先测定各鼠的正常疼痛反应作为
基础痛阈 (放入热板至小鼠舔后足时间,若小于 5 s
或超出 30 s,则弃之),选取合格动物随机分成 5 组,
分组及给药同“2. 1”。连续给药 5 d,末次给药 60、90
min后再测定各鼠的疼痛反应,结果见表 4。
痛阈提高百分率 = (给药后潜伏期 - 基础阈
值)/基础阈值 × 100%
表 4 千根草乙醇总提取物对热刺激小鼠疼痛的影响
Table 4 Effect of the extract of Euphorbia thymifolia L. on on
hot-induced pain in mice(珋x ± s,n = 10)
组别
剂量 /
(g·kg -1)
60 min
痛阈提高
百分率 /%
90 min
痛阈提高
百分率 /%
空白对照组 - 0 6. 13
吲哚美辛组 0. 015 8. 76 2. 16
千根草 高剂量组 40 0. 21 46. 41*
中剂量组 20 36. 48 33. 97*
低剂量组 10 1. 67 12. 63
与空白对照组比较:* P < 0. 05。
实验表明千根草乙醇总提取物高、中剂量组能
提高 90 min痛阈百分率,与空白对照组比较差异有
统计学意义(P < 0. 05)。
3 讨论
炎症是机体对各种损伤所发生的以防御为主的
反应,炎症渗出组织肿胀是炎症早期的重要指标。
本实验采用的二甲苯所致小鼠耳郭肿胀以及乙酸所
致小鼠腹腔毛细血管通透性增高分别为肿胀和渗出
急性炎症模型,结果显示千根草乙醇总提取物对致
炎剂引起的水肿、渗出均有明显的抑制作用,且千根
草高剂量组对二甲苯所致小鼠耳肿胀的抑制作用强
于吲哚美辛,提示千根草乙醇总提取物对早期急性
炎症有较好的疗效,然而其对亚急性和慢性炎症的
作用尚需进一步的实验研究。
本实验采用乙酸扭体法和热板刺激法研究千根
草乙醇总提取物的镇痛作用,乙酸扭体法比较适合
外周镇痛作用机制药物的筛选,而热板法适合中枢
镇痛作用机制药物的筛选。结果显示千根草高、中
剂量能提高小鼠热刺激痛阈百分率,减少乙酸所致
的小鼠疼痛扭体次数,提示千根草乙醇总提取物的
外周镇痛作用与中枢镇痛作用相似。
本课题组前期从千根草乙醇总提取物中分离得
到木犀草素、芹菜素、槲皮素等 13 个化合物[6]。文
献[11]表明木犀草素对急性炎症有明显的抑制作用,
中枢和外周镇痛效果相近。文献[12]表明槲皮素具
有抗炎镇痛作用,给药后 1 h 镇痛作用消失。而本
实验结果显示千根草乙醇总提取物对急性炎症有明
显的抑制作用,外周镇痛作用与中枢镇痛作用相似,
但中枢镇痛作用出现在给药后 1. 5 h,提示木犀草素
和槲皮素可能是千根草乙醇总提取物的抗炎镇痛有
效成分,千根草抗炎镇痛作用的其他活性成分及其
作用机制有待进一步研究。
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(责任编辑:幸建华)
163第 3 期 盛亚丽,等.千根草乙醇总提物抗炎镇痛作用研究