全 文 ：ＤＯＩ：１０．３７２４／ＳＰ．Ｊ．１０９６．２０１２．１０７６９
利用糖芯片研究半乳寡糖与蓖麻凝集素和
鸡冠刺桐凝集素间的相互作用
王玉峰１，３　吴建东１，２　韩章润１，２　吕友晶１，２　赵 峡１，２　于广利＊１，２
（中国海洋大学，海洋药物教育部重点实验室１，山东省糖科学与糖工程重点实验室２，青岛２６６００３）
３（江苏雨润肉类产业集团有限公司，南京２１００４１）
摘　要　建立了用糖芯片技术研究寡糖与凝集素相互作用的方法。以新乳糖－Ｎ－四糖 （ＬＮｎＴ）、乳糖－Ｎ－四
糖 （ＬＮＴ）、λ－卡拉胶四糖 （Ｌ４）和琼胶五糖 （Ａ５）为原料，经还原胺化法分别将其与１，２－十六烷基磷脂酰乙
醇胺偶联得到拟糖脂，再将其与卵磷脂和胆固醇按４∶２∶５比例混合制备成脂质体后，用全自动芯片点样仪将
其点印在硝酸纤维素膜包被的玻片上制成糖芯片，并进行寡糖与凝集素的结合实验。结果表明，蓖麻凝集素
（Ｒｉｃｉｎｕｓ　ｃｏｍｍｕｎｉｓ　ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ　１２０，ＲＣＡ１２０）特异性识别非还原端糖残基为Ｇａｌβ（１#４）的寡糖，而鸡冠刺桐
凝集素 （Ｅｒｙｔｈｒｉｎａ　ｃｒｉｓｔａｇａｌｉ　ｌｅｃｔｉｎ，ＥＣＬ）特异性识别非还原端糖残基为Ｇａｌβ（１#４）ＧｌｃＮＡｃ的ＬＮｎＴ。采
用接触式芯片点样仪制备糖芯片，并用荧光扫描仪对糖与凝集素结合信号进行检测，增加了灵敏度和准确性。
本方法不仅适合于糖与蛋白相互作用的研究，也有助于加快糖类药物的发现。
关键词　糖芯片；半乳寡糖；拟糖脂；凝集素
　２０１１－１０－１２收稿；２０１２－０４－２８接受
本文系科技部国际合作项目（Ｎｏ．２００７ＤＦＡ３０９８０）、国家自然科学基金 （Ｎｏｓ．３１０７０７２４，９１１２９７０６）、海洋公益专项 （Ｎｏ．２０１００５０２４）
及长江学者与创新团队项目（Ｎｏ．ＩＲＴ０９４４）资助
＊Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｌｙｕ＠ｏｕｃ．ｅｄｕ．ｃｎ
１　引　言
继基因芯片、蛋白质芯片之后，糖芯片技术在糖生物学和糖组学研究中的作用受到了广泛关
注［１～３］。糖芯片具有样品用量少、检测快速、灵敏度高以及可同时筛选多个糖结合蛋白等优点，已广泛
应用于糖与蛋白相互作用研究［４～８］。该技术不仅可考察同家族或基因改造后糖结合蛋白对糖配体结合
力的差异［９，１０］，也能确定病毒对不同糖配体识别的特异性［１１］。由于糖亲水性强，不能直接以非共价结
合的方式固定在芯片片基上。为了克服上述缺陷，Ｆｅｉｚｉ等将寡糖与氨基磷酸脂合成为拟糖脂 （Ｎｅｏｇｌｙ－
ｃｏｌｉｐｉｄ，ＮＧＬ），并将其固定于硝酸纤维素膜包被的玻片上，成功用于微量寡糖与蛋白相互作用研
究［１２～１４］。
本研究采用上述技术，以新乳糖－Ｎ－四糖 （ＬＮｎＴ）、乳糖－Ｎ－四糖 （ＬＮＴ）、琼胶五糖 （Ａｇａｒｏｓｅ
ｐｅｎｔｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，Ａ５）和λ－卡拉胶四糖 （λ－Ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ　ｔｅｔｒａｏｓｅ，Ｌ４）为原料制备了ＮＧＬ，将其制备成
脂质体后点印在硝酸纤维素膜包被的玻片上制备糖芯片，并进一步用糖芯片探索了它们与蓖麻凝集素
（Ｒｉｃｉｎｕｓ　ｃｏｍｍｕｎｉｓ　ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ　１２０，ＲＣＡ１２０）和鸡冠刺桐凝集素 （Ｅｒｙｔｈｒｉｎａ　ｃｒｉｓｔａｇａｌｉ　ｌｅｃｔｉｎ，ＥＣＬ）之间的
相互作用。
２　实验部分
２．１　仪器与试剂
Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ　Ｑ－Ｔｏｆ质谱仪 （英国 Ｗａｔｅｒｓ公司）；薄层点样仪 （瑞士Ｃａｍａｇ公司）；双波长飞点薄层
扫描仪 （日本Ｓｈｉｍａｄｚｕ公司）；凝胶成像系统 （美国Ｓｙｎｇｅｎｅ公司）；ＫＱ３２００Ｅ型超声波清洗器 （中国
昆山超声波有限公司）；晶芯?ＰｅｒｓｏｎａｌＡｒｒａｙｅｒ　ＴＭ１６个人点样仪和晶芯? ＬｕｘＳｃａｎＴＭ１０Ｋ 微阵列芯片
扫描仪 （北京博奥生物公司）；高效硅胶薄层板 （２０ｃｍ×２０ｃｍ，德国Ｓｉｌｉｃａ　Ｇｅｌ　６０Ｍｅｒｃｋ　Ｄａｒｍｓｔａｄｔ公
司）；硝酸纤维素膜 （０．２２ｍ），硅胶柱 （５００ｍｇ，６ｍＬ）和Ｆａｓｔ?ｓｌｉｄｅ－１６Ｐａｄ　Ｆｒａｍｅ（英国 Ｗｈａｔｍａｎ公
司）；硝酸纤维素膜包被的玻片 （中国博奥生物公司）。
第４０卷
２０１２年９月
　　 　　　　 　　　
分析化学 （ＦＥＮＸＩ　ＨＵＡＸＵＥ）　研究报告
Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
　　　　 　　　　 　　　
第９期
１３４１－１３４６
乳糖－Ｎ－四糖 （Ｌａｃｔｏ－Ｎ－ｔｅｔｒａｏｓｅ，ＬＮＴ）：（Ｇａｌβ１－３ＧｌｃＮＡｃβ１－３Ｇａｌβ１－４Ｇｌｃ，其中，半乳糖 （Ｇａｌ），
Ｎ－乙酰葡萄糖 （ＧｌｃＮＡｃ），葡萄糖 （Ｇｌｃ）和新乳糖－Ｎ－四糖 （Ｌａｃｔｏ－Ｎ－ｎｅｏｔｅｔｒａｏｓｅ，ＬＮｎＴ：Ｇａｌβ１－
４ＧｌｃＮＡｃβ１－３Ｇａｌβ１－４Ｇｌｃ）购自Ｄｅｘｔｒａ　Ｌａｂｓ公司；１，２－二－Ｏ－十六烷基－甘油基－３－磷脂酰乙醇胺 （１，２－
Ｄｉ－Ｏ－Ｈｅｘａｄｅｃｙｌ－ｓ　Ｎ－Ｇｌｙｃｅｒｏ－３－Ｐｈｏｓｐｈａｔｉｄｙｌｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ，ＤＨＰＥ），四丁基氰基硼烷化铵 （Ｔｅｔｒａｂｕ－
ｔｙｌａｍｍｏｎｉｕｍ　ｃｙａｎｏｂｏｒｏｈｙｄｒｉｄｅ，ＴＢＡＣ），卵磷脂，胆固醇，樱草素 （Ｐｒｉｍｕｌｉｎｅ），地衣酚 （Ｏｒｃｉｎｏｌ）与牛
血清白蛋白 （ＢＳＡ）均购自Ｓｉｇｍａ公司；生物素化凝集素 ＲＣＡ１２０ 和ＥＣＬ购自 Ｖｅｃｔｏｒ公司；荧光物质
ＡｌｅｘａＦｌｕｏ５５５（Ｃｙ３）和ＡｌｅｘａＦｌｕｏ６４７（Ｃｙ５）标记的亲和素购自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司。其它试剂均为分析
纯。
２．２　寡糖的制备
将λ－卡拉胶用０．１ｍｏｌ／Ｌ　Ｈ２ＳＯ４ 配成１％水溶液，于８０℃水浴中降解３ｈ后，用１ｍｏｌ／Ｌ　ＮａＯＨ
中和，再经Ｓｕｐｅｒｄｅｘ　３０ｐｒｅｐｇｒａｄｅ凝胶层析柱分离纯化获得寡糖Ｌ４。Ａ５是用琼脂糖为原料，参照文
献［８］方法进行制备。Ｌ４和 Ａ５的结构序列采用电喷雾离子化质谱 （Ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ　ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ　ｍａｓｓ
ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ，ＥＳＩ－ＭＳ）方法确定［８，１５］。
２．３　拟糖脂的合成及定量分析
参照文献 ［８，１３］，将４种寡糖制成相应的拟糖脂 （Ｎｅｏｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄ，ＮＧＬ）。将５ Ｌ、浓度为２０
ｍｍｏｌ／Ｌ各寡糖样品分别置于微量反应瓶中，氮气吹至近干，加入１００ Ｌ　８ｍｍｏｌ／Ｌ　ＤＨＰＥ后，再加入
２０Ｌ新配制２０ｇ／Ｌ还原剂ＴＢＡＣ－甲醇溶液，在６０℃密封避光反应４８ｈ。反应完毕后，将反应混合物
加入固相硅胶小柱中，用不同极性的洗脱液 （氯仿－甲醇－水）分步洗脱分离，分管收集 （５００Ｌ／管）。采
用高效薄层层析法分析ＮＧＬ的纯度 （展开剂为氯仿－甲醇－水 （５５∶４５∶１０，Ｖ／Ｖ））。薄层展开完毕后，电
吹风吹干，先用Ｐｒｉｍｕｌｉｎｅ进行脂显色，确定过量ＤＨＰＥ和ＮＧＬ所在的收集管位置；再用Ｏｒｃｉｎｏｌ进行
糖显色，确定ＮＧＬ的收集管位置；合并含有ＮＧＬ的收集管。将各纯化的ＮＧＬ用适量的氯仿－甲醇－水
（２５∶２５∶８，Ｖ／Ｖ）溶解后，转移并保存至棕色玻璃小瓶中。取少许储存液，用薄层点样仪将其点印在高效
薄层硅胶板上，经Ｐｒｉｍｕｌｉｎｅ染色后，用薄层扫描仪在３６５ｎｍ下进行扫描，再与不同浓度ＤＨＰＥ比较进行
定量分析。
２．４　脂质体的制备
参照文献 ［１６，１７］，分别将４种ＮＧＬ制备成脂质体。将２０Ｌ　１００ｍｏｌ／Ｌ　ＮＧＬ转移至５００Ｌ离
心管中，加入溶于甲醇中的卵磷脂和胆固醇，使ＮＧＬ、卵磷脂和胆固醇的摩尔比为４∶２∶５，室温下将溶
液挥干。向上述离心管中加入２０Ｌ缓冲液 （２０ｍｍｏｌ／Ｌ羟乙基哌嗪乙硫磺酸 （ＨＥＰＥＳ），１５０ｍｍｏｌ／
Ｌ　ＮａＣｌ（ｐＨ　７．４），超声乳化１０ｍｉｎ，使拟糖脂、卵磷脂和胆固醇相互充分作用，形成水包油的脂质体悬
液。以１００００　ｇ离心３０ｓ，取上清液，得单层脂质体。
２．５　糖芯片的制备
先将４种脂质体分别配成５０，１０，２和０．４ｍｏｌ／Ｌ的溶液，加入３０％或１５％甘油－水溶液，以防止
溶剂在点样时挥发，最后加入Ｃｙ３（０．１ｍｏｌ／Ｌ）作为点样指示剂。将制备好的脂质体溶液转移至３８４
孔板中，并将其放入芯片点样仪样品固定架中。将硝酸纤维素膜包被的玻片和预点样玻片放到点样仪固
定位置后，设置芯片的点样参数。芯片点样仪的水循环系统和超声系统运行正常后，开始点样。将所点
芯片放入芯片扫描仪中，设定扫描参数 （电压：５Ｖ；光电倍增管：４５０Ｖ；分辨率：１０ ｍ），并进行扫描
分析。
２．６　寡糖与ＲＣＡ１２０ 和ＥＣＬ的结合实验
参照文献 ［６，８］，将糖芯片放入Ｆａｓｔ?ｓｌｉｄｅ－１６Ｐａｄ　Ｆｒａｍｅ中，进行寡糖与ＲＣＡ１２０ 和ＥＣＬ的结合实
验。首先用 ＨＥＰＥＳ缓冲液 （１０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＨＥＰＥＳ，１５０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＮａＣｌ，２ｍｍｏｌ／Ｌ　ＣａＣｌ２，ｐＨ　７．４，简
称ＨＢＳ）浸泡每个拟进行实验的芯片微阵列３ｍｉｎ（１５０Ｌ／孔）。弃去ＨＢＳ后，用３％ＢＳＡ（ｍ／Ｖ，用
ＨＢＳ配制）室温封闭１ｈ，弃去封闭液后，用 ＨＢＳ清洗３次。加入１００ Ｌ生物素化凝集素ＲＣＡ１２０（１
ｍｇ／Ｌ）或ＥＣＬ（２ｍｇ／Ｌ），室温孵育２ｈ后，弃去游离的凝集素，再用ＨＢＳ清洗３次。最后加入１００Ｌ
经Ｃｙ５标记的亲和素 （０．５ｍｇ／Ｌ），室温孵育３０ｍｉｎ后，用ＨＢＳ清洗３次，并用二次蒸馏水清洗１次。
２４３１　　 分 析 化 学 第４０卷
将芯片自然晾干后，用芯片扫描仪在Ｃｙ５激发光下进行扫描分析。
３　结果与讨论
３．１　寡糖的结构确证
电喷雾离子化质谱 （ＥＳＩ－ＭＳ）技术的出现，促进了寡糖结构分析技术的进步。本实验采用ＥＳＩ－
ＭＳ的负离子模式分析了所制备的２种海洋寡糖的结构序列，结果如图１所示。由图１Ａ可知，Ａ５的分
子离子峰为７９１．３，与理论分子量相符，其结构序列为Ｇａｌβ１－４ａｎＧα１－３Ｇａｌβ１－４ａｎＧα１－３Ｇａｌ。Ｌ４为含有
多个硫酸基的四糖 （图１Ｂ），在进行质谱分析时，由于发生不同程度的硫酸基脱落现象［１５］，从而导致复
杂离子碎片的产生 （ｍ／ｚ　４１２．１，７４５．３，８２５．３，９０５．２）。通过分析，确定其结构序列为Ｇａｌ（２Ｓ）β１－
４Ｇａｌ（２６Ｓ）α１－３Ｇａｌ（２Ｓ）β１－４Ｇａｌ（２６Ｓ）。
图１　Ａ５和Ｌ４的电喷雾离子化质谱分析图
Ｆｉｇ．１　ＥＳＩ－ＭＳｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　ａｇａｒｏｓｅ　ｐｅｎｔｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（Ａ５）ａｎｄλ－ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ　ｔｅｔｒａｏｓｅ（Ｌ４）
Ｇａｌ，半乳糖 （Ｇａｌａｃｔｏｓｅ）；Ｓ，硫酸酯基 （Ｓｕｌｆａｔｅ　ｇｒｏｕｐ）；Ｇａｌ（２Ｓ），２－硫酸半乳糖 （２－Ｏ－ｓｕｌｆａｔｅｄ　ｇａｌａｃｔｏｓｅ）；Ｇａｌ
（２６Ｓ），２，６－二硫酸半乳糖 （２，６－Ｏ－ｄｉ－ｓｕｌｆａｔｅｄ　ｇａｌａｃｔｏｓｅ）；ａｎＧ，３，６－内醚半乳糖 （３，６－ａｎｈｙｄｒｏ－ｇａｌａｃｔｏｓｅ）；［Ｍ－３Ｓ－
Ｈ］!，失去３个硫酸基的碎片离子 （Ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｉｏｎ　ｔｈａｔ　ｌｏｓｅ　ｔｈｒｅｅ　ｓｕｌｆａｔｅ　ｇｒｏｕｐｓ）。
３．２　拟糖脂的合成、纯化及定量
ＮＧＬ合成机理如图２所示。寡糖还原端糖残基的半缩醛与氨基脂类化合物在还原剂ＴＢＡＣ作用
下形成稳定的ＮＧＬ。由于４种寡糖聚合度均较小 （ｄｐ＜５），在氯仿－甲醇 （１∶３，Ｖ／Ｖ）反应体系中具有
很好的溶解性，ＮＧＬ的得率均大于９０％。
　图２　半乳寡糖拟糖脂的合成机理
Ｆｉｇ．２　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｇａｌａｃｔｏ－ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｎｅｏｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ
ＮＧＬ的纯化均使用固相硅胶小柱。过量ＤＨＰＥ用２ｍＬ极性较小的洗脱剂氯仿－甲醇－水（１３０∶５０∶９，
Ｖ／Ｖ）去除；而所需的ＮＧＬ用４ｍＬ中极性的洗脱剂氯仿－甲醇－水 （６０∶３５∶８，Ｖ／Ｖ）洗脱并收集；最后
用２ｍＬ极性较高的洗脱剂氯仿－甲醇－水 （２５∶２５∶８，Ｖ／Ｖ）去除少量未反应的寡糖和还原剂。通常
ＬＮｎＴ－ＤＨＰＥ在７，８，９管；ＬＮＴ－ＤＨＰＥ在８，９，１０管；Ａ５－ＤＨＰＥ在８，９管；Ｌ４－ＤＨＰＥ在８，９，１０
３４３１第９期 王玉峰等：利用糖芯片研究半乳寡糖与蓖麻凝集素和鸡冠刺桐凝集素间的相互作用 　　
管。采用本方法，各ＮＧＬ均可得到较好的分离纯化。
由于所有ＮＧＬ均在还原端只有一个ＤＨＰＥ，因此可以采用ＤＨＰＥ为标准品间接测定 ＮＧＬ的含
量，从而避免了因为各单糖种类和聚合度的不同而引起的显色差异。以不同浓度ＤＨＰＥ为标准，经
Ｐｒｉｍｕｌｉｎｅ显色后的荧光面积为横坐标，其浓度为纵坐标，制作标准曲线。结果表明，ＤＨＰＥ在５０～５００
ｐｍｏｌ之间有较好的线性关系 （ｙ＝０．７５９７ｘ !５８．７２１，Ｒ２＝０．９５９），以此确定了４种ＮＧＬ的浓度。
３．３　制备糖芯片点样参数
糖芯片的点样参数包括点样范围 （Ｏｘ：６．２５ｍｍ，Ｏｙ：４．２５ｍｍ）、阵列数 （２×８）、阵距 （５．５
ｍｍ）、阵列点数 （８×８）、针阵点距 （５００ｍ）和样品重复点数 （４次／针阵）。一次取样约１ Ｌ，连续点
样５０次。在点样过程中，落针深度要适中，过深则会戳破纤维素膜，过浅则会造成点样量不准，甚至漏
点，这就要求芯片片基以及所涂布的纤维素膜的厚度均一。一般玻璃芯片的点样深度为１ｍｍ，考虑到
本芯片在片基上包被了硝酸纤维素膜，经过实验探索，确定其落针最佳深度为０．６ｍｍ。由于硝酸纤维
素膜有很好的吸水性，为了避免扩散造成点样点直径过大，确定点样针在膜上的最佳停留时间为０．０１
ｓ。采用上述参数点样完毕后，通过芯片扫描仪在Ｃｙ３激发光下扫描确认点样效果。如图３Ａ和图３Ｄ
所示，采用本参数所点糖芯片效果理想，无膜被戳破或漏点的情况发生。
图３　凝集素ＲＣＡ１２０ 和ＥＣＬ与４种寡糖在糖芯片上的结合效果
Ｆｉｇ．３　Ｂｉｎｄｉｎｇ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｒｉｃｉｎｕｓ　ｃｏｍｍｕｎｉｓ　ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ　１２０（ＲＣＡ１２０）ａｎｄ　ｅｒｙｔｈｒｉｎａ　ｃｒｉｓｔａｇａｌｉ　ｌｅｃ－
ｔｉｎ（ＥＣＬ）ｗｉｔｈ　ｆｏｕｒ　ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｏｎ　ｇｌｙｃｏｃｈｉｐ
（Ａ）和 （Ｄ）为结合前Ｃｙ３的扫描图；（Ｂ）和 （Ｅ）为结合后Ｃｙ３在芯片上的残留情况；（Ｃ）和 （Ｆ）
为结合后Ｃｙ５激发光下寡糖与凝集素结合信号。
（Ａ）ａｎｄ（Ｄ）ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ　ａｌｅｘａＦｌｕｏ５５５（Ｃｙ３）ｓｃａｎｎｉｎｇ　ｇｒａｐｈ　ｂｅｆｏｒ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ；（Ｂ）ａｎｄ
（Ｅ）ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ　Ｃｙ３ｒｅｓｉｄｕｅ　ｓｔａｔｕｓ　ａｆｔｅｒ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ；（Ｃ）ａｎｄ（Ｆ）ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ　ｔｈｅ
ｂｉｎｄｉｎｇ　ｓｉｇｎａｌｓ　ｏｆ　ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ａｎｄ　ｌｅｃｔｉｎｓ　ｂｙ　ｓｃａｎｎｉｎｇ　ａｌｅｘａＦｌｕｏ６４７（Ｃｙ５）ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ．
３．４　寡糖与ＲＣＡ１２０ 和ＥＣＬ的亲和力比较
研究表明，植物凝集素ＲＣＡ１２０［１８，１９］和ＥＣＬ［２０］均识别非还原端具有Ｇａｌβ１－４结构的糖链，本研究制
备了２种非还原端具有Ｇａｌβ１－４结构的海洋寡糖Ｌ４和Ａ５，通过与阳性寡糖ＬＮｎＴ和阴性寡糖ＬＮＴ
（非还原端结构为Ｇａｌβ１－３）比较，用糖芯片技术考察它们与２种凝集素亲和力的差异。研究表明，适当
浓度的甘油不仅可以稳定脂质体，而且具有防止样品扩散的作用［２１］。考察了不同浓度甘油对脂质体的
影响。由图３（Ａ，Ｄ）可知，虽然当３０％甘油可以防止样品扩散，但容易造成荧光强度过饱和；而采用
４４３１　　 分 析 化 学 第４０卷
１５％甘油时，荧光强度适中，效果理想。此外，从图３（Ｂ，Ｅ）可知，用缓冲液洗涤去除了所有杂质 （除
ＮＧＬ之外）后，Ｃｙ３仍在纤维素膜中有一定保留率，且每个点的荧光强度基本一致，表明Ｃｙ３是一个良
好的用于检查点样均匀度示踪剂。
在确定样品无漏点和点样重现性良好前提下，可以开展糖与凝集素结合研究。从图３Ｃ可知，
５０ｍｏｌ／Ｌ的４种寡糖与ＲＣＡ１２０ 的亲和力有明显差异，并 且 ＲＣＡ１２０ 特 异 性 识 别 ＬＮｎＴ （Ｇａｌβ１－
４ＧｌｃＮＡｃβ１－３Ｇａｌβ１－４Ｇｌｃ）与琼胶五糖 Ａ５（Ｇａｌβ１－４ａｎＧα１－３Ｇａｌ１－４ａｎＧα１－３Ｇａｌ）。但对ＬＮＴ （Ｇａｌβ１－
３ＧｌｃＮＡｃβ１－３Ｇａｌβ１－４Ｇｌｃ）的亲和力很弱，表明ＲＣＡ１２０ 主要识别非还原端具有Ｇａｌβ１－４结构的糖链，这
与文献［８，１７，１８］报道一致。另外，ＲＣＡ１２０ 还与非还原端半乳糖有硫酸基取代的$－卡拉胶寡糖Ｌ４（Ｇａｌ
（２Ｓ）β１－４Ｇａｌ（２６Ｓ）α１－３Ｇａｌ（２Ｓ）β１－４Ｇａｌ（２６Ｓ））有很强的亲和力，且亲和力高于ＬＮｎＴ，表明非还原端
半乳糖残基２位被硫酸酯基取代后，可提高其亲和力。当寡糖浓度≤１０ ｍｏｌ／Ｌ时，各寡糖与ＲＣＡ１２０
的亲和力均较弱。从图３Ｆ可知，ＥＣＬ只识别ＬＮｎＴ，对其它结构的寡糖均无明显亲和力，表明ＥＣＬ只
识别非还原端具有Ｇａｌβ１－４ＧｌｃＮＡｃ结构的寡糖链
［１７，１９］。
３．５　两种糖芯片制备方法的比较
本研究以４种寡糖为原料，通过还原胺化方法制备ＮＧＬ，并将其制备成脂质体，进一步成功制备了糖
芯片。本研究是在前期研究［８］的基础上，改进了糖芯片的制备方法，主要通过专门制作生物芯片的接触式
点样仪制备糖芯片并采用芯片扫描仪检测结合信号。２种方法制备的糖芯片的具体参数对比如表１所示。
表１　两种糖芯片制备方法比较
Ｔａｂｌｅ　１　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　ｇｌｙｃｏｃｈｉｐ
参数
Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ
点样方法Ｓｐｏｔｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄｓ
薄层点样仪
Ｔｈｉｎ　ｌａｙｅｒ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ａｒｒａｙｅｒ
糖芯片点样仪
Ｇｌｙｃｏｃｈｉｐ
ａｒｒａｙｅｒ
参数
Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ
点样方法Ｓｐｏｔｔｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄｓ
薄层点样仪
Ｔｈｉｎ　ｌａｙｅｒ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ａｒｒａｙｅｒ
糖芯片点样仪
Ｇｌｙｃｏｃｈｉｐ
ａｒｒａｙｅｒ
芯片大小
Ｇｌｙｃｏｃｈｉｐ　ｓｉｚｅ １ｃｍ×１ｃｍ　 ０．５ｃｍ×０．５ｃｍ
凝集素用量＊
Ｌｅｃｔｉｎ　ｑｕａｎｔｉｔｙ
２ ｇ　ＲＣＡ１２０
或（ｏｒ）４ ｇ　ＥＣＬ
０．１ ｇ　ＲＣＡ１２０
或（ｏｒ）０．２ ｇ　ＥＣＬ
探针个数
Ｓｕｍ　ｏｆ　ｐｒｏｂｅｓ ２４　 ６４
显色剂用量
Ｃｏｌｏｒｉｎｇ　ｑｕａｎｔｉｔｙ １
ｇ　 ０．０５ ｇ
最小探针用量
Ｍｉｎｉｍｕｍ　ｐｒｏｂｅ　ｑｕａｎｔｉｔｙ １０ｐｍｏｌ　 １ｐｍｏｌ
定量方法
Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ
可见光
Ｖｉｓｉｂｌｅ　ｌｉｇｈｔ
荧光
Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ
　
　　从表１可知，采用芯片点样仪后不仅探针数量可增多，样品用量及凝集素和显色剂用量也减少，且
采用荧光发定量分析也显著提高灵敏度。在芯片制备方法研究方面，采用１５％甘油作为防扩散剂效果
较好。寡糖浓度为１０～５０ ｍｏｌ／Ｌ，点样量２０ｎＬ时，能较好地考察寡糖与凝集素的结合力差异。
ＲＣＡ１２０除特异性识别ＬＮｎＴ和Ａ５外，还与Ｌ４有较强的亲和力。但ＥＣＬ只特异性识别ＬＮｎＴ，而不与其
它寡糖结合，表明ＥＣＬ专一性高于ＲＣＡ１２０，可作为一种专一识别非还原端具有Ｇａｌβ１－４ＧｌｃＮＡｃ结构糖链
的试剂。糖芯片既可作为一种快速、灵敏度和通量高的实验技术，还可用于糖与蛋白相互作用及其构效
关系研究。
Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ
１　Ｗｕ　Ｃ　Ｙ，Ｌｉａｎｇ　Ｐ　Ｈ，Ｗｏｎｇ　Ｃ　Ｈ．Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００９，７（１１）：２２４７－２２５４
２　Ｏｙｅｌａｒａｎ　Ｏ，Ｇｉｌｄｅｒｓｌｅｅｖｅ　Ｊ　Ｃ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００９，１３（４）：４０６－４１３
３　Ｌｉｕ　Ｙ，Ｐａｌｍａ　Ａ　Ｓ，Ｆｅｉｚｉ　Ｔ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００９，３９０（７）：６４７－６５６
４　Ｚｈｏｕ　Ｘ，Ｔｕｒｃｈｉ　Ｃ，Ｗａｎｇ　Ｄ．Ｊ．Ｐｒｏｔｅｏｍｅ．Ｒｅｓ．，２００９，８（１１）：５０３１－５０４０
５　Ｔａｙｌｏｒ　Ｍ　Ｅ，Ｄｒｉｃｋａｍｅｒ　Ｋ．Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００９，１９（１１）：１１５５－１１６２
６　Ｌｉｕ　Ｙ，Ｆｅｉｚｉ　Ｔ，Ｃａｍｐａｎｅｒｏ－Ｒｈｏｄｅｓ　Ｍ　Ａ，Ｃｈｉｌｄｓ　Ｒ　Ａ，Ｚｈａｎｇ　Ｙ，Ｍｕｌｏｙ　Ｂ，Ｅｖａｎｓ　Ｐ　Ｇ，Ｏｓｂｏｒｎ　Ｈ　Ｍ，Ｏｔｔｏ　Ｄ，
Ｃｒｏｃｋｅｒ　Ｐ　Ｒ，Ｃｈａｉ　Ｗ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００７，１４：８４７－８５９
７　Ｓｔｏｗｅｌ　Ｓ　Ｒ，Ａｒｔｈｕｒ　Ｃ　Ｍ，Ｍｅｈｔａ　Ｐ，Ｓｌａｎｉｎａ　Ｋ　Ａ，Ｂｌｉｘｔ　Ｏ，Ｌｅｆｆｌｅｒ　Ｈ，Ｓｍｉｔｈ　Ｄ　Ｆ，Ｃｕｍｍｉｎｇｓ　Ｒ　Ｄ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．
Ｃｈｅｍ．，２００８，２８３：１０１０９－１０１２３
８　ＷＡＮＧ　Ｙｕ－Ｆｅｎｇ，ＹＵ　Ｇｕａｎｇ－Ｌｉ，ＨＡＮ　Ｚｈａｎｇ－Ｒｕｎ，ＷＵ　Ｊｉａｎ－Ｄｏｎｇ，ＺＨＡＯ　Ｘｉａｏ－Ｌｉａｎｇ，ＣＨＡＩ　Ｗｅｎ－Ｇａｎｇ．Ａｃｔａ
Ｃｈｉｍｉｃａ　Ｓｉｎｉｃａ，２０１１，６９（８）：９５５－９５９
５４３１第９期 王玉峰等：利用糖芯片研究半乳寡糖与蓖麻凝集素和鸡冠刺桐凝集素间的相互作用 　　
王玉峰，于广利，韩章润，吴建东，赵小亮，柴文刚．化学学报，２０１１，６９（８）：９５５－９５９
９　Ｓｏｎｇ　Ｘ，Ｘｉａ　Ｂ，Ｓｔｏｗｅｌ　Ｓ　Ｒ，Ｌａｓａｎａｊａｋ　Ｙ，Ｓｍｉｔｈ　Ｄ　Ｆ，Ｃｕｍｍｉｎｇｓ　Ｒ　Ｄ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　＆Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００９，１６：３６－４７
１０　Ｓａｌｏｍｏｎｓｓｏｎ　Ｅ，Ｃａｒｌｓｓｏｎ　Ｍ　Ｃ，Ｏｓｌａ　Ｖ，Ｈｅｎｄｕｓ－Ａｌｔｅｎｂｕｒｇｅｒ　Ｒ，Ｋａｈｌ－Ｋｎｕｔｓｏｎ　Ｂ，Ｏｂｅｒｇ　Ｃ　Ｔ，Ｓｕｎｄｉｎ　Ａ，Ｎｉｌｓｓｏｎ
Ｒ，Ｎｏｒｄｂｅｒｇ－Ｋａｒｌｓｓｏｎ　Ｅ，Ｎｉｌｓｓｏｎ　Ｕ　Ｊ，Ｋａｒｌｓｓｏｎ　Ａ，Ｒｉｎｉ　Ｊ　Ｍ，Ｌｅｆｆｌｅｒ　Ｈ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０１０，２８５（４５）：
３５０７９－３５０９１
１１　Ｃｈｉｌｄｓ　Ｒ　Ａ，Ｐａｌｍａ　Ａ　Ｓ，Ｗｈａｒｔｏｎ　Ｓ，Ｍａｔｒｏｓｏｖｉｃｈ　Ｔ，Ｌｉｕ　Ｙ，Ｃｈａｉ　Ｗ，Ｃａｍｐａｎｅｒｏ－Ｒｈｏｄｅｓ　Ｍ　Ａ，Ｚｈａｎｇ　Ｙ，
Ｅｉｃｋｍａｎｎ　Ｍ，Ｋｉｓｏ　Ｍ，Ｈａｙ　Ａ，Ｍａｔｒｏｓｏｖｉｃｈ　Ｍ，Ｆｅｉｚｉ　Ｔ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，２００９，２７（９）：７９７－７９９
１２　Ｔａｎｇ　Ｐ　Ｗ，Ｆｅｉｚｉ　Ｔ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．，１９８７，１６１（１）：１３３－１４３
１３　Ｃｈａｉ　Ｗ，Ｓｔｏｌ　Ｍ　Ｓ，Ｇａｌｕｓｔｉａｎ　Ｃ，Ｌａｗｓｏｎ　Ａ　Ｍ，Ｆｅｉｚｉ　Ｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，２００３，３６２：１６０－１９５
１４　Ｆｅｉｚｉ　Ｔ，Ｆａｚｉｏ　Ｆ，Ｃｈａｉ　Ｗ，Ｗｏｎｇ　Ｃ　Ｈ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２００３，１３：６３７－６４５
１５　Ｙａｎｇ　Ｂ，Ｙｕ　Ｇ，Ｚｈａｏ　Ｘ，Ｊｉａｏ　Ｇ，Ｒｅｎ　Ｓ，Ｃｈａｉ　Ｗ．ＦＥＢＳ．Ｊ．，２００９，２７６（７）：２１２５－２１３７
１６　ＧＥ　Ｃｈａｎｇ－Ｈｕｉ，ＷＡＮＧ　Ｓｈａｎ－Ｊｕ，ＺＨＵ　Ｚｈｅｎｇ－Ｍｅｉ．Ｂｕｌｌ　Ａｃａｄ　Ｍｉｌ　Ｍｅｄ　Ｓｃｉ，２０００，２４（３）：２０４－２０７
葛常辉，王善菊，朱正美．军事医学科学院院刊，２０００，２４（３）：２０４－２０７
１７　Ｌｉｕ　Ｙ，Ｃｈａｉ　Ｗ，Ｃｈｉｌｄｓ　Ｒ　Ａ，Ｆｅｉｚｉ　Ｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．，２００７，４１５：３２６－３４０
１８　Ｉｔａｋｕｒａ　Ｙ，Ｎａｋａｍｕｒａ－Ｔｓｕｒｕｔａ　Ｓ，Ｋｏｍｉｎａｍｉ　Ｊ，Ｓｈａｒｏｎ　Ｎ，Ｋａｓａｉ　Ｋ，Ｈｉｒａｂａｙａｓｈｉ　Ｊ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２００７，１４２（４）：
４５９－４６９
１９　Ｗｕ　Ａ　Ｍ，Ｗｕ　Ｊ　Ｈ，Ｓｉｎｇｈ　Ｔ，Ｌａｉ　Ｌ　Ｊ，Ｙａｎｇ　Ｚ，Ｈｅｒｐ　Ａ．Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２００７，４３（１０）：１７００－１７１５
２０　Ｗｕ　Ａ　Ｍ，Ｗｕ　Ｊ　Ｈ，Ｔｓａｉ　Ｍ　Ｓ，Ｙａｎｇ　Ｚ，Ｓｈａｒｏｎ　Ｎ，Ｈｅｒｐ　Ａ．Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊ　Ｊ．，２００７，２４：５９１－６０４
２１　ＸＩＡＮＧ　Ｚｈｅｎｇ，ＭＡ　Ｗｅｎ－Ｌｉ，ＦＥＩ　Ｊｉａ，ＺＨＥＮＧ　Ｗｅｎ－Ｌｉｎｇ，ＺＨＯＵ　Ｙｅ．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｊｉｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００７，
２８（３）：３１２－３１５
向 征，马文丽，费 嘉，郑文岭，周 烨．暨南大学学报，２００７，２８（３）：３１２－３１５
Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇａｌａｃｔｏ－ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｗｉｔｈ
Ｒｉｃｉｎｕｓ　Ｃｏｍｍｕｎｉｓ　Ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ　１２０ａｎｄ
Ｅｒｙｔｈｒｉｎａ　Ｃｒｉｓｔａｇａｌｉ　Ｌｅｃｔｉｎ　ｂｙ　Ｇｌｙｃｏｃｈｉｐ
ＷＡＮＧ　Ｙｕ－Ｆｅｎｇ１，３，ＷＵ　Ｊｉａｎ－Ｄｏｎｇ１，２，ＨＡＮ　Ｚｈａｎｇ－Ｒｕｎ１，２，ＬＹｏｕ－Ｊｉｎｇ１，２，ＺＨＡＯ　Ｘｉａ１，２，ＹＵ　Ｇｕａｎｇ－Ｌｉ＊１，２
１（Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｍａｒｉｎｅ　Ｄｒｕｇｓ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｏｃｅａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ，Ｑｉｎｇｄａｏ　２６６００３，Ｃｈｉｎａ）
２（Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｇｌｙｃｏｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｇｌｙｃｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，
Ｏｃｅａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ，Ｑｉｎｇｄａｏ　２６６００３，Ｃｈｉｎａ）
３（Ｊｉａｎｇｓｕ　Ｙｕｒｕｎ　Ｍｅａｔ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　Ｇｒｏｕｐ　Ｃｏ．Ｌｔｄ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｌｅｃｔｉｎｓ　ａｎｄ　ｇａｌａｃｔｏ－ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａ－
ｒｉｄｅｓ　ｂｙ　ｇｌｙｃｏｃｈｉｐ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｆｏｕｒ　ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　Ｌａｃｔｏ－ｎｅｏ－Ｎ－ｔｅｔｒａｏｓｅ （ＬＮｎＴ），Ｌａｃｔｏ－
Ｎ－ｔｅｔｒａｏｓｅ（ＬＮＴ），λ－ｃａｒｒａ－ｔｅｔｒａｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（Ｌ４）ａｎｄ　ａｇａｒｏ－ｐｅｎｔｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ（Ａ５），ｗｅｒｅ　ｃｏｎｖｅｒｔｅｄ　ｔｏ
ｎｅｏｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ （ＮＧＬｓ）ｂｙ　ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ　ｔｏ　１，２－ｄｉｈｅｘａｄｅｃｙｌ－ｓｎ－ｇｌｙｃｅｒｏ－３－ｐｈｏｓｐｈｏｅｔｈａｎｏｌａｍｉｎｅ
（ＤＨＰＥ）ｖｉａ　ｒｅｄｕｃｔｉｖｅ－ａｎｉｍａｔｉｏｎ．Ｌｉｐｏｓｏｍｅ　ｗａｓ　ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　４∶２∶５ｏｆ　ＮＧＬｓ：ｐｈｏｓ－
ｐｈａｔｉｄｙｌｃｈｏｌｉｎｅ：ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ＮＧＬ　ｌｉｐｏｓｏｍｅ　ｗａｓ　ｐｒｉｎｔｅｄ　ｏｎｔｏ　ｔｈｅ　ｎｉｔｒｏｃｅｌｕｌｏｓｅ
ｍｅｍｂｒａｎｅｓ　ｃｏａｔｅｄ　ｇｌａｓｓ　ｐｌａｔｅ　ｔｏ　ｇｅｔ　ｇｌｙｃｏｃｈｉｐｓ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｗｉｔｈ　ｌｅｃｔｉｎｓ
ｗａｓ　ｉｎｖｅｓｔｉ－ｇａｔｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄ　ｔｈａｔ　Ｒｉｃｉｎｕｓ　ｃｏｍｍｕｎｉｓ　ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ　１２０（ＲＣＡ１２０）ｂｏｕｎｄ　ｔｏ
ｔｈｅ　ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ　ｗｈｏｓｅ　ｎｏｎ－ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｗａｓ　Ｇａｌ%（１→４），ａｎｄ　Ｅｒｙｔｈｒｉｎａ　ｃｒｉｓｔａｇａｌｉ　ｌｅｃｔｉｎ
（ＥＣＬ）ｏｎｌｙ　ｂｉｎｄ　ｗｉｔｈ　ＬＮｎＴ　ｗｈｏｓｅ　ｎｏｎ－ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｔｅｒｍｉｎａｌｓ　ｗｅｒｅ　Ｇａｌ%（１→４）ＧｌｃＮＡｃ．Ｔｈｅ　ｐｒｅｐａｒａ－
ｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｇｌｙｃｏｃｈｉｐ　ｂｙ　ｃｏｎｔａｃｔｉｖｅ　ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｅｒ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ，ｔｈｅ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｓｉｇｎａｌｓ　ｏｆ　ｏｌｉｇｏｓａｃ－
ｃｈａｒｉｄｅｓ　ｗｉｔｈ　ｌｅｃｔｉｎｓ　ｗｅｒｅ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｓｃａｎｎｅｒ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ａｃｃｕｒａｃｙ　ｗｅｒｅ
ｄｒａｍａｔｉｃａｌｙ　ｅｎｈａｎｃｅｄ．Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｎｏｔ　ｏｎｌｙ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｓｔｕｄｙ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｏｌｉｇｏｓａｃ－
ｃｈａｒｉｄｅｓ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｂｕｔ　ｃａｎ　ａｌｓｏ　ｓｐｅｅｄ　ｕｐ　ｔｈｅ　ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ－ｂａｓｅｄ　ｄｒｕｇ　ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　Ｇｌｙｃｏｃｈｉｐ；Ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；Ｎｅｏｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄ；Ｌｅｃｔｉｎ
（Ｒｅｃｅｉｖｅｄ　１２Ｏｃｔｏｂｅｒ　２０１１；ａｃｃｅｐｔｅｄ　２８Ａｐｒｉｌ　２０１２）
６４３１　　 分 析 化 学 第４０卷