全 文 ：第 18卷　第 2 期 　　　　　　　　　　　　　　云南农业大学学报　　　　　　　 Vol.18　No.2
2003年　6月 　　　　　　　　　　Journal of Yunnan Agricultural University　　　　　 Jun.2003
葫芦茶提纯物对兔球虫卵囊的离体杀灭试验
李树荣1 ,杨　灿2 ,王　芸1 ,项　伟3 ,李琦华1 ,毛云玲3
(1.云南农业大学动物科技学院 , 云南 昆明 650201;
2.云南省弥勒县第一中学 , 云南 弥勒 652300;
3.云南省林业科学院 ,云南 昆明 650204)
摘要:用葫芦茶的提纯物葫芦茶素 A(Triquetin A), Cyclokievitone , 葫芦茶素 D(Triquetin D), 葫芦茶素 C(Triquetin
C), 山萘酚(Kaempferol), 二氢山萘酚(Dihydrokaemoferol), 对羟基桂皮酸(P-hydroxycinnamic acid), L-2-O-甲基
-手-肌醇(2-O-Methyl-L-chiro-inositol),卫矛醇(Galactitol), 10%葫芦茶浸膏剂等不同浓度及其相关溶剂 ,
5%二甲亚枫 、蒸溜水 、10%吐温-80为对照组 , 对兔球虫的卵囊进行杀灭试验。用卵囊减少率为其效果判定。
效果最好的是 Cyclokievitone和葫芦茶素 D(Triquetin D),葫芦茶素 A(Triquetin A)稍差。其余提纯物与对照组的药
效基本相似。
关键词:葫芦茶提纯物;兔球虫卵囊;杀灭实验
中图分类号:S 858.291;S 852.7　　文献标识码:A　　文章编号:1004-390X(2003)02-0170-05
The Test on Killing Egg Cells of Coccidia
from Rabbit Using Purified Materials of
Tadehagi triquetrum (L.)ohashi
LI Shu-rong1 ,YANG Can2 , WANG Yun1 ,
XIANG Wei3 , LI Qi-hua1 ,MAO Yun-ling3
(1.College of Animal Science and Technology , Y A U , Kunming 650201 , China;
2.The First High School of Mile County of the Yunnan Province , Mile 652300 , China;
3.Yunnan Academy of Forest Sciences , Kunming 650204 , China)
Abstract:Various , concentration , of Triquetin A , Cyclokievitone , Triquetin D , Triquetin C , Kaempferol ,
Dihydrokaemoferol ,P -hydroxycinnamic acid , 2-O -Methyl-L -chiro-inositol , Galactitol and 10%
Tadehagi triquetrum (L.)ohashi , Which are purifiedmaterials of Tadehagi triquetrum (L.)ohashi , have
been used to the killing test on egg celles of coccidian from rabbit.In the experiment , three kinds of
solvents related which are 5% DMSO , distilled water and 10% Tween-80 , have been used as control
group ,The rate of egg cell is used to evaluate the effect of the extract materals.The results indicate that
Cyclokievitone and Triquetin D have remarkable effects , on inhibiting or killing egg celles of coccidian ,
where as Triquetin C and Triquetin A are inferior to them , and the other purified materials have similar
effects to that of the control group.
Key words:Tadehagi triquetrum (L.)ohashi purified material;rabbit coccidia egg cell;killing test
收稿日期:2002-07-15
　基金项目:云南省应用基础基金资助(2000C0099M)
　作者简介:李树荣(1948-),男 , 云南泸西县人 , 高级实验师 , 主要从事动物寄生虫方面的研究。
DOI :10.16211/j.issn.1004-390x(n).2003.02.016
　　葫芦茶[ Tadehagi triquetrum (L.)ohashi] ,又称
剃刀柄 、虫草 、田刀柄 、螳螂草 、牛虫草 、迫颈草 、地
马压 、剑板茶 、咸鱼草 、百劳舌 、龙舌黄 、金剑草 ,是
一种生长于亚热带地区的田间杂草 。据报道 ,该植
物叶中含有鞣质 7.8%～ 8.6%,二氧化硅 0.5%～
2.32%,氧化钾 1.3%～ 3.0%.葫芦茶有一定的药
用价值 ,药性为苦 、凉 。具有清热解毒 ,消积利湿兼
杀虫作用;民间用于食品中驱杀虫 、蝇。葫芦茶水
煎剂口服用于清热解毒 ,健脾开胃和杀虫[ 1 ～ 6] ;据
本课题研究 ,其主要成分是黄酮和黄酮甙。李树荣
等用葫芦茶煎剂投服山羊时 ,发觉羊球虫检出率呈
减少趋势[ 7 ,8] 。将煎剂用于鱼时 ,对鱼的烂鳃病有
一定的治疗作用[ 9] 。又将其浸膏剂按每 kg 体重
0.5 ～ 1.3 g 稀释后用于兔球虫 ,临床试验也有一定
效果[ 10] ,用其粉剂或水煎剂[ 11]或浸膏剂[ 12]对椎实
螺都有较好的杀灭作用。
为了对葫芦茶的若干成份中 ,究竟是何物质起
到杀灭虫体或球虫卵囊的作用 。于 2002年 5月至
6月 ,用葫芦茶的提纯物作试验药剂 ,用兔球虫的
卵囊作为试验对象进行了试验 ,现将试验结果报道
如下 。
1 　材料和方法
1.1 　葫芦茶提纯物
由中国科学院昆明植物研究所植物化学实验
室提供;依其分子结构不同而编为葫芦茶素 A
(Triquetin A), Cyclokievitone , 葫芦茶素 D(Triquetin
D),葫芦茶素 C(Triquetin C),山萘酚(Kaempferol),
二氢山萘酚(Dihydrokaemoferol),对羟基桂皮酸(P-
hydroxycinnamic acid),L -2-O-甲基-手-肌醇
(2 -O -Methyl -L -chiro -inositol), 卫矛醇
(Galactitol)等 9种 ,其中葫芦茶素 A(Triquetin A),
Cyclokievitone ,葫芦茶素 D(Triquetin D),葫芦茶素 C
(Triquetin C), 山萘酚(Kaempferol)和二氢山萘酚
(Dihydrokaemoferol)为黄酮类。用相应的溶剂先溶
解后 ,再加入蒸溜水 ,使每 10.0mL 混合液内含 1.0
mg 提纯物。
1.2 　方法
将含有兔球虫卵囊的兔粪混匀后 ,用虫卵计数
室进行卵囊计数 。再将粪便按每组 3份 ,每份 5 ～
8 g ,称取后放入平皿内 ,用相应的葫芦茶提纯物药
液分低(2.5mL)、中(5.0mL)、高(10.0mL)拌匀 ,因
提纯物葫芦茶素 A(Triquetin A),Cyclokievitone , 葫
芦茶素 D(Triquetin D),山萘酚(Kaempferol),二氢山
萘酚(Dihydrokaemoferol)为二甲亚枫易溶解 ,且溶解
后每 100mL 溶液内含二甲亚枫3%～ 5%,故设 5%
二甲亚枫作对照 ,列为二甲亚枫系列;又因对羟基
桂皮酸(P -hydroxycinnamic acid), L-2-O-甲基
-手-肌醇(2-O-Methyl-L-chiro-inositol),卫
矛醇(Galactitol)属水溶性 ,故设相应的蒸溜水为对
照组 ,列为蒸溜水系列;葫芦茶素 C(Triquetin C)溶
解时加有 10%吐温-80 ,所以在其项下设 10%吐
温-80作对照组;列为吐温-80 系列。3个对照
组同样每组分为3份 。培养后于第24 h ,48 h ,72 h ,
144 h分别称取粪便 1 g 进行卵囊计数 。
效果判定:根据药物与兔粪混合后 ,其中的卵
囊发育 、孵化或多或少都受到影响 ,采用麦克马斯
特氏法(McMaster s method)算出每 g 粪中卵囊数
[(A片+B片)÷ 2×100] ,再算出卵囊减少率(%)
=[(用药前的 EPG -用药后的 EPG)÷用药前
EPG] ×100%.
2 　结果和分析
(1)各组粪便拌入药液后 ,卵囊发育均受到不
同程度的影响 。
(2)5%二甲亚枫及 10%吐温-80组中的高 、
中 、低浓度中的卵囊孵育与蒸溜水中的孵育情况基
本一致(见表 1)。
(3)蒸溜水系列中的各组 ,在孵育期间 ,羟基
桂皮酸(P -hydroxycinnamic acid), L-2-O-甲基
-手-肌醇(2-O-Methyl-L-chiro-inositol)高
浓度 ,卫矛醇(Galactitol)低浓度中卵囊变化与蒸溜
水基本一致外 ,其余各组均呈无规则的增减 ,其卵
囊计数均高于蒸溜水(见表 2)。
(4)二甲亚枫系列中的各组 , 以葫芦茶素 A
(Triquetin A), Cyclokievitone , 葫芦茶素 D(Triquetin
D)组中的卵囊呈逐渐减少趋势 ,其余各组中的卵
囊数均呈无规则的增减 ,但总体趋势呈现增加状
(见表3)。
(5)吐温系列中的葫芦茶素 C(Triquetin C)药
物拌入后 ,各浓度检出的卵囊数并不均衡 ,但总体
都呈现出增加趋势(见表 4)。
171第 2期　　　　　　　李树荣 ,等:葫芦茶提纯物对兔球虫卵囊的离体杀灭试验
表 1 　2 种对照药与蒸溜水的孵育情况
Tab.1　Hatching results of two controls and distilled water
组　别 用药前
EPG
投药后 EPG 卵囊减少率/ %
1 , 2 d 平均 3 , 4 , 5 d平均 6 , 7 d平均 1 , 2 d平均 3 , 4 , 5 d 平均 6 , 7 d 平均
二甲亚枫
高:3 600
中:3 600
低:3 600
2 550
2 900
2 675
2 133
1 850
1 967
1 600
1 250
1 925
29.16
41.67
25.70
40.74
48.61
45.31
55.56
65.28
46.53
吐温-80
高:43 200
中:43 200
低:43 200
16 100
20 325
16 375
15 800
18 867
15 383
10 550
13 850
11 500
62.74
52.95
62.10
63.46
56.32
64.39
75.58
67.94
73.38
蒸溜水
A:3 600
B:3 600
C:3 600
1 550
1 800
1 575
1 450
1 667
1 333
1 400
1 425
1 300
56.95
50.00
56.25
59.71
53.70
63.13
61.11
60.42
63.89
表 2 　蒸溜水系列中的各组卵囊孵育情况
Tab.2　Hatching results of egg cell with distilled water series
组　别 投药前
EPG
投药后 EPG 卵囊减少率/ %
1 , 2 d 平均 3 , 4 , 5 d平均 6 , 7 d平均 1 , 2 d平均 3 , 4 , 5 d 平均 6 , 7 d 平均
对羟基桂皮酸
高:3 600
中:3 600
低:3 600
2 225
2 250
2 800
1 133
1 367
2 517
1 000
1 350
1 925
38.20
37.50
22.22
68.52
62.04
30.09
72.23
62.50
46.53
L-2-O-甲基-
手-肌醇
高:3 600
中:3 600
低:3 600
2 600
3 050
2 475
2 217
1 584
1 733
1 850
2 375
1 900
27.78
15.28
31.25
38.42
24.07
51.85
48.61
34.03
47.22
卫矛醇
高:3 600
中:3 600
低:3 600
2 050
2 550
2 750
2 400
2 283
2 133
2 225
2 625
1 725
43.06
29.17
23.61
33.33
36.57
40.74
38.20
27.09
52.08
10%葫芦
茶浸膏剂
高:3 600
中:3 600
低:3 600
2 050
2 175
1 400
1 883
2 333
1 533
2 250
1 975
1 350
43.75
39.59
61.11
47.67
35.19
57.41
37.50
45.14
62.50
蒸溜水
A:3 600
B:3 600
C:3 600
1 550
1 800
1 575
1 450
1 667
1 333
1 400
1 425
1 300
56.95
50.00
56.25
59.71
53.70
63.13
61.11
60.42
63.89
3 　讨论
(1)从表 1可以看出 ,用 2种溶剂与蒸溜水比
较 ,其卵囊孵育情况未出现显著变化 ,说明用来做
溶剂的 5%二甲亚枫和 10%吐温-80属于性能稳
定的药剂 ,对兔球虫的卵囊无杀灭效果 ,在试验中
起到了对照的目的。
(2)葫芦茶植物叶中含有鞣质 7.8%～ 8.6%,
二氧化 硅 0.5% ～ 2.32%, 氧化 钾 1.3% ～
3.0%[ 1 ,2 ,4 , 5] .葫芦茶有一定的药用价值 ,其主要
成分是黄酮和黄酮甙。表 3显示 ,参试的 9种葫芦
茶提纯物中有效果的黄酮类:Cyclokievitone ,葫芦茶
素D(Triquetin D)和葫芦茶素 A(Triquetin A);说明
试验中的 3种黄酮类提纯物对离体兔球虫卵囊有
明显的抑制发育和杀灭效果 ,也说明葫芦茶驱虫有
效成份是黄酮类的化合物。再将 3种药物相比较 ,
效果 最好 的是 Cyclokievitone 和葫 芦 茶素 D
(Triquetin D),葫芦茶素A(Triquetin A)稍差。
(3)卵囊在外界环境中 ,当湿度为 55%～ 75%
和温度为20 ℃时 ,约经 2 ～ 3 d发育成熟 ,具有感染
172 云南农业大学学报 　　　　　　　　　　　　　　第18卷
性。卵囊在干燥和高温下容易死亡[ 13] 。试验中 ,
所观察卵囊在第 2 ～ 5 d 明显增大成熟 ,比较容易
观察 。其它时间相对小些且不容易观察 ,这与其在
离体条件下的发育环境有直接关系 ,也可能是由于
干燥或是由于实验过程中存在的误差。
(4)从表 4 的结果显示 , 提纯物葫芦茶素 C
(Triquetin C)的卵囊减少率与 10%吐温-80比较
偏低 ,说明葫芦茶素 C(Triquetin C)在其溶液中尚
未起到作用(即浓度偏低)。
(5)球虫卵囊的孢子形成过程需要一定的温
度 、氧气和湿度。温度为 29 ℃左右 ,氧气充足的条
件适宜于大多数球虫卵囊的孢子形成[ 14] 。试验进
行时所用的条件 ,已基本满足了球虫卵囊发育的条
件。
表 3 　二甲亚枫系列各组中的卵囊孵育情况
Tab.3　Hatching results of egg cell with DMSO
组　别 投药前
EPG
投药后 EPG 卵囊减少率/ %
1 , 2 d 平均 3 , 4 , 5 d平均 6 , 7 d平均 1 , 2 d平均 3 , 4 , 5 d 平均 6 , 7 d 平均
葫芦茶素 A
高:43 200
中:43 200
低:43 200
31 900
28 450
25 500
28 200
27 217
24 417
20 925
22 100
22 025
26.16
34.14
40.97
34.72
37.00
43.48
51.56
48.84
49.02
Cyclokievitone
高:43 200
中:43 200
低:43 200
27 275
22 725
27 175
24 483
22 500
23 483
19 450
19 775
21 550
36.87
47.40
37.10
41.25
47.92
45.64
54.98
54.23
50.12
葫芦茶素 D
高:43 200
中:43 200
低:43 200
24 050
24 400
25 350
21 350
21 267
23 017
17 525
20 175
20 325
44.33
43.52
41.32
50.58
50.77
46.72
59.43
53.30
52.95
山萘酚
高:43 200
中:43 200
低:43 200
22 175
20 200
18 575
24 783
23 200
19 633
26 450
26 900
19 775
48.67
53.25
57.00
42.63
46.30
54.55
35.77
60.88
54.22
二氢山萘酚
高:3 600
中:3 600
低:3 600
2 950
2 950
2 950
2 833
2 317
2 183
2 725
2 625
2 625
18.75
18.06
18.11
21.29
35.65
39.35
74.32
27.08
26.38
二甲亚枫
高:3 600
中:3 600
低:3 600
2 550
2 900
2 675
2 133
1 850
1 967
1 600
1 250
1 925
29.16
41.67
25.70
40.74
48.61
45.37
55.56
65.28
46.53
表 4 　吐温-80系列组卵囊孵育情况
Tab.4　Hatching results of egg cell with Tween-80
组　别 投药前
EPG
投药后 EPG 卵囊减少率/ %
1 , 2 d 平均 3 , 4 , 5 d平均 6 , 7 d平均 1 , 2 d平均 3 , 4 , 5 d 平均 6 , 7 d 平均
葫芦茶素 C
高:43 200
中:43 200
低:43 200
17 275
16 650
19 300
14 733
22 167
19 933
17 725
17 725
20 100
60.01
61.45
55.32
65.89
48.69
53.85
58.97
58.97
53.47
吐温-80
高:43 200
中:43 200
低:43 200
16 100
20 325
16 375
15 800
18 867
15 383
10 550
13 850
11 500
62.74
52.95
62.10
63.46
56.32
64.39
75.58
67.94
73.38
173第 2期　　　　　　　李树荣 ,等:葫芦茶提纯物对兔球虫卵囊的离体杀灭试验
[ 参　考　文　献]
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[ 14] 　左仰贤.球虫学[ M] .天津:天津科学技术出版社 ,
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(上接第 157页)
3 　讨论
从红花大金元和 K326上部叶可溶性总糖 、还
原糖 、淀粉含量的变化图可以看出 ,它们在旺长期
的含量均偏高 ,其可能原因是上部叶光照充足 ,碳
的分解代谢最为旺盛 ,合成代谢也相对活跃 ,特别
是还原糖和可溶性总糖 。烟叶中可溶性总糖和还
原糖在移栽后 72 d开始下降 ,表明烟叶此时已经
开始转为合成淀粉为主 ,下部叶成熟 ,中 、上部烟叶
接近成熟 。
总的来说 ,移栽后 72 d ,可溶性总糖和还原糖
含量最高 ,为烟叶淀粉的合成提供了碳源。淀粉的
合成则主要在 82 d以后(下部叶在72 d),此时准确
把握烟叶的成熟度 ,做到适熟采收对烟叶的品质形
成有着重要的实践意义。
[ 参　考　文　献]
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174 云南农业大学学报 　　　　　　　　　　　　　　第18卷