全 文 ：* 青海大学医学院中青年团队项目(2013 － KT － 1);青海省科技厅项目(2014 － ZJ － 716)
第一作者 Tel:(0971)5312252;E － mail:chunhuihu@ hotmail． com
高效液相色谱法测定藏药砂生槐子中 4 种生物碱含量*
胡春晖，张发斌，丁李，刘阳
(青海大学医学院，西宁 810001)
摘要 目的:运用高效液相色谱法分析砂生槐子中氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱和苦参碱的含量。方法:改良砂生槐子中生物
碱提取工艺，采用 Diamonsil C18(2)(4. 6 mm × 250 mm，3 μm)色谱柱，以 0. 02 mol·L
－1磷酸缓冲盐(pH 8)－甲醇(55∶ 45)，流
速 1. 0 mL·min －1，检测波长 220 nm，柱温 35 ℃。结果:氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱和苦参碱质量浓度在 0. 46 ～ 59. 00、0. 40 ～
51. 60、0. 55 ～ 70. 00、0. 59 ～ 75. 00 μg·mL －1的范围内线性良好，相关系数分别为 0. 999 9、0. 999 9、0. 999 9、0. 999 8;加样回收
率分别为 99. 98%、100. 3%、99. 69%、100. 2%。氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱和苦参碱 4 种生物碱的含量分别为 59. 37、0. 99、
0. 26、15. 35 μg·g －1。结论:该方法经方法学验证可用于砂生槐子中生物碱的含量测定。
关键词:西藏狼牙刺;砂生槐子;苦参碱;氧化苦参碱;槐果碱;槐定碱;高效液相色谱;藏药质量检测
中图分类号:Ｒ 917 文献标识码:A 文章编号:0254 － 1793(2015)03 － 0430 － 05
HPLC determination of fouralkaloids in Tibetan medicine
Sophora moorcroftiana seeds*
HU Chun － hui，ZHANG Fa － bin，DING Li，LIU Yang
(Medical College of Qinghai University，Xining 810001，China)
Abstract Objective:To develop a method for the determination of matrine，oxymatrine，sophocarpine and sophori-
dine in Sophora moorcroftiana seeds by HPLC．Methods:Modified extract technology of total alkaloids in Sophora
moorcroftiana seeds was adopted． The analytes were separated on a Diamonsil C18(2)(4. 6 mm × 250 mm，3 μm)
column，eluted by 0. 02 mol·L －1 phosphate buffered saline (pH 8)and 45% methanol (55∶ 45)，identified by UV
detector at 220 nm at the column temperature of 35 ℃ ． Ｒesults:The linear ranges for oxymatrine，sophocarpine，so-
phoridine and matrine were 0. 46 － 59. 00 μg·mL －1(r = 0. 999 9)，0. 40 － 51. 60 μg·mL － 1(r = 0. 999 9)，
0. 55 － 70. 00 μg·mL － 1(r = 0. 999 9)，0. 59 － 75. 00 μg·mL － 1(r = 0. 999 8)μg·mL － 1，the average re-
coveries (n = 6)were 99. 98%，100. 3%，99. 69%，100. 2%，while the sample content was 59. 37 μg·
g － 1，0. 99 μg·g － 1，0. 26 μg·g － 1，15. 35 μg·g － 1，respectively． Conclusion:The experiment results indi-
cate that the method can be used for the determination of matrine，oxymatrine，sophocarpine and sophoridine in
Sophora moorcroftiana seeds．
Keywords:Tibet spike;Sophora moorcroftiana seeds;matrine;oxymatrine;sophocarpine;sophoridine;HPLC;Tibet-
an medicine quality testing
棘球蚴病或称包虫病(echinococcosis)是流行于
我国西、北部的人畜共患寄生虫病，已成为牧民“因
病致贫、因病返贫”的根源之一［1］。目前世界卫生
组织(WHO)推荐使用药物主要以苯并咪唑类
(benzimidazoles)为主［2］，但由于这类药物口服后
胃肠道吸收相对较差，病灶囊内药物浓度仅占血
液浓度 1 /10 ～ 1 /100;长期服用会引起中毒性肝炎
等不良反应，降低患者的顺应性［3 － 4］。
砂生槐(Sophora moocrorftiana)又名“西藏狼
牙刺”、“刺柴”，豆科槐属，多年生矮灌木，分布
于西藏波密、林芝等地区，为西藏高原特有植物，
具有极强的抗旱、耐痔薄等特性［5］。藏医药记载
砂生槐多以种子人药，味苦性凉，消炎解毒、催
吐，主治湿热黄疽、白喉、痢疾、赤巴病、消化不
—034— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015，35(3)
良、虫病等，是一种极为宝贵的植物药用资源。
现代药理学研究表明［6］，砂生槐子的总生物碱在
杀死棘球绦虫，调节免疫力，抗炎抗过敏等多方
面具有显著效果，特别是利用中藏药多组分、多
靶点的特性作用于多房棘球绦虫，使其发挥多重
功效，从多个角度“攻击”寄生虫，使其措不及防，
达到杀虫的目的。
根据文献报道［7］，砂生槐种子中富含生物碱，
主要包括氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱、苦参碱等一
些常见生物碱，但所有文献报道的生物碱提取方法
都以酸碱调提取液的 pH，再采用有机溶剂萃取的方
法提取［9］，且仅有 1 篇文献报道［10］采用 HPLC 法同
时检测氧化苦参碱、槐果碱、苦参碱，本课题优化总
生物碱提取工艺，提取时间大大缩短，并同时检测 4
种生物碱，提取量均优于文献报道［10］，为下一步制
剂制备的安全性打下基础。
1 仪器与试药
1. 1 仪器
Aglent 1200 高效液相色谱系统，包括自动进样
器、在线脱气机、四元梯度泵、柱温箱和紫外检测器;
LG － 02 型高速重要粉碎机(瑞安市百信药机器械
厂);XS205 电子分析天平(瑞士 Mettler Toledo)。
1. 2 试药
对照品氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱和苦参
碱(南京奥多福尼生物科技有限公司，批号分别
为 519 －02 －8、16837 － 52 － 8、145572 － 44 － 7、641 －
39 －4，纯度均在 98%以上)，磷酸氢二钠、磷酸二
氢钠(天津市永大化学试剂有限公司，分析纯，批
号分别为 YD20140303、YD20140117)，甲醇为色
谱纯。砂生槐子原料药购于西藏林芝地区，经青
海大学医学院杨仕斌副教授鉴定为豆科槐属砂
生槐干燥种子。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
采用 DiamonsilC18 (2)(4. 6 mm × 250 mm，
3 μm)色谱柱，以 0. 02 mol·L －1磷酸钠盐缓冲液
(pH 8)－甲醇(55∶ 45)，流速 1. 0 mL·min －1，检测
波长 220 nm，柱温 35 ℃。在上述色谱条件下，色谱
峰分离较好，各组分理论塔板数均大于 6 000，拖尾
因子小于 1. 5，分离度均大于 2. 5，色谱见图 1。
图 1 砂生槐子样品(A)及 4 种生物碱对照品(B)的 HPLC图
Fig． 1 The HPLC chromatograms of Sophora moorcroftiana seeds (A)and four reference substances of alkaloids (B)
1．氧化苦参碱(oxymatrine) 2．槐果碱(sophocarpine) 3．槐定碱(sophoridine) 4．苦参碱(matrine)
—134—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015，35(3)
2. 2 溶液制备
2. 2. 1 混合对照品储备液 分别精密称取氧化苦
参碱、槐果碱、槐定碱和苦参碱的对照品 1. 40、
1. 18、1. 50、1. 03 mg，置于 10 mL 量瓶中，加甲醇溶
解并稀释至刻度，摇匀，制成含上述 4 种生物碱分别
为 0. 118、0. 103、0. 140、0. 150 mg·mL －1的混合溶
液，即得。
2. 2. 2 供试品溶液 砂生槐子样品粉碎后过 3 号
筛，称取粉末约 0. 5 g，精密称定，置于 25 mL 具塞
锥形瓶中，加入 90%乙醇(用氨水调至 pH = 10)，
超声(功率 250 W，频率 50 kHz)1 h，减压回收溶
剂，得总生物碱浸膏，用甲醇定容于 25 mL 量瓶
中，即得。
2. 3 方法学考察
2. 3. 1 线性范围的考察 将“2. 2. 1”制备的混
合对照品储备液以甲醇分别稀释 2、4、8、32、64、
128、256 倍，可得氧化苦参碱 59. 00、29. 50、
14. 75、3. 69、1. 84、0. 92、0. 46 μg·mL － 1，槐果
碱 51. 60、25. 80、12. 90、3. 23、1. 61、0. 81、0. 40
μg·mL － 1，槐定碱 70. 00、35. 00、17. 50、4. 38、
2. 19、1. 10、0. 55 μg·mL － 1 和苦参碱 75. 00、
37. 50、18. 75、4. 69、2. 34、1. 17、0. 59 μg·mL － 1
的混合对照品溶液，按“2. 1”项下色谱条件进行
测定，以对照品质量浓度 X(μg·mL － 1)为横坐
标，峰面积 Y 为纵坐标，绘制标准曲线，结果见
表 1。
表 1 各生物碱成分的回归方程、相关系数、线性范围及精密度考察
Tab． 1 Ｒegression equation，correlation coefficient，linear range and precision of alkaloid components
分析物
(analyte)
标准曲线
(linear regression equation)
r
线性范围
(linear range)/
(μg·mL －1)
高浓度
(high concentration)
中浓度
(medium concentration)
低浓度
(low concentration)
C /
(μg·mL －1)
ＲSD
/%
C /
(μg·mL －1)
ＲSD
/%
C /
(μg·mL －1)
ＲSD
/%
氧化苦参碱(oxymatrine) Y =2. 34 × 104X －6. 02 0. 999 9 0. 46 ～ 59. 00 14. 75 0. 22 3. 69 1. 3 0. 92 2. 4
槐果碱(sophocarpine) Y =2. 24 × 104X －2. 60 0. 999 9 0. 40 ～ 51. 60 12. 90 0. 28 3. 23 0. 94 0. 81 2. 4
槐定碱(sophoridine) Y =1. 81 × 104X －1. 26 0. 999 9 0. 55 ～ 70. 00 17. 50 0. 69 4. 38 0. 64 1. 09 2. 2
苦参碱(matrine) Y =3. 20 × 104X －2. 68 0. 999 8 0. 59 ～ 75. 00 18. 75 0. 65 4. 69 1. 5 1. 17 1. 0
2. 3. 2 精密度考察 精密吸取“2. 3. 1”项下高、
中、低 3 种质量浓度的混和对照品溶液，按“2. 1”项
下色谱条件测定，连续进样 6 次，计算氧化苦参碱、
槐果碱、槐定碱和苦参碱峰面积的 ＲSD，结果见表
1，实验结果显示分析物的 ＲSD 均小于 2. 5%，表明
精密度良好。
2. 3. 3 重复性考察 取样品粉末 6 份，每份约
0. 5 g，精密称定，按“2. 2. 2”项下方法制备供试
品溶液，按“2. 1”项下色谱条件进样测定，样品中
氧化苦参碱含量为(59. 26 ± 0. 65)μg·g － 1，ＲSD
为 1. 1%;槐果碱含量为(0. 99 ± 0. 04)μg·g － 1，
ＲSD 为 3. 6%;槐定碱含量为(0. 25 ± 0. 02)μg·
g － 1，ＲSD 为 2. 7%;苦 参 碱 含 量 为 (15. 36 ±
0. 02)μg·g － 1，ＲSD 为 3. 5%;表明本方法重复性
良好。
2. 3. 4 稳定性考察 取供试品溶液 1 份，分别于
0、2、4、8、10 和 12 h，按“2. 1”项下色谱条件进样测
定，氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱和苦参碱面积的
ＲSD分别为 0. 23%、0. 83%、1. 7%、2. 0%。表明供
试品溶液在 12 h内稳定性良好。
2. 3. 5 回收率考察 称取已测知氧化苦参碱、槐果
碱、槐定碱和苦参碱的含量分别为(59. 17 ± 0. 67)
μg·g － 1、(1. 00 ± 0. 02)μg·g － 1、(0. 26 ± 0. 01)
μg·g － 1、(15. 31 ± 0. 02)μg·g － 1的砂生槐子粉末
约 0. 6 g 共 6 份，精密加入氧化苦参碱、槐果碱、槐
定碱和苦参碱质量浓度为 66. 52、1. 12、0. 31、18. 50
μg·mL －1的混合对照品溶液 0. 5 mL，按“2. 2. 2”项
下方法制备供试溶液，按“2. 1”项下色谱条件测定。
计算氧化苦参碱、槐果碱、槐定碱和苦参碱平均回收
率(n = 6)分别为 99. 98%、100. 3%、99. 69%、
100. 2%，均在 95%～105%之间;ＲSD分别为 1. 0%、
2. 2%、2. 2%、2. 2%。表明该方法加样回收试验结
果良好。
2. 3. 6 含量测定 称取砂生槐子适量，按“2. 2. 2”
项下方法制备供试品溶液，按“2. 1”项下条件进样
测定，结果见表 2。
3 讨论
目前世界卫生组织推荐治疗棘球蚴病的药
物主要以苯并咪唑类为主［10］，但由于这类药物
特殊的理化性质(不溶于水及多数有机溶剂)，口
—234— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015，35(3)
表 2 藏药砂生槐子中 4 种生物碱的含量测定(n =3)
Tab． 2 Content determination of four alkaloids in
Tibetan medicine Sophora moorcroftiana seeds
成分
(component)
含量(content)
/(μg·g － 1)
平均值
/(μg·g － 1)
ＲSD
/%
氧化苦参碱(oxymatrine) 59. 61 59. 98 58. 52 59. 37 1. 3
槐果碱(sophocarpine) 0. 98 1. 01 0. 99 0. 99 1. 5
槐定碱(sophoridine) 0. 26 0. 25 0. 26 0. 26 2. 2
苦参碱(matrine) 15. 35 14. 99 15. 73 15. 36 2. 4
胃肠道吸收相对较差，病灶囊内药物浓度仅占
血液浓度 1 /10 ～ 1 /100;且化疗药物单一靶点
很容易使多房棘球绦虫产生耐药性。研究表明
利用中藏药多组分、多靶点的特性作用于寄生
虫［13 － 14］，使其发挥多重功效，从多个角度“攻
击”寄生虫，使其措不及防，达到杀虫的目的。
而青海省地处青藏高原，中藏药资源极其丰富，
藏药砂生槐种子种的总生物碱在杀死多房棘球
绦虫，调节免疫力，抗炎抗过敏等多方面具有显
著效果，尤其是杀虫，减少耐药性效果明显。基
于上述原因，本课题首先建立砂生槐子总生物
碱的含量检测方法，为进一步开发、研究打
基础。
砂生槐子中抗棘球蚴病的有效成分为总生物
碱，文献［7］表明主要以氧化苦参碱、槐果碱、槐定
碱和苦参碱等生物碱为主，因此本试验以这 4 种生
物碱为指标成分，采用 HPLC 同时测定砂生槐子中
的此 4 种指标成分含量。传统的中药有效成分提取
方法有溶剂浸渍法、超声提取法、加热回流提取法
等［8］，因此首先分别对 4 种指标成分的热稳定性、超
声稳定性进行了评价，结果显示 4 种指标成分在超
声中稳定性良好。文献报道［9 － 10］砂生槐子中生物
碱的提取方法较为复杂，而且需用氯仿萃取，一方面
由于萃取过程中乳化现象严重，使生物碱损失;另一
方面氯仿毒性较大，为下一步制剂的制备留下安全
隐患。因此课题组人员采用 90%乙醇(pH 10)，与
文献报道的方法相比，提取时间大大缩短，而且采用
安全的乙醇作为溶剂，为下一步制剂制备的安全性
打下基础。
砂生槐子中的总生物碱有常见的苦参碱、氧
化苦参碱，首先根据中国药典 2010 年版中苦参碱
的含量测定方法对 4 种指标成分进行检测［11］，结
果发现采用氨基柱易出现鬼峰，且出峰时间过长，
随后又采用 C18柱
［12］，以甲醇、乙腈、水、磷酸钠缓
冲盐(pH 8)作为流动相，以峰形、出峰时间等作为
评价指标，最终确定以 0. 02 mol·L － 1磷酸钠缓冲
盐溶液(pH 8)－ 甲醇(55 ∶ 45)，流速 1. 0 mL·
min － 1检测波长 220 nm，柱温 35 ℃为色谱条件峰
形良好，且理论塔板数、对称因子、分离度等指标
均符合要求。
实验证实，砂生槐种子中氧化苦参碱的含量为
59. 37 μg·g －1，苦参碱的含量为 15. 36 μg·g －1，众
所周知，苦参类生物碱具有重要的医药价值，是一
类极其重要的化学物质，具有杀虫、消炎等功效。
且西藏地区种植的砂生槐的根系发达，具有极强
的抗旱、耐瘠薄、抗风沙等生态适应性和很好的防
风固沙、保持水土的功能，在维护高原生态方面起
着重要的作用。而目前，国内外还没有以砂生槐
为原料开发生物碱的科研单位和生产厂家。砂生
槐是继苦参、苦豆子之后，又一种具有开发利用价
值的苦参碱的植物资源，通过开发利用，对促进西
部地区，特别是青藏高原区域经济社会发展具有
重要意义。
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(本文于 2014 年 6 月 10 日收到
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—434— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2015，35(3)