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鬼箭羽水提液对胰淀素诱导下人脂肪细胞糖摄取的影响



全 文 :62
第 1 4 卷 第 1 期
2012 年 1 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 14 No. 1
Jan .,2012
筋肉疼痛及运动障碍。考《灵枢·经脉》:“是动则
病……项似拔,脊痛,腰似折,牌不可曲,如结,揣如
裂,是为踩厥。”《灵枢·五瘾津液别》曰 :“虚,故
腰背痛而胫酸。”《医学心语》曰 :“腰痛拘急,牵引
腿足。”上述为典型腰腿痛症状,且疼痛剧烈合并下
肢痛,与腰椎间盘突出症的临床症状极为相似。从
脊柱的生物力学角度看,脊柱力平衡失调与脊柱周
缘肌筋的张力有关,肌筋张力的失衡导致脊柱内外
压失衡是腰椎间盘突出症的主要原因。
经筋疗法“以痛为腧”的取穴原则是治疗经筋
病行之有效的方法 [3],可引申为筋肉的牵扯、拘挛、
转筋、强直和肌肉的弛松、口僻、肢体的瘫痪麻痹、痿
弱不用及关节活动不利等。治疗时既要探查腰部及
腿部的局部性及线型性病灶阳性体征检查 ;又须对
病人进行腹股沟及腹部深层“缓筋”的查灶。经筋
疗法配合腰椎定点斜板法治疗腰椎间盘突出症疗
效优于传统的推拿手法,其中经筋疗法达到松筋解
结、疏通气血、降低内压、拉宽间隙,解除粘连的作
用,对腰椎间盘突出症患者软组织紧张痉挛的松解
作用效果较好,能纠正患者的外结构(肌肉结构)平
衡,相对传统推拿手法而言,更加具有简、便、准的疗
效。赵宏伟等 [4] 采用经筋疗法治疗腰腿痛 136 例,
具体方法 :先用 、揉、点、按等手法施于背部,使背
部的肌肉得以充分放松,再用拇指沿脊柱两旁及腰
骶部等部位寻找“筋结”点,并用拇指、其余四指及
掌根分别在筋结点处进行推、点、按等手法治疗。痊
愈 89 例,好转 57 例,总有效率 100%。而定位腰椎斜
板法,能纠正患者的内结构(骨结构)平衡,摒除了
传统斜板法扳动时定位不准的缺点,与传统坐位旋
转复位法相比,亦减少了坐位时患者腰椎间盘所承
受压力大、操作时易导致椎间盘更加突出而引起患
者病情加重的危险,也凸显了定位腰椎斜板法的安
全性和实用性。经筋疗法与腰椎定点斜板法相结合
治疗腰椎间盘突出症,两者相得益彰,临床疗效明显
优于传统手法治疗,值得临床推广。◆
参考文献
[ 1 ] 国家中医药管理局 . 中医病证诊断疗效标准 [ S ] . 南京 :南京
大学出版社,1994 :202.
[ 2 ] 罗 才 贵 . 推 拿 治 疗 学 [ M ] . 北 京 :人 民 卫 生 出 版 社,2007 :
90-91.
[ 3 ] 杨 丽 美 .《内 经》经 筋 理 论 的 应 用 [ J ] . 宁 夏 医 学 院 学 报,
2006,28 ( 3 ) :26.
[ 4 ] 赵宏伟.经筋疗法治疗腰腿痛的临床观察[ J ] .针灸临床杂志,
2004,20 ( 9 ) :13.
鬼箭羽水提液对胰淀素诱导下人脂肪细胞糖摄取的影响
王静 1,卞茸文 2
(1.江苏省太仓市中医医院,江苏 太仓 215400 ;2.江苏省老年医学研究所糖尿病防治研究中心,江苏 南京 210024)
摘 要 :目的 :观察鬼箭羽水提液对人脂肪细胞糖摄取的影响。方法 :分离糖尿病(n=7)及非糖尿病组(n=14)
患者的脂肪细胞,在100nmol·L-1 胰淀素和1.5 U/L胰岛素中培养,加入鬼箭羽水提液后观察细胞糖摄取量。结果 :
胰淀素使细胞糖摄取量明显降低,鬼箭羽水提液使降低的摄取量升高,但没有统计学意义。结论 :胰淀素抑制人脂
肪细胞糖摄取,鬼箭羽水提液对此抑制作用改善不明显。
关键词 :鬼箭羽水提液 ;胰淀素 ;脂肪细胞
中图分类号 :R282 文献标识码 :A 文章编号 :1673-842X (2012) 01- 0062- 02
收稿日期 :2011-07-27
基金项目 :美国 Lilly 医学基金资助项目(Endo-003-008)
作者简介 :王静(1979-),女,江苏太仓人,主治医师,硕士,研究方向 :内分泌学。
Effects of Winged Euonymus Twig on Glucose Uptake of Amylin Induced Human Adipocytes
WANG Jing1,BIAN Rong-wen2
(1.Taicang Hospital of Traditional Chinese Medicine,Taicang 215400,Jiangsu,China ;
2.Diabetes Center,Jiangsu Provincial Geriatrics Institute,Nanjing 210024,Jiangsu,China)
Abstract :Objective :Investigate the effects of winged euonymus twig on glucose uptake of human
adipocytes. Methods :The human adipocytes were separated and treated with 100nmol·L-1 amylin and 1.5U/L
insulin then put in winged euonymus twig and the glucose uptake was determined. Result :It was found that
amylin can inhibited glucose uptake,while winged euonymus twig can ameliorate the amylin inhibition. But
no statistical significance. Conclusion :Amylin can inhibit the glucose transport in human adipocytes, while
winged euonymus twig can not obviously improve the inhibition.
Key words :gymnema sylvestre ;amylin ;adipocytes
鬼箭羽的降糖功效已被认可,对其降糖机理也
有了初步研究,但目前鬼箭羽对外周组织的影响还
不清楚。因此在前人研究的基础上,本实验以分离
的人原代脂肪细胞为载体,加入胰淀素造成脂肪细
DOI:10.13194/j.jlunivtcm.2012.01.64.wangj.066
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1 4 卷 辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
胞糖摄取障碍的病理状态,采用鬼箭羽水提取物进
行外周葡萄糖转运摄取的体外研究,以探求鬼箭羽
改善外周组织葡萄糖利用的可能机理。
1 材 料
1.1 脂肪组织
选取普外科择期腹腔手术患者大网膜上脂
肪组织,重量 2~3g 左右。参照 1997 年 ADA 糖尿
病诊断标准将患者分为非糖尿病组 14 例,糖尿
病组 7 例。所有患者均排除 :妊娠、哺乳期 ;严重
肝肾功能损害 ;近 1 个月内有糖尿病酮症或酮症
酸中毒 ;大网膜组织有严重脓肿或广泛肿瘤转
移。
1.2 试剂和仪器
KRH 缓 冲 液(自 配)、牛 血 清 白 蛋 白(Roche)、
Ⅳ型胶原酶(Gibco 公司,夏斯生物技术公司分装)、
人 胰 岛 素(Lilly 公 司)、2- 脱 氧 -D-[1-3H]- 葡 萄 糖
(2-Deoxy-D-[1-3H]-Glucose,3H-DG)(Amersham
公司)、液闪计数仪(Ls5000TD,Beckman)。
1.3 鬼箭羽水提液
参考朗素梅等的方法 [1],取鬼箭羽药材 500g 加
6 倍水,煎煮 3 次,每次 2h,合并 3 次煎液,按 1 :1 浓
度浓缩后于冰柜中保存以备用。
1.4 一般资料比较
两组的性别比、年龄及 BMI 的差异均无统计学
意义。
2 方 法
2.1 脂肪细胞分离
参 考 Rodbell 方 法 [2] 将 组 织 称 重 后,去 除 组
织中的血管等非脂肪组织。磷酸缓冲液(PBS)
清洗 3 次后剪成 1mm3 左右的组织块。Ⅳ型胶原
酶 3mg/mL,37℃消化 1h。消化后过滤,滤液离心
(1000×g,1min),吸取上层液,加入无糖的缓冲液
清洗 3 次。
2.2 脂肪细胞的培养
离心后的脂肪细胞在 37℃,5%CO2 温箱中孵育
30min,加入含不同干预物的培养液中培养 1h(表
1),每次实验分为 3 组,每组设三复孔。
表 1 脂肪细胞分组培养的各试剂终浓度
项目 基础胰岛素组 胰淀素组 鬼箭羽组
胰岛素(U·L-1) 1.5 1.5 1.5
胰淀素(nmol·L-1) 0 100 100
鬼箭羽(g·L-1) 0 0 76.9
注 :总反应体积为 52μL,其中脂肪细胞为 40μL。
2.3 脂肪细胞葡萄糖摄取测定
每 管 加 入 浓 度 为0.1μCi/μL的3H-DG5μL
于37 ℃ 培 养10min。 随 后 立 即 加 入4 ℃ 低 糖
DMEM200μL以终止葡萄糖摄取反应。加入500μL
冷冻甲基硅油,4℃下 2500r/min 离心 1min 提取脂肪
细胞。吸取硅油层,加入闪烁液,以液体闪烁仪计数
摄取量。
2.4 统计学处理
非正态分布数据,经自然对数转化。统计采用
SPSS12.0 进行,两组间差异采用t 检验。
3 结 果
非糖尿病组及糖尿病组脂肪细胞葡萄糖摄取
量 :在基础胰岛素刺激下,两组脂肪细胞葡萄糖
摄取量差异无统计学意义。加入胰淀素后,两组
糖摄取量均明显降低,非糖尿病组摄取量降低了
0.40cpm,糖尿病组摄取量降低了 0.96cpm,但两组下
降量差异无统计学意义(P>0.05)。见表 2。
鬼箭羽组脂肪细胞糖摄取量略高于胰淀素组,
统计学上无明显差异(P>0.05)。鬼箭羽组中,非糖
尿病组升高了 0.01cpm,糖尿病组升高了 0.34cpm。
表 2 两组脂肪细胞葡萄糖摄取量(x—±s)
组别 样本数 葡萄糖摄取量 基础胰岛素组 胰淀素组 鬼箭羽组
非糖尿病组 14 6.29±1.47 5.79±1.26* 5.80±0.92☆
糖尿病组 7 6.86±0.84 5.90±0.90* 6.24±0.91☆
注 :与基础胰岛素组相比,*P<0.05 ;鬼箭羽组与胰淀
素组相比,☆P>0.05。
4 讨 论
鬼箭羽味苦性寒,能补阴生津、活血化瘀,其
作用符合“消渴”阴虚为本、燥热为标的特点,并且
能兼顾血瘀,鬼箭羽的药理研究证明其具有降糖、
降脂、改善血流变等作用,鬼箭羽提取物可显著降
低大鼠 FBG、FINS 水平,提高胰岛素敏感指数 ;还
可降低血清炎性因子 TNF-α 和 CRP,提高血清脂
联素水平 [3]。而胰淀素被证实对人脂肪细胞糖摄
取有抑制作用,为糖尿病胰岛素抵抗的原因之一。
在本实验条件下,鬼箭羽水提液对胰淀素导致的
人脂肪细胞葡萄糖摄取量降低没有改善。但是从
绝对值上看,非糖尿病组和糖尿病组使用了鬼箭
羽水提液后脂肪细胞葡萄糖摄取量绝对值是有升
高的。
阴性结果的可能原因是 :(1)鬼箭羽的有效
浓度未能确定。由于研究时间较短,临床取得的
标本数量偏少。并且临床条件的限制,每次取材
量也不多,所以实验只设了鬼箭羽一种浓度剂量,
而没有做不同浓度下对脂肪细胞的作用影响,所
以能够显著改善胰淀素抑制作用的浓度未能确
定。本实验的结果只能说明该浓度下鬼箭羽对胰
淀素抑制的脂肪细胞葡萄糖摄取率没有改善,鬼
箭羽的改善作用在其他浓度下则未知。(2)人脂
肪细胞活性较大鼠的活性低,鬼箭羽作用时间短,
未能显示出其改善葡萄糖摄取率的作用。目前的
研究结果说明鬼箭羽对胰岛素有协同作用,如果
能够在本实验的基础上继续深入到分子水平,将
信号传导的通路分析清楚,将提高鬼箭羽甚至是
其他降糖中药的研究层次,并且能够解释其作用
机制。
本实验结果表明,尽管统计学无显著差异,但
是非糖尿病组和糖尿病组使用了鬼箭羽后脂肪细胞
葡萄糖摄取率比胰淀素组有所升高。加大鬼箭羽的
浓度可能会改善胰淀素的抑制作用。所以鬼箭羽的
研究前景相当广阔。◆
参考文献
[ 1 ] 郎素梅,朱丹妮,余伯阳,等 . 中药鬼箭羽降糖有效部位的
药效学和化学研究 [ J ] . 中国药科大学学报,2003,34 ( 2 ) :
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[ 3 ] 李娟娥,王磊,秦灵灵,等 . 鬼箭羽对 2 型糖尿病大鼠糖脂代谢
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