全 文 ：杠板归不同部位中齐墩果酸和熊果酸含量的测定研究
童奎骅
浙江省宁波市北仑区第二人民医院　浙江 宁波 315809
关键词　杠板归　齐墩果酸　熊果酸　反相高效液相色谱法　光电二极管阵列检测器　含量测定
　　杠板归又名河白草 、 蛇倒退 , 别名贯叶蓼 , 为蓼
科植物杠板归 Polygonum per folia-tum L.的地上部分 ,
具有利水消肿 、清热解毒 、活血等功效[ 1] 。该植物临床
应用广泛 , 尤其在治疗妇科炎症疾病方面具有独到疗
效 , 目前市场上已有以该植物入药的中成药制剂上市。
体内外实验表明 , 杠板归具有抗癌活性 , 对实验性动物
移植肿瘤有抑制作用 , 还具有抗炎和抑菌活性[ 2-3 ] 。对
其化学成分的研究表明 , 杠板归全草含黄酮类 、苦木素
类 、蒽醌类和新苯丙素蔗糠酯类化合物[ 4] ;还含齐墩果
酸和乌索酸等三萜酸类成分 , 具有抗菌 、抗病毒 、 抗肿
瘤 、降血糖血脂等多种生理作用[ 5-8] 。同时测定杠板归
中齐墩果酸和熊果酸含量的方法尚未见文献报道。为
此 , 本实验采用超声辅助提取 , 建立反相高效液相色谱
法同时测定了杠板归不同部位中齐墩果酸和熊果酸的含
量 , 为杠板归中齐墩果酸和熊果酸的测定及其开发利用
提供科学依据。
1　仪器与试剂
1.1　仪器:Waters 系列高效液相色谱仪 , 包括双
515泵 , 光电二极管阵列检测器 (2996型), 77251进
样阀 , Empow er 中文色谱数据工作站 (美国);RO-
MB-10D 高纯水机 (杭州永洁达膜分离设备厂);
CP225D 电子分析天平 (北京 Sartourius 公司);
FW100型高速万能粉碎机 (天津市泰斯特仪器有限公
司);202-26A 型数显电热恒温干燥箱 (上海阳光实验
仪器有限公司);SK2510HP 超声波清洗器 (上海科
导超声仪器有限公司 , 功率:250W , 频率:59kHz)。
1.2　试剂:甲醇为色谱纯 (江苏汉邦科技有限公司),
乙醇为分析纯 (江西洪都生物化学有限公司), 水为超
纯水 , 磷酸为分析纯 (上海市试剂一厂综合经营公司),
熊果酸 、齐墩果酸对照品 (中国药品生物制品检定所提
供 , 批号分别为:110742-200314 , 110709-200311), 杠
板归原料药采自福建省 , 经鉴定为蓼科植物杠板归 Po-
lygonum per foliatum的地上部位。
2　方法与结果
2.1　溶液配制:分述如下 。
2.1.1　对照品溶液:分别精密称定齐墩果酸 、 熊果
酸对照品 1.14mg 和 2.72mg , 置于 10m l量瓶中 , 加
甲醇溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 制成含齐墩果酸
0.114mg ·ml-1和熊果酸 0.272 mg · ml-1的对照品混
合溶液 。
2.1.2　样品溶液:杠板归按茎 、 叶和地上部位分离
后置恒温干燥箱中于 80 ℃干燥 6 h , 用高速中药粉碎
机粉碎 。精密称取样品不同部位粉末约 3g , 分别置于
50ml具塞锥形瓶中 , 加入 50ml95%乙醇超声提取
45min , 冷却后不足损失乙醇重量 , 摇匀后用 0.45
μm 滤膜过滤 , 取续滤液作为样品溶液。
2.2　熊果酸和齐墩果酸检测波长的确定:采用 PA D
检测器在 190 ～ 600 nm 波长范围内扫描 , 对照品溶液
中熊果酸和齐墩果酸在流动相中的最大吸收波长分别
为 199.9 nm和 201.0 nm (图 1), 但由于在低波长处
流动相有较强的末端吸收 , 为减少干扰 , 提高信噪
比 , 提取不同波长的色谱进行比较 , 并积分计算了对
应的峰面积响应值 , 选择 210 nm 为检测波长 , 其信
噪比高 , 噪音低 , 峰形对称 , 可在消除背景干扰时保
证基线平稳和检测的灵敏度 。
图 1　对照品中熊果酸 (UA)和齐墩果酸 (OA)的紫外光谱
2.3　色谱条件:色谱柱为 Kromasi l C18柱 (4.6mm
×250mm , 5μm);流动相为甲醇∶水∶磷酸 (90∶
10∶0.1 , v/v/v);流速 0.8 m l ·min-1 ;检测波长
210 nm;柱温为 30℃。以齐墩果酸和熊果酸计 , 理论
·294· 浙江中医杂志 2011年 4月第 46 卷第 4 期
塔板数均大于 12000 , 齐墩果酸和熊果酸分离度为
1.78 , 对称因子分别为 1.03 、 1.01 , 外标法定量分
析。对照品和样品色谱见图 2 ～ 3。
2.4　精密度试验:分别精密吸取对照品混合贮备溶
液 10μl , 平行进样 5次 , 以峰面积计算色谱系统精密
度 , 齐墩果酸和熊果酸峰面积 RSD 分别为 0.6% (n
=5)和 0.3%(n=5)。说明进样方法和仪器精密度
良好 。
2.5　重现性试验:取同一杠板归样品液 5份 , 每份
各约 3g , 按样品溶液制备方法制备样品溶液 。精密吸
取各样品溶液 10μl , 进样 , 测定其峰面积积分值 , 外
标法计算含量 , 齐墩果酸和熊果酸含量的 RSD 分别
为 2.1% (n=5)和 1.8%(n=5)。结果表明 , 样品
制备方法重现性良好 。
2.6　线性关系试验:用微量注射器精密吸取齐墩果
酸和熊果酸对照品混合贮备液中 2 、 6 、 10 、 15 、 25μl
进样分析 , 按色谱条件测定峰面积 , 以对照品的进样
量为横坐标 , 峰面积为纵坐标 , 绘制标准曲线 , 得齐
墩果酸回归方程为:Y=8.02×105X-2.84×104 (r
=0.9998), 熊果酸回归方程为:Y =7.40×105X-
5.16 ×104 (r =0.9998)。表明齐墩果酸进样量在
0.228 ～ 2.850 μg , 熊果酸进样量在 0.544 ～ 6.800 μg
时 , 线性关系良好。
2.7　加样回收率试验:精密称取已知齐墩果酸和熊果
酸含量的杠板归茎样品 6份 , 按高 、 中 、低三种浓度分
别加入对照品适量 , 制备样品溶液 , 进样测定含量 , 齐
墩果酸平均回收率为 97.4%, RSD为 1.5%(n=6);
熊果酸平均回收率为96.9%, RSD为 1.2%(n=6)。
2.8　样品含量测定:精密吸取制备的样品溶液各
20μl进样 , 平行 3次 , 测定齐墩果酸和熊果酸峰面积
积分值 , 外标法计算齐墩果酸和熊果酸的平均含量 。
测定结果见表 1。
表 1　杠板归不同部位中齐墩果酸和熊果酸的含量 (%)
部位 齐墩果酸 RSD 熊果酸 RSD
茎 0.0463 1.6 0.0998 1.8
叶 0.0115 1.9 0.0241 2.3
地上部位 0.0137 0.7 0.0301 2.1
3　讨论
测定结果表明 , 在杠板归样品不同部位中 , 杠板
归茎中齐墩果酸和熊果酸的含量均最高 , 远高于叶和
地上部位。茎中齐墩果酸含量为叶的 4.02 倍 , 熊果
酸为叶的 4.14倍 , 且同一部位中熊果酸的含量均明
显高于齐墩果酸 。提示样品中齐墩果酸和熊果酸主要
分布于杠板归茎中。
本试验建立的高效液相色谱法可同时测定杠板归
不同部位中熊果酸和齐墩果酸的含量 , 样品处理简
单 , 提取效率高 , 待测组分无其它杂质的干扰 。加入
少量磷酸可以创造弱酸性环境 , 能有效抑制待测组分
齐墩果酸和熊果酸的解离 , 使拖尾现象得以改善 , 峰
形尖锐对称 , 分离度符合色谱定量分析的要求 。
本实验所用方法简便 、 快速 , 分离效果好 , 数据
准确可靠 , 可为杠板归不同部位中熊果酸和齐墩果酸
的定量分析及质量评价控制提供了科学依据。
4　参考文献
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收稿日期　2010-11-01
·295·浙江中医杂志 2011 年 4 月第 46卷第 4期