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山槐中异黄酮类化合物的提取和鉴定



全 文 :国土与自然资源研究 1 9 93 年 第 2 期
山槐中异黄酮类化合物的提取和鉴定
胡忠勤 . 杨雪冬 ’ 乌卜晓晨 ’ ` 李连成 ’ 王恩慧 帝
【摘要】 本文是以山槐为原料 , 通过溶剂萃取的方法提取出黄酮类化合物 , 再通过薄层分析分离出异
黄酮类化合物 , 最后由紫外分光光度计测出其在 225 ~ s o on m 之间光谱图 , 确定为异黄酮类化合物 。
【关键词】 山槐 异黄酮 紫外光谱
黄酮类化合物广泛存在于植物体 。 有些黄酮类化合物可做染料 。 黄酮类化合物的生物活
性多祥 , 效果比较显著的是消炎 、 强心 、 降压 、 扩张冠状动脉 、 降低胆固醇 、 利尿 、 祛痰和 ;
护肝等活性作用 。 某些黄酮类化合物具有营养作用 , 被称为 “ 维生素 P’ , 或 “ 生物黄酮体 ” 。
、 本实验以山槐 ( M a a c k sa a m u r e n s i s R u p r . e t M a x im ) 树皮 、 槐花米为原料 , 用水和 甲醇
( l
:
l) 的混合物浸润后 , 再用有机溶剂萃取 , 经浓缩和干燥后 , 得到粗异黄酮类化合物 , 取
少量溶于甲醇溶剂 , 经薄层分析 , 滤去 甲醇 , 在 2 25 ~ 5 0 0n m 之间测紫外光谱 , 根据谱图和资
料可确定为异黄酮类化合物 。
仪器与试剂
仪器
电热恒温水浴锅 (3 7一 j的℃ )
z X 一 l 真空干燥箱 (大连自控设备厂 )
试剂 :
分析纯甲醇 ( b p 6月~ 6 5 C )
分析纯乙醇 ( bP 34 . S C )
分析纯石油醚 ( b p 6 0 ~ 9 0 ` C )
实验部分
BE C K M A N D U 一 ` , J 元光度计 ( 日本岛津 )
层析缸 (,J 、 型 )
分析纯正丁醇 ( bP 1 . 7℃ )
分析纯乙酸乙醋 ( bP 7 C )
无水乙醇 ( b p 7 8℃ )
2
.
! 材料的处理和试剂的选择
将山槐树皮 (选用小兴安岭野生 山槐 ) 、 槐花米在 70 C以下干燥 , 将树皮粉碎 , 选用水和
甲醇 (l : 1) 的混合物为溶剂 。
2
.
2 异黄酮类化合物的提取
用水和甲醇 ( 1 : 1) 的混合物分别浸泡山槐树皮 、 槐花米原料各 109 (常温下 ) 。 每次用
溶剂 10 ml , 共 2 次 , 时间为 24 小时左右 。 提滤 , 合并浸液 , 并在 80 ℃以下水浴加热回馏 24
小时 , 然后蒸馏浓缩至 10 0ml 左右 , 浓缩后的浸提液用石油醚萃取 5次 , 分出石油醚层 , 余下
的水层用乙醚萃取 2 次 , 分出乙醚层 。 用乙酸乙酷萃取余下的水层 5 次 , 分出乙酸乙酩层 , 然
冻北林业大学 , 哈尔滨 * , 哈尔滨轻工业学校
国土与 自然资源研究 1 9 9 3年 第 2期
后再用正丁醇萃取余下的水层 2 次 , 分出正丁醇层 。 以上抽提均在常温下进行 。
最后把以上分出的乙酸乙酷 、 正丁醇溶液分别蒸馏 、 浓缩 , 然后在真空干燥箱 中恒温 70 ℃
干燥 。 得到粗产品后 , 用紫外光谱分析 。
2
.
3 异黄酮类化合物的分离
( l) 薄层层析的操作方法 首先将调好的吸附剂均匀地铺在预先选好的玻璃板上 , 隔夜
自然晾干 , 然后放入供箱 (6 0℃ ) 中活化 1 小时 , 再用毛细管将样 品点到层析板上 , 最后通
过展开剂展开 , 鉴定 。 采用这个方法要注意对吸附剂 、 展开剂的选择 。
( 2) 本实验所用吸附剂为荧光硅胶〔G F 。
( 3) 展开剂用正丁醇效果较好 。
展开剂干燥后先在紫外灯下观察荧光斑点 , 根据不同的物质在紫外灯下显出不同颜色的
谱带可以进行分离的和鉴定 , 将荧光不 同的所有区段分两份刮下 , 分别溶于 l oml 甲醇 , 做 G C
测定 。
2
.
4 黄酮类和异黄酮类化合物的紫外鉴定
( l) 黄酮类化合物的紫外光谱鉴定 用甲醇为溶剂 , 取 0 . l m g 粗产品溶解于 1 0ml 容量瓶
中 , 在 2 25 ~ S O0n m 波长范围内扫描 。
( 2) 异黄酮类化合物的紫外鉴定 i薄层分析后的已定容的甲醇溶液 , 在 2 5 ~ 5 0 0n m 波长
范围内扫描 。
2
.
5 颜色反应
( l) 碱性试剂的显色反应 将黄酮类化合物的溶液滴在滤纸上 , 干燥后暴露于氨蒸气中 ,
观察颜色变化 。
( 2) 金属盐类试剂的综合反应 将少量化合物加入到 1% lA o : 溶液中 。
(3 ) 与硫酸反应 黄酮类化合物溶于浓硫酸中 , 并观察颜色变化 。
( 4) 还原显色反应 在黄酮类化合物 的醇溶液中加入小块镁条 , 然后滴加几滴浓盐酸 , 并
观察现象 。
2
.
6 原液中黄酮类化合物含量的测定
将盛有 s m l 原液的试管 , 放进热水浴中蒸发溶液至干 , 浓缩时 , 注意调节水温不致过度沸
腾 。 向浓缩后的剩余物中加 s m or . S N K Zcr Z o : 溶液 , 加热 10 分钟 , 冷却后移入滴定瓶中 , 稀释
10 0m l
, 冷却后加 1o m l 6N H Z s o ; , 加 2 0% K l 溶液 ] 3 m l , 暗处放置 10 分钟 , 用 0 . I N 的 N a ZS Zo 3
溶液滴定 。 接近终点时 , 加淀粉指示剂 。 用同样的方法滴定 5m1 K 2Cr 2 0 : 溶液作为对照 , 按下
式计算黄酮类化合物的浓度 :
2 6 8
.
3 ( a 一 b )
8
二 3 3 . 5 4 ( a 一 b )
式中 x — 原液中黄酮类化合物的浓度 (略 / m l ) ;a— 滴定对照液所消耗的 Na Z s 2 0 : 溶液的体积 ( m l ) ;
b— 滴定分析液所消耗的 Na ZS Zo : 溶液的体积 ( m l ) ;
g— 为被测定的原液的体积 (m l ) ;
2 6 8
.
3— l 毫升 0 . I N a : s : 0 3 相当干黄酮类化合物的数量 (件g ) 。
2
.
7 关于改换溶剂的试验
国土与自然资源研究 1 9 9 3年 第 2期
黄酮类化合物具有药用价值 , 提取应选用无毒 、 无害的溶剂 。
( 1) 以无水乙醇作溶剂 分别称 10 克粉碎的山槐树皮 、 槐花米加冷无水乙醇浸提两次 ,
每次一昼夜 , 合并浸提液 , 浓缩后放置在真空箱中恒温 70 ℃ 烘干 , 得到黄色粘稠物 , 做紫外
鉴定 。
( 2) 以水作溶剂 分别称 1 09 粉碎的山槐树皮 、 槐花米 , 加水 3 O0m] 煮沸抽出 1 小时 , 趁
热过滤 , 残渣以水 l o oml 再煮沸抽出 , 合并抽出液 , 浓缩 , 烘干 , 得到黄色粘稠物 , 做紫外鉴
定 。
3 结果与讨论
.3 1 化合物的提取
山槐树皮 、 槐花米分别用水和甲醇 l( , l) 的混合液浸提 , 浸液分别呈黄色 、 褐色 。 抽
滤浓缩后首先用石油醚和乙醚萃取 , 萃取液为乳白色 , 主要为石腊和脂类 。 然后用乙酸乙酷
和正丁醇萃取 , 浓缩 、 干燥后析出黄色粘稠状的物质 , 即为山槐中含有的黄酮类化合物 。
1 09 山槐树皮中含有黄酮类化合物大约为 0 . 85 9 , 产率 8 . 5% 。
1她 槐花米中含有黄酮化合物大约为 0 . 80 克 , 产率为 8 . 0% 。
3
.
2 紫外光谱的鉴定
( 1) 槐花米 在 2 25 ~ s o on m 范围内出现两个谱带 , 在 2 58 . sn m 处出现一个强吸收峰 , 在
3 5 nI m 处出现一个肩峰 , 此化合物为异黄酮类或黄酮类化合物 。 薄层分析后 , 只在 25 9 . on m 处
出现一个吸收峰 , 此化合物为异黄酮类化合物 。
大多数黄酮类化合物在甲醇中的紫外光谱 , 在 2 5~ 5 0 0n m 区域 内有两个主要吸收率 , 其
中之一出现在 2 4 0~ 2 8 0n m (带 l ) 范围内 , 另一个吸收峰在 3 0 0~ 4 0 0 n m (带 I ) 范围内 , 一
般来说带 l 吸收可以认为与 A 环苯 甲酞系统有关 , 而带 I 则与 B 环肉桂酞系统有关 。
异黄酮类化合物成分由于侧链的苯环结在 C : 上 , 使其与毗酮环的拨基间消失了似黄酮的
共扼体系 , 因而其吸收光谱中似黄酮类的吸收峰往往不复存在或大大地减少了吸收峰的强度 ,
就一般情况来说 , 多数异黄酮类成分只能 出现在 25 0~ 2 7 0n m 的一个强吸收峰 , 有时在 3 0 一
3 3 0n m 处也能出现一个吸收强度很小的小峰或曲折 。 根据在关资料 : 异黄酮在 24 0~ 2 8 0n m 之
问吸收 , 二氢黄酮在 3 0 ~ 3 3 0 0 m 之间吸收 , 黄酮醇则在 2 52 一 2 8 2 n m 之间吸收 。

\尹引
7尸八h
5

!}
O
肉桂酞
异黄酮通式 黄酮醉通式 黄酮类化合的共扼结构
3
.
3 颜色反应
( 1) 碱性试剂的显色反应 氨气熏后滤纸上无颜色变化 。
( 2) 金属盐类试剂的络合反应 化合物与 1% lA a 3 反应后无颜色变化 。
国土与自然资源研究 199 3 年 第 2 期
(3 ) 硫酸的反应 化合物溶于浓硫酸后颜色由黄色变为红色 。
“ ) 还原显色反应 反应时镁条周围溶液变为红色 。
根据上述紫外光谱可判断化合物为异黄酮 、 二氢黄酮类或黄酮醇类化合物 , 根据颜色反
应现象可断定有异黄酮类化合物 。
3
.
4 原液中黄酮类化合物含量的测定
达到等当点时 , 溶液的颜色由紫黑色变为蓝色 。
( l) 以水和甲醇 ( 1 : l) 为溶剂时 , 山槐树皮和槐花米提取液中黄酮类化合物平均含量
为 2 69 . 6 1昭 /m l 和 1吕0 . 0 4林g /m l 。
(2 ) 以无水乙醇做溶液 , 山槐树皮和槐花米提取液中黄酮类化合物平均含量为 31 6 · 切
林g /m l 和 2 3 3 . 6 5阳 /m l .
(3 ) 以水做溶剂 . 山槐树皮和槐花米提取液中黄酮类化合物平均含量为 2 48 . 3 6阳 /ml 和
1 3 9
.
4 9“ 8 /m l 。
` 、
3
.
5 改换溶剂试验的结果
l( ) 以无水乙醇作溶剂 , 山槐树皮产率 8 . 8 ; 槐花米产率 8 . 1% , 紫外光两谱图都只有一
个强吸收峰 , 而且吸收峰在 24 0一加 on m 之间 , 由此可断定 , 此产物纯属异黄酮类化合物 .
(2 ) 以水作溶剂 , 产率分别为 7 . 9 % , 8 . 2% , 由紫外光谱图 , 产物与水和 甲醇作溶剂时
相同 .
、通过以上实验 、 鉴定及有关资料 , 从山槐树皮 、 槐花米中提取黄酮类化合物 , 无论是从
药用价值上 , 还是从经济上和工作量上 , 用无水乙醇 、 水比用甲醇加水要好 ; 而用无水乙醉
作溶剂 , 既不用萃取 , 也不需薄层分离 , 即所得纯异黄酮类化合物 。
4 参考文献
i (苏〕 波钦诺克若 , 荆家海等译 。 植物生物化学分析方法 . 科学出版社 , 19 81 , 2
2 〔日〕 又lJ米达夫著 , 杨本文译 . 植物化学 。 农业出版社 , 1 9 86 , 12
3 (英〕 .J B 哈本等编 , 截伦凯等译 . 黄酮类化合物 . 科学出版社 , 19 83 , 4
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5 何林兴 。 槐植物成分的研究及应用 。 野生植物研究 , 19 85 , ( 1 )
6 居世忠 . 黄酮类化合物的生物活性 . 国外医学 , 19 79 , ( 3)