全 文 ：·药物制剂与药品质量控制·
HPLC法测定肾茶中 3种甲氧基黄酮类活性成分*
李光1，2，路娟3，李学兰1，2，张宁4，刘斌4，陈曦3
(1．中国医学科学院药用植物研究所云南分所，景洪 666100;2．云南省西双版纳傣族自治州傣药南药重点实验
室，景洪 666100;3．中国医学科学院药用植物研究所，北京 100193;4．黑龙江中医药大学佳木斯学院，佳木斯
154007)
摘 要 目的 建立测定肾茶提取物中橙黄酮、半齿泽兰素、半齿泽兰素-5-甲醚含量的方法。方法 采用高效液相
色谱( HPLC) 法，Symmetry C18( 4．6 mm×150 mm，5 μm) 色谱柱，流动相为乙腈-0．05%磷酸盐缓冲液，梯度洗脱; 流速:
1 mL·min－1，柱温: 35 ℃，检测波长: 365 nm，进样量为 10 μL。结果 橙黄酮在 0．50 ～ 5．00 μg、半齿泽兰素在 0．50 ～
5．00 μg、半齿泽兰素-5-甲醚在 0．05～0．50 μg范围内具有良好的线性关系;平均加样回收率分别为 101．26%，100．28%和
99．66%。ＲSD分别为 1．73%，0．82%和 1．68%。结论 该方法简便、准确，可用于肾茶的质量评价。
关键词 肾茶;色谱法，高效液相;橙黄酮;半齿泽兰素;半齿泽兰素-5-甲醚
中图分类号 Ｒ286; Ｒ927．2 文献标识码 B 文章编号 1004－0781( 2015) 09－1203－04
Determination of Three Active Flavones in Orthosiphon stamineus by HPLC
LI Guang1，2，LU Juan3，LI Xuelan1，2，ZHANG Ning4，LIU Bin4，CHEN Xi1，3 ( 1． Yunnan Branch，Institute of
Medicinal Plant，Chinese Academy of Medical Sciences，Peking Union Medical College，Jinghong 666100 ，
China; 2．Key Laboratory of Dai and Southern Medicine of Xishuangbanna Dai Autonomous Prefecture，Yunnan
Province，Jinghong 666100 ，China; 3．Institute of Medicinal Plant，Chinese Academy of Medical Sciences，Peking
Union Medical College，Beijing 100193，China; 4．Jiamusi College，Heilongjiang University of Traditional Chinese
Medicine，Jiamusi 154007，China)
ABSTＲACT Objective To develop a method for content determination of sinensetin，eupatorin，and 3-hydroxy-5，6，7，
4-tetramethoxyflavone in Orthosiphon stamineus． Methods The determination was carried out on a Symmetry C18 column
( 4．6 mm×250 mm，5 μm) by HPLC．The mobile consisted of acetonitrile and water containing 0．05% H3PO4 in gradient elution．
The flow rate was 1 mL·min－1，the column temperature was 35 ℃，the detected wavelength was set at 365 nm，and the injection
volume was 10 μL． Ｒesults The peak areas and the sample quantity of the three components presented good linear relationship
in the range of 0． 50 － 5． 00 μg for sinensetin，0． 50 － 5． 00 μg for eupatorin，and 0． 05 － 0． 50 μg for 3-hydroxy-5，6，7，4-
tetramethoxyflavone．The average recoveries were 101．26%，100．28% and 99．66%，respectively． ＲSD were 1．73%，0．82% and
1．68%，respectively． Conclusion The method is proved to be simple，accurate and can be used for the quality evaluation of
Orthosiphon stamineus．
KEY WOＲDS Orthosiphon stamineus; Chromatography，high performance liquid; Sinensetin; Eupatorin; 3-hydroxy-5，6，
7，4-tetramethoxyflavone
肾茶(又名猫须草，傣药名为雅糯渺)来源于
Clerodendranthus spicatus(Thunb．)C． Y．Wu ex H．W． Li
(又称 Orthosiphon stamineus)的全草，是傣医常用的
收稿日期 2014－04－ 03 修回日期 2014－11－14
基金项目 * 北京协和医学院协和青年基金资助项目
(3332013081，33320140076) ;中央级公益性科研院所基本科研
业务基金资助专项(YZYN-14-02、YZYN-13-02) ;黑龙江省自然
科学基金面上项目(H201328)
作者简介 李光(1985－) ，男，河北安国人，助理研究员，硕
士，从事民族药药理及开发工作。电话:0691－2136981，E-mail:
lhbg311@ hotmail．com。
通信作者 陈曦(1973－) ，男，黑龙江齐齐哈尔人，副研究
员，博士，从事中药药理及开发工作。电话:010－62799771，E-
mail:91chenxi12@ 163．com。
排解人体内积蓄毒素的药物，具有清热解毒、利水消
肿、利尿化石等功能，是传统傣医用于预防和治疗肾、
膀胱、尿道等泌尿系统感染疾病的首选药材［1］。现代
研究表明，肾茶提取物具有利尿排石［2］、抗氧化［3］、降
血压［4］、保肝［5］等活性，课题组前期研究发现，肾茶提
取物具有明显的降血糖［6］、提高半乳糖所致衰老小鼠
学习能力［7］等作用，具有较大的应用开发价值。
肾茶中主要的活性成分是甲氧基黄酮［8-9］，由橙黄
酮、半齿泽兰素、半齿泽兰素-5-甲醚等组成［10］。甲氧
基黄酮类具有明显的抗氧化［11-12］、抗肿瘤［13］、抗
炎［14］、免疫调节［15］及保护心血管［16］作用，被誉为“天
然抗氧化剂”。目前肾茶质量控制的方法多为测定肾
茶中酚酸类成分［17-18］，或者测定甲氧基黄酮类成
·3021·医药导报 2015年 9月第 34卷第 9期
分［19］，这些方法尽管分离度较好，但出峰时间短，
5 min中内全部出峰，对样品处理要求较高，对于传统
药物中复杂提取物测定有效成分适用性不高。笔者拟
建立一种较为快速测定肾茶中 3种主要甲氧基黄酮方
法以完善肾茶质量控制，在此基础上，比较不同产地肾
茶中甲氧基黄酮类的含量，为后期产品开发奠定基础。
1 仪器与试药
1．1 仪器 超高效液相色谱仪(PDA 检测器，Waters
ACQUITY UPLC H-CLASS) ，AB265-S 型分析天平(感
量 0．01 mg，瑞士梅特勒托利多公司) ;优普超纯水仪。
1．2 试药 橙黄酮、半齿泽兰素对照品(含量分别为
95．0%，98．3%，批号分别为 12101311，10111422)购自
百灵威公司，半齿泽兰素-5-甲醚对照品(含量为
98．5%，批 号:0305100 )购 自 Indofine Chemical
Company;乙腈为色谱纯(Fisher公司) ，水为超纯水，其
他试剂为分析纯。肾茶样品采自云南、福建、广东、广
西、海南等全国各主产区，采集时间为 2009 年 9—10
月，经中国医学科学院药用植物研究所云南分所李学
兰研究员鉴定为唇形科肾茶属 Clerodendranthus
spicatus (Thunb．)C．Y．Wu植物的地上部分。
2 方法与结果
2．1 色谱条件 色谱柱:Symmetry C18(4． 6 mm ×
150 mm，5 μm) ，流动相为乙腈-0．05%磷酸盐缓冲液，
洗脱梯度为 0 ～ 30 min 乙腈浓度为 5%→100%，30 ～
40 min 乙腈浓度为 100%;流速:1 mL·min－1，柱温:
35 ℃，检测波长:365 nm，进样量为 10 μL，样品经孔径
0．45 μm 微孔滤膜滤过，各种甲氧基黄酮类成分色谱
峰与其他色谱峰基线分离，方法学考察结果显示此条
件适用于肾茶中甲氧基黄酮类的含量测定。
2．2 对照品溶液的制备 分别精密称取橙黄酮、半齿
泽兰素、半齿泽兰素-5-甲醚对照品各 5 mg，置10 mL量
瓶中，加甲醇超声溶解并定容，过孔径 0．22 μm微孔滤
膜，取续滤液作为对照品溶液，备用。
2．3 供试品溶液的制备 精密称取肾茶粉末 4．0 g，
加入甲醇 25 mL，超声提取 30 min，滤过，滤液过孔径
0．22 μm微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液，4 ℃冷
藏备用。
2．4 线性关系考察 在“2．1”项色谱条件下分别进样
对照品溶液 1，2，4，6，8，10 μL，以进样量为横坐标
(X) ，峰面积为纵坐标(Y) ，建立标准曲线，得到橙黄
酮、半齿泽兰素、半齿泽兰素-5-甲醚对照品的回归方
程分别为 Y = 323 704X + 29 378，r = 0． 999 5;Y =
338 223X+17 097，r = 0．999 2;Y = 381 229X+709．5，r =
0．999 1，显示橙黄酮在 0．50 ～ 5．00 μg、半齿泽兰素在
0．50～5．00 μg、半齿泽兰素-5-甲醚在 0．05 ～ 0．50 μg 范
围内具有良好的线性关系。见图 1。
A．对照品; B．肾茶样品; 1．半齿泽兰素-5-甲醚; 2．橙黄酮; 3．
半齿泽兰素
图 1 两种溶液的 HPLC图谱
A． reference substance;B．Orthosiphon stamineus sample;1．3-
hydroxy-5，6，7，4-tetramethoxyflavone;2．sinensetin;3．eupatorin
Fig．1 HPLC chromatograms of two kinds of solutions
2．5 精密度实验 精密量取“2．3”项制备供试品溶液
10 μL，于“2．1”项色谱条件下，连续进样 6 次，记录色
谱图，分别计算样品中 3种甲氧基黄酮峰面积的 ＲSD。
结果表明 ＲSD 在 0．566% ～ 1．634%，说明仪器精密度
良好。
2．6 重复性实验 按照“2．3”项供试品溶液制备方
法，平行制备供试品溶液 5份。于“2．1”项色谱条件下
进样测定，计算样品中 3 种甲氧基黄酮含量的 ＲSD。
结果表明 ＲSD 在 1．219% ～ 1．852%，说明实验重复性
良好。
2．7 稳定性实验 按照“2．3”项制备供试品溶液，在
“2．1”项色谱条件下分别于 0，2，4，6，8，10 h 进样，计
算样品中 3种甲氧基黄酮峰面积 ＲSD。结果表明 ＲSD
在 1．195%～1．910%，说明供试品 10 h内稳定性良好。
2．8 加样回收率实验 取已知含量的肾茶样品4．0 g，
精密称定，分别精密加入橙黄酮、半齿泽兰素、半齿泽
兰素-5-甲醚对照品(按纯品计算)47． 50，78． 64，
9．85 mg，与样品混合，按“2．3”项方法制备供试品溶
液，在“2．1”项下色谱条件进行测定，计算橙黄酮、半齿
泽兰素、半齿泽兰素-5-甲醚回收率。结果表明平均加
样回收率分别为 101．26%，100．28%和 99．66%。ＲSD
·4021· Herald of Medicine Vol. 34 No. 9 September 2015
在0．82%～1．73%，ＲSD＜2%，说明 3种甲氧基黄酮类的
回收率符合要求。见表 1。
2．9 样品测定 分别取不同产地肾茶按“2．3”项方
法制备供试品溶液并进行测定，结果见表 2。
通过测定 13 份肾茶样品，3 种主要甲氧基黄酮总
含量 6．23%～9．29%，平均含量为 7．82%，白花肾茶的含
量为 7．45%，紫花肾茶含量为 8．40%，紫花肾茶含量普遍
较高，并以景洪药植所的含量最高，为9．29%。
3 讨论
肾茶为西双版纳傣族自治州的傣族人常用药物，
平时代茶饮，用于治疗肾炎、肾结石等疾病，东南亚地
区居民也习惯应用该药材，相继发现该药材还具有降
表 1 肾茶样品中 3种甲氧基黄酮类成分加样回收率
Tab．1 Ｒecovery test of three kinds of methoxy flavonoids ingredients in shencha sample
成分
称样量 /
g
原有量 加入量 测得量
mg
回收率 平均值 ＲSD
%
橙黄酮 4．034 8 110．08 47．50 157．54 99．92 101．26 1．73
4．008 8 109．37 47．50 158．14 102．67
3．975 8 108．66 47．50 155．94 99．54
3．957 1 107．96 47．50 155．27 99．60
4．045 4 107．27 47．50 156．02 102．63
4．010 6 106．58 47．50 155．61 103．22
半齿泽兰素 4．010 0 205．50 78．64 284．87 100．93 100．28 0．82
4．083 8 209．28 78．64 287．47 99．43
4．099 4 210．08 78．64 288．96 100．31
4．026 0 206．32 78．64 284．43 99．33
4．022 9 206．16 78．64 285．03 100．29
4．004 3 205．21 78．64 284．97 101．42
半齿泽兰素-5-甲醚 4．028 8 16．91 9．85 26．73 99．70 99．66 1．68
4．062 2 17．05 9．85 26．86 99．59
4．035 9 16．94 9．85 26．81 100．20
3．988 3 16．74 9．85 26．78 101．93
4．014 5 16．85 9．85 26．38 96．75
4．066 9 17．07 9．85 26．90 99．80
表 2 不同产地肾茶中 3种甲氧基黄酮类成分含量比较
Tab．2 Comparision of content determination among three kinds of methoxy flavonoids ingredients in Orthosiphon stamineus
samples from different habitats %
编号 花色 产地
橙黄酮
含量
半齿泽兰素
含量
半齿泽兰素-
5-甲醚含量
黄酮
总含量
S1 白花 海南省万宁市兴隆镇药植所 3．16 4．47 0．36 7．99
S2 白花 云南省勐腊县勐伴乡 2．01 3．89 0．33 6．23
S3 紫花 云南省景洪市药植所 3．78 5．16 0．35 9．29
S4 紫花 云南省勐腊县勐仑植物园 3．25 4．17 0．61 8．03
S5 白花 云南省普洱江城县 2．01 4．32 0．57 6．90
S6 白花 云南省耿马县孟定镇 3．02 4．45 0．22 7．69
S7 紫花 云南省勐腊县勐仑镇 3．20 5．21 0．58 8．99
S8 紫花 福建省鼓浪屿亚热带植物引种园 3．09 4．11 0．13 7．33
S9 白花 广东省阳春市时尚区新东头村 4．01 2．96 0．44 7．41
S10 白花 云南省元江县东峨镇 3．27 4．02 0．37 7．66
S11 白花 广西省南宁市南药园 3．54 3．95 0．27 7．76
S12 白花 福建省鼓浪屿亚热带植物引种园 3．48 4．27 0．23 7．98
S13 紫花 海南省儋州市热带植物园 3．09 4．90 0．39 8．38
·5021·医药导报 2015年 9月第 34卷第 9期
血脂及抑菌作用，该药物保健功能逐渐受到广泛关
注［20］，深入研究其质量控制方法显得尤为重要。
本实验建立了同时测定 3种主要甲氧基黄酮类成
分的方法，能够实现对肾茶提取物中甲氧基黄酮类成
分的同时测定。本实验结果显示，紫花肾茶中甲氧基
黄酮总含量明显高于白花肾茶品种，这与之前指纹图
谱［21］测定结果吻合，而且景洪市肾茶含量最高，这可
能与该地区充足的日照条件有关，高日照条件下可刺
激植物产生大量的黄酮类次生代谢产物［11］。
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