全 文 ：收稿日期:2014-03-21
基金项目:广西自然科学基金创新团队项目(2010GXNSFF013001)
作者简介:王芳(1990-)，女，在读硕士研究生，专业方向:天然药物化学;Tel:13977301852，E-mail:wgfg. happy@ 163. com。
* 通讯作者:尹文清，Tel:13597331359，E-mail:yinwq0000@ aliyun. com。
壮药红根草的质量标准研究
王 芳1，2，尹文清1* ，闵建国2，王力生2
(1. 广西师范大学化学与药学学院药用资源化学与药物分子工程教育部重点实验室，广西 桂林 541004;2.
桂林三金药业股份有限公司，广西 桂林 541004)
摘要 目的:建立壮药红根草的质量标准。方法:采用生物切片和粉末显微技术对红根草的组织结构进行特
征鉴定;采用原位预处理-薄层色谱法对红根草中齐墩果酸和熊果酸进行鉴别;通过流动相添加 β-环糊精(β-CD)改
善分离度，采用 HPLC法对红根草中齐墩果酸和熊果酸进行定量分析，以 Waters Symmetry Column C18(250 mm ×
4. 6 mm，5 μm)为色谱柱，甲醇-2 mmol /L β-CD = 85∶ 15 为流动相，流速为 1. 0 mL /min，柱温为 30 ℃，检测波长为
210 nm。结果:红根草的组织结构特征明显;薄层色谱中齐墩果酸和熊果酸分离度好，斑点清晰;HPLC色谱中齐墩
果酸和熊果酸分别在 0. 2258 ～ 1. 6935 μg(r1 = 0. 9993)和 0. 2314 ～ 1. 7355 μg(r2 = 0. 9996)进样量范围内与峰面积
呈良好的线性关系，加样回收率分别为 99. 46%、100. 96%，ＲSD 分别为 0. 75%、1. 28%。结论:建立的定性和定量
方法具有操作简便、灵敏度高、重现性好的特点，可用于红根草药材的质量控制。
关键词 红根草;齐墩果酸;熊果酸;原位预处理-薄层色谱法;HPLC;质量标准
中图分类号:Ｒ282. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)11-1994-04
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2014. 11. 021
红根草为唇形科植物红根草 Salvia prionitis
Hance的干燥全草，又名红地胆、关公须、落地红等，
壮药名棵壤红，收载于 2011 年版《广西壮药质量标
准》第二卷〔1〕。主要分布于江西、浙江、安徽、广西、
广东等省区。作为壮族常用民族药材，红根草具有
疏风清热、利湿、止血安胎的功效，常用于感冒发热、
急性扁桃体炎、肺炎咳喘、咽喉肿痛、腹泻等，也是复
方红根草片的主要处方用药。文献有关其化学成分
研究不多，只报道其根中含红根草邻醌、红根草对醌
等二萜醌类成分〔2〕，也缺乏含量测定用对照品，故
其现行质量标准仅见简单的理化鉴别，无明确的含
量控制指标。本课题组在对红根草进行系统分离研
究中，从中分离得到熊果酸和齐墩果酸等五环三萜
酸成分，具有抗肿瘤、降血糖、抗炎、抗 HIV 等药理
活性〔3〕。本研究建立了红根草中熊果酸和齐墩果
酸的定性、定量研究方法，以期为药材及相关成药标
准提升和深度应用开发提供参考。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 ＲT-02A 高速粉碎机(北京亚环天元有
限公司);Leica ＲM2245 生物显微镜(德国);DMC-
LX3 数码照相机(日本 Panasonic公司);XP205 型天
平(0. 01 mg，瑞士METTLEＲ TOLEDO);Auto Sample
3 薄层色谱自动点样仪(瑞士 CAMAG公司);Ｒepro-
star 3 薄层色谱摄像仪(瑞士 CAMAG 公司);Waters
2695 高效液相色谱仪(美国，DAD 检测器);Branson
bug 40-60 超声波清洗仪(上海必能信公司)。
1. 2 试剂与药品 熊果酸(批号:110742-200517)、
齐墩果酸(批号:110709-200505)对照品均购自中国
食品药品检定研究院。甲醇和乙腈为色谱纯，水为
超纯水，其余试剂均为分析纯。
1. 3 药材 红根草采自广西、广东、福建等地，经
桂林三金药业股份有限公司钟小清高级工程师鉴定
为唇形科植物红根草 Salvia prionitis Hance 的干燥
全草，凭证标本存放于桂林三金药业股份有限公司
标本室。
2 方法与结果
2. 1 茎横切面显微鉴别
2. 1. 1 茎切片的制备:从红根草的茎截取段长为 5
～ 6 cm 的小段，用水浸泡 24 h，然后用融化的石蜡
将其包裹，待冷却后切成 30 ～ 50 μm 的薄片置于载
玻片上，用水合氯醛溶液进行透化，滴加稀甘油，置
显微镜下观察。
2. 1. 2 茎横切面特征:呈四方形。表皮细胞为呈
类方形，外被有角质层，外壁增厚，下方有厚角组织;
皮层较窄，由 3 ～ 5 层薄壁细胞组成，四棱角处厚角
细胞增多，厚角组织增厚，有 5 ～ 8 层，排列紧密，增
厚部分呈半月形;内皮层明显，韧皮部较窄，在四棱
角处较发达;木质部在四棱角处较发达，导管单个散
在或 2 至数个聚集;髓部较大，由大型薄壁细胞组
成，中间呈空洞状。见图 1。
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图 1 红根草茎横切面详图(A，×100)与简图(B，×40)
1. 非腺毛 2. 表皮层 3. 厚角组织 4. 腺毛 5. 皮层
6. 韧皮部 7. 木质部 8. 髓部
2. 2 粉末显微鉴别
2. 2. 1 显微片制备:红根草全草粉碎(过 150 目
筛)，水合氯醛溶液透化，滴加稀甘油，置显微镜下
观察。
2. 2. 2 粉末显微特征:棕黄色。表皮细胞含棕色
物质;非腺毛多 2 ～ 10 个细胞，平直或略弯曲，基部
1 ～ 3 个细胞较短，有的中部 1 个细胞缢缩状，壁稍
厚，有角质纹理;腺毛头部为单细胞，直径 24 ～ 34
μm，单柄细胞或无柄细胞，多呈蘑菇状;叶下表皮细
胞气孔直轴式，副卫细胞 2 个;薄壁细胞类长方形。
见图 2。
2. 3 薄层鉴别
2. 3. 1 对照品溶液的制备:分别精密称取齐墩果
酸、熊果酸对照品各 10 mg，加甲醇制成每 1 mL含 1
mg的溶液，作为对照品溶液。
图 2 红根草粉末图(×400)
1. 表皮细胞 2. 非腺毛 3. 气孔(含下表皮细胞) 4. 腺
毛 5. 薄壁细胞
2. 3. 2 供试品试液的制备:取红根草药材粉末 2
g，精密称定，加无水甲醇 25 mL，超声(250 W，40
kHz)处理 60 min，取续滤液 10 mL，石油醚(30 ～ 60
℃)振摇提取 2 次，弃去石油醚层，剩余甲醇液定容
至 10 mL，作为供试品溶液。
2. 3. 3 薄层原位预处理及薄层条件:吸取对照品
和供试品溶液各 5 μL，分别点于同一硅胶 G薄层板
上。进行原位预处理，将薄层板点样端浸入含 1%
碘的二氯甲烷溶液中，使溶液浸过斑点后即取出，覆
盖一块玻板于薄层板，30 min后，挥干溶剂。以环己
烷-氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸 = 20∶ 5∶ 8∶ 0. 2 为展开剂，
展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，于 105
℃加热至斑点显色清晰，色谱图见图 3-A。未作原
位预处理的薄层色谱图见图 3-B。
图 3 红根草中齐墩果酸和熊果酸的 TLC图
A. 经过原位预处理色谱图 B. 未作原位预处理色谱图
1. 熊果酸对照品 2 ～ 4. 红根草样品 5. 齐墩果酸对照品
2. 4 HPLC含量测定
2. 4. 1 对照品溶液的制备:分别精密称取齐墩果
酸、熊果酸对照品适量，加甲醇制成每 1 mL 含 0. 1
mg的溶液，作为对照品储备液。
2. 4. 2 供试品溶液的制备:取红根草药材粉末(过
150 目筛)2 g，精密称定，加无水甲醇 25 mL，超声
(250 W，40 kHz)处理 30 min，滤过，取续滤液 10
·5991·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 11 期 2014 年 11 月
mL，用石油醚(30 ～ 60 ℃)振摇提取 2 次，弃去石油
醚层，甲醇层定容至 10 mL，0. 45 μm 微孔滤膜滤
过，作为供试品溶液。
2. 4. 3 色谱条件:色谱柱为 Waters Symmetry Col-
umn C18(250 mm ×4. 6 mm，5 μm);流动相为甲醇-2
mmol /L β-CD = 85∶ 15;流速为 1. 0 mL /min;柱温为
35 ℃;检测波长为 210 nm。混合对照品及供试品溶
液 HPLC图见图 4。
图 4 混合对照品溶液(A)和红根草供试品溶液(B)HPLC图
1. 齐墩果酸 2. 熊果酸
2. 4. 4 线性关系考察:精密吸取各对照品储备液
2、4、6、8、10、15 μL 注入色谱仪，记录色谱图，对照
品的进样量(X)与峰面积(Y)的回归方程分别为:Y1
= 498300X1 － 7517，r1 = 0. 9993 和 Y2 = 433600X2 －
1730，r2 = 0. 9996。结果表明齐墩果酸和熊果酸进
样量分别在 0. 2258 ～ 1. 6935 μg、0. 2314 ～ 1. 7355
μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2. 4. 5 精密度试验:精密吸取各对照品储备液 10
μL，连续测定 6 次，以齐墩果酸和熊果酸的峰面积
值计算，ＲSD分别为 0. 31%和 0. 20%。
2. 4. 6 稳定性试验:取同一供试品溶液，室温下放
置，分别于 0、4、8、16、24、48 h 测定，以齐墩果酸和
熊果酸的含量值计算，ＲSD 值分别为 0. 34% 和
1. 22%，结果表明供试品溶液在 48 h内稳定。
2. 4. 7 重复性试验:取红根草样品粉末 2 g，精密
称定，按照“2. 4. 2”项下平行制备 6 份供试品溶液，
按“2. 4. 3”项下色谱条件测定，结果样品中齐墩果酸
的含量为 0. 1797%，ＲSD为 0. 55%;熊果酸的含量为
0. 3369%，ＲSD为 0. 58%，说明方法重复性良好。
2. 4. 8 加样回收率试验:精密称取已准确进行含
量测定的红根草样品粉末 1 g，共 6 份，置于具塞锥
形瓶中，分别加入 2 mL 齐墩果酸对照品储备液
(1. 129 mg /mL)和 3 mL 熊果酸对照品储备液
(1. 157 mg /mL)，按照“2. 4. 2”项下制备供试品溶
液，测定峰面积，计算回收率，结果见表 1。
2. 4. 9 不同产地红根草中齐墩果酸和熊果酸的含
量测定:取红根草样品粉末 2 g，精密称定，按
“2. 4. 2”项下方法制备供试品溶液，“2. 4. 3”项下方
法测定峰面积，外标一点法计算齐墩果酸和熊果酸
的含量。不同产地的红根草中齐墩果酸和熊果酸的
含量测定结果见表 2。
3 讨论
3. 1 通过对红根草茎横切面和全草粉末的显微鉴
别，使红根草的组织结构特征得到确认。
3. 2 经过对红根草化学成分分离鉴定研究，从中
得到较大量的齐墩果酸和熊果酸(经 NMＲ 验证确
认)，与原标准〔1〕比较，增加了专属性成分的定性、
定量测定，能够更好地控制壮药红根草药材的质量。
表 1 齐墩果酸和熊果酸加样回收率试验结果 (n =6)
名称 取样量 /g 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均值 /% ＲSD /%
齐墩果酸 1. 0080 2. 2580 4. 0551 99. 37 98. 88 0. 75
1. 0040 2. 2580 4. 0183 98. 06
1. 0030 2. 2580 4. 0122 97. 87
1. 0060 2. 2580 4. 0551 99. 53
1. 0040 2. 2580 4. 0367 98. 87
1. 0090 2. 2580 4. 0612 99. 56
熊果酸 1. 0080 3. 4710 6. 9391 102. 09 100. 97 1. 28
1. 0040 3. 4710 6. 8619 100. 25
1. 0030 3. 4710 6. 8409 99. 74
1. 0060 3. 4710 6. 9321 102. 08
1. 0040 3. 4710 6. 8339 99. 44
1. 0090 3. 4710 6. 9461 102. 19
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表 2 不同产地红根草中齐墩果酸
和熊果酸的含量(%，n =2)
来源 齐墩果酸 熊果酸
广东清远 0. 1549 0. 3401
广西永福 0. 1743 0. 2985
福建福州 0. 1470 0. 2374
贵州贵阳 0. 1278 0. 2469
广西梧州 0. 1346 0. 1998
3. 3 在定性鉴别中，因齐墩果酸与熊果酸属于甲
基位置异构的五环三萜类化合物，在常规 TLC 展开
下，二者的比移值几乎相同，参考文献〔4〕方法，采用
含 1%碘的二氯甲烷溶液进行原位预处理后再展
开，齐墩果酸的比移值明显增大，能实现二者分离检
测。
3. 4 在定量分析时，文献多选择梯度洗脱、流动相
加酸等方式，改善齐墩果酸和熊果酸同分异构体分
离度〔5〕。本文借鉴 2010 年版中国药典积雪草标准
项下同分异构体的测定方法〔6〕，采用在流动相中添
加 β-CD，实现了红根草中齐墩果酸和熊果酸较好的
分离测定，具有简便、快速的特点。
参 考 文 献
［1］广西壮族自治区食品药品监督管理局 . 广西壮族自治
区壮药质量标准［S］．第二卷 . 南宁:广西科学技术出
版社，2011:141.
［2］邹节明，钟小清，吕高荣，等 . 广西特色中草药资源选编
［M］．北京:科学出版社，2011:860-862.
［3］李彩莲，冯锋 . 熊果酸衍生物构效关系研究进展［J］．
药学进展，2011，35(1):23-29.
［4］严华，张聿梅，林瑞超 . 原位预处理-薄层扫描法同时测
定女贞子中熊果酸与齐墩果酸的含量［J］．药物分析杂
志，2009，29(7):1107-1110.
［5］张桥，沈娟，柳于介，等 . 高效液相色谱法测定中药凌霄
花中麦角甾苷、齐墩果酸和熊果酸含量［J］． 中国中药
杂志，2011，36(8):1043-1045.
［6］国家药典委员会 . 中华人民共和国药典［S］．一部 . 北
京:中国医药科技出版社，2010:266-267.
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