全 文 ：·质量分析研究·
紫锥花及其制剂中苣菊酸的薄层扫描含量测定
黄劲梅 , 谢培山 (广州市药品检验所 , 广州 510120)
摘要:目的 采用薄层色谱扫描法测定紫锥花药材 、 紫锥花干浸膏及其制剂施保利通口服液 (Esberitox N)中指
标成分苣菊酸 (Cichoric acid)的含量 , 为了考察不同色谱法定量测定的相关性 , 与高效液相色谱法测得的结果
进行比较。方法 样品经预处理后点于硅胶 60 F254 预制板上 , 以甲苯-醋酸乙酯-甲酸 (5∶4∶1)为展开剂 ,
于 328 nm波长处进行吸收扫描 , 用两点校正法测定 , 所得结果与 HPLC 测得的结果比较。结果 此方法的平均
回收率为 100.2%,最低检测限为 0.16μg 。结论 TLCS 法与 HPLC法比较 , 测定结果相关性良好。薄层扫描法和
高效液相色谱法是互为补充的两种不同体系的色谱法 , 薄层色谱法用于天然药物的分析 , 简便快捷 , 同板同时
可获得多达 12 份以上的样品数据。
关键词:@施保利通口服液/化学;@紫锥花/化学;@苣菊酸/分析;色谱法 , 薄层;色谱法 , 高压液相
中图分类号:R284.1 　　　文献标识码:A　　　文章编号:1003-9783 (2002)01-0033-03
　　紫锥花 (Radix Echinacea purpurea)是欧洲常用
的一种传统药材 , 主要含有苣菊酸 、绿原酸 、咖啡
酸衍生物和烷基酰胺类 , 苣菊酸是其特征成分[ 1] 。
施保利通口服液 (Esberitox N)是由德国 Schaper &
Brummer 药厂生产的一种免疫调节剂 , 处方中主要
含有赝靛 、紫锥花和侧柏叶。本文建立了苣菊酸的
薄层色谱扫描含量测定法 , 经方法学验证 , 方法可
行 , 并根据测得的结果与高效液相色谱法进行了比
较。
1　材料与方法
1.1 　仪器与试药 　薄层扫描仪:瑞士 CAMAG
Scanner 3+CATS 4.04;定量毛细管:美国 Drummond
公司;薄层板:硅胶 60F254 预制板 (Merck);高
效液相色谱仪:美国 HP1100 及 Chemstation 软件;
苣菊酸 (Cichoric acid)对照品 、 紫锥花 (批号
E01117 、 E00580)、 紫锥花干浸膏 (批号 950874 、
951016)、施保利通口服液样品 (共 3 批 , 批号
516161 、 515304 、 512634)均 由 德国 Schaper &
Brummer 药厂提供 。所用试剂均为分析纯。
1.2　紫锥花药材供试品溶液制备　精密称取紫锥
花药材粗粉 150 mg , 加入甲醇-水 (65∶35)混合
液于水浴上回流 3次 , 每次 40 mL , 30 min , 滤过 ,
合并滤液于 80℃水浴上蒸干 , 残渣用甲醇 -水
(65∶35)混合液溶解并定容至 5 mL , 作为紫锥花
药材供试品溶液。
1.3　紫锥花干浸膏供试品溶液制备　精密称取紫
锥花干浸膏 150 mg , 加入甲醇-水 (65∶35)混合
液于水浴上回流 3次 , 每次 40 mL , 30 min , 滤过 ,
合并滤液于 80℃水浴上蒸干 , 残渣用甲醇 -水
(65∶35)混合液溶解并定容至 5 mL , 精密吸取 2
mL , 于 80℃水浴上蒸干 , 残渣用水 5 mL 溶解 , 上
C18预处理柱 , 用 10%甲醇 20 mL 洗脱 , 收集洗脱
液于 80℃水浴上蒸干 , 残渣用甲醇-水 (65∶35)
溶解并定容至 5 mL , 作为紫锥花干浸膏供试品溶
液 。
1.4　施保利通口服液供试品溶液的制备　精密吸
取施保利通口服液 10 mL , 放于分液漏斗中 , 加水
30 mL 混匀 , 用稀盐酸调至溶液 pH 为 3 ～ 4 , 用水
饱和醋酸乙酯萃取 4 次 , 每次 30 mL , 合并醋酸乙
酯萃取液 , 用醋酸乙酯饱和水洗 2 次 , 每次 20 mL ,
弃去水洗液 , 醋酸乙酯液于 80℃水浴上蒸至近干 ,
收稿日期:2001-09-20
作者简介:黄劲梅 (1969-), 女 , 主管药师 , 主要从事中药质量标准的研究。
·33·中药新药与临床药理 2002年 1月第 13 卷第 1期
加入硅胶拌样 , 于干燥器中放置过夜 , 上已装好的
硅胶柱上 (100 ～ 160 目 , 105℃活化 1 h , 4 g , 内
径 1.5cm), 分别用醋酸乙酯 -甲醇 (95∶5)50
mL , 醋酸乙酯-甲醇 (3∶7)70 mL 洗脱 , 收集醋
酸乙酯-甲醇 (3∶7)洗脱液于 80℃水浴上蒸干 ,
残渣用甲醇-水 (65∶35)溶解并定容至 5 mL , 作
为供试品溶液。
1.5　苣菊酸对照品溶液的制备　精密称取苣菊酸
对照品约 4 mg , 放于 20 mL 量瓶中 , 加甲醇溶解
并稀释至刻度 , 摇匀 , 作为对照品溶液 。
1.6　测定方法　精密吸取供试品溶液 (A)2 μL
共 12 份 , 苣菊酸对照品溶液 (S)1 μL 和 3 μL 为
1 组 , 共 3 组 , 分别交叉点于同一硅胶 60 F 254 预
制板上 , 顺序为 S 1;S 2;A;A;A;A;S 1;S
2;A;A;A;A;S 1;S 2;A;A;A;A , 以甲
苯-醋酸乙酯-甲酸(5∶4∶1)为展开剂 ,展开 ,取出 ,
晾干 ,于 328 nm 波长处进行吸收扫描 ,根据供试品
和对照品的吸收峰面积值进行计算 ,即得。
2　实验部分
2.1　标准曲线制定　定量吸取苣菊酸对照品溶液
(0.4mg/mL)0.5 ,1.0 ,1.5 ,2.0 , 2.5 ,3.0μL , 点于同
一薄层板上 , 按测定方法操作 , 扫描 , 线性回归得
标准曲线:Y=2024.3 X+340.34 , r=0.9994 ,线性
范围:0.16 ～ 0.8μg 。
2.2　回收试验　精密称取苣菊酸 2.96mg 于 10 mL
容量瓶中 , 加入甲醇溶解并稀释至刻度 , 作为对照
品溶液 。另精密吸取施保利通口服液 5 mL , 精密
加入对照品溶液 1 mL , 再加入水 30 mL 稀释 , 余
下操作按施保利通口服液供试品溶液的制备方法 ,
制得供试品溶液 。吸取对照品溶液 1 μL 、 3μL 和
供试品溶液 2 μL 交叉点于同一硅胶 60 F 254 预制
板上 , 按测定法操作 , 计算 , 结果见表 1。平均回
收率为 100.2%,RSD=4.1%。
2.3　重复性试验　取施保利通口服液样品 (批号:
516161)按上述测定方法进行 6次测定 , 结果分别
为:0.079 ,0.074 ,0.081 ,0.079 ,0.080 , 0.079mg/mL ,
RSD=2.8%,证明重现性较好。
2.4　精密度考察　定量吸取供试品溶液点于薄层
板上 , 按测定法对 7 个点进行扫描测定 , 其峰面积
积分值分别为:665.3 , 639.8 , 636.8 , 676.3 , 648.9 ,
653.3 ,620.0 ,RSD=2.9%,说明精密度良好。
表 1　加样回收试验结果
样品含量
/mg
加入对照品
的量/mg
实际测得
的量/mg
对照品回
收量/mg
回收率
/ %
0.395 0.296 0.694 0.299 　101.0
0.395 0.296 0.671 0.276 93.2
0.395 0.296 0.694 0.299 101.0
0.395 0.296 0.688 0.293 99.0
0.395 0.296 0.695 0.300 101.4
0.395 0.296 0.708 0.313 105.7
2.5　稳定性试验　定量吸取供试品溶液点于薄层
板上 , 按测定法分别在不同的时间 (0 , 1 , 3 , 5
h)扫描测定 , 其峰 面积值 分别为:1280.4 ,
1038.4 ,923.4 ,941.0 ,810.9 ,由上述数据可知 , 苣菊
酸在放置 1 h后测定 , 其峰面积值减小 , 放置的时
间越长峰面积值越小 , 所以 , 薄层板挥干后应马上
扫描测定。
2.6　样品测定　取紫锥菊药材 、紫锥菊干浸膏和
施保利通口服液样品 , 按测定法进行测定 , 结果见
表 2。
表 2　TLCS 法测定结果
样品 紫锥花药材/% 紫锥花干浸膏/ % 施保利通口服液/(mg·mL-1)
批号 E01117 E00580 9508740 951016 516161 515304 512634
结果 1.91 1.86 0.43 0.82 0.079 0.087 0.076
　　从上述结果可以看出 , 紫锥花干浸膏的含量差
异较大 , 紫锥花药材和施保利通口服液的含量较稳
定 。
2.7　与高效液相色谱法测定结果的比较　为了进
一步验证薄层色谱扫描法对测定苣菊酸的可靠性 ,
与 HPLC 方法测定结果进行了比较 。HPLC 色谱条
件为:色谱柱为 HP Zorbax SB-CN 柱 (粒度 5μm ,
4.6×250 mm), 以乙腈 -0.005mol/L 磷酸 (1∶1)
为移动相 , 流速为 1 mL/min , 柱温为 40℃, 检测
波长为 328 nm , 理论塔板数以苣菊酸计算为 3000。
照上述 HPLC 实验条件 , 用薄层扫描法项下的供试
品溶液和对照品溶液进行测定 , 测定结果见表 3。
表 3　HPLC 法测定结果
样品 紫锥花药材/% 紫锥花干浸膏/ % 施保利通口服液/(mg·mL-1)
批号 E01117 E00580 9508740 951016 516161 515304 512634
结果 1.84 1.79 0.47 0.81 0.081 0.089 0.077
·34· 中药新药与临床药理 2002年 1 月第 13卷第 1期
3　讨论
3.1　紫锥花 (Echinacea Radix)是欧洲常用的一种
传统药材 , 具有免疫调节作用[ 2] , 它分为 3 个不
同的种:E.Angustifolia radix 、 E.Pallida radix和 E.
Purpurea radix , 不同种的紫锥花所含的成分有差别 。
紫锥苷 (echinacoside)是 E.Angustifolia radix 和 E.
Pallida radix 的特征成分 , 存在于 E.Angustifolia
radix 中的是去葡萄糖苷 (Desglucosyl -echinaco-
side), 并含有洋蓟酸 (Cynarin), 存在于 E.Pallida
radix 中的是去鼠李糖苷 (Desrhamnosyl-echinaco-
side), 不含洋蓟酸 , 这两种药材中所含的苣菊酸
(Cichoric acid)非常少。而苣菊酸是 E.Purpurea
radix 的主要成分 , E.Purpurea radix 中不含紫锥
苷[ 1] 。施保利通口服液所用的原料药材是 E.Pur-
purea radix , 所以通过测定苣菊酸的含量能达到控
制样品质量的目的。
3.2　供试品溶液的制备:施保利通口服液样品中
除紫锥花外还含有赝靛和侧柏叶 , 所以样品的醋酸
乙酯提取液要通过一硅胶柱 , 用不同比例的醋酸乙
酯-甲醇混合液洗脱 , 将干扰成分去除 。
3.3　薄层色谱的展开条件及检测波长:曾试用氯
仿-丙酮-甲酸 (5∶2∶0.7)为展开剂 , 但展开剂
中的氯仿易引起边缘效应 , 并且使斑点扩散 。最后
将展开剂改为甲苯-醋酸乙酯-甲酸 (5∶4∶1), 苣
菊酸斑点较为集中清晰 (图 1)。薄层色谱图及扫
描图均显示苣菊酸的分离度符合定量测定要求 (图
2), 经原位光密度扫描 , 供试品斑点和对照品斑点
的光谱曲线基本重合 , 证明无其它杂质的干扰 (图
3)。
图 1　紫锥花薄层色谱图
注:样品 1 , 2 , 7 , 8 , 13 , 14 为苣菊酸
样品 3～ 6 , 9～ 12 , 15～ 18为紫锥花
3.4　将 HPLC 法测定结果 (表 3)与 TLCS 法测定
结果 (表 2)比较 , 可以看出 , 薄层色谱扫描法和
高效液相色谱法的测定结果基本一致。目前的趋势
似乎含量测定非 HPLC 莫属 , 实际上 , TLCS 和
HPLC 是互为补充的两种不同体系的色谱定量方
法 , 薄层色谱法用于天然药物的分析 , 简便快捷 ,
同板同时检测多达 12 份样品数据 , 尤其适合无须
化学衍生即直接扫描 (吸收或荧光)的样品的含量
测定。从以上的测定结果证明了薄层扫描法用于苣
菊酸测定完全符合定量要求 。
图 2　紫锥花和苣菊酸光谱图
1.紫锥花　　2.苣菊酸
图 3　紫锥花和苣菊酸薄层扫描图
1.紫锥花　　2.苣菊酸
参考文献:
[ 1] Wanger H., Bladt S., Zgainski.E.M.Plant Drug Analysis [ M] .
Springer Verlng , 2nd ED , 242-245.
[ 2] Egert D., Bodinet C., Beuscher N.Adaption of an ELISA of Im-
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Bapti sia and Echinacea for Quality Control [ J] .Planta Medica , 1989 ,
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·35·中药新药与临床药理 2002年 1月第 13 卷第 1期