全 文 ：2015 年 1 月 Ｖｏｌ． 33 Ｎｏ． 1
Ｊａｎｕａｒｙ 2015 Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ 84 ～ 89
技术与应用 ＤＯＩ：10． 3724 ／ ＳＰ． Ｊ． 1123． 2014． 09033
* 通讯联系人． Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｕｒｙ＠ ｓｉｎａ． ｃｏｍ．
基金项目：国家自然科学基金项目（21365018）；新疆生产建设兵团科技攻关项目（2011ＡＢ030）；新疆生产建设兵团塔里木盆地生物
资源保护利用重点实验室开放课题（ＢＲＹＢ1404）．
收稿日期：2014－09－22
循环制备液相色谱分离芳香新塔花中的化学成分
李国柱， 孟庆艳， 罗 碧， 葛振红， 刘文杰*
（塔里木大学生命科学学院，新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护
利用重点实验室，新疆 阿拉尔 843300）
摘要：建立了交替循环和直接循环液相色谱相结合的方法用于制备芳香新塔花中的化学成分。芳香新塔花样品经
溶剂提取、柱色谱和中压制备色谱初步分离后得到芳香新塔花的不同馏分。以甲醇－水为流动相，利用双柱交替循
环法对组分进行分离，同时，流动相经恒流泵循环输入色谱柱。以馏分Ⅰ和馏分Ⅱ为例，在混合循环模式下分离得
到 5 个化合物。通过核磁共振对其进行鉴定，确定分别为乔松素－7－Ｏ－芸香糖苷、白杨素－7－Ｏ－芸香糖苷、金合欢素－
7－Ｏ－芸香糖苷、云杉素和原儿茶酸。实验结果表明，该制备方法分离效率高，节省流动相，是分离天然产物的有效
手段。
关键词：交替循环；直接循环；制备色谱；化学成分；芳香新塔花
中图分类号：Ｏ658 文献标识码：Ａ 文章编号：1000－8713（2015）01－0084－06
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ ｆｒｏｍ Ｚｉｚｉｐｈｏｒａ
ｃｌｉｎｏｐｏｄｉｏｉｄｅｓ Ｌａｍ． ｗｉｔｈ ｒｅｃｙｃｌｉｎｇ ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ
ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ＬＩ Ｇｕｏｚｈｕ，ＭＥＮＧ Ｑｉｎｇｙａｎ，ＬＵＯ Ｂｉ，ＧＥ Ｚｈｅｎｈｏｎｇ，ＬＩＵ Ｗｅｎｊｉｅ*
（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｔａｒｉｍ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ＆ Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｉｎ Ｔａｒｉｍ Ｂａｓｉｎ ｏｆ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ Ｃｏｒｐｓ，Ａｌａｒ 843300，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｔｅｒｎａｔｅ ｒｅｃｙｃｌｉｎｇ ａｎｄ ｄｉｒｅｃｔ ｒｅｃｙｃｌｉｎｇ ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ ｆｒｏｍ Ｚｉｚｉｐｈｏｒａ ｃｌｉｎｏｐｏｄｉｏｉｄｅｓ Ｌａｍ． Ｔｈｅ
ｃｒｕｄｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ Ｚｉｚｉｐｈｏｒａ ｃｌｉｎｏｐｏｄｉｏｉｄｅｓ Ｌａｍ． ｂｙ ｓｏｌｖｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｃｏｌｕｍｎ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａ－
ｐｈｙ ａｎｄ ｒｅｖｅｒｓｅｄ－ｐｈａｓｅ （ＲＰ）ｆｌａｓｈ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ． Ａｌｌ ｔｈｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｗｉｔｈ ｍｅｔｈａｎｏｌ
ａｎｄ ｗａｔｅｒ ａｓ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｒｅｃｙｃｌｉｎｇ ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｗｉｔｈ ｔｗｉｎ ＲＰ ｃｏｌ－
ｕｍｎｓ ｓｗｉｔｃｈｅｄ ｂｙ ａ ｔｗｏ－ｐｏｓｉｔｉｏｎ ｔｅｎ－ｗａｙ ｖａｌｖｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｗａｓ ｒｅｃｙｃｌｅｄ ｉｎ
ｃｌｏｓｅ ｌｏｏｐ ｗｉｔｈ ａ ｔｗｏ－ｐｏｓｉｔｉｏｎ ｓｉｘ－ｗａｙ ｖａｌｖｅ． Ｔｈｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ Ⅰ ａｎｄ ｆｒａｃｔｉｏｎ Ⅱ ｆｒｏｍ ｒｅｖｅｒｓｅｄ－ｐｈａｓｅ ｆｌａｓｈ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｐｏｗｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｐｏｓｅｄ ｐｒｏｔｏｃｏｌ，ａｎｄ
ｆｉｖｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ Ｚｉｚｉｐｈｏｒａ ｃｌｉｎｏｐｏｄｉｏｉｄｅｓ Ｌａｍ． Ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｉｖｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎ－
ｔｉｆｉｅｄ ａｓ ｐｉｎｏｃｅｍｂｒｉｎ－7－Ｏ－ｒｕｔｉｎｏｓｉｄｅ，ｐｉｎｏｃｅｍｂｒｉｎ－7－Ｏ－ｒｕｔｉｎｏｓｉｄｅ，ａｃａｃｅｔｉｎ－7－Ｏ－ｒｕｔｉｎｏｓｉｄｅ，ｐｉｃｅｉｎ ａｎｄ
ｐｒｏｔｏｃａｔｅｃｈｕｉｃ ａｃｉｄ ｗｉｔｈ ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ （ＮＭＲ）． Ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ
ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ ｈｉｇｈｅｒ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｗｉｔｈ ｌｅｓｓ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｕｓｅｄ ｔｈａｎ ｔｈｅ
ｒｅｐｏｒｔｅｄ ｍｅｔｈｏｄｓ，ａｎｄ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｅｘｐｅｃｔｅｄ ａｓ ａｎ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｐｌｅｘ ｎａｔｕｒａｌ
ｐｒｏｄｕｃｔｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｔｈｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｗｉｔｈ ｓｉｍｉｌａｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ａｌｔｅｒｎａｔｅ ｒｅｃｙｃｌｉｎｇ；ｄｉｒｅｃｔ ｒｅｃｙｃｌｉｎｇ；ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｏｎｓｔｉｔｕ－
ｅｎｔｓ；Ｚｉｚｉｐｈｏｒａ ｃｌｉｎｏｐｏｄｉｏｉｄｅｓ Ｌａｍ．
第 1 期 李国柱，等：循环制备液相色谱分离芳香新塔花中的化学成分
芳香新塔花为唇形科（Ｌａｍｉａｃｅａｅ）新塔花属
（Ｚｉｚｉｐｈｏｒａ）植物（Ｚｉｚｉｐｈｏｒａ ｃｌｉｎｏｐｏｄｉｏｉｄｅｓ Ｌａｍ．）干燥地
上部分，其主要药理作用为治疗高血压、心脏病、哮
喘多汗、咳嗽、水肿、支气管、肺脓疡和其他疾病。有
关芳香新塔花的化学成分研究国内外都有报道。国
外学者的研究主要集中在芳香新塔花挥发油的成分
及药理作用［1，2］；国内学者对芳香新塔花挥发油及
全草的化学成分均有研究［3－5］。化学成分研究表
明，芳香新塔花全草中的主要化学成分为挥发油、黄
酮、生物碱、维生素、有机酸、苷类等。但芳香新塔花
的化学成分研究尚不深入，其物质基础还没有充分
进行研究。
天然产物研究中常见的分离纯化方法有常规柱
色谱法、制备高效液相色谱法、高速逆流色谱法等。
但是对于天然产物中的许多化合物，包括对映体、非
对映体、异构体或者结构相似保留时间非常相近的
化合物，很难用上述方法从复杂的混合组分中直接
分离得到［6－10］。循环制备液相色谱作为一种快速发
展的技术，可用于分离天然产物中的复杂组分。该
制备系统通过连续的循环操作方式实现模拟长柱的
色谱分离效果，获得了比传统长色谱柱更高的分
离效率［11］。
在液相色谱的发展过程中，再循环技术在改进
凝胶色谱低柱容量上首先得到应用［12］。根据再循
环的方式不同，循环制备液相色谱主要分为交替循
环液相色谱和直接循环液相色谱两种。交替循环由
两根色谱柱和一个切换阀组成，通过阀的切换将分
离组分交替循环输入两根相同的色谱柱，以连续的
循环操作方式达到预期的分离效果。直接循环由一
根色谱柱和一个切换阀组成，通过控制阀的切换将
溶剂和分离组分循环输入同一色谱柱反复进行分
离，以实现化合物的分离纯化。Ｌａｎ 等［13］利用双柱
交替循环制备分离结构相似的化合物。Ａｌｌｅｙ 等［14］
利用双柱交替循环液相色谱从糖复合物中分离纯化
结构具有细微差异的同分异构体，分离出结构非常
相近的麦芽三糖和异麦芽三糖。Ｓｉｄａｎａ 等［15］利用
直接循环液相色谱分离出松三糖，其纯度达到
94. 7％。Ｓｉｄａｎａ等［16］利用直接循环液相色谱从斜脉
桉的叶子中分离出同分异构体 ｅｕｇｌｏｂａｌ Ａ 和 ｅｕｇｌｏ－
ｂａｌ Ｂ。Ｎａｋａｔｓｕ等［17］利用直接循环液相色谱从 Ｅｓ－
ｅｎｂｅｃｋｉａ ｌｅｉｏｃａｒｐａ 的叶子中分离出两种喹啉酮类生物
碱，分别是 ｌｅｉｏｋｉｎｉｎｅ Ａ和 ｌｅｉｏｋｉｎｉｎｅ Ｂ。
直接循环法分离天然产物中的化学成分，其优
点是只使用一根色谱柱，而且节省溶剂。但在分离
过程中，检测器、管路和恒流泵均参与了再循环过
程，为了减少色谱柱外的混合，恒流泵的泵头柱塞体
积不能太大，同时，恒流泵输液流速需较低，因而采
用直接循环模式分离时间较长，效率低，循环的次数
有限，不能充分利用色谱柱的分离能力。双柱交替
循环法分离天然产物中的化学成分时，整个分离过
程在色谱柱中进行，柱外混合程度较低，而且可以使
用较高的溶剂流速，分离效率比单柱直接循环法高。
但是，由于溶剂不参与循环过程，在分离的组分结构
比较相近，循环次数较多时，需要消耗大量的
流动相。
本文构建了交替循环和直接循环液相色谱相结
合的方法，以二位十通切换阀实现分离的组分在两
根色谱柱内循环分离，同时，流动相通过六通阀进行
切换参与循环。建立的系统可由 3 种方式对复杂样
品进行单独分离纯化，包括交替循环液相色谱、直接
循环液相色谱以及交替循环和直接循环液相色谱联
用分离方式。交替循环和直接循环液相色谱联用的
方法与单独的交替循环或直接循环液相色谱相比，
操作灵活，克服了单一使用时的缺点，对复杂样品的
分离既可以节省溶剂，又能提高化合物的分离效率。
以芳香新塔花中极性相似，保留时间相近的几种化
合物的混合馏分为例，利用建立的方法对其进行分
离纯化，对天然产物复杂样品的分离纯化有一定的
借鉴意义。
1 实验部分
1．1 仪器、试剂与材料
分析型仪器：岛津 ＬＣ－20ＡＴ型高效液相色谱仪
（日本岛津公司），配有 ＬＣ－20ＡＴ 二元梯度泵、ＳＰＤ－
Ｍ20Ａ紫外检测器、柱温箱和自动进样器。
制备型仪器：ＳＴＩ 501 型液相色谱仪（杭州赛智
科技有限公司），配有高压输液泵、ＵＶ－501 检测器、
7725ｉ进样阀；Ｒｈｅｏｄｙｎｅ ＴｉａｎＭＸ 二位十通阀（美国
Ｒｈｅｏｄｙｎｅ公司）；8725ｉ 二位六通阀（美国 Ｒｈｅｏｄ－
ｙｎｅ公司）；中压制备液相色谱系统（瑞士步琪有限公
司），配有 Ｃ－605型二元梯度液相泵、Ｃ－640 型紫外检
测器、Ｃ－620型控制单元、Ｃ－660 型馏分收集器、进样
单元、Ｃ－690型玻璃色谱柱（230 ｍｍ×36 ｍｍ）。
样品浓缩仪器：ＲＥ－2008Ｂ 旋转蒸发仪（上海瑞
兹机电设备有限公司）；真空冷冻浓缩仪（潍坊三水
检验设备有限公司）。
试剂：分析纯甲醇、氯仿（天津市致远化学试剂
有限公司）；色谱级甲醇（美国 Ｓｉｇｍａ公司）；Ｍｉｌｌｉ－Ｑ
超纯水系统（美国Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司）。
材料：芳香新塔花药材采自新疆昌吉州木垒县
·58·
色 谱 第 33 卷
龙王庙水库（北纬 Ｎ43° 47′28. 92″，东经 Ｅ90° 16′
11. 62″），经西南民族大学民族药物研究所刘圆教授
鉴定为唇形科新塔花属植物 Ｚ． ｃｌｉｎｏｐｏｄｉｏｉｄｅｓ Ｌａｍ．的
干燥地上部分；柱层析硅胶（200 ～ 400 目，上海盛亚
化工有限公司）；玻璃色谱柱反相 Ｃ18 填料（50 μｍ，
日本 ＹＭＣ 公司）；Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ （250 ｍｍ ×4. 6
ｍｍ，5 μｍ）和Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ （250 ｍｍ×19 ｍｍ，5
μｍ）色谱柱（美国Ｗａｔｅｒｓ公司）。
1．2 实验方法
1．2．1 样品制备
称取芳香新塔花全草 6. 0 ｋｇ，用 70％ （ｖ ／ ｖ）乙
醇浸提 3 次，每次 48 ｈ，抽滤合并滤液，浓缩干燥得
粗提物。粗提物经硅胶柱（100. 0 ｃｍ×7. 0 ｃｍ）分
离，以氯仿－甲醇（100 ∶1、100 ∶10、100 ∶50、100 ∶100，
如无特殊说明均为体积比）和甲醇梯度洗脱，每段
洗脱 3 个柱体积（ＢＶ）。将所得的氯仿－甲醇（100 ∶
10）洗脱组分经中压柱色谱分离，以甲醇－水（10 ∶90、
30 ∶70、60 ∶40）梯度洗脱，流速为 20 ｍＬ ／ ｍｉｎ，每段
洗脱 750 ｍＬ。经 ＨＰＬＣ检测，甲醇－水（10 ∶90）馏分
中各成分之间的分离度都比较好，经高效制备液相
色谱可得到很好的分离；甲醇－水（60 ∶40）馏分中主
要成分为保留时间非常相近的化合物，经常规柱色
谱或高效制备液相色谱很难得到很好的分离，将其
作为馏分Ⅰ；甲醇－水（30 ∶70）馏分中含有多种主要
成分，经高效制备液相色谱分离得到单体化合物和
一种由两个极性相近化合物组成的混合物，将该混
合物作为馏分Ⅱ。以馏分Ⅰ和馏分Ⅱ为例，利用建
立的混合循环模式制备 ＨＰＬＣ分离。
1．2．2 色谱条件
分析型色谱条件：色谱柱为 Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ
（250 ｍｍ×4. 6 ｍｍ，5 μｍ）；流速为 1 ｍＬ ／ ｍｉｎ；温
度为 40 ℃；检测波长为 267 ｎｍ；进样浓度为 1 ｇ ／ Ｌ；
进样量为 20 μＬ。馏分Ⅰ，流动相为甲醇－水（65 ∶
35），等度洗脱 10 ｍｉｎ；馏分Ⅱ，流动相为甲醇－水（30
∶70），等度洗脱 10 ｍｉｎ。
循环制备色谱条件：色谱柱为 Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ
（250 ｍｍ×19 ｍｍ，5 μｍ）；流速为 15 ｍＬ ／ ｍｉｎ；进
样量为 1 000 μＬ，样品质量浓度为 100 ｇ ／ Ｌ；其余与
分析型色谱条件相同。
2 结果与讨论
2． 1 交替循环和直接循环液相色谱联用方法
的建立
本文建立的交替循环和直接循环液相色谱联用
方法如图 1 所示。图 1 中 Ａ－Ｄ 和 Ｃ－Ｄ 分别为该制
备系统的直接循环模式的开路和循环状态；Ａ 状态
固定，系统处于独立交替循环模式，Ｂ 和 Ｄ 分别为
交替循环的两个状态；通过六通阀的切换（Ａ 或 Ｃ）
和十通阀的切换（Ｂ 或 Ｄ）实现直接循环和交替循
环混合模式。具体操作顺序如下：ａ． 在进样前制备
系统处于 Ａ－Ｂ状态，样品完全进入色谱柱 1 分离后
进入检测器，通过观察峰信号确定待分离组分已完
全通过色谱柱 1 进入色谱柱 2 时，切换十通阀到 Ａ－
Ｄ状态。ｂ．样品经过色谱柱 2 后直接流入色谱柱
1，再次分离后进入检测器；观察峰信号，待需要的组
分将要响应时，切换十通阀至 Ａ－Ｂ 状态。通过二位
十通阀的切换，去除杂质，只保留目标组分，最终系
统位于 Ａ－Ｄ状态。ｃ．切换六通阀至 Ｃ－Ｄ状态，目标
组分与流动相依次经过色谱柱 2 和色谱柱 1，同时
参与循环；观察峰信号，待目标组分中某化合物达到
完全分离后切换到 Ａ－Ｄ 状态。ｄ． 收集已完全分离
的馏分，将未完全分离的混合组分再次进入直接循
环状态，连续操作直至所有化合物完全分离，观察峰
信号依次收集所有馏分。
图 1 交替循环和直接循环液相色谱系统分离示意图
Ｆｉｇ． 1 Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ ｄｉａｇｒａｍｓ ｏｆ ａｌｔｅｒｎａｔｅ ｒｅｃｙｃｌｉｎｇ
ａｎｄ ｄｉｒｅｃｔ ｒｅｃｙｃｌｉｎｇ ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ｌｉｑｕｉｄ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
Ａ． Ｔｈｅ ｓｉｘ－ｗａｙ ｖａｌｖｅ ｉｎ ｔｈｅ ｌｏａｄ ｐｏｓｉｔｉｏｎ；Ｂ． ｓａｍｐｌｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｅｎ－
ｗａｙ ｖａｌｖｅ ｉｎｔｏ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｏｌｕｍｎ 1，ｔｈｅｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｄｅｔｅｃｔｏｒ ａｎｄ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｏｌｕｍｎ 2；Ｃ． ｔｈｅ ｓｉｘ－ｗａｙ ｖａｌｖｅ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｊｅｃｔ ｐｏｓｉ－
ｔｉｏｎ；Ｄ． ｓａｍｐｌｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｅｎ－ｗａｙ ｖａｌｖｅ ｉｎｔｏ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｏｌｕｍｎ
2，ｔｈｅｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｃｏｌｕｍｎ 1 ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｏｒ．
2．2 馏分Ⅰ和馏分Ⅱ在混合循环模式制备液相色
谱条件下的分离
馏分Ⅰ的 ＨＰＬＣ分析谱图如图 2ａ所示，可以看
出，该组分用普通分析柱难以分离。按照 2. 1 节所
·68·
第 1 期 李国柱，等：循环制备液相色谱分离芳香新塔花中的化学成分
述方法步骤，色谱柱用流动相平衡后，在进样前，该
制备系统处于 Ａ－Ｂ 状态。通过进样阀进样后当样
品完全进入色谱柱 1 时，二位十通阀切换到 Ａ－Ｄ 状
态。经条件摸索，样品首次通过色谱柱 1 保留时间
为 9 ｍｉｎ时不收集组分，去除目标组分前面的杂质
图 2 馏分Ⅰ的（ａ）液相色谱分析谱图和（ｂ）循环制备色谱图
Ｆｉｇ． 2 （ａ）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ａｎｄ （ｂ）ｒｅｃｙｃｌｉｎｇ ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ
ＨＰＬＣ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｆｒａｃｔｉｏｎ Ⅰ
Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｃｏｌｕｍｎ：Ｘｂｒｉｄｇｅ （250 ｍｍ×4. 6 ｍｍ，5 μｍ）；ｆｌｏｗ
ｒａｔｅ：1 ｍＬ ／ ｍｉｎ． Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ｃｏｌｕｍｎ：Ｘｂｒｉｄｇｅ （250 ｍｍ×19 ｍｍ，
10 μｍ）；ｆｌｏｗ ｒａｔｅ：15 ｍＬ ／ ｍｉｎ． Ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅｓ：ｍｅｔｈａｎｏｌ （Ｂ）ａｎｄ
ｗａｔｅｒ （Ａ）． Ｉｓｏｃｒａｔｉｃ ｅｌｕｔｉｏｎ：65％ Ｂ ｆｏｒ 90 ｍｉｎ． Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅ－
ｌｅｎｇｔｈ：267 ｎｍ． Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｖｏｌｕｍｅ：1000 μＬ． Ｓａｍｐｌｅ ｍａｓｓ ｃｏｎｃｅｎ－
ｔｒａｔｉｏｎ：100 ｇ ／ Ｌ．
峰后立刻切换到 Ａ－Ｂ 状态。目标组分完全进入色
谱柱 2，保留时间为 13 ｍｉｎ时，通过二位十通阀再次
切换到 Ａ－Ｄ状态，去除目标组分后面的杂质峰。保
留时间为 26 ｍｉｎ时，收集目标组分的第一个单体化
合物（ＦＴ－1），收集完后立刻切换到 Ａ－Ｂ状态。保留
时间为 34 ｍｉｎ时，再次切换到 Ａ－Ｄ状态。此时切换
六通阀至 Ｃ状态，该制备系统处于 Ｃ－Ｄ 状态，目标
组分和流动相进行直接循环。当目标组分中有达到
完全分离的馏分时，将六通阀状态由 Ｃ切换至 Ａ处
于 Ａ－Ｄ状态，收集完分离完全的组分时，再切换到
Ｃ－Ｄ状态，即收集组分时，制备系统处于开路状态，
收集完组分时待分离组分和流动相处于循环状态。
连续操作，当保留时间为 52 ｍｉｎ 和 83 ｍｉｎ 时，分别
收集第二个（ＦＴ－2）和第三个单体化合物（ＦＴ－3），总
运行时间为 86 ｍｉｎ，制备色谱图如图 2ｂ所示。根据
直接循环系统开路与循环的时间，与交替循环法相
比，节约流动相约 60％。建立的混合模式制备液相
色谱流动相参与循环时，样品组分结构越相近，循环
次数越多，流动相节省比例越大。
采取同样的方法用于馏分Ⅱ中化合物的分离纯
化。在保留时间为 23 ｍｉｎ时，该制备系统进行直接
循环，样品和流动相参与循环。在保留时间为 51
ｍｉｎ和 64 ｍｉｎ 时，分别收集两个单体化合物（ＦＴ－4
和 ＦＴ－5），总运行时间为 68 ｍｉｎ，液相色谱分析谱图
和制备色谱图如图 3ａ和 3ｂ所示。与交替循环法相
比，节约流动相约 66％。
图 3 馏分Ⅱ的（ａ）液相色谱分析谱图和（ｂ）循环制备色谱图
Ｆｉｇ． 3 （ａ）Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ａｎｄ （ｂ）ｒｅｃｙｃｌｉｎｇ ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ
ＨＰＬＣ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｆｒａｃｔｉｏｎ Ⅱ
Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｃｏｌｕｍｎ：Ｘｂｒｉｄｇｅ （250 ｍｍ×4. 6 ｍｍ，5 μｍ）；ｆｌｏｗ
ｒａｔｅ：1 ｍＬ ／ ｍｉｎ． Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ｃｏｌｕｍｎ：Ｘｂｒｉｄｇｅ （250 ｍｍ×19 ｍｍ，
10 μｍ）；ｆｌｏｗ ｒａｔｅ：15 ｍＬ ／ ｍｉｎ． Ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅｓ：ｍｅｔｈａｎｏｌ （Ｂ）ａｎｄ
ｗａｔｅｒ （Ａ）． Ｉｓｏｃｒａｔｉｃ ｅｌｕｔｉｏｎ：30％ Ｂ ｆｏｒ 75 ｍｉｎ． Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅ－
ｌｅｎｇｔｈ：267 ｎｍ． Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｖｏｌｕｍｅ：1000 μＬ． Ｓａｍｐｌｅ ｍａｓｓ ｃｏｎｃｅｎ－
ｔｒａｔｉｏｎ：100 ｇ ／ Ｌ．
将分离得到的各个组分浓缩冻干，得到单体化
合物 ＦＴ－1、ＦＴ－2、ＦＴ－3、ＦＴ－4 和 ＦＴ－5，质量分别为
12、27、18、9 和 5 ｍｇ；经液相色谱分析，色谱峰纯度
分别为 96. 8％、99. 5％、99. 7％、96. 5％ 和 97. 1％，分
析色谱图如图 4 所示。以核磁共振对其进行解析，
确定 5 个化合物分别为乔松素－7－Ｏ－芸香糖苷、白杨
素－7－Ｏ－芸香糖苷、金合欢素－7－Ｏ－芸香糖苷、云杉素
和原儿茶酸，结构图见图 5。
·78·
色 谱 第 33 卷
图 4 ＦＴ－1、ＦＴ－2、ＦＴ－3、ＦＴ－4和 ＦＴ－5的液相色谱分析谱图
Ｆｉｇ． 4 Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ＨＰＬＣ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ＦＴ－1，
ＦＴ－2，ＦＴ－3，ＦＴ－4 ａｎｄ ＦＴ－5
Ｃｏｌｕｍｎ：Ｘｂｒｉｄｇｅ （250 ｍｍ×4. 6 ｍｍ，5 μｍ）；ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅｓ：
ｍｅｔｈａｎｏｌ （Ｂ）ａｎｄ ｗａｔｅｒ （Ａ）． Ｉｓｏｃｒａｔｉｃ ｅｌｕｔｉｏｎ：20％ Ｂ． Ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ
ｖｏｌｕｍｅ：10 μＬ． Ｆｌｏｗ ｒａｔｅ：1 ｍＬ ／ ｍｉｎ．
2．3 结构鉴定
ＦＴ－1：淡黄色粉末（甲醇），ＵＶ λｍａｘ：284、330
ｎｍ；1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ6，400 ＭＨｚ）δ：7. 54（2Ｈ，
ｄ，Ｊ ＝ 7. 2 Ｈｚ，Ｈ－2′，6′），7. 42（2Ｈ，ｔ，Ｊ ＝ 7. 2 Ｈｚ，Ｈ－
3′，5′），7. 38（1Ｈ，ｔ，Ｊ＝ 7. 2 Ｈｚ，Ｈ－4′），6. 16（2Ｈ，ｄ，Ｊ
＝ 1. 6 Ｈｚ，Ｈ－6，8），5. 65（1Ｈ，ｄｄ，Ｊ ＝ 3. 2，10. 0 Ｈｚ，
Ｈ－2），4. 98（1Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ 7. 2 Ｈｚ，Ｈ－1″），4. 53（1Ｈ，ｂｒｓ，
Ｊ＝7. 2 Ｈｚ，Ｈ－1），3. 71 ～ 3. 75（1Ｈ，ｍ，Ｈ－3″），3. 59
～ 3. 66（1Ｈ，ｍ，Ｈ－5″），3. 51 ～ 3. 58（1Ｈ，ｍ，Ｈ－2″），
3. 37 ～ 3. 44（1Ｈ，ｍ，Ｈ－5），3. 20 ～ 3. 28（1Ｈ，ｍ，Ｈ－
4″），3. 02 ～ 3. 20（1Ｈ，ｍ，Ｈ－3），2. 85 ～ 2. 87（1Ｈ，
ｍ，Ｈ－2），2. 81 ～ 2. 83（1Ｈ，ｍ，Ｈ－4），3. 78 ～ 3. 86
图 5 ＦＴ－1、ＦＴ－2、ＦＴ－3、ＦＴ－4和 ＦＴ－5的化学结构
Ｆｉｇ． 5 Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ＦＴ－1，ＦＴ－2，ＦＴ－3，
ＦＴ－4 ａｎｄ ＦＴ－5
（1Ｈ，ｍ，Ｈ－6″），2. 47 ～ 2. 53（2Ｈ，ｍ，Ｈ－3），1. 09
（3Ｈ，ｔ，Ｊ＝6. 4 Ｈｚ，Ｈ－6）；13Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ6，100
ＭＨｚ）δ：79. 0（Ｃ－2），42. 5（Ｃ－3），197. 2（Ｃ－4），
162. 9（Ｃ－5），96. 0（Ｃ－6），165. 6（Ｃ－7），97. 0（Ｃ－8），
163. 5（Ｃ－9），103. 8（Ｃ－10），138. 9（Ｃ－1′），129. 0
（Ｃ－3′，4′，5′），127. 3（Ｃ－2′，6′），99. 8（Ｃ－1″），73. 4
（Ｃ－2″），76. 0（Ｃ－3″），71. 1（Ｃ－4″），76. 7 （Ｃ－5″），
66. 4（Ｃ－6″），103. 8（Ｃ－1），70. 7（Ｃ－2），77. 2（Ｃ－
3），70. 0（Ｃ－4），72. 5（Ｃ－5），18. 3（Ｃ－6）。波谱
数据与文献［18］报道的数据一致，故鉴定化合物为乔
松素－7－Ｏ－芸香糖苷。
ＦＴ－2：黄色粉末（甲醇），ＵＶ λｍａｘ：267，305
ｎｍ；1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ6，400 ＭＨｚ）δ：7. 06（1Ｈ，
ｓ，Ｈ－3），6. 49（1Ｈ，ｄ，Ｊ＝2. 0 Ｈｚ，Ｈ－6），6. 82（1Ｈ，ｄ，Ｊ
＝2. 0 Ｈｚ，Ｈ－8），8. 09（2Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ 8. 5 Ｈｚ，Ｈ－2′，6′），
7. 62 ～ 7. 64（2Ｈ，ｍ，Ｈ－3′，5′），7. 59 ～ 7. 61（1Ｈ，ｍ，
Ｈ－4′），5. 09（1Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ 7. 5 Ｈｚ，Ｈ－1″），4. 54（1Ｈ，
ｂｒｓ，Ｈ－1），1. 07 （3Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ 6. 5 Ｈｚ，Ｈ－6）；13Ｃ
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ6，100 ＭＨｚ）δ：164. 3（Ｃ－2），105. 0
·88·
第 1 期 李国柱，等：循环制备液相色谱分离芳香新塔花中的化学成分
（Ｃ－3），182. 6（Ｃ－4），161. 6（Ｃ－5），100. 2（Ｃ－6），
163. 5（Ｃ－7），95. 3（Ｃ－8），157. 5（Ｃ－9），106. 1（Ｃ－
10），131. 0（Ｃ－1′），127（Ｃ－2′，6′），129. 7（Ｃ－3′，5′），
132. 6（Ｃ－4′），100. 2（Ｃ－1″），73. 5（Ｃ－2″），76. 7（Ｃ－
3″），70. 3（Ｃ－4″），76. 1（Ｃ－5″），66. 5（Ｃ－6″），101. 0
（Ｃ－1），70. 8（Ｃ－2），71. 2（Ｃ－3），72. 5（Ｃ－4），
68. 8（Ｃ－5），18. 3（Ｃ－6）。化合物通过异核单量子
关系（ＨＳＱＣ）、多键碳氢关系（ＨＭＢＣ）和氢－氢二维
空间相关（ＲＯＥＳＲ）等二维核磁共振谱解析，确定
该化合物为白杨素－7－Ｏ－芸香糖苷。
ＦＴ－3：白色结晶（甲醇），ＵＶ λｍａｘ：267、334
ｎｍ；1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ6，400 ＭＨｚ）δ：6. 95（1Ｈ，
ｓ，Ｈ－3），6. 46（1Ｈ，ｄ，Ｊ＝2. 0 Ｈｚ，Ｈ－6），6. 78（1Ｈ，ｄ，Ｊ
＝2. 0 Ｈｚ，Ｈ－8），8. 05（2Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ 8. 5 Ｈｚ，Ｈ－2′，6′），
7. 14（2Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ 9. 0 Ｈｚ，Ｈ－3′，5′），3. 87（3Ｈ，ｓ，－
ＯＣＨ3），5. 08（1Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ 7. 5 Ｈｚ，Ｈ－1″），4. 56（1Ｈ，
ｂｒｓ，Ｈ－1），1. 08 （3Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ 6. 5 Ｈｚ，Ｈ－6）；13Ｃ
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ6，100 ＭＨｚ）δ：164. 4（Ｃ－2），104. 3
（Ｃ－3），182. 5（Ｃ－4）161. 6（Ｃ－5），100. 4 Ｃ－6），
163. 4（Ｃ－7），95. 2（Ｃ－8），157. 4（Ｃ－9），105. 9（Ｃ－
10），123. 1（Ｃ－1′），128. 9（Ｃ－2′，6′），115. 2（Ｃ－3′，
5′），162. 9（Ｃ－4′），100. 4（Ｃ－1″），73. 5（Ｃ－2″），76. 7
（Ｃ－3″），70. 8（Ｃ－4″），76. 1（Ｃ－5″），66. 5 （Ｃ－6″），
101. 1（Ｃ－1），71. 1（Ｃ－2），71. 2（Ｃ－3），72. 5（Ｃ－
4），69. 0（Ｃ－5），18. 3（Ｃ－6）。波谱数据与文
献［19］报道的数据一致，故鉴定化合物为金合欢素－7－
Ｏ－芸香糖苷。
ＦＴ－4：淡黄色粉末（水），ＵＶ λｍａｘ：213、264
ｎｍ；1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ6，400 ＭＨｚ）δ：7. 91（2Ｈ，
ｄ，Ｊ＝8. 8 Ｈｚ，Ｈ－2，6），7. 10（2Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ 8. 8 Ｈｚ，Ｈ－3，
5），2. 52（3Ｈ，ｓ，Ｈ－8），5. 01（1Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ 7. 6 Ｈｚ，Ｈ－
1′），2. 89－3. 79（ｍ，ｓｕｇａｒ－Ｈ）；13Ｃ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ6，
100 ＭＨｚ）δ：131. 3（Ｃ－1），130. 7（Ｃ－2），116. 3（Ｃ－
3，5），161. 5（Ｃ－4），196. 9（Ｃ－7），26. 9（Ｃ－8），100. 2
（Ｃ－1′），73. 6（Ｃ－2′），77. 6（Ｃ－3′），70. 0 （Ｃ－4′），
77. 0（Ｃ－5′），61. 0（Ｃ－6′）。波谱数据与文献［20］报道
的数据一致，故鉴定化合物为云杉素。
ＦＴ－5：白色粉末 （水），ＵＶ λｍａｘ：258，292
ｎｍ；1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ－ｄ6，400 ＭＨｚ）δ：7. 33（1Ｈ，
ｄ，Ｊ ＝ 2 Ｈｚ，Ｈ－2），7. 29（1Ｈ，ｄｄ，Ｊ ＝ 2. 0，8. 4 Ｈｚ，Ｈ－
6），6. 78（1Ｈ，ｄ，Ｊ ＝ 8. 4 Ｈｚ，Ｈ－5）；13Ｃ ＮＭＲ（ＤＭ－
ＳＯ－ｄ6，100 ＭＨｚ）δ：121. 5（Ｃ－1），117. 1（Ｃ－2），
145. 3（Ｃ－3），150. 4（Ｃ－4），115. 6（Ｃ－5），122. 2（Ｃ－
6），167. 9（Ｃ－7）。波谱数据与文献［21］报道的数据
一致，故鉴定化合物为原儿茶酸。
3 结论
本文以芳香新塔花为研究对象，通过双柱交替
循环制备色谱，并对流动相进行直接再循环，对芳香
新塔花组分进行分离纯化，得到 5 个单体化合物，经
分析其纯度均达到 96％ 以上。构建的方法具有节
省溶剂、分离效率高等优点，用常规的分离方法不能
分离或者很难分离的化合物可以利用本文方法得到
很好的分离。因此，交替循环和直接循环液相色谱
相结合的方法对天然产物复杂化合物的分离纯化具
有较强的实用意义。
参考文献：
［1］ Ｓｈａｒｏｐｏｖ Ｆ Ｓ，Ｓｅｔｚｅｒ Ｗ Ｎ． Ｎａｔ Ｐｒｏｄ Ｃｏｍｍｕｎ，2011，6（5）：
695
［2］ Ｏｚｔｕｒｋ Ｓ，Ｅｒｃｉｓｌｉ Ｓ． Ｆｏｏｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ，2007，18（5）：535
［3］ Ｚｈｏｕ Ｘ Ｙ，Ｓｈｉ Ｙ，Ｍａ Ｘ Ｍ，ｅｔ ａｌ． Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｃｈｉ－
ｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅｓ （周晓英，施洋，马秀敏，等． 现代中药研究与
实践），2011，25（2）：44
［4］ Ｌｉ Ｎ，Ｙａｎｇ Ｘ Ｊ，Ｍｅｎｇ Ｄ Ｌ，ｅｔ ａｌ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ｐｈａｒｍａ－
ｃｅｕｔｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （李宁，杨小菊，孟大利，等． 沈阳药科大学
学报），2009，26（9）：691
［5］ Ｚｈａｎｇ Ｐ Ｈ，Ａｉ Ｌｉ Ｓ，Ｊｉ Ｑ Ｌ，ｅｔ ａｌ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃ－
ｔｒｏｍｅｔｒｙ Ｓｏｃｉｅｔｙ （张丕鸿，艾力· 沙吾尔，计巧灵，等． 质谱
学报），2008，29（3）：162
［6］ Ｎａｇａｉ Ｔ，Ｍｉｚｏｂｅ Ｈ，Ｏｔａｋｅ Ｉ，ｅｔ ａｌ． Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ａ，2011，
1218（20）：2880
［7］ Ｑｉａｎ Ｋ，Ｎａｋａｇａｗａ－Ｇｏｔｏ Ｋ，Ｙｕ Ｄ，ｅｔ ａｌ． Ｂｉｏｏｒｇ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ
Ｌｅｔｔ，2007，17（23）：6553
［8］ Ｗａｔａｎａｂｅ Ｋ，Ｓｕｚｕｋｉ Ｋ，Ｋｉｔａｍｕｒａ Ｓ． Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，2006，67
（4）：338
［9］ Ｓｍｉｔｈ Ｌ Ｒ，Ｋｕｂｏ Ｉ． Ｊ Ｎａｔ Ｐｒｏｄ，1995，58（10）：1608
［10］ Ｉｔｏ Ｊ，Ｇｏｂａｒｕ Ｋ，Ｓｈｉｍａｍｕｒａ Ｔ，ｅｔ ａｌ． Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，1998，54
（24）：6651
［11］ Ｒｅｎ Ｑ Ｌ，Ｄｏｎｇ Ｘ Ｙ，Ｂａｏ Ｚ Ｂ． Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ－
ｒａｐｈｙ （任其龙，董新艳，鲍宗必． 色谱），2014，32（5）：445
［12］ Ｂｏｍｂａｕｇｈ Ｋ Ｊ，Ｌｅｖａｎｇｉｅ Ｒ Ｆ． Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ｓｃｉ，1970，8
（11）：657
［13］ Ｌａｎ Ｋ，Ｊｏｒｇｅｎｓｏｎ Ｊ Ｗ． Ａｎａｌ Ｃｈｅｍ，1998，70（14）：2773
［14］ Ａｌｌｅｙ Ｗ Ｒ Ｊｒ，Ｍａｎｎ Ｂ Ｆ，Ｈｒｕｓｋａ Ｖ，ｅｔ ａｌ． Ａｎａｌ Ｃｈｅｍ，2013，
85（21）：10408
［15］ Ｓｉｄａｎａ Ｊ，Ｊｏｓｈｉ Ｌ Ｋ． Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ｒｅｓ Ｉｎｔ，2013，2013． ＤＯＩ：
10. 1155 ／ 2013 ／ 509812
［16］ Ｓｉｄａｎａ Ｊ，Ｓｉｎｇｈ Ｓ，Ａｒｏｒａ Ｋ，ｅｔ ａｌ． Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａ，2011，82（7）：
1118
［17］ Ｎａｋａｔｓｕ Ｔ，Ｊｏｈｎｓ Ｔ，Ｋｕｂｏ Ｉ，ｅｔ ａｌ． Ｊ Ｎａｔ Ｐｒｏｄ，1990，53（6）：
1508
［18］ Ｘｕ Ｘ，Ｘｉｅ Ｈ，Ｈａｏ Ｊ，ｅｔ ａｌ． Ｊ Ａｇｒｉｃ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ，2011，59
（4）：1205
［19］ Ｘｉｅ Ｘ Ｙ，Ｓｕ Ｙ Ｆ，Ｃｈａｉ Ｘ，ｅｔ ａｌ． Ｃｈｉｎａ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍａ－
ｔｅｒｉａ Ｍｅｄｉｃａ （解笑瑜，苏艳芳，柴欣，等． 中国中药杂志），
2009，40（11）：1715
［20］ Ｑｕ Ｇ Ｌ，Ｚｈａｎｇ Ｈ Ｍ，Ｄｅｎｇ Ｚ Ｗ，ｅｔ ａｌ． Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉ－
ｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ （曲功霖，张海鸣，邓志威，等． 中国药学杂志），
2011，46（2）：93
［21］ Ｒａｍａｄａｎ Ｍ Ａ，Ａｈｍａｄ Ａ Ｓ，Ｎａｆａｄｙ Ａ Ｍ，ｅｔ ａｌ． Ｎａｔ Ｐｒｏｄ
Ｒｅｓ，2009，23（13）：1218
·98·