全 文 ：肾茶联合泼尼松对多柔比星肾病大鼠
核因子 － KB、白介素 － 8 水平的干预研究
王丽敏，穆斯塔凡，王 蕾
(佳木斯大学附属第一医院儿科，黑龙江 佳木斯 154003)
摘要:目的:通过观察多柔比星肾病大鼠核因子 － KB、白介素 － 8 水平变化，探讨肾茶联合泼尼松对肾病综合征的保护机
制。方法:50 只雄性 Wistar大鼠随机分为正常组，模型组，肾茶组及肾茶与泼尼松联合治疗组。除正常组大鼠外单次尾静脉
注射多柔比星 5mg /kg来制备肾病模型，用酶联免疫吸附法检测核因子 － KB、白介素 － 8。结果:各组大鼠尿蛋白、核因子 －
KB及白介素 － 8 均明显高于正常组(P ＜ 0． 01) ;肾茶组和联合治疗组的尿蛋白、核因子 － KB 及白介素 － 8 均低于肾病组
(P ＜ 0． 01) ，但联合治疗组降低更明显，与肾茶组比较差异有显著性(P ＜ 0． 01)。结论:肾茶与泼尼松联合治疗组可有效降
低核因子 － KB和白介素 － 8 水平，其机制可能通过下调核因子 － KB 和白介素 － 8 表达，从而对多柔比星肾病大鼠起保护作
用。
关键词:多柔比星;肾茶;泼尼松;核因子 － KB;白介素 － 8;蛋白尿
中图分类号:Ｒ692 文献标识码:A 文章编号:1008 － 0104(2013)06 － 0042 － 02
微小病变型肾病是小儿肾病综合征最常见的类型之一，
以大量蛋白尿(＞ 3． 5g /d)、低蛋白血症(＜ 30g /L)、高脂血症
及全身不同程度的水肿为主要临床表现，大量蛋白尿及低蛋
白血症为最主要指标。其中尿蛋白的产生与肾小球滤过膜
的分子及电荷屏障受损有关。目前临床对肾病综合征主要
采取糖皮质激素及免疫抑制剂、抗凝等对症治疗，其中以糖
皮质激素为主要治疗药物，但长期单独用药会导致骨质疏松
等一系列副作用，给家庭带来沉重的经济和心理负担。核因
子 － KB (nuclear factor － KB)是一种具有多向性调节作用的
核转录因子，与许多基因特别是免疫相关基因的转录调节密
切相关，肾病综合征患儿存在免疫功能紊乱，故可以通过调
节 NF － KB纠正其免疫失衡［1］。具相关研究表明［2］，核因子
－ KB与白介素 － 8 具有直线正相关关系，而白介素 － 8 在肾
病综合征的早期发病过程中发挥重要的作用，可通过激活中
性粒细胞损伤足突细胞和基底膜，从而引起蛋白尿。肾茶具
有显著的免疫调节功能，抗炎［3］等作用。因此，我们通过多
柔比星制备肾病综合征大鼠模型，观察探讨肾茶和泼尼松联
合治疗对多柔比星肾病大鼠核因子 － KB、白介素 － 8 水平的
影响及其可能机制。
1 材料和方法
1． 1 实验动物及分组
6 周龄雄性Wistar大鼠 50 只，体重 100 ～ 120g，由大连医
科大学动物实验中心提供，两次尿蛋白定性试验均阴性。将
50 只大鼠随机分为两组:正常组(n = 10)注射 0． 5mL生理盐
水，肾病组(n = 40)按照王峥等［4］尾静脉单次注射多柔比星
(浙江省海正药业有限股份公司)5mg /kg 制备肾病综合征模
型。注射后第 6 天收集所有大鼠 24h 尿液，尿蛋白 ＞ 30mg /
24h者为肾病综合征模型成功。期间死亡 5 只，不合格者 5
只予以剔除。剩余肾病组再随机分为 3 组:模型组(n = 10)、
肾茶组(n = 10)、肾茶和强的松联合治疗组(n = 10)。
1． 2 研究方法
1． 2． 1 给药方法:肾茶组和联合治疗组在造模成功后第 7
天开始给予肾茶(泉州市医药公司)灌胃给药 5mL /kg，正常
组和模型组给予等量生理盐水灌胃。联合治疗组在肾茶灌
胃后 1h给予泼尼松［5］，即在造模成功后第 1 ～ 7 天每天给药
13． 5mL /kg(6． 3mg /kg)第 8 ～ 15 天，每天减量 10%，第 16 ～
28 天每天给药 2． 7mL /kg(1． 25mg /kg)。
1． 2． 2 各组大鼠 24h 尿蛋白的测定:在多柔比星注射后第
6、20、41 天收集 24h尿液，用全自动生化分析仪检测 24h 尿
蛋白定量。
1． 2． 3 各组大鼠核因子 － KB、白介素 － 8 的检测:以下严格
按照说明书进行操作，在第 7、21、42 天大鼠清晨空腹采静脉
抗凝血 2mL，用淋巴细胞分离液分离出单个核细胞并用 PBS
液制成 2 × 106 /mL细胞悬液，同时采集非抗凝血 1mL，分离
血清置于 － 80℃冰箱保存备用，用 IL － 8 试剂盒、NF － KB试
剂盒(美国 Activemotif 公司)分别检测白介素 － 8 和核因子
－ KB。
1． 3 统计学分析
应用 SPSS17． 0 统计分析软件，结果用均数 ± 标准差
(x ± s)表示。多组间比较用随机区组方差分析;两组间比
较用 t检验;相关分析采用 Pearson直线相关析。P ＜ 0． 05有
统计学意义。
2 结果
2． 1 尿蛋白的变化
模型组、肾茶组及联合治疗组的 24h尿蛋白较正常组明
显升高，差别具有显著性 (F = 2564． 88，319． 59，1824． 50，P
均 ＜ 0． 01) ，但联合治疗组与肾茶组比较，尿蛋白明显减少，
差异具有统计学意义(P ＜ 0． 01)。见表 1。
表 1 各组大鼠尿蛋白定量(x ± s，mg /24h，n = 10)
组别 7d 21d 42d
正常组 6． 59 ± 0． 31 6． 86 ± 0． 31 7． 18 ± 0． 33
模型组 40． 89 ± 1． 15△ 101． 67 ± 11． 13△ 209． 1 ± 6． 21△
肾茶组 38． 49 ± 1． 21△ 92． 67 ± 7． 88△★ 100 ± 5． 93△●
联合组 38． 03 ± 1． 13△ 88． 6 ± 7． 55△★ 56． 4 ± 9． 42△●□
注:△与正常组比较 P ＜ 0． 01 ，★与肾病组比较 P ＞ 0． 05;●与
肾病组比较 P ＜ 0． 01;□与肾茶组比较 P ＜ 0． 01。
2． 2 核因子 － KB的变化
模型组、肾茶组及联合治疗组的核因子 － KB 水平较正
常组明显升高，差别具有显著性 (F = 118． 97，98． 41，
218． 33，P ＜ 0． 01) ，但联合治疗组与肾茶组比较，核因子 －
KB水平明显减少，差异具有统计学意义 (P ＜ 0． 01)。见表
2。
·24· 黑龙江医药科学 2013 年 12 月第 36 卷第 6 期
表 2 各组大鼠核因子 － KB(x ± s，OD值，n = 10)
组别 7d 21d 42d
正常组 0． 167 ± 0． 031 0． 288 ± 0． 034 0． 301 ± 0． 021
模型组 0． 405 ± 0． 012△ 0． 507 ± 0． 041△ 0． 713 ± 0． 030△
肾茶组 0． 349 ± 0． 028△ 0． 484 ± 0． 022△★ 0． 614 ± 0． 055△●
联合组 0． 29 ± 0． 04△ 0． 459 ± 0． 027△★ 0． 359 ± 0． 053△●□
注:△与正常组比较 P ＜ 0． 01;★ 与肾病组比较 P ＞ 0． 05;●与
肾病组比较 P ＜ 0． 01;□与肾茶组比较 P ＜ 0． 01。
2． 3 白介素 － 8 的变化
模型组、肾茶组及联合治疗组的白介素 － 8 水平较正常
组明显升高，差别具有显著性(F = 177． 91，24． 18，506． 80，P
均 ＜ 0． 01) ，但联合治疗组与肾茶组比较，白介素 － 8 水平明
显减少，差异具有统计学意义(P ＜ 0． 01)。见表 3。
表 3 各组大鼠白介素 － 8 (x ± s，pg /mL，n = 10)
组别 7d 21d 42d
正常组 2820 ± 95 3184 ± 69 3420 ± 103
模型组 3762 ± 82△ 3957 ± 228△ 4602 ± 67△
肾茶组 3504 ± 74△ 3755 ± 242△★ 3888 ± 46△●
联合组 3340 ± 72△ 3575 ± 252△★ 3694 ± 53△●□
注:△与正常组比较 P ＜ 0． 01;★ 与肾病组比较 P ＞ 0． 05;●与
肾病组比较 P ＜ 0． 01;□与肾茶组比较 P ＜ 0． 01。
2． 4 相关性分析
肾病组、肾茶组及肾茶与泼尼松联合治疗组各组的 NF
－ KB与 IL － 8 具有相关关系(r = 0． 963，0． 979，0． 916，P均
＜ 0． 01) ;正常组 NF － KB 与 IL － 8 不具有相关关系
(r = 0． 106，P ＞ 0． 05)。肾病组、肾茶组及肾茶与泼尼松联
合治 疗 组 各 组 的 尿 蛋 白 与 IL － 8 具 有 相 关 关 系
(r = 0． 980，0． 881，0． 908，P均 ＜ 0． 01) ;正常组尿蛋白与 IL
－ 8 不具有相关关系(r = 0． 099，P ＞ 0． 05)。
3 讨论
肾病综合征在儿童其患病率为 16 /100000［6］，其发病机
制极其复杂。有的学者认为［7］肾病综合征可为抗体对肾小
球基底膜的损伤所致，从而引起肾小球滤过膜结构及电荷屏
障变化，致使肾小球滤过膜通透性增加，产生蛋白尿，这与
Pighetti［2］等研究一致，且认为 IL － 8 在肾小球足细胞和基底
膜的早期损伤发挥着重要的作用。也有的学者认为［8］，循环
免疫复合物可通过多种途径活化补体系统，产生多种具有炎
性递质作用的活性片段，进而介导肾脏组织的损伤。近年来
细胞免疫在肾病综合征的致病机制也有所研究［9］，患儿可出
现 T细胞免疫功能紊乱，而抑制核因子 － KB 可发挥免疫抑
制作用［1］。本实验通过抑制核因子 － KB、白介素 － 8 而使治
疗组大鼠尿蛋白较肾病组明显减少，差别具有统计学意义
(P ＜ 0． 01) ，从而进一步证实了，核因子 － KB及白介素 － 8
在肾病综合征的致病机制中发挥着一定的作用。降低核因
子 － KB及白介素 － 8 水平，减少尿蛋白，可为治疗肾病综合
征提供了一个新的治疗途径。
曾有学者试用泼尼松冲击疗法治疗肾病综合征［10］以期
尽快缓解病情，但单独激素冲击疗法的有效性及安全性尚待
定论。本实验以肾茶组及肾茶、泼尼松联合组为治疗组，肾
茶为单味中药，较为安全可靠，与泼尼松联合使用，可减少单
用激素的不良反应，且激素可快速直接地作用于效应细胞，
诱导肝药酶系统［11］，这与本实验研究一致，肾茶和泼尼松联
合治疗组的尿蛋白比单用肾茶组尿蛋白明显减少，差别具有
显著性(P ＜ 0． 01)。据相关文献报道［12］，NF － KB是糖皮质
激素抗炎效应最基本的调节因子，且激素能够部分抑制核因
子 － KB的活性和白介素 － 8 的分泌。这与本实验研究一致，
激素可通过以上机制减少尿蛋白，从而缓解肾病综合征病
情。本实验中肾茶组及联合治疗组的核因子 － KB 及白介素
－ 8 水平较同期肾病组的水平低，差别具有统计学意义
(P ＜ 0． 01)。这为治疗肾病综合征的治疗开辟了新的途径。
但由于肾病综合征的发病机制复杂，影响核因子 － KB 通路
的因素众多，且本实验周期较短，观测指标有限，仅限于初步
研究，还需要进一步的研究及探讨，以便更好的应用于临床。
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(收稿日期:2013 － 09 － 12)
基金项目:佳木斯大学科研课题资助项目，编号:L2012 － 047。
作者简介:王丽敏(1964 ～)女，黑龙江佳木斯人，硕士，主任医师，硕士研究生导师。
通讯作者:穆斯塔凡(Mustafe Mohamed Ahmed，1983 ～)男，索马里人，在读硕士研究生。E － mail:mustapha_dr@ hotmail．
com。
(下转第 46 页)
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(收稿日期:2013 － 06 － 12)
作者简介:张富运(1984 ～)男，河南商丘人，在读硕士研究生。
通讯作者:杨建华(1969 ～)男，黑龙江佳木斯人，主任医师，教授，硕士研究生导师，E － mail:jianhua01@ 163． com。
Effects of BMMNCs on behavioral function in rats with spinal cord injury
ZHANG Fu-yun，YANG Jian-hua，WANG Lei，ZHAO Zhong-nan，Ｒajiv
(Department of Orthopedics，First Affiliated Hospital of Jiamusi University，Jiamusi 154003，China)
Abstract:Objective:To observe the effects of bone marrow mononuclear cells (BMMNCs)on Hindlimb
function of rats and the expression of neurotrophin － 3(NT －3)in the injuried Spinal cord of rats with the Ｒat mod-
el of spinal cord hemisection． Methods:We rinse marrow blood from Bilateral femur and tibia under sterile condi-
tions，and isolate BMMNCs in the way of Ficoll density gradient centrifugation． 104 Winstar rats were randomly di-
vided into A group(Sham group)with 8 rats;B group (PBS Control group)and C group (BMMNCs Experimental
group) ，each group of 48． At the 1d，3d，5d，7d，14d and 21d 7d after injury，the rat hindlimb was scored by
the Ｒat BBB Grading，and the expressions of NT － 3 were detected by the Immunohistochemistry． Ｒesults:At each
time point，the BBB scores show that A group is significantly higher than B and C group(P ＜ 0． 05) ，and B group
is less than C group(P ＜ 0． 05)． Immunohistochemistry shows that the expressions of NT － 3 in the Spinal cord of
rats of C group is higher than those in B group(P ＜ 0． 05)． The differences between A group and group B and C
was statistically significant(P ＜ 0． 05)． Conclusion:BMMNCs can promote the expressions of NT － 3 in injured
spinal cord tissues，which may be one of the mechanisms that BMMNCs repair Spinal cord injury and promote spi-
nal cord function．
Key words:bone marrow mononuclear cells;spinal cord injury;NT －3;rat
(上接第 43 页)
The intervention study of clerodendranthus spicatus
and prednisone on Nuclear Factor －KB and Interleukin － 8 level
of rats with doxorubicin nephropathy
WANG Li-min，Mustafe Mohamed Ahmed，WANG Lei
(The First Affiliated Hospital of Jiamusi University，Jiamusi 154003，China)
Abstract:Objectives:To explore the protection mechanisms spicatus and prednisone in nephrotic syndrome
by observing the level of Nuclear Factor － KB and Interleukin － 8 of rats with doxorubicin nephropathy． Methods:
50 male Wistar rats were randomly divided into normal group，model group，spicatus group and combined group of
spicatus and prednisone． Except for the normal group rats a single intravenous injection of doxorubicin 5mg /kg to
prepare Nephropathy model． We used ELISA to detect Nuclear Factor － KB，Interleukin － 8． Ｒesults:The nephrot-
ic rats urinary protein，nuclear Factor － KB and Interleukin － 8 were significantly higher than those in normal group
at the same period(P ＜ 0． 01)． In spicatus group and combined treatment group，urinary protein，Nuclear Factor
－ KB and interleukin － 8 were lower than those in ephropathy group(P ＜ 0． 01) ，but the decline in combined
treatment group was more significant，and the difference was significant compared with spicatus group(P ＜ 0． 01)。
Conclusions:The level of Nuclear Factor － KB and Interleukin － 8 in spicatus and prednisone in combined group
can be effectively reduced，and the mechanism may play a protective role in the rats with doxorubicin nephropathy
by decreasing the expression of Nuclear Factor － KB and Interleukin － 8
Key words:doxorubicin;clerodendranthus spicatus;prednisone;Nuclear Factor － KB;Interleukin － 8;protein-
uria
·64· 黑龙江医药科学 2013 年 12 月第 36 卷第 6 期