全 文 ：指数 [ 16] , 在本实验中 , AA大鼠用来观察 Ur体内对 LPS诱导
PGE2的作用。培养 PMφ观察 Ur体外对 LPS诱导 COX-2 mR-NA的作用。实验中观察到 , AA大鼠 PMφ分泌 PGE2含量明显
增高 , 在连续灌胃给药 14 d及 21 d, Ur水提取部分可显著性抑制
PGE2分泌水平。 体外实验 , RT-PCR结果表明 , Ur明显抑制COX-2 mRNA的表达 ,并呈剂量依赖性。提示 Ur对 AA大鼠体
内 PGE2合成的抑制作用可能是通过降低 COX-2 mRNA的表达
而发挥抗炎作用的。
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收稿日期:2007-08-29;　修订日期:2007-12-30
基金项目:内蒙古医学院蒙药现代化研究项目(No.MX2005ZB024)
作者简介:王雨梅(1967-),女(汉族),天津人 ,现为内蒙古自治区医药工
业研究所在读博士研究生, 副主任药师 , 硕士学位 ,主要从事中蒙药新药
开发工作.
高效液相色谱法
同时测定百金花中龙胆苦苷和咖啡因的含量
王雨梅 , 杜瑞芳 , 刘卫东 , 马　丽
(内蒙古自治区医药工业研究所 ,内蒙古 呼和浩特　010020)
摘要:目的 建立百金花中龙胆苦苷(gentiopicrin)和咖啡因(caffeine)的高效液相色谱测定方法。方法 采用 ODS柱 , 流
动相为甲醇 -水(30∶70), 检测波长 273nm。结果 该法回收率龙胆苦苷为 97.76%, 咖啡因为 102.30%;RSD龙胆苦苷
为 2.97%,咖啡因为 1.75%(n=6)。结论 该方法建立同一色谱条件下测定百金花中龙胆苦苷和咖啡因 ,简便 、准确 , 为
百金花蒙药植物资源的进一步开发提供了可靠的依据。
关键词:百金花;　龙胆苦苷;　咖啡因;　高效液相色谱
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)09-2134-02
DeterminationofGentiopicrinandCaffeineinHerbaCentauriibyHPLC
WANGYu-mei, DURui-fang, LIUWei-dong, MALi
(InnerMongolianAutonamyInstituteofMedicineandIndustry, Huhhot010020, China)
Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodfordeterminationofgentiopicrinandcafeineinHerbaCentaurii.
MethodsTheseparationwasperformedonKromasilC
18
Column(250mm, 4.6 mm×5μm)andthemobilephasewasmethanol
-water(30∶70).Gentiopicrinandcafeinewasdetectedat273nm.ResultsTherecoveryrateofgentiopicrinandcaffeinewas
97.70% and102.30%, respectively.ConclusionThismethodisrapidandaccuratefordeterminationofgentiopicrinandcafe-
ine.ItcanbeusedforfurtherexploitationofMongolianherbalresources.
Keywords:HerbaCentauri;　Gentiopicrin;　Caffeine;　HPLC
　　百金花为龙胆科植物百金花 Centauriummeyeri(Bunge) Druce的干燥带花全草 , 蒙文名 “森达日阿 -其其格”, 为一蒙古
族习用药材 , 具有清热 、退黄 、利胆功效 , 民间用于治疗肝热 、胆
热 、黄疸 、头痛等症 [ 1] 。百金花为民间习用 , 其化学成分及分离 、
测定方法也未见文献报道。 本研究首次采用 HPLC法测定百金
花中龙胆苦苷和咖啡因含量。
1　仪器与材料
1.1　仪器 Agilent1100液相色谱仪 , Agilent1100紫外检测器 ,
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 9期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.9　
AS3120超声波清洗机 , AG135电子分析天平。
1.2　试药 龙胆苦苷对照品和咖啡因对照品均由中国药品生物
制品检定所购入 , 水为双蒸水 , 甲醇为色谱纯 , 其它试剂均为分
析纯。
1.3　药材 百金花药材采自内蒙古自治区鄂尔多斯市 , 由内蒙
古大学生命科学学院赵立清博士鉴定为百金花的 Centaurium
meyeri(Bunge)Druce的带花全草。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 KromasilC18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm,
100A);流动相为甲醇 -水(30∶70);检测波长 273 nm;体积流
量 1.0 ml/min;柱温为室温;进样量 20μl。在此条件下供试品中
龙胆苦苷成分 、咖啡因成分能与其他成分达到较好分离(见图
1)。
1.龙胆苦苷　　 2.咖啡因
图 1　对照品(a)及样品(b)的 HPLC色谱图
2.2　对照品溶液制备 精密称取龙胆苦苷对照品和咖啡因对照
品适量 , 分别加流动相制成每毫升含咖啡因 100 μg和龙胆苦苷
200μg的溶液。精密量取上述对照品溶液各 2.0ml, 置 10 ml量
瓶中 , 加流动相制成每毫升含咖啡因 20 μg和龙胆苦苷 40μg的
混合对照品溶液。
2.3　供试品溶液制备 取本品粗粉约 0.2 g, 精密称定 , 置 25 ml
量瓶中 , 加入流动相适量 , 超声处理 20 min,放冷 ,流动相补足至
刻度 , 摇匀 ,滤过 , 续滤液即为供试品溶液。
2.4　标准曲线制备 取咖啡因对照品约 10 mg, 龙胆苦苷对照品
约 10mg,精密称定 , 分别置 100 ml和 50ml量瓶中 , 用流动相溶
解并稀释至刻度 , 摇匀。精密量取咖啡因对照品溶液 0.25, 0.5,
1.0, 2.5, 5.0 ml和龙胆苦苷对照品溶液 0.5, 1.0, 2.0, 5.0, 10.0
ml, 分别置于 25 ml量瓶中 , 用流动相稀释至刻度 , 摇匀 , 分别测
定峰面积。 以对照品峰面积 Y为纵坐标 , 相应对照品的量 X
(μg)为横坐标 ,得龙胆苦苷回归方程为:Y=3E+06X-7 974.9,
r=0.999 9,线性范围 0.082 8 ～ 1.656 3 μg;咖啡因回归方程为 Y
=7E+06X-19 651, r=0.999 9, 线性范围 0.021 568 ～ 0.431
36 μg。
2.5　精密度实验 对照品混合溶液 , 重复进样 5次 ,测定峰面积。
结果龙胆苦苷峰面积 RSD为 1.12%, 咖啡因峰面积 RSD
为 1.27%。
2.6 　稳定性实验 取同一供试品溶液 , 间隔一定时间进样 ,依法
测定峰面积。结果咖啡因峰面积 RSD为 1.03%(n=5);龙胆苦
苷峰面积 RSD为 0.32%(n=5)。结果供试品溶液在 8 h内
稳定。
2.7　重复性实验 取同一批药材 5份 , 按供试品溶液制备方法操
作 , 分别测定龙胆苦苷 、咖啡因峰面积 ,计算含量。结果龙胆苦苷
含量 RSD为 2.09%,咖啡因含量 RSD为 0.48%。
2.8　加样回收实验 精密称取已知含量的药材样品 0.1 g,分别
精密加入一定量的龙胆苦苷及咖啡因对照品 ,按供试品溶液制备
方法进行测定并计算回收率 , 结果龙胆苦苷平均回收率为
97.76%, RSD为 2.97%(n=6), 咖啡因平均回收率为 102.30%,
RSD为 1.75%(n=6)。
2.9　样品测定 取不同批次的百金花药材粉末 , 按 “ 2.3”项下方
法处理 ,进样测定。结果见表 1。
表 1　百金花中龙胆苦苷和咖啡因的含量测定结果
药材
批次
龙胆苦苷
质量分数 C/mg· g-1　RSD(%)
咖啡因
质量分数 C/mg· g-1　RSD(%)
1 4.85 2.09 1.19 0.48
2 3.56 1.67 0.97 1.23
3 4.07 1.89 1.05 1.46
　　n=3
3　讨论
在 《中国药典》Ⅰ 部 2005年版收载的 “龙胆 ” “秦艽”及 “龙
胆泻肝丸”中均测定龙胆苦苷 [ 2] , 检测波长分别是 270和 254
nm, 我们针对龙胆苦苷 、咖啡因进行紫外光谱扫描 , 发现在(273
±2)nm处有最大吸收 , 因此将 273nm作为检测波长。
提取药材时 ,先后以 30%甲醇为提取溶媒 , 分别尝试超声提
取 60min、回流提取 60 min, 从色谱图来看 ,两种提取方法测定所
得供试液的色谱峰基本一致 ,以测定的龙胆苦苷和咖啡因总量为
判定指标 ,两种方法无显著差别。由于超声提取较回流提取方
便 , 最终选择超声提取。同时还考察了超声提取时间 , 结果 20
min提取完全。
在上述色谱条件下 ,本实验分别选择了 3种不同的流动相:
甲醇 -水(30∶70)、乙腈 -水(12∶88)、甲醇 -乙腈 -水(10∶
10∶80)。结果表明使用 3种不同流动相对照品分离均较好 , 考
虑到甲醇较乙腈廉价 ,选择甲醇 -水(30∶70)作为流动相。
百金花作为蒙古族习用药材 ,在本实验中建立了含量测定的
方法 , 作为分离测定研究尚属首次。因此 , 本实验方法可以作为
今后质量控制及其他方面研究的基础 ,以更好地开发这一蒙药植
物资源 。
参考文献:
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.9 时珍国医国药 2008年第 19卷第 9期