全 文 ：收稿日期:2016-04-26; 修订日期:2016-07-26
基金项目:吉林省中医药科技项目(No． 2014 － ZDB)
作者简介:张 楠(1989-)，女(汉族)，吉林四平人，长春中医药大学在读
硕士研究生，主要从事中药鉴定学研究工作．
* 通讯作者简介:翁丽丽(1969-)，女(汉族)，吉林农安人，长春中医药大
学教授，硕士学位，主要从事中药鉴定学研究工作．
龙胆及朝鲜龙胆中龙胆多糖与
龙胆苦苷的含量测定
张 楠，姜雨昕，任 悦，张 悦，翁丽丽 *
(长春中医药大学，吉林 长春 130117)
摘要:目的 测定不同药用部位、不同采收时期及产地的龙胆、朝鲜龙胆中龙胆多糖和龙胆苦苷的含量，为龙胆药材的综
合利用及资源开发提供理论依据。方法 采用紫外分光光度法测定多糖含量，HPLC法测定龙胆苦苷含量。结果 龙胆根
中龙胆多糖的含量在 0． 29% ～ 1． 13%、茎叶中含量在 0． 65% ～ 1． 85%、花中含量在 0． 61% ～ 2． 15%;龙胆苦苷主要存在
于根部，8 批龙胆药材根中龙胆苦苷的含量在4． 31% ～ 5． 35%;两个不同产区的朝鲜龙胆根中龙胆苦苷的含量分别为 4．
28%及 5． 51%。结论 龙胆茎叶中含有一定量的龙胆多糖，具有一定的开发价值;朝鲜龙胆根中含有一定量龙胆苦苷、龙
胆多糖，可作为龙胆新资源开发利用。
关键词:朝鲜龙胆; 龙胆多糖; 龙胆苦苷; 紫外分光光度法
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2016． 10． 029
中图分类号:Ｒ932 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2016)10-2395-02
龙胆 Gentiana scabra Bunge．系龙胆科多年生草本植物，主要
产于东北和内蒙古，其性味苦、寒;归肝、胆经;有清热燥湿、泻肝
胆火、健胃的功效［1］。朝鲜龙胆 Gentiana uchiyamai Nakai为同属
植物，又名金刚龙胆，主产于吉林。龙胆的主要有效成分为龙胆
苦苷，具有利胆、保肝、抗过敏、抗炎、健胃等多种药理作用［2］，是
评价龙胆药材质量的重要指标。多糖类是多种中药的有效成分
之一［3］，近年来，关于龙胆多糖的现代药理研究逐渐增多，研究
结果表明龙胆多糖具有一定的抗凝血、保肝和降血脂作用［4］。
本研究在不同生长时间采集吉林省不同地区的龙胆及朝鲜
龙胆药材，测定其不同产地、不同采收期、不同药用部位龙胆多糖
及龙胆苦苷的含量，为龙胆药材的综合利用及资源开发提供理论
依据。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 岛津高效液相色谱仪 Prominence － ILC － 2030(岛津
企业管理中国有限公司)、JA2603B万分之一电子天平(上海天美
天平仪器有限公司)、FA1004B 十万分之一电子天平(上海佑科
仪器仪表有限公司)、TU － 1080 紫外可见分光光度计(北京普析
通用仪器有限责任公司)、TDL80 － 2B 台式离心机(上海安亭科
学仪器厂)。
1． 2 试药
1． 2． 1 对照品 龙胆苦苷(规格:20mg，购于中国食品药品鉴定
所)，无水葡萄糖(规格:100mg，购于成都曼思特生物科技有限公
司)。
1． 2． 2 试剂 蒽酮、硫酸、乙醇、甲醇均为分析纯;色谱甲醇;水
为超纯水
1． 3 药材 龙胆分别采集于吉林市昌邑区左家镇、吉林省蛟河
天岗镇、吉林市龙潭区江密峰镇、吉林市龙潭区杨木乡、吉林省永
吉县、长春市九台区、长春中医药大学七星百草园(栽培);朝鲜
龙胆分别采集于吉林省白山市八道江区、吉林省延边市二道白河
镇。
龙胆 Gentiana scabra Bunge． 及朝鲜龙胆 Gentiana uchiyamai
Nakai经长春中医药大学药学院翁丽丽教授鉴定，均为正品。
2 方法与结果
2． 1 龙胆多糖含量测定
2． 1． 1 对照品溶液的制备 精密称取 10mg 葡萄糖，置 100ml 容
量瓶中，加水制成 0． 1mg /ml的溶液，即得龙胆多糖对照品溶液。
2． 1． 2 供试品溶液的制备 取药材 2g，精密称定，置索氏提取器
中，加蒸馏水 90ml，加热回流直至提取液无色，将提取液转移到
100ml容量瓶中，定容，摇匀后精密量取溶液 10ml，加 150ml 的
95%乙醇醇沉，在温度 4℃的条件下放置 12h，离心 10 min，小心
倾去上清液，将沉淀定容到 25ml 容量瓶中，摇匀，即得龙胆多糖
供试品溶液。
2． 1． 3 标准曲线的制备 精密吸取葡萄糖溶液 0． 2，0． 6，1． 0，
1． 4，1． 8，2． 0ml置 10ml具塞试管中，补足蒸馏水至体积为 2． 0ml，
加 6ml硫酸蒽酮试液摇匀，置 90℃以上热水浴中加热 15min，取
出，立即放入冷水浴中冷却 15min，以蒸馏水为空白对照，在
625nm波长处测定吸光度。以葡萄糖含量为横坐标，溶液的吸光
度值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程:Y = 2． 951X + 0． 006(r
= 0． 9995)。结果表明，多糖含量在 0． 02 ～ 0． 2mg 范围内线性关
系良好。
2． 1． 4 精密度试验 取同批样品溶液，重复测定吸光度 6 次，吸
光度值依次为:0． 314、0． 315、0． 315、0． 315、0． 314、0． 315，ＲSD =
0． 17%，结果表明仪器精密度良好。
2． 1． 5 重现性试验 按照“2． 1． 2”方法独立制备 6 份龙胆多糖供
试品溶液，测定吸光度，计算含量，其值依次为:0． 63%、0． 62%、
0． 63%、0． 61%、0． 61%、0． 60%，ＲSD = 1． 96%，结果表明该方法
的重现性良好。
2． 1． 6 稳定性试验 取龙胆药材，按照“2． 1． 2”方法下处理，室
温下分别于 1，2，3，4，5，6h 测定 6 次，吸光度值依次为:0． 321、
0． 323、0． 322、0． 322、0． 321、0． 323，ＲSD = 0． 28%，表明溶液吸光
度值在 6． 0h内基本稳定。
2． 1． 7 加样回收率试验 采用加标回收率实验，取 6 份已知含量
的龙胆样品，按照“2． 1． 2”制备方法，在试样中精密加入一定量
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的葡萄糖标准品溶液，依法测定多糖的含量，计算回收率，平均回
收率为 99． 22%，ＲSD值为 0． 47%。结果见表 1。
表 1 龙胆多糖回收率试验结果
编号
取样量
/g
试样中含
量 /mg
对照品加
入量 /mg
测得值 /mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
ＲSD
/%
1 1． 0003 1． 13 1． 0 2． 117 98． 7
2 1． 0005 1． 13 1． 0 2． 126 99． 6
3 1． 0001 1． 13 1． 0 2． 128 99． 8 99． 22 0． 47
4 1． 0003 1． 13 1． 0 2． 121 99． 1
5 1． 0002 1． 13 1． 0 2． 117 98． 7
6 1． 0002 1． 13 1． 0 2． 124 99． 4
2． 1． 8 样品含量测定 分别取吉林省不同产区的龙胆及朝鲜龙
胆，依法测定龙胆多糖含量。结果见表 2 ～ 3。
表 2 龙胆中龙胆多糖含量测定结果
序
号
产地 采收时间
不同药用部位龙胆多糖含量 /%
根 茎叶 花
1 吉林市昌邑区左家镇 2016 － 06 － 01 0． 50 0． 90 未开花
2 吉林省蛟河天岗镇 2015 － 07 － 10 1． 13 0． 65 未开花
3 吉林市江密峰镇 2015 － 07 － 17 1． 06 1． 10 未开花
4 吉林市龙潭区杨木乡 2015 － 08 － 01 0． 67 1． 85 未开花
5 吉林市龙潭区杨木乡 2015 － 09 － 01 0． 99 1． 40 未开花
6 吉林省永吉县 2015 － 09 － 20 0． 29 0． 96 2． 15
7 七星百草园 2015 － 09 － 26 0． 45 0． 88 0． 61
8 长春市九台区 2015 － 09 － 27 1． 03 0． 76 0． 75
表 3 朝鲜龙胆中龙胆多糖的含量测定结果
序
号
产地 采收时间
不同药用部位龙胆多糖含量 /%
根 茎叶 花
1 吉林省白山市八道江区 2015 － 07 － 31 0． 60 0． 88 0． 41
2 吉林省二道白河镇 2015 － 08 － 31 0． 60 1． 98 0． 34
2． 2 龙胆苦苷含量测定
2． 2． 1 色谱条件 色谱柱:Agilent Innoval C18(250mm × 4． 6mm，
5μm);流动相:甲醇 －水(25∶ 75)，流速:1． 0ml /min;检测波长:
270nm;柱温:25℃;进样量:10μl。
2． 2． 2 对照品溶液的制备 取龙胆苦苷对照品适量，精密称定，
加甲醇制成每 1ml含 0． 2mg的溶液，即得。
2． 2． 3 供试品溶液的制备 取药材约 0． 5g，精密称定，置于具塞
锥形瓶中，加入甲醇 20ml，精密称定，超声 15 min，再称定，用甲
醇补足减少重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液 2ml，置 10ml 容量
瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2． 2． 4 标准曲线的制备 取龙胆苦苷对照品，配制成不同浓度的
溶液，按照上述色谱条件测定峰面积，以浓度为横坐标 X，相应的
峰面积为纵坐标 Y 制作标准曲线，得到回归方程为 Y =
1701193． 023X + 4737． 348361，相关系数 r = 0． 9999。结果表明，
对照品在 0． 4 ～ 3． 2μg范围内呈良好的线性关系。
2． 2． 5 精密度试验 精密吸取“2． 2． 3”项下供试品溶液 10μl，按
上述色谱条件连续进样 6 次，记录峰面积，其值依次为:3115458、
3152645、3056751、3162106、3066679、3091035，ＲSD = 1． 41%，表
明仪器精密度良好。
2． 2． 6 重现性试验 取同一批样品按“2． 2． 3”项下方法制备供
试品溶液 6 份，进样 10μl，记录峰面积，计算含量，其值依次为:
4． 28%、4． 30%、4． 31%、4． 34%、4． 38%、4． 33%，ＲSD = 0． 78%。
表明方法重现性良好。
2． 2． 7 稳定性试验 取同一批次供试品，室温下分别于 0，2，4，
6，12，24h进行测定，记录峰面积，其值依次为:3317247、3356102、
3369948、3357937、3353484、3396530，ＲSD = 0． 77%，表明龙胆苦
苷在 24h之内稳定。
2． 2． 8 加样回收率试验 取样品 6 份，精密称定，加入龙胆苦苷
对照品一定量，按“2． 2． 3”项下方法制备，测定含量，计算回收
率，平均回收率为 98． 43%，ＲSD值为 0． 76%。结果见表 4。
表 4 龙胆苦苷回收率试验结果
编号
取样量
/g
已知样品
含量 /mg
对照品加
入量 /mg
测得值 /mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
ＲSD
/%
1 0． 2502 10． 7633 10． 01 20． 5136 97． 41
2 0． 2506 10． 7287 10． 03 20． 6918 99． 33
3 0． 2501 10． 7979 10． 01 20． 5913 97． 84 98． 43 0． 76
4 0． 2507 10． 7328 10． 02 20． 6715 99． 19
5 0． 2501 10． 7694 10． 03 20． 6312 98． 32
6 0． 2503 10． 7441 10． 02 20． 6112 98． 47
2． 2． 9 样品含量测定 分别取吉林省不同产区的龙胆及朝鲜龙
胆，按上述供试品溶液的制备方法和色谱条件依法测定龙胆苦苷
含量。结果见表 5 ～ 6，图 1 ～ 2。
表 5 龙胆中龙胆苦苷含量测定结果
序号 产地 采收时间
不同药用部位龙胆苦苷含量 /%
根 茎叶 花
1 吉林市昌邑区左家镇 2015 － 06 － 01 5． 18 0． 37 未开花
2 吉林省蛟河天岗镇 2015 － 07 － 10 4． 31 0． 20 未开花
3 吉林市江密峰镇 2015 － 07 － 17 5． 01 0． 32 未开花
4 吉林市龙潭区杨木乡 2015 － 08 － 01 4． 87 0． 46 未开花
5 吉林市龙潭区杨木乡 2015 － 09 － 01 5． 35 0． 19 未开花
6 吉林省永吉县 2015 － 09 － 20 5． 20 0． 02 未检出
7 七星百草园 2015 － 09 － 26 4． 95 0． 21 0． 13
8 长春市九台区 2015 － 09 － 27 4． 97 1． 20 0． 04
表 6 朝鲜龙胆中龙胆苦苷含量测定结果
序号 产地 采收时间
不同药用部位龙胆苦苷含量 /%
根 茎叶 花
1 吉林省白山市八道江区 2015 － 07 － 31 5． 51 0． 41 1． 19
2 吉林省延边二道白河镇 2015 － 08 － 31 4． 28 0． 71 0． 60
图 1 龙胆苦苷对照品高效液相色谱图
图 2 龙胆药材样品高效液相色谱图
3 讨论
本研究对吉林市昌邑区左家镇、吉林省蛟河天岗镇、吉林市
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时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 10 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 10
江密峰镇、吉林市龙潭区杨木乡、吉林省永吉县、长春市九台区、
长春中医药大学七星百草园等产地的龙胆;吉林省白山市八道江
区、吉林省延边二道白河镇等两个不同产地的朝鲜龙胆样品分别
进行了龙胆多糖及龙胆苦苷的测定。
本实验结果表明，茎叶、花中含有一定量龙胆多糖，有的含量
高于根;其中吉林市龙潭区杨木乡产的龙胆茎叶中多糖含量较
高，具有一定的开发利用价值。龙胆苦苷主要存在于根中，茎叶
及花中含量很少，且不同产地、不同采收时间含量差异没有明显
区别，8 批龙胆药材根中龙胆苦苷的含量在 4． 31% ～ 5． 35%，均
达到《中国药典》规定的标准［5］。朝鲜龙胆茎叶中多糖含量高于
根及花;两个不同产区的朝鲜龙胆根中龙胆苦苷的含量分别为
4． 28%及 5． 51%，吉林省朝鲜龙胆有一定的资源分布量，具有潜
在的开发价值。
参考文献:
［1］ 段 宇，王冬梅，潘英妮，等． GAP 基地龙胆中多糖和龙胆苦苷积
累动态与土壤因子的关系［J］． 沈阳药科大学学报，2014，31(12):
998．
［2］ 王建科，高言明，陈惠玲． 坚龙胆中龙胆苦苷含量的测定［J］． 贵州
农业科学，2013，41(2):47．
［3］ 蒋 品，高言明，杨玉琴，等． 龙胆不同采收期中多糖含量变化研
究［J］． 微量元素与健康研究，2011，28(2):19．
［4］ 王金宏，江蔚新．龙胆中植物多糖保肝、降血脂及免疫调节作用的
研究［D］．哈尔滨:哈尔滨商业大学，2012:44．
［5］ 国家药典委员会．中国药典，一部［S］．北京:中国医药科技出版社，
2015:96．
收稿日期:2016-01-30; 修订日期:2016-06-04
基金项目:国家中医药管理局中医药行业专项(No． 201307002);
上海市自然科学基金项目(No． 14ZＲ1441200);
上海市教委创新项目(No． 13YZ046)
作者简介:雷慧博(1989-)，女(汉族)，河南登封人，上海中医药大学在读
硕士研究生，学士学位，主要从事中药质量标准研究工作．
* 通讯作者简介:吴立宏(1966-)，男(汉族)，河南栾川人，上海中药标准
化研究中心研究员，硕士研究生导师，博士学位，主要从事中药质量标准
及药用民族植物学研究工作．
龙胆中龙胆苦苷和落干酸含量的高效液相色谱法测定
雷慧博1，吴立宏1，2* ，王峥涛1，2，侴桂新1，2
(1．上海中医药大学 中药研究所 中药标准化教育部重点实验室暨中药新资源与质量标准综合评
价国家中医药管理局重点研究室，上海 201203;
2．上海中药标准化研究中心，上海 201203)
摘要:目的 建立 HPLC法测定龙胆药材(饮片)中龙胆苦苷和落干酸的方法，提升龙胆药材(饮片)质量标准。方法 For-
tis Xi － C18色谱柱(250 mm ×4． 0 mm，5 μm)，以乙腈 － 0． 1%磷酸梯度为流动相(0→30 min，8:92→20:80)，流速 1． 0 ml
·min －1，检测波长 240 nm，柱温 25℃。结果 龙胆苦苷和落干酸分别在 10． 02 ～ 501． 00 mg·L －1和 1． 01 ～ 160． 96 mg·
L －1内线性关系良好，平均回收率分别为 100． 2%(ＲSD为 1． 51%，n = 9)和 98． 55%(ＲSD为 2． 26%，n = 9)。所测定 39 批
样品中，坚龙胆中龙胆苦苷含量范围为 1． 40% ～ 4． 82%，落干酸含量范围为 0． 50% ～ 1． 06%;龙胆中龙胆苦苷含量范
围为 2． 35% ～ 4． 21%，落干酸含量范围为 0． 96% ～ 2． 76%。结论 该方法简单，准确，灵敏，可靠，重现性好，可用于龙
胆药材(饮片)质量控制研究。
关键词:龙胆; 龙胆苦苷; 落干酸; 高效液相色谱法
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2016． 10． 030
中图分类号:Ｒ284 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2016)10-2397-03
在我国中医药健康服务发展“十三五”规划中，中医药国际
化已被确立为中医药发展的基本目标之一。中医药可持续发展、
走向国际、引领世界关键是标准［1］。国家中医药管理局中医药
行业专项将“川芎等 80 种中药材国际推荐质量标准研究”作为
中药材国际标准的示范研究，龙胆为其中一个品种。龙胆为常用
的苦寒健胃保肝药，具有清热燥湿、泻肝胆火之功效。《中国药
典》规定其来源为条叶龙胆 Gentiana manshurica Kitag．、龙胆 G．
scabra Bge．、三花龙胆 G． triflora Pall． 或坚龙胆 G． rigescens
Franch．的干燥根和根茎 ［2］。目前市场上流通的商品中主要以
坚龙胆和龙胆为主，条叶龙胆、三花龙胆在商品中未见或极少
见［3］。其主要化学成分为(裂)环烯醚萜苷类、三萜类、多糖类以
及生物碱类等，而(裂)环烯醚萜苷类化合物也称苦味素类，为主
要活性成分，也是其苦味的物质基础［4］，其中龙胆苦苷(gentiopi-
croside)和落干酸(loganic acid)即是龙胆药材中含量较高的 2 种
苦味素类化合物。本研究以在全国主要药材市场收集到的 39 批
药材为对象，以龙胆苦苷和落干酸 2 个指标成分，对市场上流通
量大的坚龙胆和龙胆进行 HPLC法含量测定，建立了同时测定龙
胆苦苷和落干酸的含量的方法，以期为提升龙胆药材(饮片)质
量标准提供依据。
1 仪器与试药
Agilent 1100 高效液相色谱仪(四元泵、在线真空脱气机、自
动进样器、柱恒温箱、DAD 检测器)，Agilent 色谱工作站(Agilent
公司，美国);电子分析天平(BT 124S，BT 25S，Sartorius，德国);
超纯水制备仪(Zealpure Great，上海泽权仪器设备有限公司);数
控超声波清洗器(KQ － 250DB，昆山市超声仪器有限公司)。乙
腈、磷酸为色谱纯(Fisher Scientific，美国);超纯水(自制)。甲醇
为分析纯(国药集团上海化学试剂公司)。
龙胆苦苷对照品(上海中药标准化研究中心，纯度≥98． 0%，
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 10 时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 10 期