全 文 ：122 6一 药物分析杂志 h Cin J ph ar mA n al2 8 0 0, 2 8 ( 8 )
同一生境栽培与野生花锚中抗肝炎成分含量的比较分析 `
冯丽娟 ` ,2 , 王延花 ` ,2 , 纪 兰菊 ’ ,*2 `
( 1
. 中国科学院西北高原生物研究所 , 西宁 8 1 0001 ; 2 . 青海省青藏高原特色生物资源研究重点实验室 , 西宁 8 ! 0 0 0 1)
摘要 目的 : 比较栽培与野生花锚中去甲氧基花锚昔和花锚昔在不同生长期的含量变化以及在同一生长期内栽培与野生花
锚不同部位有效成分 的含量变化 。 方法 : R P 一 H P L C 法 , 使用 V P 一 O D S C I: 柱 (5 林m , 150 m m x 4 . 6 m m ) , 流动相 为乙睛 -
0
.
1% 磷酸水溶液 , 梯度洗脱仁0 一 5 . 0 m in 乙睛的体积分数 ( 以 下同 )为 巧% ; 5 . 01 一 14 . 0 m in 由 巧% 线性递增至 25 % ; 14 .
01
一 3 0 . 00 m in 由 2 5 % 线性递增至 4 0 % ] , 流速为 1. 0 m l · m in 一 ’ , 柱温 25 ℃ , 检测波长 254 n o l 。 结果 : 去甲氧基花锚昔和花
锚昔分别在 0 . 68 一 3 . 40 林g 和 0 . 74 一 3 . 68 卜g 范围内呈 良好的线性关系 , 平均回收率 ( n 二 5) 分别为 9 . 7 % 和 98 . 8 % 。 结论 :
栽培与野生花锚中的有效成分含量均在夏季达到最高 , 秋季最低 ;不同的人工管理措施可能造成去甲氧基花锚昔和花锚昔积
累的差异 。
关键词 :栽培花锚 ;野生花锚 ; 去甲氧基花锚昔 ;花锚着 ; R P 一 H IP 尤 法
中图分类号 : gR l7 文献标识码 : A 文章编号 : 02 54 一 17 9 3 ( 2 0 0 8 ) 08 一 1226 一。
C o m P a r a t i v e a n a l y s i s o f e o n t e n t s o f a n it 一 h e P a t i t i s s u b s t a n c e b e t w e e n
c u l t i v a t e d a n d w i l d H d le n ia e l l iP i存c a w iht s im i l a r h a b i t a t `
FE N G L i 一 j u a n `
,
2 ,
W A N G Y
a n 一 h u a ,
·
2 , J l L a 。 一 j u ’
,
2”
( 1
. 叫。, r ll l w e s l l ,l a l e a u In s t i t u [e o f B i o l o邵 A ` a `l e ,, l y `》f Ch i n e s e S o i e , le e , x i n i n g 8 10 0 0 1 , Ch i n a ;
2
.
Qi
n g h a i K
e y L a l
、` ,
la [
o r y o f Qi n g h
a i 一 T i l〕 e l p l a 一e a u B i o l 《 ) g i e a l R e s o u r e e s , X i n i , 19 8 10 0 0 1 , C ll i n 。 )
A b s t r a c t o bj e c it v e
:
C
o m P a r i n g th e e o n t e n t e h a n g e o f d
e m e th o
x y h a l e n ia 、 id e a n d h a l e n i a s id e i n d i fe r e n t gr o w t h
p e r io d a n d d i ffe r
e n t l) a r l s b e t w e e n e u l ti v a t e d a n d w i ld aH l
e n ia e ll iP i ti e a
.
M
e t h o d : D e t e rm i
n e t h e e o n t e n t o f d e m e
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rh o x声a l e n ia s id e a : , d h a l e f l ia s j( l e b少 R p 一 H p LC w i th V p 一 O D S C . 8 e o l u m n ( 5 协n l , 15 O n ,。 x 4 . 6 m ; n ) . hT e m ob i le
P h a s e e o n s i s t e d o f a (
: e r o n i t r i le 一 0
.
1% p h o s ph o
r i e a (: i d w i t }1 g r a d i e n t e l u t io n 仁O 一 5 . 0 0 m i n a e e to n i t r i le w a s 15% ,
5
.
0 1 一 14
.
0 0 m i r , .fl o m 15% t。 2 5%
,
14
.
0 1 一 3 0
.
o o n 、 i n fr ( , m 2 5% * 0 4 0% 」. T h e n o w r a te w a s 1 . 0 m L · m i n 一 ’ .
T h e e o l u m
l l te n lp e r a t u r e w a s 2 5 ℃ a n d d e t e e t i o n w a v e le n g th w a s s e t a t 2 5 4 n m . R e s u l t s : T h e li n e a r r e s P o n s e 一 a n g e d
fr o m 0
.
6 8 t o 3
.
4 0 卜9 o f d e m e th o x y h a le n i a s i d e a n d fr o m 0 . 74 to 3 . 6 8 林9 o f h a l e n i a s id e · Th e a v e r a g e r e c O V e r i e s
w e r e 9 9
.
7% a n d 9 8
.
8%
r e s p e e t i v e ly
.
C o n c l u s i o n : T h e e o n t e n t o f a n t i 一 h e p a t it i s s u b s t a n e e 15 t h e r n a i n e o m p o n e n t
i n s u m m e r b e tw e e n e u l t i v a t e d a n d w il d aH l
e n i a e l l iP i t ie a : a rt i if e a l m a n a g e m e n ts e a n
, n a k e `h e e o n t e n t d ife r e n t i n
a n ti 一 h e p a t i ti s s u b s t a r l e e
·
K e y w o r d s : e u l ti v a te (1 aH l
e , : i a e l liP i t ie a : w i ld aH le
n i a e l l切 i , i e a ; d e m e th o x y h a l e n i a s id e : h a l e n i a s id e ; R P 一 H P LC
花锚 ( aH l e n i a 。 l l iP i t ie a D . D o n ) , 是龙胆科花锚
属植物 , 广泛分布于我国除华南华东外的各个地区 。
在青海地区 , 作为一 种常用 藏药 ,别名 “ 藏茵陈 ” 。
全草人药 , 性甘苦 、 寒 , 主要功用清热解毒 、 凉血止
血 , 常用于治疗肝炎 、 脉管炎 ,外伤出血 。 对慢性胆
囊炎和急性黄胆型肝炎有明显的疗效 〔` 〕。 花锚的
主要化学成分为 口 山酮 ( x a n th o n e ) 、 黄酮 ( fl a v o n e )
和三枯 ( itr et pr en e) 类化合物 , 已经分离鉴定了 15 种
口 山酮和黄酮成分 LZ 一别 , 其中抗肝炎有效成分为 口
山酮昔花锚昔 ( h a le n i a s id e )和去 甲氧基花锚昔 ( d e -
m e t h o
x y h a le n i a s id e ) 生2 1
,吉文鹤等 [ ’ 〕曾报道过栽培花
锚中抗肝炎成分在不同生 长期的变化 ,其有效成分
含量在夏季最高 ,在秋季含量最低 ,这不同于一般的
植物生长含量累积规律 , 为此我们在与吉文鹤等 〔’ 」
国家中西部专项 ( 20 o l B Ag o l A一7 )
* * 通 讯作者 ’ r e l : ( 0 97 1 ) 8 0 100 9 2 ; E 一 n l a i l : J i l a nj u @ s i n a . C o n
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2008. 08. 005
药物分析杂志 Chin Jp ha rA ma n l0 0 8 2, 2 5 ( s ) 一 12 27 一
相同的色谱条件及样品处理条件下 ,对 同一生境 中
栽培与野生花锚中抗肝炎成分的含量进行测定 ,进
一步研究花锚中有效成分累积的季节性变化以及初
步探索影响花锚有效成分累积的可能囚素 , 为花锚
引种栽培提供一定的科学依据 。
1 仪器 、试剂与材料
LC 一 10 A T V P 二 元 泵 ( 岛津公 司 ) ; R h e o d y n e
7 7 2 5 进样器 ( 美国 ) : S PD 一 M 10 A V P 二极管阵列检
测器 (岛津公司 ) ; C las S 一 V P 液相色谱工作站 ( 岛津
公司 ) ; iM il 一 Q 超纯水装置 ; A T 一 130 柱温箱 (天
津 ) ; A B 10 4 一 N 电子天平 ( M e t tl e : 一 t o l e d。 公司 ) ;
Z M 震动超微粉碎机 ; 2 2 0 0 B 超声波仪 ; C I : 硅胶小
柱 ( 1 m L , W a r e r s 印 2 7 4 A I ) 。 乙睛购自山东禹城禹
王试剂厂 , 为色潜纯 ;磷酸和甲醇为分析纯 ;水为自
制重蒸水并经 0 . 45 林m 滤膜过滤 ;去甲氧基花锚昔
和花锚普对照品由中国科学院西北高原生物研究所
孙洪发教授提供 , 纯度均为 % % 以上 。
本实验以青海群家 、 平安地 区野生和栽培的花
锚药材为样 .晶 , 采集时间分别为 2 0 0 4 年 5 月 3 日 、
2 0 0 4 年 6 月 l 日 、 2 0 0 4 年 7 月 l 日 、 2 0 0 4 年 8 月 l
日 、 20 0 4 年 9 月 3 日 , 由中国科学院西北高原生 物
研究所陈桂深研究员鉴定 。
2 溶液制备
2
.
1 对照品溶液 分别精密称取去甲氧基花锚 一昔
及花锚昔对照品适量 , 加甲醇制成浓度分别为 0 . 17
m g
·
m L
一 ’及 0 . 184 m g · m l J 一 `的单一对照品溶液 。
2
.
2 供试品溶液 分别将样 品置粉碎机中粉碎成
细粉 (过 4 0 目筛 ) ,精密称取 0 . 5 9 , 置于 10 0 m L 锥
形瓶中 ,加人 甲醇 20 nl J 回流提取 2 }1 ,滤过 ,残渣用
甲醇洗涤 ,合并滤液 , 以甲醇定容至 25 m L ,摇匀 , 经
C
. 、硅胶小柱除去色素 , 即得供试品溶液 。
3 色谱条件
色谱柱 : V p 一 ( ) D S C 18柱 ( 5 林m , 15 0 n 飞m x 4 . 6
m m ) ;流动相为乙睛 一 0 . 1% 磷酸水溶液 , 梯度洗脱
仁O 一 5 . 0 0 m i n , 乙睛 的体积分数 ( 下 l司 ) 为 15% ;
5
.
0 1 一 14 . 0 0 m i n , 乙 睛 由 15% 线性 递增 至 2 5% ;
14
.
0 1 一 3 0
.
0 0 m in
, 乙睛由 2 5 % 线性递增至 4 0 % ] :
流速 1 . 0 m L · m i n 一 ’ ;检测波长 2 54 n m ; 柱温 : 25
℃ ,在上述色谱条件下 ,去 甲氧基花锚普 、 花锚昔对
照品及样品的色谱图如图 1 。
4 线性关系考察
分别精密吸取去甲氧基花锚昔 、 花锚普的单一
对照品溶液 4 , 8 , 12 , 16 , 2 0 林 L ,按 上述色谱条件测
定 。 以相应组分的色谱峰面积 ( )Y 对其进样量 ( X ,
, 一 ~ T一 - - - - - -- - - - - - - - 1 - - - -- - - -10 2 0 3 -A1
、 _ ,
{
_ _
3 0 t / m i n
图 l 对照品及样品的 H PCL 图谱
F ig 1 H P L C
e
h
r o
ma r
o gr a m s o f er fe er n
(三e s u b s一a n (
·
e s a n 明1 s a n 飞I〕 l e
A
. 对照品 ( r e丘 r e n e e s u h s tan e e s ) B . 群家 7 月栽培花锚全草 ( w h o l e
p l
a n l o f
e u l t i
v a t e d H a l e z` i a e l liP i r i e a i n J u ly Q
u r lj i a )
1
. 去 1 !氧纂花锚 任 ( de : ,、e t h o xy h al e n i a s id e ) 2 . 花锚营 ( h a l e n i a s i de )
林g )进行线性回归 , 计算回归方程 。 去 甲氧基花锚
有和花锚昔的回归方程分别为 :
Y = 5
.
0 2 2 x 10 4 X + 3
.
9 2 1 x I O
5 r = 0
.
9 9 9 9
Y = 4
.
7 2 9 x 10
4
X + 3
.
4 86 x I O
5 r = 0
.
9 9 9 5
线性范围分别为 0 . 68 一 3 . 40 林g 和 0 . 74 一 .3 68 林g 。
5 精密度试验
分别精确吸取单一对照 品溶液各 20 卜L , 按上
述色谱条件连续进样 5 次 , 以峰面积计算得去 甲氧
基花锚昔和花锚昔 的 R SD ( n = 5) 分别为 1. 3% 和
0
.
8%
, 表明精密度 良好 。
6 重复性试验
精密称定同一批样品 , 按 “ 2 . 2 ” 项下方法分别
制备 5 份供试品溶液 , 分别测定 , 结果去甲氧基花锚
昔及花锚昔含量平均值分别为 0 . 39 % , 0 . 20 % ; R S D
分别为 2 . 2 % 和 2 . 3 % 。
7 稳定性试验
取 上述供试品溶液 ,分别间隔 Z h 进样 ,每次 2 0
时 J ,重复 5 次 , 求得去甲氧基花锚昔 和花锚昔峰面
积的 R SD 分别为 1 . 9% 和 2 . 2% ,说明供试品溶液
中去甲氧基花锚昔和花锚昔在 s h 内稳定 。
8 加样回收率试验
取 5 份已知含量 ( 去 甲氧基花锚昔的含量为
一 12 2 8 一 药物分析杂志 h Cin J Ph ar mA n al2 0 08 , 2 8 ( 8 )
0
.
3 9%
, 花锚昔 的含量为 0 . 21 % ) 的花锚药材适量 , 9 样品测定
分别加人去 甲氧基花锚昔对照品 0 . 94 , 1 . 01 , 1 . 03 , 按 “ 2 . 2 ” 项下方法制备各样品的供试品溶液 ,
0
.
90
,
1
.
0
,
lg 和 花锚昔 对照 品 1 . 7 , 1 . 80 , 1 . 72 , 精密吸取 20 林L 进样 ,按上述色谱条件测定峰面积
1
.
75
,
1
.
78 哪 , 按 “ 2 . 2 ” 项 下方法制备溶液 , 进行 积分值 ,代人 回归方程计算不 同地 区不同生长期的
H PL c 分析 , 测得去 甲氧基花锚 甘和花锚昔 的回收 花锚中有效成分的含量与同一 生长期内花锚的全
率 ( ,` = 5) 分别为 9 . 7% ( R S D = 3 , 7% ) 和 98 . 8% 草 、根 、茎 、 叶 、花中的有效成分含量 ,结果见表 1 、表
( R S D = 2
.
6% )
。
2
。
表 1 青海不同地区花锚中去甲氧基花锚普和花锚普含量的季节性变化 《% )
T a b 1 T h e e h a n g e o f d e m e t h o x y h al e n ia s i d e a n d h a le n i a s i d e w it h s e a s i o n in d ifl 笼r e in r e ig o n s o f Q i n gh a i
采集地
( f l
以 , , t , , l。、 )
采集时间
(
、 。, 11。 。 Ie o l 一i ,1 1 e )
去甲氧基花锚背
(
: I e n le 山 o x y ll a l e ; ,i a o j` l。 )
花锚朴
11 a le l 一i a s i ( 1〔
1
总含量
( 加一a l 、。 n r e ,I t )
群家
( Q
. , , 1」i a )
类型
( I y下,。 )
栽培
。11一 、 :` to l )
羔
平安
〔! ,一,】只石: 、 )
栽培
(
. [. lt v 。 比、 l )
(器
( )4 一 05 一 03
04 一 06
一 0 】
04 一 0 7 一 ( ) 1
04 一 0 8 一 0 1
04 一 0 9
一 03
0 4 一 〔) 5 一 ( )3
04
一 涌 一 0 1
04
一 0 7 一 0 1
( ) 4 一 0 8 一 0 1
0 4 一 0 9 一 0 3
04 一 0 5
一 0 3
04 一 0 6 一 0 1
0 4 一 ( ) 7 一仃1
(片 一 0 8 一 o j
0 4 一 0 9 一 03
04 一 ( ) 5 一 ( ) 3
() 4 一 0 6 一 ( ) l
l )J 一〔) 7 一 O J
0 4 一 0 8 一 0 1
04 一 0 9 一 0 3
1
.
22
1
.
2 3
]
.
5 7
0
.
8 7
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.
6】
1
.
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.
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.
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.
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.
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.
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.
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.
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2
.
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.
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.
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.
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.
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.
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0 4 1
0 1 3
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.
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0
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1
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0
.
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.
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.
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】. 9 5
2
.
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1
.
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.
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.
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0
2
.
5 0
3
.
0 0
0
.
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0
.
4 】
5
.
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1
.
26
2
.
02
0
.
67
4
.
92
6
.
0 0
4
.
8 4
2
.
24
0
.
80
表 2 野生与栽培花锚同一采集期 ( 9 月 )不同部位去甲氧基花锚普和花锚普的含量 《% )
T a b 2 T h e e o n te n t o f d em e ht o x y h a le n ia s id e a n d h al e n ia s i d e i n d i fc er
n t P a r tS e o ll e e et d s a m e it m e i n S e P t e m b e r
采集地
( I
, l。 , 11 5 1妞 )
群家
( Q
. , , ,J i: . )
类型
豁
不同部位
(
。 {i lfe
,、 , I t {, a r一、 )
去甲氧基花锚朴
(
、 I e ;: , e一11 . ) x y l ,日。 l li u s记。 )
花锚昔
( 1
1 a l e , zi a 、 i、 I e )
总含量
( t
o ra l 0 . ) n r e o t )
(
。 u i r i v a一e o l )
(徽志
平安
( P 1
1 19
’ a , 1
)
栽培
。 、 : 1Il v a * e 。 {)
箫 )
全草 ( * l lu le p l a , 1一)
书 ( 、 一e , 1 1 )
叶 ( l o a f )
花 ( fl o w e r )
根 ( r u o L)
全草 ( * 11 u le p l al l t )
钱 ( 、 t e l , l )
叶 ( le a f )
花 ` 月` ,。 ,今
根 ( ,飞,。,一)
全草 ( w ll o l e l o la : 1一)
茎 ( s t e : , 1 )
叶 ( le a f )
花 ( fl ( ,、 e l )
根 ( r. ,。, t )
全草 ( * 11 u l。 「,la . l l )
茎 ( s l e川 )
j]卜( le a f )
花 ( n o w e r )
根 ( n o r )
0
.
24
0 1 8
0
.
2 8
0
.
1 5
1
.
3 1
0
.
39
0
.
38
0
.
6 1
0
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75
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.
24
0
.
5 8
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2 9
0
.
9 9
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15
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. 】0
0
.
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.
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0
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0
.
37
0
.
27
0
.
5 0
0
.
2 6
2
.
1 0
0
.
59
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.
58
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0
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18
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.
16
1
.
4 2
0
.
6 6
4
.
38
2
.
04
0
.
5 1
药物分析杂志h C i n JPh r a mA n al 20 0 8
,
2 8 ( 8 ) 12 2 9 一
10 讨论
10
.
1 图 2 为青海平安 、 群家两地区野生与栽培花
锚中去甲氧基花锚普和花锚普这 2 种活性成分含量
加和值的季节性变化趋势 , 从图中可知群家与平安
两地的栽培与野生花锚中去甲氧基花锚昔和花锚昔
的总含量均在夏季达到最高而在秋季的含量最低 ,
去甲氧基花锚昔的含量高于花锚昔的含量 ,并且这
2 种昔 的含量也是 9 月最低 ,这与吉文鹤等所得的
结论 〔’ 一致 。 这可能与夏 季植物代谢活动旺盛有
关 ,从提高去甲氧基花锚昔和花锚昔的利用角度 ,应
在夏季采挖花锚 。
总含量 ( t o t a l co ” t e n t ) /%
5 ,
目 栽培 ( e u l t i v a t o d )
o 野生 伽 i l d )
O J一麟娜一叭户逻黔 (。氨) ( ;撕 花( f l o , e r ) (操t )
不同部位 (d i f f e r e n t p a r t s )
图 4 平安栽培与野生 花锚不同部位去 甲氧基花锚茸 和花锚昔总含
量
f’i g 4
f诀x e n t
1
’卜l e l ( ) l七一1 〔二( ) n 一e n 一 `一f de .1一e 一h (j x y h al e n i a s id e a n d ha l e n i a s i 〔 l e i n ( l i-f
p a 一生5 ` ) 1 5 往一1一F) l e fr 〔) n 一 P i n g ’ a n
总含量 ( t o t a l 。 o n 飞e n t ) /%
7 , ~
群家栽培 (Q u n j ua C。一t i v a t e d )
一 群家野生 (Qu n j i a w l l d )
~
平安栽培 ( Pu n g , a n ` u l t u v a t e d )
~
平安野生 护 I n R , a n 叨j ] d )
10
.
3 本实验选择的提取溶剂种类 、 浓度 、 提取方
法 、提取时间以及流动相和检测波长均采用吉文鹤
等 l ’ 一所用的方法 ·
M a y 丁u n e J u l y Au g u s t S e P t e m b e r
月份 (~ t h )
图 2 平安 、 群家两地区栽培与野生 花锚 「} ,去甲氧基 花锚价和花锚
什总含量的季节性变化
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10
.
2 从图 3 、 图 4 可知 , 同一采集期内 , 群家与平
安两地区的野生花锚中有效成分的含量分布有相同
的趋势 ,均在叶 、花 中的含量较高 ,而在根中的含量
最低 ,这与吉文鹤等所得结论 LS }一致 〔) 群家与平安
的栽培花锚中有效成分的含量分布趋势不同 , 群家
栽培花锚根中有效成分含量最高 ,平安栽培花锚根
中有效成分的含量最低 。 不同的人工管理措施对花
锚中有效成分含量的分布有一定影响 。
总含量 ( t o t o l e o n t e n t ) /%
。 栽培 (e u l t i v a七e d )
a 野生 ( w i l d )
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(本文于 2 0 0 7 年 1 1 月 10 日修改回 )
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图 3 群家栽培与野生花锚不同部位去甲氧基花锚曹 和花锚背总
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