全 文 ：国际药学研究杂志 2014 年 6 月 第 41 卷 第 3 期 J Int Pharm Res， Vol.41， No.3， June， 2014
比色法测定不同产地傣药肾茶中主要酚类物质含量
辛 雪 1，董 霄 2，张 彪 1，曹酌中 1，邹海淼 1，苏 靖 1，邱明丰 1
［摘要］ 目的 优选合适的显色体系，建立傣药肾茶中主要酚类物质的含量测定方法，对不同产地样品进行含量测定。 方
法 以迷迭香酸为对照品、亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠为显色剂、检测波长为 500 nm、采用比色法测定 19 个不同产地样品的主
要酚类物质含量。结果 迷迭香酸在 8.792~17.584 μg/ml 范围内线性关系良好（r2=0.9993），平均加样回收率为 100.73%，相对标
准偏差（RSD）为 0.85%。不同产地样品中主要酚类物质的质量分数为 1.16%~3.49%。结论 该方法简单、准确、重复性好，适合傣
药肾茶中主要酚类物质的含量测定。 结果显示不同产地样品中以云南产肾茶中主要酚类物质含量相对较高。
［关键词］ 肾茶；主要酚类物质；含量测定；比色法
［中图分类号］ R284.1 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1674-0440（2014）03-0368-06
DOI：10. 13220/j. cnki. jipr. 2014. 03. 020
Determination of the main phenolic in Clerodendranthus spicatus
from different areas by colorimetric method
XIN Xue1，DONG Xiao2, ZHANG Biao1，CAO Zhuo-zhong1, ZOU Hai-miao1, SU Jing1, QIU Ming-feng1
（1. School of Pharmacy, Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200240, China； 2. School of Medicine, Shanghai
Jiaotong University, Shanghai 200025,China）
［Abstract］ Objective To choose an appropriate coloured system and develop a method for the determination of the main
phenolic in Dai Medicine —Clerodendranthus spicatus from different areas. Methods The main phenolic in Clerodendranthus
spicatus from 19 areas was determined at 500 nm wavelength, with rosmarinic acid as reference and sodium nitrite-aluminum nitrate-
sodium hydroxide as colour-developing system. Results Rosmarinic acid presented good linear relationship (r2 =0.9993) in the
concentration range of 8.792-17.584 μg/ml.The average recovery was 100.73% and RSD was 0.85%.The content of the main phenolic
in Clerodendranthus spicatus ranged from 1.16 % to 3.49 %. Conclusion The method is appropriate for the determination of the
main phenolic in Clerodendranthus spicatus. The main phenolic content in samples from Yunnan province is relatively high.
［Key words］ Clerodendranthus spicatus; main phenols; determination; colorimetric method
基金项目：上海市科委项目（13401900800）；云南省科技厅项目（2008IF018）
作者简介：辛 雪，女，在读硕士研究生，研究方向：中药与傣药新制剂与新剂型研究， E-mail：dongfengshixue@sjtu.edu.cn
作者单位：1. 200240 上海，上海交通大学药学院（辛 雪，张 彪，曹酌中，邹海淼，苏 靖，邱明丰）；2. 200025 上海，上海交通大学医学院
（董 霄）
通讯作者：邱明丰，男，副教授，研究生导师，研究方向：中药与傣药新制剂与新剂型研究，Tel： E-mail：mfqiu@sjtu.edu.cn
肾茶 （Clerodendranthus spicatus （Thunb.）C.Y.
Wu）为传统傣药，傣语为“芽糯妙”，又名猫须草，具
有清热解毒、利水通淋之功效［1］，民间主要用于治疗
急/慢性肾炎、膀胱炎、尿路结石、咽炎及风湿性关节
炎 ［2］。 现代药理研究表明，肾茶所含主要酚类物质
（包括黄酮类和酚酸类） 为治疗慢性肾炎的有效部
位，其中又以泽兰黄素、迷迭香酸为主要的有效成
分（图 1）［3-5］。
目前，研究者多采用 HPLC 法测定其中的单一
指标成分——迷迭香酸作为该药材的质量控制标
准 ［5-6］，尚不能全面反映肾茶的质量情况，肾茶主要
酚类物质的含量测定也无相关报道。 本文对肾茶主
要酚类物质含量测定条件进行了详细的研究，利用
酚类物质与一些显色剂能发生特异性显色反应的
特点，考察了不同显色方法，最终建立了以亚硝酸
钠-硝酸铝-氢氧化钠为显色剂， 测定肾茶中主要酚
类物质含量的紫外-可见分光光度法（ultraviolet-vis-
ible spectrophotometry，UV），并测定了 19 个不同产
地肾茶主要酚类物质的含量，为其质量控制标准的
完善及资源的开发利用提供一定的参考。
1 材料与方法
1. 1 仪器
UV-759 紫外可见分光光度计， 上海奥普勒公
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咖啡酸
↓
迷迭香酸
↓
供试品
↓↑甲醇
司；METTLER TOLEDO XS105 电子天平， 梅特勒-
托利多公司；J-04B 型高速中药粉碎机，上海淀久中
药机械制造有限公司；KQ-250DB 型数控超声波清
洗器，昆山市超声仪器有限公司，功率 250W。
1. 2 试药
迷迭香酸对照品（批号：111871-201102，含量以
98%计），咖啡酸对照品（批号：110885-200102，含量
以 100%计）， 均购自中国药品生物制品检定所，测
试用水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
1. 3 对照品溶液的配制
取迷迭香酸对照品， 精密称定为 11.21 mg，置
100 ml 量瓶中加甲醇定容， 得浓度为 0.1099 mg/
ml 的迷迭香酸对照品溶液 （迷迭香酸含量以 98%
计）。
取咖啡酸对照品， 精密称定为 10.30 mg，置
100 mL 量瓶中加甲醇定容， 得浓度为 0.1030 mg/
ml 的咖啡酸对照品溶液（咖啡酸含量以 100%计）。
1. 4 供试品溶液的配制
取肾茶粉末（24 目）约 0.5 g，甲醇超声提取 30
min，冷却至室温，用甲醇定容至 50 ml，0.45 μm 微
孔滤膜过滤，得到供试品溶液。
1. 5 药材鉴别及检查［7］
按照《云南省中药饮片标准》肾茶项下要求对
所采集肾茶（表 1）进行性状鉴别、薄层鉴别、水分检
查和浸出物检查。
1. 6 测定方法及对照品的选择
1. 6. 1 直接法 分别精密量取各对照品及供试品
溶液 2 ml 于 25 ml 量瓶中，甲醇定容，在 200~400
nm波长范围内测定［8］。
1. 6. 2 三氯化铁-铁氰化钾法 分别精密量取各对
照品及供试品溶液 2 ml 于 25 ml 量瓶中， 加甲醇
至 5 ml，0.3%十二烷基硫酸钠 2 ml 及 0.6%铁氰化
钾溶液-0.9% 三氯化铁（体积比 1︰1）混合溶液 1
ml，混匀，置暗处 5 min， 加 0.1 mol/L 盐酸溶液至
刻度，摇匀，置暗处 20 min，以试剂为空白，在 400~
900 nm波长范围内测定。
1. 6. 3 亚硝酸钠-硝酸铝显色法 分别精密量取各
对照品 5 ml 及供试品溶液 3 ml 于 25 ml 量瓶中，
加 5％亚硝酸钠溶液 2.0 ml，放置 6 min 后，加 10％
硝酸铝溶液 2.0 ml， 放置 6 min。 分别加入 10 ml
1 mol/L的氢氧化钠溶液，用甲醇定容，放置 15 min
后测定吸光度（A）值，在 400~900 nm 波长范围内
测定。
2 结果
2． 1 不同产地药材检定结果
依据《云南省中药材饮片标准》肾茶项下相关
规定，对肾茶药材进行鉴别，水分检查和浸出物检
查。
2. 2 三种测验法的比较
2. 2. 1 直接法 结果显示（图 2），供试品最大吸收
峰与各对照品相比较发生一定位移，说明直接测定
干扰较大，专属性不高，不适于肾茶主要酚类物质
的含量测定。
2. 2. 2 三氯化铁-铁氰化钾法 酚类化合物酚羟基
具有还原性，可与铁氰化钾-三氯化铁溶液生成普鲁
士蓝沉淀，该沉淀在强酸溶液中溶解，通过测定溶
液 A值可进行定量分析［9］。结果显示（图 3），供试品
显色后在 746 nm 处迷迭香酸对照品、 咖啡酸对照
品均有最大吸收，专属性好，但从扫描图谱也可看
图 1 肾茶主要有效成分化学结构
Fig. 1 Chemical structure of main effective components
of Clerodendranthus spicatus
图 2 直接法波长扫描结果
Fig.2 Wavelength scanning of direct method
吸
光
度
（ A
U
）
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出，供试品的 A 值呈毛刺状波动，故进行时间扫描，
进一步考察显色反应的稳定性。
取肾茶供试品溶液 2 ml，按照以上显色方法显
色后，以试剂为空白，立即于 746 nm 处测定吸光度
值，以 1 s 为间隔进行时间扫描，共测定 2 h，结果
见图 4。 反应前 30 min，该反应形成的蓝色络合物
A 值快速下降，30 min 后仍呈不稳定的波动， 反应
条件不易控制，结果稳定性差，故不适于作为肾茶
中主要酚类物质的含量测定方法。
2. 2. 3 亚硝酸钠-硝酸铝显色法 亚硝酸钠可还原
黄酮或酚酸类化合物的邻位无取代的邻二酚羟基
部位，加硝酸铝络合，在碱性环境下使化合物开环
而显红色，可对药材中具有的邻位无取代的邻二酚
羟基酚类化合物进行定量分析 ［10］。 由结果可知（图
图 3 三氯化铁-铁氰化钾法波长扫描图
Fig. 3 Wavelength scanning of ferric trichloride-potassium
ferricyanide method
图 4 三氯化铁-铁氰化钾法时间扫描图（746.0 nm）
Fig. 4 Temporal scanning of ferric trichloride-potassium
ferricyanide method
试剂空白
供试品未显色
↓
↑
咖啡酸
迷迭香酸
供试品
↓
白花
白花
白花
白花
白花
紫花
白花
白花
紫花
白花
紫花
白花
白花
紫花
白花
白花
白花
白花
紫花
符合标准
符合标准
符合标准
符合标准
符合标准
符合标准
符合标准
符合标准
符合标准
符合标准
符合标准
符合标准
符合标准
符合标准
符合标准
符合标准
符合标准
符合标准
符合标准
云南省基诺山乡
云南省普洱市
云南省耿马县
云南省元江县
云南省景洪市
云南省景洪市
云南省勐腊县勐伴乡
云南省勐腊县植物园
云南省勐腊县植物园
云南省勐腊县勐仑镇
云南省勐腊县勐仑镇
云南省勐海县
福建省厦门市
福建省厦门市
福建省长泰县
海南省万宁市
广西省南宁市
广东省阳春市
海南省儋州市
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
编号 产地 鉴别花色
检查
水分（%） 浸出物（%）
<12
<12
<12
<12
<12
<12
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<12
<12
<12
<12
<12
<12
<12
<12
<12
<12
<12
<12
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<15
<15
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<15
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<15
<15
<5
<15
<15
<15
表 1 不同产地肾茶检定结果
Tab.1 Calibration results of Clerodendranthus spicatus from different habitats
2.000
1.800
1.600
1.200
1.400
1.000
0.800
0.600
0.400
0.200
0.000
0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7200
时间（s）
吸
光
度
（ A
U
）
1.000
0.900
0.800
0.600
0.700
0.500
0.400
0.300
0.200
0.100
0.000
吸
光
度
（ A
U
）
400.0450.0500.0550.0600.0650.0 750.0800.0
波长（nm）
850.0900700.0
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5），供试品、迷迭香酸对照品均在 500 nm处有最大
吸收，咖啡酸对照品在 510 nm处有最大吸收，试剂
空白在该处无干扰，可见该法专属性良好、干扰小，
可作为肾茶主要酚类物质的含量测定方法。 由于迷
迭香酸的最大吸收波长与供试品一致，且迷迭香酸
为肾茶所含有效成分， 故选择迷迭香酸作为对照
品。
图 5 亚硝酸钠-硝酸铝法波长扫描图
Fig. 5 Wavelength scanning of sodium nitrite-aluminium
nitrate method
2. 3 亚硝酸钠-硝酸铝显色法的方法学研究
2. 3. 1 酸度考察 溶液的酸碱度会直接影响显色
剂的存在形式和有色化合物的浓度变化，在该显色
方法中，加入氢氧化钠的目的是为显色反应提供适
宜的碱性环境，便于显色剂中铝离子与邻二酚羟基
络合，使吸收峰红移，避免杂质干扰。 分别取 3 ml
迷迭香酸溶液于 25 ml 量瓶中， 加 5％亚硝酸钠溶
液 2.0 ml， 放置 6 min 后， 加 10％硝酸铝溶液 2.0
ml，放置 6 min。 分别加入不同体积的 1 mol/L的氢
氧化钠溶液，用甲醇定容至刻度，放置 15 min 后测
定其 A 值。 由结果可以看出， 在加入氢氧化钠 8~
12 ml 用量范围内，对照品溶液 A 值达到最大且趋
于稳定，故确定加入 10 ml 氢氧化钠。
2. 3. 2 显色剂用量考察 过量的显色剂是反应完
全的必要保证。 但显色剂用量过大对有色化合物的
组成会产生不良的影响， 故选用 5％亚硝酸钠溶液
和 10％硝酸铝溶液作为显色剂， 分别取 3 ml 迷迭
香酸对照品溶液于 25 ml 量瓶中， 加不同体积 5％
亚硝酸钠溶液，放置 6 min 后，加 10％硝酸铝溶液
2.0 ml，放置 6 min，加入 1 mol/L 的氢氧化钠溶液
10 ml，用甲醇定容至刻度，放置 15min。 在 500 nm
处测定不同体积亚硝酸钠溶液 A值（图 6）。
图 6 吸光度-5%亚硝酸钠溶液加入量曲线图
Fig.6 Curve graph of absorbaney-5% sodium nitrite
分别取 3.0 ml 迷迭香酸对照品溶液于 25 ml
量瓶中， 加入 5％亚硝酸钠溶液 1 ml， 放置 6 min
后，加不同体积的 10％硝酸铝溶液，放置 6 min，加
入 1 mol/ml 的氢氧化钠溶液 10 ml，用甲醇定容至
刻度，放置 15 min。 在 500 nm处测定吸光度，绘制
吸光度-10%硝酸铝溶液加入量曲线（图 7）。 可见加
入 5%亚硝酸钠 1.0 ml，10%硝酸铝 1.0ml 可使显色
反应达到完全。
图 7 吸光度-10%硝酸铝溶液加入量曲线图
Fig. 7 Curve graph of absorbaney -10% aluminium
hydroxide
2. 3. 3 稳定性考察 取供试品溶液 3 ml， 照 2. 2.
3 确定的显色方法显色后，于 500 nm 处测定 A 值，
以 1 s为间隔进行时间扫描，共测定 2 h（图 8）。 说
明该显色反应形成的络合物稳定性好，符合测定要
求。
2. 3. 4 标准曲线的制备 精密量取迷迭香酸对照
品溶液 2.0、2.5、3.0、3.5 和 4.0ml 于 25 ml 量瓶中，
照 2.2.3 确定的显色方法显色后，于 500 nm 处测定
吸光度值。以对照品浓度（mg/ml） 为横坐标，A值为
纵坐标绘制工作曲线 。 线性方程 ：Y=46.861X-
0.1316（r2=0.9993）， 迷迭香酸在 8.792~17.584 μg/ml
范围内线性关系良好。
试剂空白
↓
供试品未显色
↓
↑
咖啡酸
↑
迷迭香酸
↑
供试品
吸
光
度
（ A
U
）
吸
光
度
（ A
U
）
吸
光
度
（ A
U
）
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2. 3. 5 精密度考察 用 2. 2. 3 确定的显色方法对
供试品和迷迭香酸对照品分别重复测定 6 次，结果
表明，供试品精密度 RSD 为 0.549%（n=6），迷迭香
酸对照品 RSD为 0.612%（n=6）。
2. 3. 6 重复性实验 取供试品 6 份， 照 2. 2. 3 确
定的显色方法测定主要酚类物质的含量，求出 RSD
值。 结果 6份供试品的主要酚类物质的质量分数分
别为 1.745% 、1.718% 、1.713% 、1.728% 、1.699%和
1.710%，RSD值为 0.9291%。
2. 3. 7 加样回收率实验 根据《中国药典》2010 版
附录 XW A 中药质量标准分析方法验证指导原则
中准确度相关规定，设计 3 个不同浓度，每个浓度
分别制备 3 份供试品溶液照 2.2.3 确定的显色方法
进行测定，用 9 个测定结果进行评价（表 2）。 平均
回收率为 100.7%，RSD 为 0.85%。 表明该法准确可
靠，可用于肾茶中主要酚类化合物的含量测定。
2. 3. 8 不同产地肾茶主要酚类物质的含量测定
取不同产地的肾茶粉末约 0.5 g， 照 2. 2. 3 确定的
显色方法测定 A 值，由 2. 3. 4 确定的工作曲线计算
主要酚类物质含量（表 3）。从不同产地来看，肾茶主
要酚类物质含量存在一定差异，以云南省勐仑镇植
物园所产肾茶质量最优；从省份来看，云南省所产
肾茶优于其他省份；从不同花色来看，紫花肾茶优
于白花肾茶。
3 讨论
主要酚类化合物的常用测定方法还有 Folin-
Ciocalten法。 其原理是利用多酚类化合物分子中所
含有的极易氧化的羟基， 在碱性条件下能与 Folin-
Ciocalten试剂反应后形成络合物呈现蓝色［11］。 但在
对该法反应条件摸索过程中发现，反应体系在加入
常用的碱性缓冲液碳酸钠溶液后极易产生白色沉
淀，推测可能是在较低温度下碳酸钠在提取溶剂甲
醇溶解性不好，故导致碳酸钠晶体极易析出，干扰
测定， 且温度变化对碳酸钠的溶解度影响很大，将
缓冲液更换为碳酸氢钠溶液后又不能达到反应所
需的碱性环境，以至于反应条件难以控制，故不适
宜用于肾茶中主要酚类物质的含量测定。
本文在全面系统的调研酚类化合物含量测定
表 2 加样回收率测定结果
Tab．2 Results of recovery determination
样品称样量
（g）
样品中含量
(mg)
0.24923
0.24884
0.25046
0.25098
0.24933
0.24982
0.25032
0.25055
0.25022
4.284
4.277
4.305
4.314
4.285
4.294
4.303
4.306
4.301
对照品加入量
(mg)
吸光度
回收率
(%)
2.56
2.56
2.56
4.29
4.29
4.29
6.01
6.01
6.01
0.3821
0.3852
0.3864
0.5143
0.5152
0.5121
0.6471
0.6407
0.6415
100.3
102.2
101.7
100.2
101.2
100.0
101.2
99.74
100.0
表 3 不同产地肾茶药材主要酚类物质含量测定结果
Tab. 3 Determination results of main phenols of
Clerodendranthus spicatus from different producing area
编号 采集地
SC-01
SC-02
SC-03
SC-04
SC-05
SC-06
SC-07
SC-08
SC-09
SC-10
SC-11
SC-12
SC-13
SC-14
Sc-15
SC-16
SC-17
SC-18
SC-19
云南省普洱市
云南省耿马县
云南省元江县
云南省景洪市云南分所
云南省景洪市云南分所 (紫花)
云南省景洪市基诺山
云南省勐仑镇
云南省勐仑镇（紫花）
云南省勐腊县勐伴
云南省勐仑镇植物园
云南省勐仑镇植物园（紫花）
云南省勐海县
广东阳春市
福建省厦门市
福建省厦门市(紫花)
福建省长泰县
海南省万宁市
海南省儋州市(紫花)
广西省南宁市
主要酚类物质
质量分数（%）
1.541
1.963
1.251
1.720
3.488
1.797
1.882
2.187
1.987
2.980
3.752
1.287
1.618
1.694
3.057
1.687
1.163
2.502
1.172
2.000
1.800
1.600
1.200
1.400
1.000
0.800
0.600
0.400
0.200
0.000
0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7200
时间（s）
吸
光
度
（ A
U
）
图 8 亚硝酸钠-硝酸铝显色法时间扫描结果
Fig. 8 Temporal scanning of sodium nitrite-aluminium
hydroxide colorimetric method
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方法相关文献的基础上，分别对酚类化合物最常用
的几种含量测定方法，即直接法、三氯化铁-铁氰化
钾法、 亚硝酸钠-硝酸铝显色法和 Folin-Ciocalten 法
进行了探究， 最后确定了以亚硝酸钠-硝酸铝显色，
500 nm 处测定吸光度值为适宜的测定方法。 经进
一步的方法学验证表明，该方法操作简便、稳定性
好、精密度高，适用于肾茶中主要酚类物质的含量
测定。 根据本次试验结果可知，19 个不同产地肾茶
中主要酚类物质含量存在一定差异，且紫花肾茶明
显优于白花肾茶，为肾茶资源的进一步开发利用提
供了参考。
【参考文献】
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［2］ 贾米兰.傣药特色药材肾茶与百样解资源评价［D］. 上海交
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（收稿日期：2014-02-21 修回日期：2014-04-22）
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