全 文 ：2 仪姆年3 1卷2 期
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西藏农业科技
净”用组织培养方法快速繁殖螃蟹 甲技术…二
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王敬龙② 朱磊① 卫华①
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(①西藏农牧科学院蔬菜研究所 · 西藏拉萨 ·8 0 5032 )
(②西藏农牧科学院畜枚兽医研究所 · 西藏拉萨 ·8 50 09 0)
摘 要: 本文报道了利用组织培养快速繁殖技术 , 对西藏濒危藏药材螃蟹甲在无菌条件下以种
子为试验材料建立了螃蟹甲植株的无菌体系 ,进一步筛选出了螃蟹甲植株增殖和生根的最佳培养
基 。 为下一步对螃蟹甲进行人工驯化栽培具有重要的实践意义 。 关于试管苗移栽成活率和成本等
问题 ,有待进一步研究 。
关键词 :螃蟹甲 组织培养 增殖培养 生根培养
螃蟹甲 ( hP fo m is yo im gh us ban id Muk e巧e l) 是唇形科糙苏属多年生草本植物 ,为常用藏药。 以干燥块根
人药 ,具有祛风活络 、强筋壮骨 、清热消肿 、 止咳祛痰之功效 ,广泛用于治疗感冒、 咳嗽 、疮疥肿毒 、 风湿性关节
炎 、肺炎 、 支气管炎等疾病 。 由于长期掠夺采挖 ,野生资源急剧下降 , 日益枯竭 ,供需矛盾突出。
近年来生物技术的飞速发展 ,带动了医药生物技术产业的发展 。 组织培养是现代最先进的植物繁殖技
术 ,利用植物组织培养技术进行药用植株无性繁殖 ,解决药用植物天然资源不足的棘手问题 ,具有成本低 、高
效率、生产周期短 、无性遗传特性一致的优点。 我国对独一味 ,龙胆 ,番红花等药材的无性繁殖已有成功的结
果 ,但此种方法用于药用植物螃蟹甲的研究尚未见报道 。 本研究通过组织培养技术建立螃蟹甲无性快繁体
系是解决资源短缺的有效途径之一 。 为下一步对螃蟹甲进行人工驯化栽培具有重要的实践意义 , 致使变栽
培为工业化生产具有极大的可能性和广阔的前景。
l 材料与方法
1
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1 材料及试剂
螃蟹甲种子 : 由林芝奇正藏药厂馈赠 。
基本培养基为 MS ,琼脂为 0 . 7% , 碳源为 3% 的蔗糖 , 培
养基在 121 ℃高压灭菌 20 m in 。
1
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2 方法
1
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2
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1 螃蟹甲无菌体系的建立
挑选籽粒饱满的螃蟹甲种子 , 用 70 % 的酒精处理后 , 再
用 0 . 1% 的升汞进行表面消毒 ,倒去消毒液 ,无菌水冲洗 5 一 6
遍 ,接种在 M S 培养基中置 1h2 光周期 , 150 xL 光强下 23 士 1
/ 14 士 1℃的光照培养室中培养 ,经 25 一 30 d无菌苗 (图 l) 长
成 。 图 l 经种子发芽获得的无菌苗
利用组织培养方法快速繁殖螃蟹甲
1
.
2
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2螃蟹甲无菌苗的增殖培养
为筛选最佳的增殖培养基 ,将经种子发芽后的螃蟹甲无菌苗接种于 MS 附加不同浓度的 6 一 B A 的培养
基中 , 30d 后统计增殖倍数。
1
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2
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3 螃蟹甲试管苗的生根培养
将无菌苗接种到添加不同浓度 N A A 的 M S培养基中诱导其生根 , 30d 后观察其生根情况 。
2 结果与分析
2
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1 不同浓度 6 一 BA 对螃蟹甲无菌苗增殖的影响
为了繁殖大量的螃蟹甲有效的无菌试管苗 ,将螃蟹甲无
菌苗接种到添加不同浓度 6 一 BA 的 M S培养基中。 筛选出了
适合螃蟹甲最佳的增殖培养基 。 本实验采用六种处理方法 ,
即添加不同浓度 6 一 BA 的 M S 培养基设为 MS , MS I , M S l ,
M S l
,
M S VI
,
M S V
。 由表 l 可以看出 ,当 6 一 BA 浓度为 0 时 ,
螃蟹甲植株无增殖现象 ;在 M S W培养基中 , 巧 d 左右螃蟹甲
植株发生分化 ,单株增殖至 3 一 7 个植株 ,增殖系数为 4 . 6 且
植株生长健壮 (图 2 ) ;在 M S V培养基中 ,虽然增殖系数达 .4
73
,但植株细密而且玻璃化现象严重 。 因此 ,螃蟹甲无菌苗增
殖最佳培养基为 MSW 。
图 2 增殖的不定芽
表 1 不同浓度 6 一 BA 对螃蟹甲无菌苗增殖的影响
基本培养基 接种数 / 个 增殖芽数 / 个 增殖系数 增殖情况
nUO
MS l 0
.
17
八UOn“内、é弓J、à飞口
M S班 0 . 4
00,`U`tz
嘴.几J且
né一ù内、à凡」M SW
M S V
4
.
6
4
.
7 3
基部无变化 ,无增殖现象
基部膨大 ,有结块 ,无增殖现象
基部膨大 , 有结块 , 极少部分植株有增殖现
象 ,植株健壮
基部膨大 ,有结块 , 极少部分植株有增殖现
象 ,植株健壮
基部膨大 , 有结块 ,每个植株增殖至 3 一 7 个
植株不等 ,植株健壮
基部膨大 ,有结块 ,每个植株都增殖 ,但植株
有玻璃化现象
注 :增殖系数是指接人的每单株不定芽或单个茎段 (带有一个腋芽 ) 增殖生长产生的芽数 , 即增殖系数 二 芽
数 / 外植体数 。
2
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2 温度对螃蟹甲无菌苗生长的影响
试管苗培养在昼夜 25 ℃恒温下或在 23 士 1 / 14 士 1℃下 , 结果表明 , 在 25 ℃恒温下 ,增殖的不定芽丛苗
茎叶发黄且有玻璃化现象 , 而在 23 士 1 · / 14 士 1℃ 下增殖的不定芽丛苗茎叶为绿色且生长健壮 。 造成这种
现象的原因可能是螃蟹甲为野生资源 , 自身已经适应了高原低温的气候条件 。
2
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3 根的诱导
当增殖的无根丛生苗长至 cZ m 左右高 ,具有 3 一 4 片小叶时 ,从基部剪下分切成单株转移到添加不同浓
度 N AA 的 M S 培养基中培养发现 ,不同浓度 NA A 的成根效应和对苗生长的影响是不同的 。 当 N A A 浓度为
利用组织培养方法快速繁殖螃蟹甲
’
0一 0
.
2m g
.
L
一 ’时 ,均能使切段基部形成根 ,但是根系细长 ,无 - - - 一 、 l 一 1 :一二 _ 二~ _ , 二 ~ 、 ~ ` , 、 -须根 ,且苗生长缓慢 , 长势很差 。 而当 N A A 浓度增加至 0 . 3
一 0
.
5 mg
.
L
一 ’时 ,试管苗的生根率达 90 % 以上 ,根系粗壮 ,且
在基部长出 10 一 20 条须根 ,植株生长健壮 (图 3 ) 。
3 讨论
螃蟹甲无菌苗在增殖培养中对细胞分裂素 6 一 BA 的浓
度要求很严格 , 浓度太低时无菌苗不会发生增殖 ,而当浓度太
高时又会发生严重的玻璃化现象。 一般情况下 , “ 玻璃化 ” 现
象与 6 一 B A 的积累是同步的 , 6 一 BA 浓度越高 , “ 玻璃化 ” 程
度越严重 。 因此掌握好 6 一 BA 的浓度是获得既有较高增殖
系数又有生长健壮的螃蟹甲无菌苗的关键 。 试验中发现较低
的培养温度 ( 23 土 l / 14 土 1℃ )也是影响螃蟹甲植株正常生
长的关键因子之一 。 当培养温度超过 25 ℃时 , 螃蟹甲试管苗 图 3 诱导出粗壮的根
的茎叶发黄且有玻璃化现象 。
以上初步研究 , 可以确认利用组织培养方法快速繁殖螃蟹甲无性系是可行的 ,可能成为螃蟹甲快速繁殖
的一个途径 。 可以实现从无性繁殖系的快速繁殖到螃蟹甲育苗工厂化 , 为螃蟹甲生产实践开辟新的道路。
为使试验成果应用到实际药材生产中去 , 还需解决试管苗成活率和降低试管苗成本等问题 。
参考文献
「月高咏莉 ,林瑞超 ,王钢力等 . 藏药螃蟹甲的化学成分研究 . 中药材 . 20 7 , 3 ( or ) : 123 9 一 1242