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不同质量浓度的蔗糖和硼酸对北京杨花粉萌发的影响



全 文 :书第 41 卷第 5 期 吉 林 林 业 科 技 Vol. 41 No. 5
2012 年 9 月 JOURNAL OF JILIN FORESTRY SCIENCE AND TECHNOLOGY Sep,2012
文章编号:1005 - 7129(2012)05 - 0001 - 04 中图分类号:S792. 11. 04 文献标识码:A
不同质量浓度的蔗糖和硼酸
对北京杨花粉萌发的影响
李永生1,耿淑艳2,王永和1
(1. 长春大学生物科学技术学院,吉林 长春 130012;2. 上营森林经营局,吉林 吉林 132607)
摘要:以北京杨新鲜花粉为材料,研究固体培养基中蔗糖和硼酸不同质量浓度对花粉萌发的影响,结果
表明:在培养基不含硼酸时,最适宜萌发的蔗糖质量浓度为 10%,萌发率 93. 5%;当达到 20%时,抑制花
粉萌发,萌发率仅为 55. 6%。在培养基不含蔗糖时,最适宜萌发的硼酸质量浓度为 0. 01%,随着质量浓
度升高,萌发率呈下降状态。在蔗糖和硼酸的双重作用下,最适宜萌发的质量浓度为 10%蔗糖 + 0. 01%
硼酸,萌发率高达 98. 6%,花粉管生长快、健壮。新鲜花粉生活力测定的培养时间为 24 h。
关键词:北京杨;花粉萌发;蔗糖;硼酸;质量浓度
The effect of sucrose and boric acid on the pollen
germination of Populus × beijingensis
LI Yong - sheng1,GENG Shu - yan2,WANG Yong - he1
(1. Biotechnology College of Changchun University,Changchun 130012,China;2. Shangying Forest Manage-
ment Bureau of Shulan,Jilin 132607,China)
Abstract:The effect of sucrose and boric acid with different concentration in solid medium on the pollen germi-
nation of Populus × beijingensis were studied in this paper. Results showed that without the boric acid,the op-
timal concentration of sucrose was 10%,and the pollen germination rated was 93. 5% . The pollen germination
was only 55. 6% if the concentration of sucrose was 20% . Without sucrose,the optimal concentration of boric
acid was 0. 01% . The pollen germination rate decreased with the increasing concentration of boric acid. With
both sucrose and boric acid,the optimal medium was with 10% sucrose and 0. 01% boric acid. Under this con-
dition,the pollen germination rate was 98. 6%,and the pollen tube grew fast and healthy. The cultivating time
for measuring viability of fresh pollen was 24 h.
Key words:Populus × beijingensis;pollen germination;sucrose;boric acid;mass concentration
收稿日期:2012 - 08 - 15
作者简介:李永生(1953 -) ,男,山东寿光人,副教授,
主要从事园林植物遗传育种和林木种苗培育方面的教
学与研究.
种子植物的有性生殖完全不同于孢子植
物,它的孢子体发达、世代长,而配子体不发达、
世代短并寄生在孢子体上,生命力脆弱。在植
物的雄性繁殖器官中,花粉母细胞经减数分裂
产生花粉。花粉是指有花植物的小孢子,是种
子植物特有的结构,相当于一个小孢子和由它
发育的雄配子体,进而产生精细胞(雄配子)。
在自然授粉条件下,花粉在雌蕊柱头上萌发的
能力,就是花粉的生活力。而在人工控制授粉
中,当需要从外地采集花粉或亲本花期不相同
—1—
DOI:10.16115/j.cnki.issn.1005-7129.2012.05.012
需要贮藏花粉时,要经过一段较长时间的运输
和贮藏过程。这样在杂交前必须检验花粉的生
活力,以免使用无生活力的花粉授粉而造成杂
交工作的失败。因此,研究花粉贮藏和生活力
测定是有性杂交育种的基础。
作者以北京杨(Populus × beijingensis W.
Y. Hwang et Liang,是美杨与青杨的杂交种)花
粉为材料,研究培养基不同有效成分对其萌发
的影响,从而筛选出花粉萌发最适宜的蔗糖和
硼酸质量浓度,旨在为花粉贮藏、生活力测定和
杂交育种提供借鉴。
1 研究材料与方法
1. 1 研究材料与花粉收集
以长春大学西校区庭院栽植的北京杨为材
料,2012 年 4 月 20 日采集雌花枝在室内水培,
使花粉散落在硫酸纸上,然后用 120 目花粉筛
筛取花粉,装于试管中,试管口用棉塞封堵,置
于冰箱中保存备用。
1. 2 研究方法与内容
1. 2. 1 配制基本培养基
以固体培养基为花粉萌发的培养基质,在
100 ml 蒸馏水中加入 2 g 琼脂,加热的同时加
以搅拌,使琼脂充分溶解,配制成基本培养基。
1. 2. 2 蔗糖和硼酸对不同树种花粉萌发的影响
①试验设计。设置含不同质量浓度梯度的
蔗糖和硼酸培养基,观测其对北京杨花粉萌发
的影响。以无蔗糖和硼酸培养基为对照。
②配制培养基。按试验设计配制蔗糖和硼
酸不同质量浓度的培养基,见表 1。
③制片、播种花粉。将培养基滴入双凹载
玻片的凹形槽内,将采集的花粉均匀地撒在培
养基上,播入花粉后镜检是否均匀,若不均匀需
重新制片。然后将载玻片(玻片下加垫)置于
培养皿中,皿底放置滤纸,加入适量蒸馏水保
湿。
表 1 培养基中蔗糖和硼酸不同质量浓度的组合
硼酸 /%
蔗糖 /%
0 5 10 15 20
0 0 + 0 5 + 0 10 + 0 15 + 0 20 + 0
0. 01 0 + 0. 01 5 + 0. 01 10 + 0. 01 15 + 0. 01 20 + 0. 01
0. 03 0 + 0. 03 5 + 0. 03 10 + 0. 03 15 + 0. 03 20 + 0. 03
0. 05 0 + 0. 05 5 + 0. 05 10 + 0. 05 15 + 0. 05 20 + 0. 05
0. 07 0 + 0. 07 5 + 0. 07 10 + 0. 07 15 + 0. 07 20 + 0. 07
④培养与镜检。将培养皿置于恒温恒湿培
养箱(150 RH)中培养,温度 25℃,相对湿度
80%,随时进行镜检,观测花粉萌发状况。达到
设定时间后,分别每种培养基在显微镜下随机
取 5 个视野观测统计花粉萌发状态,取平均值
进行统计,用 XSZ -7G摄像显微镜拍摄典型镜
像的显微照片。
用下式计算花粉生活力(萌发率)。
花粉萌发率(% )=(萌发花粉粒数 /观察
的总花粉粒数)× 100
2 结果与分析
2. 1 花粉萌发试验结果
北京杨未萌发的花粉为圆球状。经过一段
时间的培养,有的花粉粒上出现透明突起,随着
时间的推移,逐渐伸长形成花粉管。经过 24 h
培养,在显微镜下观察花粉萌发状况,并进行统
计,结果见表 2。
2. 2 蔗糖不同质量浓度对花粉萌发的影响
由表 2 数据分析可知,蔗糖对北京杨花粉
萌发具有显著作用。当培养基不含蔗糖时(亦
不含硼酸) ,花粉平均萌发率仅为 18. 8%(见图
2 - 1) ;在不含硼酸只含蔗糖的培养基上,平均
萌发率为 63. 4%,在一定质量浓度范围内,随
蔗糖质量浓度升高,花粉萌发显著增加,在
10%蔗糖质量浓度条件下萌发率最高,达到
93. 5%(见图 2 - 2) ,不同蔗糖质量浓度梯度的
平均值为 63. 4%。但当蔗糖质量浓度为 20%
时,会抑制花粉的萌发,萌发率仅为 55. 6%,此
时的花粉管又短又粗。无蔗糖或质量浓度较低
时,花粉管纤细且短,生长缓慢。因此,在培养
基不含硼酸时,含 10%蔗糖的培养基是北京杨
—2—
新鲜花粉萌发的最适宜培养基。
表 2 蔗糖和硼酸不同质量浓度对北京杨新鲜花粉萌发的影响
试验处理
蔗糖 /%
0 5 10 15 20
萌发率均值 /%
(5 ~ 20)
硼酸 /%
0
26 /138 29 /142 115 /123 105 /125 80 /144
18. 8 20. 4 93. 5 84. 0 55. 6
63. 4
0. 01
34 /148 110 /114 139 /141 137 /146 49 /183
23. 0 96. 5 98. 6 93. 8 26. 8
78. 9
0. 03
27 /143 99 /158 167 /197 85 /199 35 /139
18. 9 62. 7 84. 8 42. 7 25. 2
53. 9
0. 05
15 /124 75 /124 203 /325 75 /138 27 /107
12. 1 60. 5 62. 5 54. 3 25. 2
50. 6
0. 07
9 /117 48 /125 125 /202 56 /145 46 /114
7. 7 38. 4 61. 9 38. 6 40. 3
44. 8
萌发率均值 /%
(0. 01 ~ 0. 07)
15. 4 64. 5 77. 0 57. 4 29. 4
注:“/”线上为视野中的花粉萌发数量,“/”线下为视野中的花粉总数。
2. 3 硼酸不同质量浓度对花粉萌发的影响
从表 2 数据还可以看出,硼酸对花粉萌发
亦有显著作用。在不含蔗糖只含硼酸的培养基
上,平均萌发率为 15. 4%,硼酸含量为 0. 01%
时,萌发率最高,为 23. 0%。随着硼酸质量浓
度增加,萌发率呈下降状态,硼酸含量为
0. 07%时,萌发率仅为 7. 7%。由此可见,硼酸
对花粉萌发的作用小于蔗糖。因此,在培养基
不含蔗糖时,含 0. 01%硼酸的培养基是北京杨
新鲜花粉萌发的最适宜培养基。
2. 4 蔗糖和硼酸不同质量浓度双重作用对花粉
萌发的影响
利用表 2 数据绘制直方图,直观比较蔗糖
和硼酸不同质量浓度对北京杨新鲜花粉萌发的
影响,见图 1。
图 1 北京杨花粉在蔗糖和硼酸不同质量浓度培养基上的萌发率
由表 1 和图 1 可以看出,综合蔗糖和硼酸
的双重作用,北京杨新鲜花粉的最适宜萌发的
质量浓度为 10%蔗糖 + 0. 01%硼酸。在上述
条件的培养基上,花粉管生长速度很快,而且花
粉管生长健壮;萌发率高达 98. 6%(见图 2 -
3) ,明显超过其它培养基的萌发率。数据显
示,在硼酸质量浓度一定时,随蔗糖质量浓度升
高,萌发率上升,至一定值后呈下降状态,即曲
线基本为正态分布;在蔗糖质量浓度一定时,随
着硼酸质量浓度的升高,萌发率呈下降状态,而
且花粉管的生长受到抑制,粗壮且短小(见图 2
- 4、图 2 - 5、图 2 - 6)。
—3—
图 2 - 1 硼酸 0,蔗糖 0 图 2 - 2 硼酸 0,蔗糖 10%
图 2 - 3 硼酸 0. 01%,蔗糖 10% 图 2 - 4 酸 0. 03%,蔗糖 10%
图 2 - 5 硼酸 0. 05%,蔗糖 10% 图 2 - 6 硼酸 0. 07%,蔗糖 10%
图 2 北京杨花粉在蔗糖、硼酸不同质量浓度固体培养基上的萌发状态(× 100)
3 结论与讨论
3. 1 结论
3. 1. 1 蔗糖的作用
蔗糖对北京杨新鲜花粉萌发具有显著作
用,在不含硼酸只含蔗糖的培养基上,平均萌发
率为 63. 4%,在一定质量浓度范围内,随蔗糖
质量浓度升高,花粉萌发率显著增加,在 10%
蔗糖质量浓度下萌发率最高,达到 93. 5%;但
当蔗糖质量浓度为 20% 时,会抑制花粉的萌
发,萌发率仅为 55. 6%,此时的花粉管又短又
粗。
3. 1. 2 硼酸的作用
硼酸对北京杨新鲜花粉萌发亦有显著作
用,在不含蔗糖只含硼酸的培养基上,平均萌发
率为 15. 4%,硼酸含量为 0. 01%时,萌发率最
高,为 23. 0%。随着硼酸质量浓度增加,萌发
率呈下降状态,硼酸含量为 0. 07%时,萌发率
仅为 7. 7%。
3. 1. 3 蔗糖和硼酸的双重作用
综合蔗糖和硼酸的双重作用,北京杨新鲜
花粉的最适宜萌发的质量浓度为 10%蔗糖 +
0. 01%硼酸。在上述条件的培养基上,花粉管
生长速度很快,而且花粉管生长健壮;萌发率高
达 98. 6%。
3. 2 讨论
花粉离体萌发需要碳源。蔗糖对花粉萌发
和花粉管生长具有重要的作用,是花粉萌发及
花粉管壁合成的主要营养物质来源。因此,在
花粉离体培养中,加入适量的蔗糖会促进花粉
萌发,但含量通常不大于 15%。本研究最适宜
的含量为 10%。
硼酸可以促进糖的吸收和代谢,与糖结合
能极大地提高花粉的萌发率,增加氧气的含量
和吸收,参与果胶物质的合成,利于花粉管的建
造、萌发。在花粉离体培养中,加入适量的硼酸
会促进花粉萌发,但含量通常不大于 0. 05%。
本研究最适宜的含量为 0. 01%。
参考文献
[1]曹慧娟.植物学(第 2 版) [M].北京:中国林业出版
社,1992.
[2]程金水.园林植物遗传育种学[M].北京:中国林业
出版社,2000.
—4—