全 文 ：第 34卷　第 12期 西北农林科技大学学报 (自然科学版 ) Vo l. 34 No. 12
2006年 12月 Jour. o f No r th west Sci-Tech Univ . of Ag ri. and Fo r. ( Nat. Sci. Ed. ) Dec. 2006
河北杨和新疆杨离体叶片诱导不定芽研究
贾小明 ,樊军锋 ,王娟娟
(西北农林科技大学 林学院 ,陕西杨凌 712100)
　　 [摘　要 ]　对河北杨和新疆杨离体叶片诱导不定芽的方法进行了研究。 结果表明 ,适合河北杨和新疆杨离体
叶片不定芽诱导的最适培养基为: 1 /2 M S+ 0. 25 mg /L 6-BA+ 0. 01 mg / L TDZ+ 0. 25 mg /L IAA;在此培养基中 ,
叶片分化率河北杨可达 70% ,新疆杨可达 52% ;平均分化芽数河北杨为 6. 84个 ,新疆杨为 5. 32个。 6-BA单独使用
对叶片不定芽诱导没有效果 , N AA作用不明显。 叶片刻伤方式对两种杨树叶片诱导不定芽影响显著 ,沿中脉横切效
果优于去除叶边缘 ,诱导的不定芽数前者比后者约多 3个。光照显著影响叶片不定芽产生的时间 ,不定芽在 3～ 5 d暗
培养后转至 16 h /d光照下培养比全程 16 h /d光培养发生早 15 d左右 ;光照对分化率和平均分化芽数无显著影响。
[关键词 ]　河北杨 ;新疆杨 ;叶片再生 ;组织培养
[中图分类号 ]　 S722. 3+ 7 　　　　 [文献标识码 ]　 A [文章编号 ]　 1671-9387( 2006) 12-0110-05
　　河北杨 ( Populus hopeiensis Hu et Chow )和新
疆杨 (Populus alba L. v ar. pyramidalis )是我国西北
地区广泛栽植的优良树种 ,其根系发达 ,生长较快 ,
萌芽性强 ,耐寒、耐旱、耐风沙、耐瘠薄 ,是西北黄土
丘陵峁梁、沟坡及沙滩地的重要水土保持和造林树
种 [1 ]。我国西北地区杨树虫害严重 ,且有大量不适合
杨树生长的盐碱地 ,对杨树进行树种改良迫在眉睫。
林木世代周期长 ,采用常规育种技术难以在短时间
内选育出抗逆新品种 ,基因工程技术为林木的遗传
改良提供了新途径。与草本植物相比 ,林木基因工程
进展较为缓慢 ,但作为林木分子生物学研究模式植
物的杨树 ,其基因工程研究发展迅速 ,在抗性生物工
程方面取得了巨大成就 [ 2-7]。到目前为止 ,林木转基
因研究已在毛白杨、 84k、欧美杨、美洲黑杨×青杨
等树种中获得成功 ,有的已在林业生产中发挥了巨
大作用 [2-7 ]。
植物基因工程是通过组织培养过程来实现的 ,
转基因多数采用 Horsch发明的农杆菌介导的叶盘
转化法 ,即叶片创伤经浸染后再生 [4, 7-8]。因此 ,建立
高效的离体再生系统成为植物基因遗传转化研究的
关键和前提。 基因工程之所以在木本植物中受到限
制 ,与多数树种组织培养再生困难有关。杨树离体再
生相对容易 ,但也因树种而异。有关杨树组织培养方
法的报道 [ 7, 9-14 ] ,对培养腋芽及经愈伤组织再生的研
究居多 ,而适合基因转化的再生方式——外植体直
接再生不定芽较少。 已报道的外植体直接再生不定
芽的杨树品种有毛白杨、 84k、欧美杨、美洲黑杨、美
洲黑杨×青杨和新疆杨等。河北杨只有培养腋芽的
报道 [ 9-10 ] ,通过该途径不能进行基因转化。 诸葛强
等 [11 ]于 2003年研究了新疆杨叶片离体再生 ,通过 1 /
2 M S+ 0. 25 mg /L 6-BA+ 0. 005 mg /L TDZ+ 0. 5
mg /L IAA培养基组合 ,使新疆杨叶片不定芽分化
频率达 100% ,平均分化芽数 6. 18个。作者在利用该
培养基进行新疆杨基因转化时发现 ,叶片愈伤硬化 ,
部分丧失分化能力 ,不定芽畸形 ,有大量根状毛产
生。 为此 ,本研究对河北杨、新疆杨离体叶片不定芽
的诱导方法进行了研究 ,以期寻找一种能同时适合
两种杨树叶片再生的培养方法 ,为两树种遗传转化
奠定基础。
1　材料与方法
1. 1　材　料
　　河北杨和新疆杨枝条采自西北农林科技大学林学
院渭河试验站杨树基因库。 于 2004-11温室水培休眠
的枝条 ,用萌发的嫩枝建立无菌苗体系 ,带腋芽的茎段
于含分裂素与生长素的1 /2 M S培养基上继代。本研究
取继代 12次的两种杨树试管苗叶片进行试验。
试验所用生长素有:萘乙酸 ( N AA) ,吲哚乙酸
[收稿日期 ]　 2005-12-05
[基金项目 ]　国家“ 863”高技术研究与发展计划转基因专项 ( JY03-B-26-02) ;西北农林科技大学校专项 ( 05ZR051) ;国家林业局黄土高
原林木培育实验室开放研究课题
[作者简介 ]　贾小明 ( 1973- ) ,男 ,甘肃泾川人 ,讲师 ,硕士 ,主要从事林木生物技术育种研究。
[通讯作者 ]　樊军锋 ( 1963- ) ,男 ,陕西扶风人 ,副研究员 ,博士 ,主要从事杨树育种研究。
( IAA)。细胞分裂素有:苄氨基嘌呤 ( 6-BA) ,激动素
( KT) ,玉米素 ( ZT) ,塞苯隆 ( TDZ)。以上试剂均由
上海生化公司生产。
1. 2　方　法
从已生根、生长健壮的试管苗上取叶色深绿、平
展、叶尖无黄化、状态一致的叶片 ,用手术刀刻伤 ,接
种于诱导培养基上 ,叶面接触培养基。
1. 2. 1　培养基筛选　基本培养基为 1 /2 M S培养
基 ,内含蔗糖 25 g ,琼脂 5 g , pH为 5. 8。基本培养基
附加 0. 1 mg /L IA A分别与 0. 5, 1. 0, 2. 0 mg /L的 6-
BA, ZT和 K T,以及 0. 005, 0. 010, 0. 015 mg /L的
TDZ组成 12种芽诱导培养基 ,用于筛选细胞分裂
素。基本培养基附加 0. 1 mg /L IAA及 0. 01 mg /L
TDZ,分别与 0. 10, 0. 25, 0. 50 mg /L 6-BA组成 3种
培养基 ,用于筛选细胞分裂素组合。基本培养基附加
0. 01 mg /L TDZ及 0. 25 mg /L 6-BA,分别与 0. 10,
0. 25, 0. 50 mg /L N AA或 IAA配合 ,组成 6种培养
基 ,用于筛选生长素。由于杨树叶片再生常用的植物
激素是价格便宜的 6-BA与 NAA或 IAA组合 ,因此
另设计 1 /2 M S+ 6-BA (浓度分别为 0. 5, 1. 0, 2. 0
mg /L)+ N AA(浓度分别为 0. 01, 0. 1, 0. 5 mg /L )及
1 /2 M S+ 6-BA(浓度分别为 0. 5, 1. 0, 2. 0 mg /L )+
IAA(浓度分别为 0. 01, 0. 1, 0. 5 mg /L )共 18种培养
基 ,研究常用激素在两树种叶片不定芽诱导中的效
果。
1. 2. 2　叶片刻伤方式选择　设 2种方式: 一是沿中
脉横切叶面 2 /3宽度 ,叶边缘不切断 ,不带叶柄;另一
种是剪去叶边缘 ,视叶片大小剪成 0. 5～ 0. 7 cm2的
叶盘。 在激素筛选试验中 ,均采取第 1种刻伤方式。
1. 2. 3　培养条件选择　光照分全程 16 h光培养和
先暗培养 3～ 5 d后再 16 h光培养 2种。 光照强度
2 000 lx ,培养温度 ( 25± 2)℃。
1. 2. 4　调查指标　叶片接种 45 d后 ,调查统计叶
片分化率和平均分化不定芽数。
叶片分化率 /% = (分化不定芽的叶片数 /接种叶片
数 )× 100% ;
平均分化不定芽数= 不定芽总数 /分化不定芽的叶
片数。
2　结果与分析
2. 1　细胞分裂素对河北杨和新疆杨叶片不定芽诱
导效果的影响
2. 1. 1　 6-BA对叶片不定芽诱导效果的影响　单独
使用 6-BA对河北杨和新疆杨叶片不定芽诱导均没
有效果。 在 1 /2 M S+ 6-BA( 0. 5～ 2. 0 mg /L )+
N AA( 0. 01～ 0. 50 mg /L ) ,以及 1 /2 M S+ 6-BA
( 0. 5～ 2. 0 mg /L)+ IAA( 0. 01～ 0. 50 mg /L )的所
有组合中 ,新疆杨没有一个叶片再生不定芽 ,河北杨
只有零星叶片从叶柄处产生了不定芽。 新疆杨叶片
在 20 d左右能形成疏松的愈伤组织 ,呈黄绿色 , 40 d
左右几乎整个叶片愈伤化。随着培养时间的延长愈
伤组织上类似于芽点的地方变黑 ,少数变成红色 ,始
终没有不定芽和根产生。 河北杨叶片愈伤化相对较
轻。
2. 1. 2　 ZT和 K T对叶片不定芽诱导效果的影响　
在 0. 1 mg /L IAA浓度下 ,单独使用 ZT或 KT作为
分裂素 ,对两种杨树叶片不定芽诱导没有效果 ,而且
随着分裂素浓度的增加 ,叶片愈伤组织化、白化加
重。 在 0. 5 mg /L ZT浓度下 ,叶片在 20 d左右就能
形成点状突起的愈伤组织 ,随着培养时间的延长 ,愈
伤组织变黑变红 ,并且出现玻璃化趋势 ,丧失分化能
力。 使用 KT的叶片 ,整个叶片皱缩呈蜂窝状 ,愈伤
化严重 ,但愈伤组织不明显 ,而且 K T对叶片具有较
强的杀伤作用 ,随着培养时间的延长 ,叶片白化死亡
较严重。
2. 1. 3　 TDZ对叶片不定芽诱导效果的影响　新型
细胞分裂素类物质 TDZ对河北杨和新疆杨叶片不
定芽诱导作用明显 ,结果见表 1。
表 1表明 , 0. 005～ 0. 015 mg /L的 TDZ均能诱
导两种杨树叶片产生不定芽 ,只是在诱导效果和不
定芽质量上存在差异。
当 TDZ浓度为 0. 005 mg /L时 ,两种杨树叶片
分化率和平均分化芽数均最低 ,虽然河北杨平均分
化芽数与 TDZ浓度为 0. 010 mg /L时相差不多 ,但
分化率只有 30% ,而且此浓度下叶片有少量根状毛
产生。 TDZ浓度为 0. 010 mg /L时 ,两种杨树的叶片
分化率和平均分化芽数均最高 ,其中河北杨分化率
达到 56% ,新疆杨达到 40% ;河北杨平均分化芽数为
5. 12个 ,新疆杨为 3. 2个 ;且在此浓度下诱导的不定
芽生长正常 ,叶片愈伤化较轻。当 TDZ浓度超过 0.
010 mg /L时 ,两种杨树叶片分化率和平均诱导芽数
均有不同程度下降 ,在 TDZ浓度为 0. 015 mg /L时 ,
整个叶片愈伤化 ,且不定芽出现畸形、玻璃化趋势。
综合分析认为 ,在河北杨、新疆杨叶片再生中 , TDZ
浓度以 0. 010 mg /L为宜。
111第 12期 贾小明等: 河北杨和新疆杨离体叶片诱导不定芽研究
表 1　 TDZ对河北杨和新疆杨叶片不定芽诱导的影响
Table 1　 Effects o f TDZ on adventitious buds induced from leaf explants o f
P . hopeiensis Hu et Chow and P . alba L. va r. pyramidalis
TDZ /
( mg· L- 1)
接种叶片数
No. o f
inocula ted
leaves
分化叶片数
No. of diff erentiat ed leaves
分化率 /%
Diff erentia ted frequency
平均不定芽数
Average No. of
adventious buds
河北杨
P. hopeiensis
Hu et Chow
新疆杨
P . alba
L. v ar.
pyram idalis
河北杨
P . hopeiensis
Hu et Chow
新疆杨
P . alba
L. va r.
pyrami dalis
河北杨
P . hopeiensis
Hu et Chow
新疆杨
P . alba
L. va r.
py ramidalis
备注 No tes
0. 005 50 15 12 30 24 5. 04 1. 8
不定芽正常 ,叶片愈伤组织化较轻 ,少量根
状毛产生 Normal buds, litt le pa rt s of leav es
became callus, some roo t-like hair occured
0. 010 50 28 20 56 40 5. 12 3. 2
不定芽正常 ,叶片愈伤组织化较轻 ,无根状
毛产生 Normal buds, litt le pa rts of leav es
became callus, no roo t-like hair occured
0. 015 50 24 18 48 36 4. 0 3. 1
不定芽出现畸形、玻璃化趋势 ,叶片愈伤组
织化严重 Buds are abno rma l and vi treous,
much parts of leav es became callus
2. 1. 4　 TDZ与 6-BA配合使用对叶片不定芽诱导
效果的影响　在本试验中 , 6-BA单独使用没有效
果 , TDZ单独使用虽然具有一定效果 ,但分化率较
低 ,大都在 50%以内。 6-BA与 TDZ配合使用对两种
杨树叶片分化的影响试验结果见表 2。 表 2表明 ,在
含有 0. 1 mg /L IAA和 0. 01 mg /L TDZ的培养基中
添加一定浓度的 6-BA,对两种杨树叶片不定芽诱导
均有促进作用 ,而且在一定浓度范围内 ,随 6-BA浓度
的增高 ,分化率呈上升趋势 ,但平均分化芽数却呈现
先增多后减少的趋势。 在 6-BA浓度为 0. 25 mg /L
时 ,两种杨树叶片平均分化芽数最多 ,河北杨达 6. 02
个 ,新疆杨达 4. 5个。虽然两树种在 6-BA浓度为 0.
50 mg /L时叶片分化率最高 ,但平均分化芽数却最
低 ,河北杨为 3. 2个 ,新疆杨只有 1. 4个 ,而且形成的
不定芽几乎全部畸形 ,表现为节间缩短 ,叶形不正
常 ,长条状 ,黄化。因此 ,两种杨树叶片不定芽诱导细
胞分裂素选用 0. 25 mg /L 6-BA+ 0. 01 mg /L TDZ。
与单独使用 TDZ相比 ,河北杨的叶片分化率增加了
14. 82% ,新疆杨增加了 25% ;河北杨平均分化芽数
增加了 0. 9个 ,新疆杨增加了 1. 3个。
表 2　 6-BA与 TDZ配合使用对河北杨和新疆杨叶片不定芽诱导的影响
Table 2　 Coo rdina tion effects of TDZ and 6-BA on adventitious buds induced from leaf explants
o f P . hopeiensis Hu et Chow and P .alba L. v ar. py ramidalis
6-BA/
( mg· L- 1 )
接种叶片数
No. of
inoculated
leaves
分化叶片数
No. of dif f erentiated leav es
分化率 /%
Di fferen tiated f requency
平均不定芽数
Average No. of adventious buds
河北杨
P .hopeiensis
Hu et Chow
新疆杨
P. alba L. var.
pyramidal is
河北杨
P. hopeiensis
Hu et Chow
新疆杨
P .alba L. var.
pyramidal is
河北杨
P. hop eiensis
Hu et Ch ow
新疆杨
P. alba L. var.
p yram ida lis
0. 00 50 28 20 56 40 5. 12 3. 2
0. 10 50 30 23 60 46 5. 42 3. 6
0. 25 50 32 25 64 50 6. 02 4. 5
0. 50 50 35 28 70 56 3. 20 1. 4
2. 2　生长素对河北杨和新疆杨叶片不定芽诱导效
果的影响
　　表 3表明 , N AA不适合两种杨树叶片不定芽诱
导 ,虽然河北杨叶片能产生不定芽 ,但分化率较低 ,
在 45%以内 ,尤其平均不定芽数很少 ,最高只有
1. 8个。新疆杨叶片只在 N AA浓度为 0. 10 mg /L时
叶片分化 ,但分化率也只有 4% ,其他浓度下叶片均
无分化。 相比而言 , IAA对两树种叶片诱导不定芽
效果明显 ,在浓度为 0. 10～ 0. 50 mg /L时均有不定
芽产生 ,其中以 0. 25 mg /L浓度下分化率和平均分
化芽数为最高 ,河北杨叶片分化率为 70% ,新疆杨为
52% ; 河北杨平均分化芽数为 6. 84个 ,新疆杨为
5. 32个。 IAA浓度过高时 ,诱导率反而下降 ,并有大
量根状毛产生。
经过综合筛选后认为 ,适合河北杨和新疆杨叶
片诱导不定芽的培养基为: 1 /2 M S+ 0. 25 mg /L
6-BA+ 0. 01 mg /L TDZ+ 0. 25 mg /L IAA。
112 西北农林科技大学学报 (自然科学版 ) 第 34卷
表 3　生长素对河北杨和新疆杨叶片不定芽诱导的影响
Table 3　 Effects o f Aux in on adventitio us buds induced from lea f explantso f
P . hopeiensis Hu et Chow and P . alba L. va r. pyramidalis
生长素 /
( mg· L- 1)
Aux in
N AA IAA
接种叶片数
No. of
inocula ted
leaves
分化叶片数
No. o f dif ferentiated leaves
分化率 /%
Differentiated f requency
平均不定芽数
Average No. o f
adventious buds
河北杨
P . hopeiensis
Hu et
Chow
新疆杨
P . alba
L. va r.
py ramidal is
河北杨
P . hopeiensis
Hu et
Chow
新疆杨
P. alba
L. v ar .
pyram idalis
河北杨
P. hopeiensis
Hu et
Chow
新疆杨
P. alba
L. v ar.
pyram idalis
备注 No tes
0. 10 50 31 23 62 46 5. 89 4. 0 芽正常 N ormal buds
0. 25 50 35 26 70 52 6. 84 5. 32 芽正常 N ormal buds
0. 50 50 24 17 48 34 4. 2 2. 9
芽正常 ,大量根状毛产生 Normal
buds, much roo t-like hair occured
0. 10 50 22 2 44 4 1. 8 3. 0 芽正常 N ormal buds
0. 25 50 18 0 36 0 0. 91 0
河北杨芽正常 ,有根状毛出现 ,新疆
杨叶片整个愈伤化 Norma l buds of
P . hopeiensis and few some root-like
hair occurred, leaves o f P. alba var .
became callus
050 50 21 0 42 0 0. 72 0
河北杨芽正常 , 2树种叶片均产生大
量 根 状 毛 Norma l buds of P .
hopeiensis, much ro ot -like hair ap-
pea red on leaves o f bo th two Popla r
occurred
2. 3　叶片刻伤方式对河北杨和新疆杨叶片不定芽
诱导效果的影响
　　用试验筛选的培养基进行试验 ,结果见表 4。
表 4　叶片刻伤方式对河北杨和新疆杨叶片不定芽诱导的影响
Table 4　 Effect s o f leaf cutting methods on adventitio us buds induced from lea f explants o f
P . hopeiensis Hu et Chow and P . alba L. va r. pyramidalis
刻伤方式
Cut ting m ethods
接种叶片数
No. of
inoculated
leaves
分化叶片数
No. of di ff eren tiated leaves
分化率 /%
Dif ferentiated f requency
平均不定芽数
Average No. of
adventious buds
河北杨
P. hopeiensis
Hu et Chow
新疆杨
P .alba L. v ar.
pyram idal is
河北杨
P .hopeiensis
Hu et Ch ow
新疆杨
P. alba L. var.
pyramid ali s
河北杨
P.hopeiensis
Hu et Chow
新疆杨
P .alba L. var.
pyramidal is
剪去叶边缘
Cu tt ing th e leaf edg e
50 37 23 74 46 3. 14 2. 23
沿中脉横切
Cu tting th e leaf
vein verticaly
50 35 26 70 52 6. 84 5. 32
　　表 4表明 ,叶片刻伤方式对两树种不定芽诱导
的影响极其明显 ,虽然 2种刻伤方式对两树种叶片
分化率影响不大 ,但不定芽数量差别较大 ,沿中脉横
切方式的不定芽数明显多于剪去叶边缘的处理 ,河
北杨前者不定芽比后者平均多 3. 7个 ,新疆杨多
3. 09个。在试验中还发现 ,多数不定芽都产生于叶脉
断口处 ,以中脉断口处最多 ,尤其是叶柄处 ,而且几
乎所有不定芽都产生于叶片后半部。 去除叶边缘的
处理由于几乎不伤及中脉 ,再加上剪去了大部分叶
片基部 ,致使不定芽数量下降。 在沿中脉横切时 ,刻
伤不宜过密 , 4 mm的距离较适合 ,距离较近时 ,叶
片容易脱色坏死。
2. 4　光照对河北杨和新疆杨叶片不定芽诱导效果
的影响
　　试验结果表明 ,光照主要影响两树种叶片不定
芽出现的时间 ,对分化率和平均分化芽数没有影响。
3～ 5 d暗培养后转至 16 h光照培养比全程 16 h光
培养的愈伤组织及不定芽出现早 ,前者出现时间为
40 d左右 ,后者出现时间为 55 d左右。
3　讨　论
在杨树叶片再生的报道中 ,细胞分裂素多使用
6-BA,效果较好 [ 2, 5-6, 11-14 ] ,但本研究中单独使用
6-BA对两树种叶片再生没有效果 ,这与他人的研究
结果不符。分析其原因 ,可能与试管苗的继代方式与
次数 ,以及培养过程中激素积累有关。诸葛强 [11 ]以
根部萌蘖的方式继代 ,继代次数少 ,试管苗相对年
轻 ,叶片再生容易 ,而本试验以腋芽萌发的方式继
代 ,继代次数多 ,每次继代都添加 6-BA,可能使
6-BA在试管苗中积累较多 ,而高浓度的分裂素会抑
113第 12期 贾小明等: 河北杨和新疆杨离体叶片诱导不定芽研究
制细胞分裂。本研究单独使用 ZT或 KT对两树种叶
片再生没有效果 ,这与诸葛强等 [11 ]对新疆杨的研究
结果类似 ,但与陈维纶等 [13 ]对山新杨、郝贵霞等 [ 15]
对毛白杨的研究结果不一致 ,这可能与 ZT具有较
强的树种特异性有关。
TDZ( Thidia zuron)是一种新型的具有细胞分
裂素活性的物质 ,是一种苯基脲衍生物 ,商品名为塞
苯隆。 在所有细胞分裂素类物质当中 , TDZ的作用
最强 ,往往最小的用量就能起到十分明显的效
果 [16 ]。 但由于价格昂贵 ,使其广泛应用受到限制。
TDZ可能具有促进植物体内非结合态 IAA保持在
高水平的功能等 [ 17]。本研究中分裂素使用 TDZ,并
将 TDZ与 6-BA配合使用 ,在河北杨和新疆杨叶片
再生中均获得良好效果。关于多种细胞分裂素配合
使用较单独使用效果好的报道已经很多 ,陈维纶
等 [18 ]在毛白杨叶盘的组织培养中 ,诸葛强等 [11 ]在新
疆杨的研究中均发现此种现象。王关林等 [16 ]认为 ,
出现这种现象的原因可能与不同细胞分裂素的作用
机理差异有关 ,联合使用可以实现生物学效应的互
补 ,从而产生更好的促分化效果。
杨 树 离 体 叶 片 再 生 中 生 长 素 多 采 用
NAA
[ 2, 5-6, 11-14 ]
,但本研究发现 , N AA对河北杨和新
疆杨叶片诱导不定芽作用不明显。 NAA是人工合
成的一种生长素 ,它在植物体内的作用是作为一种
生长素合成的前体 ,靠植物体细胞自身的转化酶系
统转化成相关的生长素而发挥生物学效应的 ,所以 ,
N AA具有一定的特异性 ,即仅对具有 NAA转化酶
的植物起作用 [19 ] ,本研究结果可能与此有关。 但在
试管苗的生根试验中发现 , N AA对两树种不定芽
的生根诱导效果良好。这说明不同树种 ,在不同形态
建成中需要不同种类及结构的生长调节物质 ,而且
其机理是复杂多样的。
本研究还发现 ,在河北杨和新疆杨叶片不定芽
诱导中 ,叶片质量很关键。质地厚、叶色深、平展的叶
片不定芽分化率明显高于质地较薄、浅绿、皱缩的叶
片 ,而且后者随着培养时间的延长会逐渐褪绿坏死 ,
其褪绿部位往往首先发生在最易产生不定芽的叶脉
刻伤处 ,然后逐渐蔓延。培养高质量叶片可以通过壮
苗培养来实现 ,此外 ,在试管苗生根阶段应注意培养
容器的透光、透气性。多数卷曲、浅绿、纤弱的叶片都
是在封闭、透光性差的容器中产生的。
在本试验条件下 ,河北杨的组培性能要强于新
疆杨 ,但与已报道的其他白杨派树种相比 ,两树种的
叶片不定芽诱导率均较低 ,尤其平均分化芽数没有
超过 7个。因此 ,研究其他因素 ,如无菌苗继代次数、
叶片状态、激素积累等对 2种杨树离体叶片不定芽
诱导的影响 ,进一步提高两树种的叶片再生率应该
是今后工作的重点。
[参考文献 ]
[1 ]　赵天锡 ,陈章水 .中国杨树集约栽培 [M ] .北京:中国科学技术出版社 , 1994.
[2 ]　郝贵霞 ,朱　桢 ,朱之悌 .豇豆蛋白酶抑制剂基因转化毛白杨的研究 [ J ].植物学报 , 1999, 41( 12): 1276-1282.
[3 ]　林善枝 ,肖基浒 ,张志毅 .杨树抗性基因工程研究进展 [ J] .北京林业大学学报 , 2000, 22( 6): 85-88.
[4 ]　苏晓华 ,张冰玉 ,黄烈健 ,等 .转基因林木研究进展 [ J] .林业科学研究 , 2003, 16( 1): 95-103.
[5 ]　陈　颍 ,韩一凡 ,李　玲 ,等 .苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因转化美洲黑杨的研究 [ J ].林业科学 , 1995, 31( 2): 97-103.
[6 ]　樊军锋 ,李　玲 ,韩一凡 ,等 . 84K杨树耐盐基因转化研究 [ J ].西北林学院学报 , 2002, 17( 4): 33-37.
[7 ]　赵华燕 ,卢善发 ,晁瑞堂 .杨树的组织培养及基因工程的研究 [ J ].植物学通报 , 2001, 18( 2): 169-176.
[8 ]　王关林 ,方宏筠 .植物基因工程 [M ] . 2版 .北京:科学出版社 , 2002.
[9 ]　范小峰 ,李师翁 ,张民权 .河北杨组织培养快繁技术研究 [ J].中国水土保持 , 2001( 3): 17-18.
[10 ]　曹孜文 ,刘国民 .实用植物组织培养技术教程 [M ] .修订版 .兰州:甘肃科学技术出版社 , 1999.
[11 ]　诸葛强 ,王婕琛 ,黄敏仁 ,等 .新疆杨植株再生体系的建立 [ J].南京林业大学学报:自然科学版 , 2003, 27( 6): 1-4.
[12 ]　樊军锋 ,李　玲 ,韩一凡 ,等 . 84K杨叶片外植体再生系统的建立 [ J ].西北林学院学报 , 2002, 17( 2): 33-36.
[13 ]　陈维纶 ,郭东红 ,杨善英 ,等 .山新杨叶外植体的器官分化以及生长调节物质对它的影响 [ J] .植物学报 , 1980, 22( 4): 311-315.
[14 ]　孙宁正 ,高秀华 ,赵彦修 ,等 .欧美杨 107杨组织培养再生系统的建立 [ J ].山东师范大学学报 , 2004, 19( 2): 85-87.
[15 ]　郝贵霞 ,朱　桢 ,朱之悌 .毛白杨遗传转化系统优化的研究 [ J].植物学报 , 1999, 41( 9): 363-940.
[16 ]　王关林 ,方宏筠 ,那　杰 .高活性细胞激动素 TDZ在植物组织培养中的应用 [ J] .植物学通报 , 1997, 14( 3): 47-53.
[17 ]　徐华松 ,徐力龙 ,黄学林 . TDZ在植物组织培养中的作用 [ J ].广西植物 , 1996, 16( 1): 77-80.
[18 ]　陈维纶 ,杨善英 ,郭东红 ,等 .一种以黄化法为基础提高毛白杨快速繁殖效率的新分化方法 [ J] .植物学报 , 1991, 33( 1): 14-18.
[19 ]　任永波 ,任迎虹 .植物生理生化 [M ] .成都:四川科技出版社 , 2001.
(下转第 120页 )
114 西北农林科技大学学报 (自然科学版 ) 第 34卷
o f cone and trunk shape w ere analy zed wi th the methods of principal component analysis ( PCA) , cluster
analysis of g enetic distance, index selection and comparison o f integ ra ted cha racteristics of breeding value
based on ranking ( CICR) selection o f th e superio r fami lies through comparison of the methods mentioned
above. The results of study show that the PCA can evaluate g enetic characteristics of fami lies of P. tab-
uleaformis , and o ffer the oppo rtuni ty to select the superio r fami lies; the cluster analysis can g roup the fami-
ly ma terials into dif ferent categ ories acco rding to their ow n principa l component v alues, and then the simi-
lar fami lies are clustered tog ether. The cor related g roups w ill be selected acco rding to the breeding goal;
The CICR can reflect the dif ferences of genetic essentials among families and i t is a much simpler and direct
method; the index selection method is a rela tiv ely ideal method to evaluate superior families w ith multi-
cha racteristics, because the selection ef ficiency is bet ter than tha t of other methods. The synthetic represen-
tation of families can be evalua ted and the superior fami lies be selected accurately w hen the four methods
a re applied together.
Key words: Pinus tabuleaformis Car r. ; pro geny test; mul ti-characteristic selection; selection method;
selection index
　　 (上接第 114页 )
Abstract ID: 1671-9387( 2006) 12-0110-EA
Studies on adventitio us buds induction in v itro leaf of
Populus hopeiensis Hu et Chow and Populus alba L. var. pyram idali
JIA Xiao-ming, FAN Jun-feng,WANG Juan- juan
(College of Forestry ,Northwest A & F University , Yangling, Shaanx i 712100,China )
Abstract: Studies on adventious buds induction in vit ro lea f of Populus hopeiensis Hu et Chow and P .
alba L. va r. pyramidal i were carried out. The systema tic experiment show ed tha t 1 /2 M S+ 0. 25 mg /L
6-BA+ 0. 01 mg /L TDZ+ 0. 25 mg /L IA A was the optimal system to induce adventitious buds o f Populus
hopeiensis Hu et Chow and P . alba L. v ar. pyram idal is in vi tro leav es. In this medium , 70% leaves of P .
hopeiensis Hu et Chow and 50% leaves of P . alba L. v ar. pyramidal is produced adventi tious buds and the
average numbers of each w ere 6. 48 and 5. 32 respectiv elly. The study also show ed that only 6-BA had no
influence on the induction o f adventi tio us buds. N AA had a li t tle effect on the forma tion of adventi tious
buds. The means o f cut ting leaves had remarkable ef fect on the o f fo rmation adventitious buds, and the
numbers o f adventi tious buds describing the leavesmiddle ventions w ere th ree times mo re than disposing
the leavesedge. Illumination would influence the time of leaves to induce adventi tio us buds but had no ef-
fect on the dif ferentiation rate and average numbers of the adventitio us buds. The adventi tio ns buds w ere
induced 15 day s ea rlier wi th 3- 5 daysdark cul ture and then 16 hoursil lumination per day than wi th 16
hoursillumination per day.
Key words: Populus hopeiensis Hu et Chow; P .alba L. v ar. pyramidalis; leaf reg enera tion; ti ssue cul ture
120 西北农林科技大学学报 (自然科学版 ) 第 34卷